METABOLISMO DE PROTEÍNAS 1

AM Ronco PhD
2012
 FUNCIONES DE LAS PROTEINAS
– Structuras: son importantes en las membranes celulares
(como lipoproteinas); hueso y matriz dental; colágeno (piel,
hueso, músculo filamentos, uñas, pelo)
– Hormonas: actúan como mesanjeros y reguladores;
– Función Inmune: anticuerpos
– Catálisis :enzimas
– Transporte: proteínas plasmáticas, iones en las membranas
– Expresión génica: activadores, inhibidores
 Cuánta proteína necesitamos?
• En contraste con grasas y glucosa, no existe un almacenamiento
importante para los aa; necesitamos consumir proteínas diariamente

•Los requerimientos proteicos dependen de la edad, sexo y actividad.

ALLOWANCE FOR PROTEIN

AGE g/kg g/day

Infants (0-1) ~2.2 6.5-20

Children (1-10) 1.8 - 1.25 20- 38

Teens (11-18) 1.0 - 0.8 45-55

Adults (male) 0.8 56

(female) 0.8 44
Pregnant or lactating - 20 - 30% more

Athletes 1.2 -1.7

 Cuánta proteína necesitamos?
• Las proteínas difieren en el contenido de aa esenciales

Las proteínas dietarias proveen los aminoácidos que no podemos sintetizar

– los aminoácidos “esenciales”. Los aminoácidos “no-esenciales” pueden
ser sintetizados endógenamente a partir de intermediarios de la
glicolisis o ciclo de los TCA.

Esenciales No-esenciales
Arginine (solo para niños) Alanine
Histidine Asparagine
Isoleucine Aspartate
Leucine Cysteine
Lysine Glutamate
Methionine Glutamine
Phenylalanine Glycine
Threonine Proline
Tryptophan Serine
Valine Tyrosine
 REQUIREMENTS OF ESSENTIAL AMINO ACIDS
(mg/kg/day)
Requiremientos de aa
esenciales dependen de la Infant Child Adult

edad. Arginine ? ? ?
Histidine 33 ? ?
Isoleucine 80 28 12
Leucine 135 42 16
Lysine 99 44 12
Methionine (+cysteine) 49 22 10
Phenylalanine (+tyrosine) 141 22 16
Threonine 68 28 8
Tryptophan 21 4 3
Valine 92 25 14

Distinción entre aa
esenciales y no-esenciales no
es absoluta
 Cuánta proteína necesitamos?
•Las proteínas difieren en el grado de digestibilidad

REQUERIEMIENTO DE PROTEINA
DE DIFERENTES FUENTES
g/dia para un humano 70 kg)
(

Meat/fish/eggs/milk ~ 20-25
Non-vegetarian ~ 25-30
mixed diet
Mixed vegetables ~ 30-35
Single vegetable* up to 75

* Excepto para poroto soya

 PROTEÍNAS
fuente de N2 en la dieta para
síntesis de compuestos
nitrogenados
Esqueleto carbonado: Energía
Un adulto saludable y con dieta adecuada
está en BALANCE NITROGENADO:

un estado en el cual la cantidad de N2

ingerido es igual al N2 excretado

Este proviene de la proteína ingerida y del

“recambio proteico” normal

Cuándo se afecta el balance nitrogenado??
 RESUMEN del Metabolismo proteico

Proteina dietaria Digestión y Absorción

Proteinas endógenas

RECAMBIO
Pool aminoácidos PROTEICO

a-cetoácidos, NH3
Otros compuestos N

urea
glucosa, lípidos
energía

Excreción de N
 Destino de la proteína dietaria 1
Proteina dietaria Digestión y Absorción

Proteinas endógenas
Síntesis
RECAMBIO
PROTEICO
Degradación
Pool aminoácidos

a-cetoácidos, NH3
Otros compuestos N

urea
glucosa, lípidos
energía

Excreción de N
Digestión y Absorción de proteínas en las células epiteliales

Enzimas
peptidasas
digestivas

:
Origen Gástrico pancreático célula intestinal: enterocito
 Proteína dietaria : digestión y absorción
aminoácidos

