UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
Escuela Académico profesional de Farmacia y Bioquímica

TOXICOLOGÍA Y
QUÍMICA LEGAL

PRÁCTICA N° 05
CURSO:
 Toxicología y Química Legal
PROFESOR:
 LLAHUILLA QUEA, José

GRUPO:
N°02 “ORFILA”
INTEGRANTES:
 CONTRERAS ESCANDÓN, Milagros
 RAMÍREZ GARIBAY, Deidy
 TAPIA BAÑEZ, Ysamar
 TEVES GUZMÁN, Katerin
HORARIO DE PRÁCTICAS:
LUNES 10:00 am – 2:00 pm

FECHA DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA:

16 de abril del 2018
FECHA DE ENTREGA DE LA PRÁCTICA:
21 de abril del 2018

CICLO IX - 2018
 I. OBJETIVOS
A. Determinar cualitativamente el monóxido de carbono en muestra de sangre mediante
los ensayos de dilución y alcalino.
B. Determinar cuantitativamente el monóxido de carbono en muestra de sangre por el
método Espectrofotométrico por Microdifusión de Feldstein y Klenshoj.

II. FUNDAMENTO TEÓRICO

Determinación cualitativa:
1. Ensayo de dilución ( Haldane)

El método consiste en la comparación a simple vista de la coloración de la muestra de sangre

sospechosa diluida con otra normal en igual dilución. La sangre normal tiene habitualmnete un
color rojo amarillento mientras que si la muestra desconocida tiene COHb, el color será carminado
rosado típico indicador de la presencia de COHb. Es un método de baja sensibilidad detectándose
diferencia de color cuando la saturación de la hemoglobina con CO es mayor del 30%.1

2. Ensayo alcalino

Se basa en la mayor estabilidad de la COHb, dentro de ciertos límites, con respecto a la labilidad
del pigmento hemético normal (Hb) en un medio alcalino. La sangre normal adquiere color
castaño por transformación de la Hb en hematina alcalina. La hematina es la globina
desnaturalizada que tiene el Fe como Fe+3. La sangre con COHb mantiene por unos minutos su
color carminado, porque la COHb es más resistente y más estable al tratamiento por álcalis. Luego
de varios minutos también se transformará en hematina, por lo tanto es importante la
observación inmediata. Este ensayo tiene como interferencia la sangre fetal o de recién nacido ya
que la Hb fetal es resistente al tratamiento con álcalis y por lo tanto se comporta como la COHb. La
sensibilidad de este ensayo es superior a la del método anterior, ya que con un porcentaje de
saturación de la Hb con CO superior al 10%, se puede diferenciar de una normal.1

Determinación cuantitativa:

1. Microdifusión

El método de microdifusión comprende la

liberación del CO de la hemoglobina con una
solución de ácido sulfúrico diluido o ácido láctico-
ferrocianuro. La cantidad de monóxido de
carbono, si es que existe alguna, se estima por la
película de negro plateado sobre el cloruro de
paladio contenido en la cámara de difusión. 2

2
 III. MATERIALES Y MÉTODOLOGÍA
3.1 MATERIALES
REACTIVOS
 Agua destilada
 Hidróxido de sodio 8%
 Ácido sulfúrico 10% v/v
 Cloruro de paladio 0.01N
 Base oleosa hidrosoluble
 Anticoagulante

MATERIALES
 Tubos de ensayo
 Cámara de Courvay
 Matraz
 Viales
 Aguja
 Ligadura
 Algodón
EQUIPOS
 Centrifugadora
 Espectrofotómetro

3.2 MÉTODOLOGÍA

Toma de muestra:

Palpar la vena para identificar aspectos como su curso, su elasticidad

y su tamaño, y si todo es correcto, hacer el torniquete.

Desinfectar la zona, proceder a la punción

Coger la aguja y quitar el capuchón, acercar la aguja

paralelamente al curso de la vena elegida, y con el biscel hacia
arriba punzar la piel y empezar la extracción de sangre y llenar el
vial con anticoagulante.

