FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA DE CIENCIAS QUÍMICAS

CARRERA DE INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA AMBIENTAL

GUÍA DE LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA

PRÁCTICA No. 6 BACTERIAS Y HONGOS

1. DATOS GENERALES:

NOMBRES: CÓDIGOS:

 CINTHIA PADILLA 2550

 ANGEL SANCHEZ 2375
 BENJAMIN TOAQUIZA 2545
GRUPO No.: 2

FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:

2017/11/14 2017/11/27

2. OBJETIVOS:

2.1. GENERAL:

Cultivar bacterias y hongos.

2.2. ESPECÍFÍCOS:
 Diferenciar las bacterias de los hongos mediante su cultivo.
 Identificar la funcionalidad del medio para cada cultivo de bacterias y
hongos
 Describir las colonias de bacterias y hongos producidas, relacionándolas
con sus orígenes.
 3. METODOLOGÍA:

1. Preparar los medios de cultivos para bacterias y hogos, haciendo los

cálculos previos para su elaboración y dejar enfriar durante varios
minutos antes de proseguir.
2. Colocar medio en cada caja Petri cuidadosamente, previamente
numerados y señalados según corresponda.
3. Dejar enfriar los medios de cultivos y guardarlos en el refrigerador.
4. Una vez fríos:

EN LAS 4 PLACAS CON AGAR PARA BACTERIAS

1. Dejar una placa sin abrir que será utilizada para control.
2. Dejar una placa abierta mientras se realiza los demás cultivos.
3. Tomar una fruta podrida y con la ayuda de un hisopo se lo clava en la fruta
de forma perpendicular justo donde hay más daño por parte de
microorganismos y eso se lo frota en la placa.
4. Frotar la boca de una persona usando un hisopo y luego se la frota en la
placa.
EN LAS 3 PLACAS DE AGAR PARA HONGOS*
1. Dejar una placa para hacer el control.
2. Tomar una fruta podrida, con la ayuda de un hisopo se lo clava en la fruta
de forma perpendicular justo donde hay más daño por parte de
microorganismos y eso se lo frota en la placa.
3. Frotar la boca de una persona usando un hisopo y luego se la frota en la
placa.

5. Dejar las placas a temperatura ambiente, durante 7 días. A los 4

días, abrir la placa 6, con mucho cuidado, y colocar sobre el agar seis
discos embebidos en diferentes antibióticos (que proveerá el docente).
Nota. En caso de no poder realizar este paso de la experiencia se incluye a
continuación un resultado de un antibiograma para que sea analizado en
clase.
6. Etiquetar y sellar las placas de Petri
7. Anotar diariamente los cambios que se observan.
8. Dejar que las bacterias y hongos se desarrollen durante 4 a 6 días
9. Registrar tus resultados. Después de un par de días, habrá una
variedad increíble de bacterias, moho y hongos creciendo dentro de
cada placa de Petri.
10. Desechar las bacterias y hongos de forma segura, tomando las
medidas de seguridad adecuadas.
 4. MATERIALES, SUSTANCIAS, REACTIVOS Y EQUIPOS:

Bacterias y hongos

 6 placas de Petri u otros recipientes poco profundos con tapa;

 Agar o gelatina sin sabor;
 Leche o yogur,
 Una varilla metálica o hisopos esterilizados
 Un trozo de papa u otro vegetal cocido que se debe dejar pudrir varios días
en un recipiente con agua.
 Discos embebidos en diferentes antibióticos (aportado por la escuela).

5. MARCO TEORICO Y REFERENCIAL:

5.1. Marco Teórico:

BACTERIAS (Holgado & Irina, 2016)
Son organismos o seres unicelulares procariota pertenecientes al reino
mónera. Las dimensiones de las bacterias son muy reducidas, miden unos
2µm de anchura y 8µm de longitud.

Dependiendo de la tinción de la pared celular de la bacteria según el

método de Gram se pueden distinguir dos grupos:

 Grampositivas; si su pared celular se tiñe de azul-violeta.

 Gramnegativas; si su pared celular se tiñe de rosa.

La forma de las bacterias viene determinada por la rigidez de su pared

celular y aunque no es constante, se pueden clasificar según su forma:
 Formas esféricas o cocos, que se agrupan: a) en grupos de
dos (diplococos), b) en cadenas (estreptococos) y c)
agrupaciones irregulares que tienen forma de racimo de uvas
(estafilococos).

