UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIRIQUÍ

Facultad de Ciencias Naturales y

Facultad de Ciencias Naturales y
Exactas
Exactas
Escuela de Biología
Escuela de Biología

Informe n°3
14 de abril
Informe N°2:
Diluciones seriadas II
Punto Isoeléctrico de 2015
Aminoácidos y Proteínas
QM 300 3er Año 1er Sem. Tec. Médica
Título: Diluciones seriadas 2 Definición general de disolución: Una
dilución es una mezcla homogénea,
Resumen: uniforme y estable, formada por dos o más
sustancias denominadas componentes. La
En la presente experiencia con la finalidad
sustancia presente en mayor cantidad
de adquirir destrezas en la preparación de
suele recibir el nombre de solvente, y a la
diluciones; además de determinar la
de menor cantidad se le llama soluto y es
concentración desconocida de las mismas
la sustancia disuelta. El soluto puede ser
mediante la utilización del
un gas, un líquido o un sólido, y el
espectrofotómetro, el cual proporciona las
disolvente puede ser también un gas, un
variables para dicho cálculo; se procedió a
líquido o un sólido. (Domingo, A., 2014)
realizar una serie de diluciones seriadas a
DILUCIONES SERIADAS
partir de una solución madre 25 mM,
Hay muchas situaciones en que las
empleando una dilución de 1:2, realizando
cantidades de sustancia necesarias para
seis diluciones con lo que se obtuvo las
ver un efecto son extremadamente
siguientes concentraciones:
pequeñas (por ejemplo un fármaco para
C(inicial)=25 mM,
tratar una enfermedad, una hormona para
M1=12.5 mM,
estudiar su efecto en un animal de
M2=6.25 mM,
experimentación, etc.) y difícilmente se
M3=3.125 mM,
pueden pesar o medir en esas
M4=1.562 mM,
proporciones tan pequeñas. En esas
M5=0.781 mM,
situaciones es necesario recurrir a la
M6=0.391 mM,
preparación de una solución de alta
M7=0.195 mM
concentración (o solución de stock o
Obteniendo como resultado un volumen
solución madre) y hacer diluciones
final de 1mL, en donde se tomó 0.5mL de
seriadas a partir de ésta. (Machado, S.,
soluto y 0.5mL de solvente. Podemos
2006).
concluir que una dilución puede ser útil
Un espectrofotómetro es un dispositivo
para obtener resultados más manejables.
utilizado para medir la luz a una
Objetivo: longitud de onda determinada. Está
compuesto por dos partes: un
 Adquirir destrezas en la preparación de
espectrómetro y un fotómetro.
diluciones seriadas empleadas en el
El espectrómetro proporciona luz a una
laboratorio.
longitud de onda específica. El
 Confeccionar gráficas de Abs. vs C
para determinar la concentración de fotómetro mide la intensidad de la luz.
una muestra desconocida. Mediante el cálculo de la cantidad de
luz que una solución es capaz de
Introducción: absorber y la aplicación de la ley de
Beer, el espectrofotómetro puede
DILUCIÓN
La dilución es el procedimiento que se determinar la concentración de una
sigue para preparar una disolución menos solución con color. (Radcliff, D., 2014).
concentrada a partir de una más
concentrada.
Materiales, Reactivos y Equipo: D=0,1 g
 Espectrofotómetro:
Materiales: Marca:
 Pipeta  Laptop:
Capacidad: 5mL Marca: Toshiba
Marca: Modelo: Satélite
 Vaso químico
Capacidad: 100mL
Metodología:
Marca: Kimax
 Tubos de ensayo
Capacidad: 100mL
 Espátula I. Solución Madre: se realizó los
Capacidad: 100 ml cálculos previos para preparar
50mL de dicromato de potasio a
Reactivos: 25mM.
 Agua destilada (H2O) ,
 Dicromato de potasio (K2Cr2O7)
Concentración: 25 mM
II. Diluciones Seriadas: se realizó
Apariencia: Anaranjado intenso.
los cálculos para preparar 5mL de
Masa molar: 294,18 g/mol.
dilución seriadas 1:2, con los que
Punto de fusión: 671,15 K (398 °C).
se realizaron las diluciones.
Punto de ebullición: 773,15 K (500 °C).
Densidad: 2.676 (a 25 °C respecto al
agua a 4 °C).
Solubilidad: 130 g/l a 20 °C en agua III. Determinación de la longitud
Riesgos a la salud: de onda máxima: se seleccionó
El principal problema de este producto una de las diluciones y se siguió
es su capacidad para corroer e irritar las instrucciones del profesor para
piel, ojos, membranas mucosas y determinar la longitud de onda
tracto respiratorio, así como hígado y máxima del dicromato de potasio.
riñones, por lo que es peligroso
inhalado, ingerido o por contacto con la
piel.
IV. Curva de calibración: después
Se ha informado de efectos tóxicos de
de haber realizado la lectura de la
este producto sobre los sistemas
absorbancia de las diluciones
circulatorio y nervioso central,
preparadas a la longitud de onda
pulmones, corazón, riñones y tracto
determinadas se construyó una
gastrointestinal de conejos expuestos
gráfica A vs C empleando el
a concentraciones crónicas.
método de regresión lineal, luego
se determinó la ecuación de la
Equipo:
línea recta para las disoluciones
 Balanza analítica:
preparadas.
Marca: Sartorius
Max 220g
 Resultados:
1
6.25𝑚𝑀 × = 3.125𝑚𝑀
2