Soltar el torniquete, colocar un algodón sobre la zona de punción.

Desechar la aguja y pedir al paciente que presione el algodón
durante unos minutos.

3
Determinación cualitativa

Ensayo de dilución: Ensayo alcalino:

En un tubo de ensayo verter una

alícuota de muestra de sangre

Una alicuota de
muestra de sangre se
vierte en un tubo de Diluir con agua csp 10ml
ensayo

Agregar 1ml NaOH

Se diluye en agua con
csp 10ml

Observar el color

Determinación cuantitativa:

Método espectrofotométrico por Microdifusión de Felstein y Klenshoj

En la luna de
Centrifugar x reloj se
15min coloca 2ml
Cl2Pd 0.01 N

En el
Del
compartimento
compartimento
externo se
interno sacar
coloca 1 ml de Preparación del Blanco
2ml.
sangre

Llevar a la Adicionar a
estufa x éste último +0.1ml de rvo.
20min. Poner 1ml H2SO4
Cl2Pd 0.01N
vaselina en
el filo de la +1ml goma
placa petri arábiga
para mayor
hermeticida +1ml IK 15%
d

4
IV. CÁLCULOS Y RESULTADOS
4.1 Determinación cualitativa del CO
ENSAYO DE DILUCIÓN ENSAYO ALCALINO
+ -
Soluble Sin presencia COHb

4.2 Determinación cuantitativa de CO

(Db − Dd)0.05335 x520

𝐦𝐠 𝐂𝐎% =
Db
(0.682 − 0.393)0.05335 x 520
𝐦𝐠 𝐂𝐎% = mL CO% = mg CO x 0.8
0.682
mg CO% = 11.75 mL CO % = 9.4
17.42 mL CO ------------------> 100%
9.4 mL CO ------------------> x = 53.9%

V. DISCUSIÓN

El monóxido de carbono (CO) constituye una de las principales causas de muerte por
envenenamiento para todas las edades, tanto en nuestro país como a nivel mundial. El CO es
un gas tóxico, menos denso que el aire y que se dispersa con facilidad, que se forma
principalmente a partir de la combustión incompleta de los hidrocarburos. A su alta toxicidad
se suma la peligrosidad de pasar desapercibido, al ser inodoro, incoloro y no irritar las
mucosas.3

La toxicidad de este gas es debida a la alta afinidad de la hemoglobina (Hb) por el CO,
formando la COHb, incapaz de transportar O2, produciendo hipoxia tisular. Los niveles de
COHb dependen de múltiples factores, incluida la magnitud de la exposición, el grado de
ventilación alveolar, el volumen sanguíneo y la actividad metabólica.4 Una concentración de
COHb menor a 2.5% es considerada aceptable desde el punto de vista clínico-toxicológico; un
nivel de COHb superior al 3% en los no fumadores o superior al 10% en los fumadores
confirma la exposición, mientras que entre el 20 y el 40% pueden provocar disnea, arritmia,
síncope y vómitos; y valores superiores al 60% inducen convulsiones y coma.5

En la práctica se determinó cualitativamente y cuantitativamente el porcentaje de CO por

medio del método espectrofotométrico obteniéndose 11.75% CO valor superior a los valores
normales en personas no fumadoras: 1-2%, por lo que se confirma la exposición al CO. Y en un
estudio “Determinación de niveles de contaminación por monóxido de carbono en

5
trabajadoras de tortillerías a base de leña de la Ciudad de Guatemala” Se colectaron muestras
de sangre de las trabajadoras que están expuestas a CO al menos 4 horas diarias para medir el
porcentaje de saturación de carboxihemoglobina (COHb). El método de detección de COHb se
realizó por espectrofotometría UV-VIS, leyendo las absorbancias de las muestras de sangre a
538 nm, máxima absorbancia de carboxihemoglobina, y 578 nm, punto isosbéstico de la
carboxihemoglobina y hemoglobina. Los resultados demostraron que las trabajadoras de las
10 tortillerías a base de leña tienen un porcentaje promedio de saturación de COHb de
20.06%, valor superior a los valores normales en personas no fumadoras: 1-2%. Concluyendo
que las trabajadoras de las tortillerías a base de leña de la Ciudad de Guatemala presentan
concentraciones de CO que constituyen un riesgo para su salud.6