 Formas de bastoncillos rectos (bacilos).

 Forma helicoidal que pueden ser: a) flexibles y con varias

vueltas de espira (espiroquetas), b) rígidas y con una espira
(espirilos) y, por último, c) rígidas y con una vuelta de espira
(vibrios).
 Recuento de placa de agar (PCA) (Ali, 2017)
El agar con conteo de placa (PCA) o PCA estándar es un sustrato
bacteriológico utilizado para la determinación del número total de bacterias
vivas y aeróbicas en una muestra. Por lo tanto, PCA no es un medio
selectivo. El cultivo se realiza después de una dispersión profunda y a 20
o 30 ° C.
El medio contiene:
 Triptona (contiene aminoácidos)
 Extracto de levadura (contiene péptidos, azúcares, minerales y
vitaminas B)
 Glucosa (fuente de carbono)
 Agar (agente gelificante)
 Agua
 El pH final del medio debe ser 7.0

Sabouroad Dextrose Agar (Acumedia, 2017)

Se usa para cultivar hongos y levaduras patógenos y comensales. La alta dextrosa la
concentración y el pH ácido de la fórmula permite la selectividad de los hongos.
Este medio es beneficioso en estudios de esporulación y producción de pigmentos.
Sabouraud Dextrosa Agar se utiliza para determinar la microbial contenido de
cosméticos
y en la evaluación micológica de los alimentos. Sabouraud Dextrose Agar W /
Cloranfenicol es una modificación de Sabouraud Dextrosa Agar, con el además de
cloranfenicol para aumentar la selectividad contra los microorganismos comensales.
Principios del procedimiento
El resumen enzimático de caseína y el resumen enzimático de tejido animal
proporcionan las fuentes de nitrógeno y vitamina requerido para el crecimiento del
organismo en Sabouraud Dextrose Agar W / Cloranfenicol. La alta concentración de la
dextrosa se incluye como fuente de energía. El cloranfenicol es un inhibidor antibiótico
de amplio espectro para un amplio rango de bacterias Gram-negativas y
Grampositivas. Agar es el agente solidificante.
HONGOS
Los hongos constituyen un grupo muy numeroso de organismos (se han descrito
aproximadamente 500.000, pero se estima que pueden existir entre 1 y 1,5 millones de
especies) que presentan una amplia distribución en la naturaleza, contribuyendo a la
descomposición de la materia orgánica y participando en los ciclos biológicos. Un
pequeño número son patógenos de animales y plantas. Los hongos presentan
básicamente dos tipos de morfologías: una multicelular denominada filamentosa y otra
unicelular denominada levaduriforme. Los hongos filamentosos (miceliares o mohos),
representan el crecimiento más típico de los hongos microscópicos. En medios de
cultivo sólidos y también sobre cualquier superficie en la que se desarrollen, por
ejemplo, frutas u otros alimentos, producen colonias algodonosas o pulverulentas que
son muy características. Al microscopio óptico, los hongos filamentosos presentan unas
estructuras tubulares, formadas por múltiples células, que se denominan hitas. La
mayoría de los hongos presentan reproducción sexual y asexual. El estado sexual se
denomina teleomorfo o meiospórico y el asexual anamorfo o mitospórico. Es
relativamente común que un mismo hongo tenga dos nombres, el del estado anamorfo
y el del estado teleomorfo, ya que suelen haberse descubierto y nombrado de forma
independiente (Arístegui, 2003).

5.2. Marco Referencial:

La presente práctica de “BACTERIAS Y HONGOS” se realizó en la ciudad de

Riobamba en la ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO Km 1
½ panamericana sur, Facultad de Ciencias, Escuela de Ciencias Químicas, en el
laboratorio de Biotecnología.