I. Solución Madre:
4. C4= C1 × D=

1
3.125𝑚𝑀 × = 1.562𝑚𝑀
2

5. C5= C1 × D=

1
1.562𝑚𝑀 × = 0.7812𝑚𝑀
2

6. C6= C1 × D=

Datos: 1
0.7812𝑚𝑀 × = 0.391𝑚𝑀
2
I. Cálculos de la concentración 7. C7= C1 × D=
madre (mg/mL):
1
0.391𝑚𝑀 × = 0.195𝑚𝑀
Concentración Molar: 25mM=0.0025M 2
Volumen de solución madre: 50mL= 0.05L Determinar el volumen del soluto y
Calcular los gramos de dicromato que se solvente a partir de un volumen final de
necesitan: 5mL de solución.
𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠
[𝑀] =
𝑃. 𝑀 × 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 (𝐿) V (soluto)= V (solución) × D=
1
5mL × = 2.5mL
2
Gramos = M×P.M.×V=
V (solvente)= V (solución) – V (soluto)=
0.0025M×294.18g/mol×0.05L
5mL - 2.5mL= 2.5mL
= 0.367gramos.
II. Cálculos de concentraciones
de las diluciones seriadas 1:2
a partir de la concentración
madre 25mM.
1. C1= Ci × D=
1
25𝑚𝑀 × = 12.5𝑚𝑀
2
C1= 12.5mM
2. C2= C1 × D=
D= 1:2,
1 FD= 2,
12.5𝑚𝑀 × 2 = 6.25𝑚𝑀
V (soluto)= 2.5mL,
V (solvente)= 2.5mL,
V (solución)= 5mL.
3. C3= C1 × D=
 C5=0.781mM
C2= 6.25mM
D= 1:32,
D= 1:4, FD= 32,
FD= 4, V (soluto)= 2.5mL,
V (soluto)= 2.5mL, V (solvente)= 2.5mL,
V (solvente)= 2.5mL, V (solución)= 5mL.
V (solución)= 5mL.

C6=0.391mM
C3= 3.125mM
D= 1:64,
D= 1:8, FD= 64,
FD= 8, V (soluto)= 2.5mL,
V (soluto)= 2.5mL, V (solvente)= 2.5mL,
V (solvente)= 2.5mL, V (solución)= 5mL.
V (solución)= 5mL.

C4= 1.562mM C7=0.195mM

D= 1:16, D= 1:128,
FD= 16, FD= 128,
V (soluto)= 2.5mL, V (soluto)= 2.5mL,
V (solvente)= 2.5mL, V (solvente)= 2.5mL,
V (solución)= 5mL. V (solución)= 5mL.
 III. Tabla de datos y gráfico: La absorción de las radiaciones
Tabla n° 1: Datos de la absorbancia ultravioletas, visibles e infrarrojas depende
versus la concentración. de la estructura de las moléculas, y es
Absorbancia Concentración característica para cada sustancia
(Y) (X) química.
(blanco) 0 0 Cuando la luz atraviesa una sustancia,
0.141 0.459 parte de la energía es absorbida; la
0.354 0.917 energía radiante no puede producir ningún
0.792 1.83 efecto sin ser absorbida.
1.54 3.76 El color de las sustancias se debe a que
éstas absorben ciertas longitudes de onda
de la luz blanca que incide sobre ellas y
solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas
y = 0.3548x + 0.09 longitudes de onda no absorbidas. (Baz,
R² = 0.9829 C., 2010).
1.4 R= 0.99141
La Ley de Beer declara que la cantidad de
1.2 1.201 luz absorbida por un cuerpo depende de
1 la concentración en la solución. (Sánchez,
Absorbancia