Pool de aminoácidos
Proteína endógena

Catabolismo: degradación Anabolismo: síntesis de

de proteínas proteínas

Recambio Proteico
 • Síntesis
– Proteínas plasmáticas (albúmina)
– Compuestos Nitrogenados no-
proteicos (glutation, carnitina,
creatina, etc)
– Bases Nitrogenadas (purinas and
pirimidinas: DNA y RNA)
Pool aminoácidos

•Catabolismo
•Transaminación y deaminacion a ceto-
ácidos
•Energía
•Glucosa
Pool aminoácidos •Cuerpos cetónicos
•Colesterol
•Acidos Grasos
• Eliminación de N ( urea y amonio)
 Bien alimentado Ayuno

Captación de glucosa Captación y utilización de

ácidos grasos y cuerpos
Síntesis de glicógeno
cetónicos
Síntesis de proteínas Degradación proteica y
liberación de aminoácidos
Proteínas dietarias Proteínas endógenas
70-100 g 35-200 g
Digestión y absorción: sólo 1-2 g de N2 se
pierden (equiv a 6-12 g proteína)

POOL DE AMINOÁCIDOS
RECAMBIO PROTEICO
(músculo)
Magnitud del Recambio Proteico en individuo sano de 70 Kg
 Recambio proteico

1.- Normal
- Control del crecimiento y metabolismo
- Eliminación de proteínas anormales,
errores biosintéticos, mutaciones, daño
oxidativo

2. Enfermedades catabólicas
- Ayuno, trauma, septicemia, cáncer
´
 Degradación de Proteínas

Sistemas Proteolíticos celulares en la degradación

de proteínas

1.-Lisosomal (PL) - Lento y no selectivo

-Proteasas Lisosomales (catepsinas) tienen Ph acídico

-Proteínas exógenas: endocitosis mediadas por receptor

Heterofagia
Partículas proteicas exógenas: pinocitosis
fagocitosis

--Proteínas endógenas: microautofagia

macroautofagia Autofagia
CMA (chaperona)
 Heterofagia
Proteínas
exógenas

Alimento

(MVB)
 AUTOFAGIA Mecanismo LAS

LAS:
Características y Regulación del mecanismo LAS

-Mecanismo prioritario de degradación masiva visceral (hígado)

-Ingesta de alimentos inhibe Proteolisis Lisosomal en hígado y músculo

-Se activa bajo restricción de AA pero requiere horas

-Es regulado por AA e Insulina y Glucagón

Aminoácidos reguladores de autofagia: Leu, Tyr, Pro, Met, Trp, His (hígado)
Leu (músculo). La regulación es supresiva o inhibitoria y el mecanismo
es por inhibición por feed-back.
 Modelo de inhibición de la autofagia por Leucina e Ins en hígado

AA reguladores

(Receptor Tirosine Kinase)

Kinasa, se inactiva en ayuno

Sintesis de Proteinas

Proteínas asociadas a la
membrana
del autofagosoma

Kadowaki y cols, 2003

Características y Regulación del mecanismo LAS

-Rol adicional al nutricional: homeostasis celular : previene patologías

relacionadas con la edad, enfermedades neurodegenerativas, defensa
celular, inhibición de tumorigenesis
Sistemas Proteolíticos celulares en la degradación
de proteínas

2.-Proteasomal

Rápido y Selectivo, da cuenta de la degradación proteica masiva

muscular. Las proteínas sufren recambio (son degradadas y re-
sintetizadas) a diferentes velocidades

Qué tipo de proteínas degrada???

Proteínas dañadas, normales de vida media corta (proteínas
regulatorias), normales de vida media larga (proteínas
contráctiles del músculo), proteínas de membrana, etc.

La degradación selectiva de proteínas ocurre en respuesta a

señales internas y externas: vida media
La vida media de las proteinas es muy variable

Regla del extremo NH2: en promedio, la vida media de una

proteína se correlaciona con su extremo NH2

Proteinas cuyo 1º aa es Met, Ser, Ala, Thr, Val, o

Gly (NH2 libre) tienen vidas medias mayores que 20 h.

Proteinas cuyo 1º aa es Phe, Leu, Asp, Lys, o Arg

tienen vidas medias de 3 min o menos.