6.- PROCEDIMIENTO:

6.1. DIAGRAMA DE FLUJO DE LA PRÁCTICA:

 Preparar los medios de cultivos
para bacterias y hogos, haciendo
los cálculos previos para su
elaboración y dejar enfriar durante
varios minutos antes de proseguir.
Colocar medio en cada caja Petri
cuidadosamente, previamente
numerados y señalados según
corresponda.
Dejar enfriar los medios de
cultivos y guardarlos en el
refrigerador.
EN LAS 4 PLACAS CON AGAR
PARA BACTERIAS
1. Dejar una placa sin abrir que
será utilizada para control.
2. Tomar una fruta podrida y con
la ayuda de un hisopo se lo clava
en la fruta de forma
perpendicular justo donde hay
más daño por parte de
microorganismos y eso se lo
frota en la placa.
3. Frotar la boca de una persona
usando un hisopo y luego se la
frota en la placa.
4. Dejar una placa abierta
mientras se realiza los demás
cultivos.
Etiquetar y sellar las placas de Petri Dejar que las
Anotar diariamente los cambios bacterias se
que se observan. desarrollen durante 4
a 6 días
Dejar las placas a temperatura
ambiente, durante 7 días. A los 4 días,
Registrar tus
abrir la placa 6, con mucho cuidado resultados. Después
de un par de días,
habrá una variedad
increíble de bacterias,
EN LAS 3 PLACAS DE AGAR PARA moho y hongos
HONGOS*
creciendo dentro de
1. Dejar una placa para hacer el cada placa de Petri.
control.
2.Tomar una fruta podrida, con la
ayuda de un hisopo se lo clava en la
fruta de forma perpendicular justo
donde hay más daño por parte de Desechar las
microorganismos y eso se lo frota bacterias y hongos de
en la placa. forma segura,
tomando las medidas
3. Frotar la boca de una persona
de seguridad
usando un hisopo y luego se la
adecuadas.
frota en la placa.

6.2. OBSERVACIONES:
6.2.1. Tabla: características de los cultivos:
HONGOS BACTERIAS
Caja Petri # 1 2 3 1 2 3 4
CONTENIDO Control Fruta Saliva Control Ambiente Fruta Saliva
TEXTURA --------- Peluda Peluda --------- Grumosa Grumosa Grumosa
COLOR --------- Blanco, Blanco --------- Blanco Blanco Amarilla
café y y gris Beige Beige Blanco
gris Beige
# COLONIAS --------- 3 1 --------- Incontable Incontable Incontable
FORMA --------- circular circular --------- Circular Circular Circular
Ovalada Ovalada Ovalada
Irregular

7. RESULTADOS
 7.1. CALCULOS
PLACAS DE PETRI
15-20 mL 90mL

23,5 g/L x 90 mL x 1L/1000mL =2,12g PCA

23,5 g/L x 45 mL x 1L/1000mL = 1,06g Sabouraud

7.2. TABLA: Descripción de los cultivos de hongos y bacterias:

HONGOS BACTERIAS
Caja Petri # 2 3 2 3 4
Contenido Fruta Saliva Ambiente Fruta Saliva
Descripción Se obtuvieron 3 Se obtuvo Se observó Se observó Se observó una
: hongos de un hongo una serie de una serie de serie de
aspecto circular semicircular circunferencia circunferenci circunferencias
concéntricos de blancuzco s de colores: as y óvalos y óvalos
color blancos concéntrico blanco y de colores: irregulares de
con gris y a de color gris Beige, blanco y colores:
excepción de y aspecto cuyas Beige, amarillo, blanco
uno de ellos que viscoso. colonias eran cuyas y
poseía un color incontables colonias Beige,
café eran cuyas colonias
incontables eran incontables

8. DISCUSIÓN (Mínimo 150 palabras)

Los medios de control arrojan un resultado positivo, se debe por la
ausencia de contaminación del medio de cultivo.
En el ambiente se encuentra diversidad de microorganismos formando
conjunto de ecosistemas microbianos generalmente se puede describir
para ubicar dentro de un género pero para identificar a que especie
corresponde se debe realizar estudio específico, en el medio se muestra
incontables colonias de bacterias, el cual indica su gran variedad. En la
placa de saliva también se observa presencia de colonias, en caso de
placa PCA las colonias son incontables, y en placa de Sabourand
presenta un sola colonia circular, filamentosa muy grande generalmente
 es Cándida (hongo unicelular) que vive en la flora bucal. Con muestra de
fruta podrida siembra de bacterias arrojan innumerables colonia de
bacterias y mientras que hay 2 a 4 colonias de hongos, todos los
vegetales poseen en sus superficies una microflora, arecen de
microorganismos en la profundidad de sus tejidos, el deterioro de las
capas de la frutas facilita al aumento de la flora microbiana y conlleva a
ser un medio esencial para el desarrollo.

9. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES:

7.1. CONCLUSIONES
 Se cultivó hongos y bacterias, organismos que se diferencian
teóricamente, ya que las bacterias son organismos unicelulares
microscópicos, sin núcleo ni clorofila, y los hongos son organismos que
tienen células con núcleo, son heterótrofos y pluricelulares en su
mayoría y sus cuerpos están constituidos por filamentos tubulares
microscópicos, denominados hifas, que se ramifican y entrecruzan.
 Se diferenció las bacterias de los hongos mediante su cultivo, ya que las
bacterias presentan estructuras circulares de colores beige y claros de
un tamaño muy pequeño con respecto a las cajas Petri, en cambio los
hongos se presentan como semi-círculos blanquecinos de aspecto
peludo cuyo centro cambia a un color más oscuro, además de que su
tamaño es mucho más grande que el de las bacterias.
 Se identificó la funcionalidad del medio para cada cultivo de bacterias y
hongos; como el medio de cultivo para bacterias es PCA tiene la función
de proveer alimento y estabilidad en las colonias a una temperatura
entre 20-30 oC; el medio de cultivo Sabouraud tiene la función de brindar
alimento para el desarrollo de hongos se usa para cultivar hongos y
levaduras patógenos y comensales.
 Se describió las colonias de bacterias y hongos producidas,
relacionándolas con sus orígenes, debido a que en el caso de los
hongos provenientes de la fruta se obtuvieron 3 hongos de aspecto
circular concéntricos de color blancos con gris y a excepción de uno de
ellos que poseía un color café, lo que nos induce a la existencia de un
contaminante, en cambio los hongos provenientes de la saliva
presentaban un semicircular blancuzco concéntrico de color gris y
aspecto viscoso. En el caso de las bacterias provenientes del ambiente
estas se representaron por una serie de circunferencias de colores:
 blanco y beige, cuyas colonias eran incontables, las baterías de origen
frutal presentaron un aspecto de circunferencias y óvalos de colores:
blanco y beige, cuyas colonias eran incontables, las bacterias
provenientes de la saliva eran de forma circular y ovalado, irregular, de
colores: amarillo, blanco y beige, cuyas colonias eran incontables, lo que
nos induce a generar una serie de características fundamentales y
esenciales tanto para hongos como bacterias.

7.2. RECOMENDACIONES
 Preparar los medios de cultivo con una revisión previa de los cálculos
para obtener el suficiente medio destinado a cada caja Petri.
 Rotular las cajas Petri con cinta para evitar la confusión del material.
 Manejar los materiales y el medio especialmente, con normas de
asepsia estrictas, evitando su contaminación.
 Colocar pequeñas muestras en el cultivo de bacterias para obtener
un número de colonias contable.

10. BIBLIOGRAFÍA:
8.1 Citas
(Holgado & Irina, 2016)
(Ali, 2017)
(Acumedia, 2017)
(Arístegui, 2003).
(Porquebiotecnología, 2007)

8.2 Bibliografía
Acumedia. (12 de Abril de 2017). foodsafety. Obtenido de
http://foodsafety.neogen.com/pdf/acumedia_pi/7306_pi.pdf

Arístegui. (2003). El reino de los hongos. IBEROAMERICANA, 1-4.

Obtenido de http://hongos-alergenicos.reviberoammicol.com/files/001.PDF

8.3 Internet
Ali, A. (26 de Noviembre de 2017). vetbact. Obtenido de
http://webcache.googleusercontent.com/search?q=cache:GcY_iwy2Bp4J:w
ww.vetbact.org/%3Fdisplayextinfo%3D97+&cd=14&hl=en&ct=clnk&gl=ec&lr
=lang_en%7Clang_es

Holgado, R., & Irina, E. (12 de Diciembre de 2016). iesjuangris. Obtenido de

http://www.iesjuangris.com/index.php?option=com_attachments&task=down
load&id=8
 Porquebiotecnología. (2007). Porquebiotecnología. Obtenido de
http://www.porquebiotecnologia.com.ar/index.php?action=cuaderno&opt=5&
tipo=3&note=98

11. CUESTIONARIO:

Bacterias.

1. ¿Cómo se percibe en la placa la presencia de bacterias?