VI. CONCLUSIONES

 Se determinó cuanlitativamente la ausencia de monóxido de carbono en muestra de

sangre por el método de dilución y alcalinidad.
 Se determinó cuantitativamente 11.75 mg% de monóxido de carbono en muestra de
sangre por el método Espectrofotométrico de Microdifusión de Feldstein y Klenshoj.

VII. RECOMENDACIONES

o Utilizar todos los elementos de bioseguridad para la prevención de

intoxicaciones con los reactivos.
o Se debe identificar bien las áreas de la cámara de Courvay para evitar posibles
confuciones interfiriendo con los resultados.
o Para acelerar la reacción en la cámara de Courvay se recomienda llevarlo a
estufa.

VIII. CUESTIONARIO

DEDUCCIÓN DE LAS FÓRMULA:

1. 1mg Pd+2 0.26mg CO

Cada mol de Paladio fue reducido por un mol de monóxido de carbono.

28mg(CO) 106,42mg Pd°

x 1mg
x = 28x 1/106,42
x = 0.26

6
 2. (Db − Dd)0.05335 x520
𝐦𝐠 𝐂𝐎% =
Db

Db: densidad óptica del blanco

Dd: densidad óptica del desconocido
0.05335 = es la cantidad de cloruro de paladio contenido en 0.1ml de solución de
reactivo 0.01N.
Dónde:
La solución fijadora de PdCl2 es 0.01N (0.22g de PdCl2 en 250ml de vehículo), que
corresponde por lo tanto a 0.888g/L.

177.61
PM PdCl2 = 177.61g 𝑥= 𝑋 0.01
2
PM Pd° = 106.7g X = 0.888g/L

Por lo tanto: 177.61g PdCl2 0.888

106.7g Pd° x
X = 0.5335

520: 2 x 10 x 100 x 0,26

Factor que proviene de multiplicar 2x 10(para referir al volumen inicial de sangre y

deacuerdo con la dilución), por 100 para referir a 100ml de sangre y por 0.26 (factor
de transformación).7
Los mg de CO pueden expresarse en ml de CO, por medio de un factor que es igual a
0.8 ya que 1 mol de gas equivale a 22.4 en las condiciones normales de presión y
temperatura.7

28mg de CO 22.4ml
1mg de CO x = 0.8

IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Guatelli, M. Intoxicación oxicarbonada. Estudio bioquímico y metodología
analítica. EUDEBA: Buenos Aires; 1971.
2. Conway, E.J. Microdiffusion analysis and volumetric error. Edición 5ta, Crosby
Lockwood and Sons: London; 1962.
3. Jaimes M, Hernandez L. Determinacion de niveles sanguineos de
carboxihemoglobina como funcion de la exposicion al monoxido de carbono

7
 en la ciudad de Bogota. Revista colombiana de ciencias quimico-farmaceuticas
No. 18 1990
4. Sibón A, Martínez P, Vizcaya M, Romero J. Intoxicación por Monóxido de
Carbono. Cuad Med Forense, 13(47), Enero 2007
5. Labanti M. Investigación de la intoxicación por monóxido de carbono en la
criminalística. Universidad de Cordova: Argentina; 2016.
6. Alvarez M. Determinación de niveles de contaminación por monóxido de
carbono en trabajadoras de tortillerías a base de leña de la Ciudad de
Guatemala. 2011.
7. Durán V.“Determinación de carboxihemoglobina al inicio y final de
jornada laboral en trabajadores de estaciones de servicio-gasolineras de
la zona sur-oeste de la ciudad de Cuenca”. [Tesis].Cuenca: Universidad
de Cuenca. facultad de Ciencias Químicas. carrera de Bioquímica y
Farmacia; 2015.