Las proteinas llamadas PEST ricas en Pro (P), Glu (E), Ser
(S), Thr (T), son más rápidamente degradadas que otras
Proteasoma: complejo proteico grande formado por
estructuras con muchas subunidades en forma de
cilindros con un core central que está en el núcleo y
citosol de células eucarióticas

Core central
o catalítico:
Proteasoma 20S
 El proteasoma 20S (core catalítico)

El complejo core 20S del proteasoma encierra una

cavidad con 3 compartimentos unidos por un pasadizo
estrecho.
Tiene 3 actividades catalíticas: tipo quimiotripsina,
tipo tripsina e hidrolizante del enlace peptídico

Funciones del Proteosoma 20S:

En las células jóvenes y sanas permite eliminar rápidamente

las proteínas moderadamente oxidadas y dañadas de una
manera independiente de ATP. Degrada sólo proteínas no
plegadas

Proteínas muy oxidadas son sustratos pobres para este

proteosoma, resistiendo la degradación.
 El proteasoma 20S se puede asociar con diferentes
subunidades reguladoras

11S 19S

Proteasoma 20 S + 2 subunidades reguladoras 11 S: inmunoproteasoma

Proteasoma 20 S + 2 subunidades reguladoras 19S : proteasoma 26S
Proteasoma 20 S + 1 subunidad 11 S + 1 subunidad 19S: proteasoma híbrido
Funciones del inmunoproteasoma
Es inducible. Rol en la función inmune: es efectivo en la
generación de péptidos inmunogénicos para la presentación del
complejo mayor de histocompatibilidad. Permite que proteinas y
péptidos pequeños, no marcados entren al complejo core. Esto
no requiere hidrólisis de ATP.

20 S Proteasome
(yeast), with
11S Regulator
(Trypanosome)

Inmunoproteasoma

two views

PDB 1FNT
Funciones del Proteasoma 26S:

A diferencia del 20S, reconoce solo proteinas marcadas, las

despliega, remueve la “marca” y provee un pasadizo para que las
proteínas entren al complejo core. Puede degradar proteínas nativas
(plegadas). Requiere ATP
¿ Cómo se marcan las proteínas para que sean sustrato del proteasoma 26S????

Las proteínas se marcan con 4-6 residuos de ubiquitina

Ubiquitina: proteína con 76 aminoácidos

Los residuos se unen por el carboxilo terminal al grupo NH2 de la proteína que se quiere
marcar (preferentemente en Lys)
Mecanismo de ubiquitinilación
 Proteasoma

http://www.nature.com/nrm/journal/v2/n3/animation/nrm0301_17
9a_swf_MEDIA1.html
Acumulación proteínas oxidadas:
 enfermedades neurodegenerativas:
enfermedad de Alzheimer, distrofia muscular,
cataratas, enfermedad de Parkinson

 edad:
 carbonilos en cerebro humano, lentes
oculares, eritrocitos
 Oxidación de proteínas  Eliminación proteínas
oxidadas

Acumulación
En las células jóvenes hay proteínas moderadamente oxidadas: ( )
las que son rápidamente seleccionadas por el proteasoma 20S y degradadas.
Hay pocas proteínas severamente oxidadas ( )
También hay proteínas intactas ( ) que por el recambio normal
son ubiquitiniladas y degradadas por el proteasoma 26S
Los radicales libres generados por la mitocondria aumentan con la edad generando mayor
oxidación de proteínas (mayor grado y mayor número). El proteasoma 26S es inhibido por
oxidación al igual que las proteínas encargadas de la ubiquitinilación. Se inhibe tanto 20S
como 26S, lo que hace que se formen agregados proteicos ( ).
Estos agregados le confieren autofluorescencia a las células envejecidas contribuyendo
a la disfunción celular y senescencia
 Teoría eje lisosomal-mitocondrial

Inhibición
del proteasoma
Condiciones fisiológicas que regulan la degradación proteica
muscular por el mecanismo UP
Desórdenes del apetito
Uremia crónica y aguda
Diabetes Mellitus
Sepsis
Caquexia cancerosa
Cancer
Hipotiroidismo
Hipopituitarismo
Defectos del túbulo renal
Enf. neuromusculares
Quemaduras
SIDA
Síndrome de Cushing
Deficiencia de nutrientes
Regulación del sistema UP

1. Aumento Glucocorticoides

Acidosis

2. Insulina circulante: I e IGF-1 actúan regulando

niveles de mRNA para enzimas de la vía

3. Niveles hormona tiroídea

Evidencias de la regulación del sistema UP

mRNA de los componentes de la vía

Cantidad de proteína conjugada con ubiquitina en músculo de animales

ayunados

Degradación proteica al inhibir la actividad proteasoma

 Modelo de regulación de proteolisis bajo deficiencia de AA

La ausencia de AA activa al sistema UP que mantiene el pool de AA.