Se pueden ver colonias separadas, de diferentes tamaños y colores, o en
caso de ser un único tipo de bacteria, se puede extender como una cubierta
de pequeñas colonias del mismo color (Porquebiotecnología, 2007).
2. ¿Cuál es el objetivo de la placa 1?
La placa 1 es un control o testigo que muestra que en un medio esterilizado
(al hervir el agua) no crecen microorganismos; es decir que provienen de
alguna fuente externa (Porquebiotecnología, 2007).
3. ¿De dónde provienen los microbios que crecen sobre la placa 2? ¿Y los
que aparecen sobre la placa 3?
Los microorganismos en la placa 2 provienen del aire, del ambiente, y los
de la placa 3 provienen de la respiración de la persona que también es
consecuencia de la entrada al cuerpo de microorganismos del ambiente
(Porquebiotecnología, 2007).
4. ¿Se notan diferencias entre las colonias provenientes de diferentes
orígenes? ¿Cuáles son esas diferencias?
Posiblemente noten diferencias entre las colonias, en su aspecto y color,
dependiendo del origen (Porquebiotecnología, 2007).
5. ¿Podrían ser patógenas las bacterias que crecen en la placa 4? ¿Por qué?
Se supone que, si no hubo contaminación de otros microorganismos, las
bacterias que son parte de los alimentos no son patógenas
(Porquebiotecnología, 2007).
6. ¿Cómo se puede determinar a partir de la placa con antibióticos cuál de los
antibióticos examinados es el más efectivo?
Se debe observar el círculo que se forma alrededor del disco de antibiótico. El
antibiótico mata bacterias o impide que se multipliquen, por lo tanto, donde haya
un círculo claro alrededor del antibiótico significa que allí no hay bacterias, es decir
que el antibiótico funcionó. Cuanto más grande sea ese círculo se supone que
más efectivo fue el antibiótico en eliminar las bacterias a su alrededor
(Porquebiotecnología, 2007).
12. RESUMEN
Para la práctica de cultivo de hongos y bacterias, el procedimiento empieza con el
cálculo según indicado la etiqueta de los medios para 15 ml por caja (4 cajas para
bacterias y 3 cajas para hongos). Después de preparar los medios de PCA para
bacterias y medio Sabourand para hongos se somete a la esterilización en la
autoclave. Una vez esterilizada colocar el medio en caja Petri correspondiente, se
vierte ¾ parte, de manera uniforme y circular se agita con el fin de esparcir el
medio por todo el área de la caja.
Una vez enfriada el medio dentro de 24 horas se procede a realizar la siembra, de
cada medio se deja un aplaca sin abrir que es utilizada para control. En medio
PCA: una caja abierta para siembra de microorganismo del ambiente, en la otra
con un hisopo se siembra bacterias de fruta podrida y mucosas de la boca
correspondientemente. Para hongos: se siembra hongos de fruta podrida y saliva.
Dejar a temperatura ambiente durante 4 a 6 días y registrar los resultados.

DESCRIPTORES: Hongos, bacterias, medios, agar, antibiotico

13. ANEXOS:

(a) (b) (c) (d)

PRÁCTICA No. 6 BACTERIAS Y

NOTAS
CATEGORÍA DEL ESPOCH HNGOS
a) Preparación de DIAGRAMA LÁMINA ESCALA FECHA
medios □ APROBADO FACULTAD DE CIENCIAS
b) Placa Petri: hongos □ CERTIFICADO ESCUELA DE CIENCIAS Q
de fruta. □ INFORMACIÓN CARRERA DE I.B.A.
c) Placa Petri: hongos LABORATORIO DE 2017/11/27
de la boca. 01 1:1
d) Placa Petri: control.
□ POR CALIFICAR BIOTECNOLOGÍA
□ POR APROBAR
REALIZADO POR: GRUPO 2
□ POR CALIFICAR
 (e) (f) (g) (h)

PRÁCTICA No. 6 BACTERIAS Y

NOTAS
CATEGORÍA DEL ESPOCH HNGOS
e) Placa Petri: DIAGRAMA LÁMINA ESCALA FECHA
bacterias-control. □ APROBADO FACULTAD DE CIENCIAS
f) Placa Petri: □ CERTIFICADO ESCUELA DE CIENCIAS Q
bacterias-fruta. □ INFORMACIÓN CARRERA DE I.B.A.
g) Placa Petri: LABORATORIO DE 2017/11/27
bacterias-saliva de la 02 1:1
boca.
□ POR CALIFICAR BIOTECNOLOGÍA

h) Placa Petri: □ POR APROBAR

REALIZADO POR: GRUPO 2
bacterias-ambiente. □ POR CALIFICAR