D., 2009).
0.8
Lo anterior lo comprobamos
0.6 0.618
experimentalmente, al utilizar una
0.4 0.371 disolución de dicromato de potasio
0.269
0.228
0.2 25mM, de la cual extraímos 5 ml para
0 0 llevar a cabo diluciones seriadas 1:2 (7
0 1 2 3 4 diluciones seriadas) que fueron
Concentración preparadas a diferentes concentraciones.
Estas concentraciones desconocidas,
Lectura espectrofotométrica: λ=467nM
Fig. N°1: Grafico donde se muestra la mediante la utilización del
relación de absorbancia vs concentración. espectrofotómetro, con el cual obtuvimos
IV. Ecuación: Y= 0.3548x + 0.09 la absorbancia de cada muestra, fue
posible que se determinaran realizando los
Discusión:
cálculos antes expuestos en la sección de
Cuando decimos que una sustancia
resultados, obteniéndose que mientras
química absorbe luz de longitud de onda,
más concentrada la sol., mayor
esto significa que las moléculas de esa
absorbancia, esto debido a lo expuesto
sustancia absorben fotones de esa
por la Ley de Beer: la cantidad de luz
longitud de onda.
absorbida por un cuerpo depende de la
Todas las sustancias pueden absorber
concentración en la solución. Por lo cual
energía radiante, aun el vidrio que parece
lógicamente mientras mayor concentrada
ser completamente transparente absorbe
esté la solución, mayor será su
radiación de longitudes de ondas que no
absorbancia.
pertenecen al espectro visible; el agua
Elaboramos luego una gráfica de
absorbe fuertemente en la región del
absorbancia vs concentración con los
infrarrojo.
datos obtenidos en el espectrofotómetro
utilizando una luz de onda de λ=467nM, se Conclusiones:
puede deducir que la absorbancia
aumenta con la concentración de las A través de esta práctica podemos
soluciones y la distancia que recorre el concluir la importancia de adquirir
rayo de luz, debido a que hay mayor destrezas para en empleo y
cantidad de analito (mayor cantidad de preparación de soluciones y diluciones
moléculas que adsorben energía para seriadas en el laboratorio clínico.
excitarse). Las cuales toman esta energía Las diluciones en serie nos permite
del ayo de luz, disminuyendo la intensidad preparar diluciones homogéneas con
de la radiación, por lo que la transmitancia concentraciones sumamente
disminuye al aumentar la concentración. pequeñas, no solo en uso del área
(ANYELA, 2011). química sino como también en
También se puede utilizar esta ecuación microbiología para la dilución de
para conocer la pendiente y la ordenada al células bacterias.
origen a partir de una ecuación dada como Con el espectrofotómetro medimos un
se muestra en la figura n°1 de la gráfica. espectro de luz.
Ejemplo: La ecuación y = 0.3548x + 0.09 Absorbancia es la medición de la luz
tiene pendiente 0.3548 y coeficiente de absorbida.
posición 0.09. Blanco es la medida inicial para poder
(R2 se llama coeficiente de determinación). descartar errores.
Según el grafico nuestra R2 fue de 0.9829. A mayor concentración, mayor
Con la mayoría de las calculadoras cantidad de luz es absorbida y
científicas puede calcularse la ecuación de viceversa.
la recta y el coeficiente R. La ecuación relaciona Y (absorbancia)
Este coeficiente nos informa del grado de con X (la concentración de la solución
relación entre dos variables. Si la relación en cada caso). Entonces,
es lineal perfecta, R será 1. El coeficiente reemplazando el valor de absorbancia
R será positivo si la relación es positiva (al de la muestra incógnita en esta
aumentar x aumenta y), y R será negativo ecuación, puede obtenerse el valor de
en el caso contrario (si al aumentar x, concentración, ya que es directamente
disminuye y). proporcional a su absorbancia.
Por lo que al calcular R a partir de R2 La absorbancia es directamente
obtuvimos un valor aceptable de 0.99141, proporcional a la concentración y la
como lo muestra en la figura n°1. transmitancia es inversamente
Para obtener fieles resultados es proporcional a esta.
necesario ser cuidadosos con la
manipulación de la muestra y de la celda, Bibliografía:
para evitar que las muestras se  Baz, Catty (2010). Espectrofotometría.
confundan; así como también ir de la [En línea]. Consulta: 11 de abril de
muestra más diluida a la más concentrada 2015. Disponible en:
para evitar mediciones de absorbancia http://www.buenastareas.com/ensayos/
erradas. Espectrofotometr%C3%ADa/468724.ht
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