Los AA liberados se unen al tRNA y están listos para incorporarse a la
síntesis de proteínas. Si la deficiencia de AA persiste, se activa el
mecanismo LAS
Sistemas Proteolíticos celulares en la degradación de
proteínas
3.- Citosólico activado por Ca2+ (calpaínas):

Importante en la injuria celular, necrosis y autolisis

independiente de ATP

Numerosas otras proteasas en la célula - ej. proteasas

citoplasmáticas requeridas para apoptosis (caspasas).
 Modelo de atrofia muscular en caquexia

Deficiencia de I
IR
Son importante las proteínas desde el punto de
vista energético???

-Cuando el aporte de CH y lípidos está disminuido

-Cuando proteínas están en exceso

aa glucogénicos Glucosa
aa cetogénicos AG cetoácidos

Tejido Adiposo TG (si ingesta de CH y Lípidos

es adecuada)
 Metabolismo de aminoácidos
Proteína dietaria

proteinas endógenas

Pool de aminoácidos Destino del

esqueleto
carbonado
a-cetoácidos, NH3
otros compuestos N

urea
glucosa, lípidos
energía

Excreción de N
 Destino del esqueleto carbonado de los
aminoácidos
Todos los aminoácidos pueden ser degradados por los humanos.
“Glucogénicos” ( o “glicogénicos”) si los productos pueden entrar a la
vía gluconeogénica
“Cetogénicos” si los productos son intermediarios del metabolismo de
lípidos o cuerpos cetónicos.

Glycogenic
Glucogénicos Ketogenic Glucogénicos
Cetogénicos Both glycogenic
y cetogénicos
and ketogenic
Alanine Glycine Leucine Isoleucine
Arginine Histidine Lysine Phenylalanine
aspartic acid Methionine Tyrosine
asparagine Proline Tryptophan
cysteine Serine
glutamic acid Threonine
glutamine Valine
 Metabolismo de Aminoácidos glucogénicos

Los aminoácidos que son convertidos en intermediarios del ciclo de

los TCA pueden convertirse en glucosa por gluconeogenesis en hígado
 Aminoácidos cetogénicos
transaminase 6 steps acetoacetate
Leucine -ketocaproate
Leucina acetoacetate lipids
Lysine 2 steps -aminoadipic 6 stepsacetoacetato
-hydroxybutyrylCoA LIPIDOS
Lisina semialdehyde

Aminoácidos glucogénicos y cetogénicos

La degradación de fenilalanina es un ejemplo de cómo un aminoácido puede
dar origen tanto a lípidos como glucosa
tetrahydrobiopterin tetrahydrobiopterin
Fenilalanina
Fenilalanine tirosine p-hydroxyfenilpiruvato homogentisic acids

fumarato + acetoacetato fumaryl-acetoacetate maleyl-acetoacetate

TCA cycle, lipids

gluconeogenesis
 Biosíntesis e interconversión de aminoácidos

Reacciones más comunes de los aminoácidos

Reacciones de Transaminación

• Reacción metabólica central que permite transferir un grupo NH2 a

un cetoácido para generar otro amino ácido.

• Catalizado por una familia de transaminasas (aminotransferasas).

La reacción general es:

a-aminoácido 1 + a-cetoácido 2 a-cetoácido 1 + a-aminoácido 2

Excepto: treo y lis

ca1 aa2

aa1 ca2

Transaminasas
Transaminasas usan Piridoxal Fosfato como cofactor

Forma activa de la Vitamina B-6

 Transaminasa glutámico-pirúvico
Degradación de ala: pir E o glucosa.
Para eliminar grupo amino ya que no puede entrar desde ala al ciclo
de la urea
Transaminación de la valina: valina puede formarse a partir de
-cetoisovalerato cuando es administrado terapéuticamente
Reacciones de aminación y deaminación:

N del NH4+ se incorpora a un cetoácido, o se libera de un

aa.

aminación
- cetoácido 1 + NH4+ -aminoácido 1
deaminación

Ej: glutamato deshidrogenasa:

Enzima alostérica, reversible in vitro que al liberar NH4+

produce NADH (energía)
Reacción de deaminación: la glutamato deshidrogenasa
Enzima alostérica, reversible in vitro que al liberar NH4+ produce NADH(energía)
In vivo: formación de amonio
Regulación alostérica de la glutamato
deshidrogenasa
 (tóxico), es absorbido y
transportado al hígado

Rol del glutamato en la síntesis, degradación e interconversión

de aminoácidos
glutamina : transportador de grupos amino constituye el 50%
de los aa circulantes
 Transportador y almacenador de NH4+

Reacción catalizada por la glutamina sintetasa

Reacción catalizada por la glutaminasa
Reacciones de Decarboxilación: eliminación de CO2
Ej: glutamato decarboxilasa dependientes de
piridoxal fosfato

Reacciones de Oxidación: reacciones de deaminación pero que

no producen NADH y ATP
Vías más importantes del transporte de N2
entre órganos a partir de la proteolisis muscular

•Músculo es el órgano que más

contribuye a eliminar nitrógeno.
En ayuno:
Ciclo de la Alanina:
Aporta esqueleto carbonado
para gluconeogénesis en hígado
Metabolismo de Proteínas y aminoácidos
proteína dietaria

proteinas endógenas

aminoácidos Salida de
Nitrógeno
a-cetoácidos, NH3
otros compuestos del N

urea
glucosa, lípidos
energía

Excreción de Nitrógeno
 UREA
no es tóxico, soluble y fácilmente excretado
 Carbamil-sintetasa

(Matriz mitocondrial)

Síntesis de carbamilfosfato y entrada al ciclo de la

úrea
 Mitocondria

TCA

Ocurre en el hígado
5 enzimas:
2 en mitocondria
3 en citosol.
Ciclo de la úrea Los sustratos se
van traspasando
 Regulación del ciclo de la urea
La actividad de las enzimas del ciclo se regulan de acuerdo a las
necesidades.

• A nivel de la transcripción: elevada cuando la ingesta proteica es elevada,

cuando la ingesta es mínima se reduce 10 veces.

• Control de la 1ª enzima (carbamil sintetasa) es por efecto alostérico:

N-acetilglutamato. La N-acetilglutamato sintetasa (mitocondrial ) es
activada por arginina.

N-acetyl
glutamate
synthetase

Carbamoyl phosphate
 Alteraciones en el funcionamiento del ciclo de la urea

En ciertos desórdenes genéticos causados por mutaciones

en los genes de las enzimas del ciclo.

Una de las más severas: Coma hiperamonémico neonatal:

retardo mental.

En falla hepática tb se produce mal funcionamiento del

ciclo de la urea (no-genético).
 Si el ciclo de la urea funciona mal...

• Amoníaco (o NH4+ ) se acumula en el plasma y tejidos, incluyendo

cerebro. Las consecuencias clínicas incluyen vómitos, somnolencia, coma
y muerte.

• Causas de cuadro clínico: se barajan 2 hipótesis (no exclusivas):

• Depleción de a-cetoglutarato: en presencia de NH4+, a-

cetoglutarato es convertido a glutamato por la glutamato
dehidrogenasa. Causa una disminución del ciclo de los TCA y por lo
tanto de la fosforilación oxidativa, de los cuales las neuronas son
dependientes.

•Toxicidad de glutamina. Se acumulan los niveles de glutamina en

astrocitos, que tienen potente glutamina sintetasa. La presión
osmótica circulante causa hinchazón y edema.
Manejo de los defectos del ciclo de la urea

Terapia basada en:

a.- limitar la ingesta proteica y formación de amonio:

reemplazo por cetoácidos

b.- remover el exceso de amonio: la fuente bacteriana de

amonio intestinal se puede reducir con compuestos que
acidifican el colon (levulosa). Tb tratamiento con
antibióticos que eliminan bacterias

c.- reemplazar los intermediarios que faltan del

ciclo de la urea

d- usar drogas para crear vías alternativas de excreción

de N (fenilbutirato, benzoate)