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Universidad Andrés Bello

Facultad de Ciencias de la Salud


Departamento de Ciencias Biológicas
Laboratorio de Biología Celular BIO 035

Trabajo práctico N°3:


Microscopía

Integrantes:
Cid Ankamila
Galvez Cesar
Lizama Paula
Pérez Karen
Sección:
13
Profesoras:
Cortes Nicole
Valenzuela María

26-04-2018
Introducción

Durante muchos años las personas se han percatado de sus necesidades y lo que es
indispensable para avanzar en la ciencia, siendo una de estas el microscopio ya que ha
servido para observar células y/o microorganismos a lo largo de los años.
El microscopio óptico es el elemento o herramienta utilizado principalmente laboratorios de
investigación para dar un detalle más específico de lo que observamos a simple vista.
El primer microscopio fue inventado por casualidad por la unión de lentes el óptico
holandés zacharias janssen 1980 – 1638 fue el primer creador de un microscopio como tal
obteniendo como primer resultado imágenes borrosas a causa del lente de mala calidad. (1)
Existe una variedad de microscopios con diferentes fines científicos, algunos de estos es el
contraste de fases óptico, de barrido, de fluorescencia, electrónico entre otros. (2)
Hoy por hoy se le dan diferentes tipos de uso a cada uno de estos microscopios, tan sólo
sirve para observar células también se puede observar estructuras no celulares para
diferentes finalidades.
En este informe se verá cómo fue el trabajo práctico y teórico de utilización del
microscopio para la visualización de diferentes compuestos, probando la resolución y los
aumentos en distintos tipos de muestras teniendo en cuenta cada una de las estructuras que
componen dicho microscopio.
Hipótesis: al comprender y evaluar la estructura de un microscopio hay que tener en cuenta
su capacidad de observar minuciosamente una gran variedad de estructuras a nivel celular,
poniendo en prueba cada uno de sus aumentos y resoluciones para ver los datos más
concretos que se podrían obtener.

Objetivos
1. Observación y comprensión de como es el funcionamiento del instrumento óptico
en este caso el microscopio y la formación de la imagen en esta.
2. Lograr observar y reconocer diferentes tipos de muestras realizando comparaciones
entre ellas.
3. Alcanzar los resultados propuestos en la guía en 6 actividades diferentes.
4. Determinar valores como el cálculo de aumento total, límite de resolución, poder de
resolución y la determinación del diámetro en el campo visual de un microscopio.
Materiales y métodos

Actividad 1: Se observó con detalle y precisión cada uno de los componentes del
microscopio guiándose por el esquema entregado en la guía ,posterior a eso se observó
parte de los “objetivos” para determina “el poder de aumento y apertura numérica de los
lentes objetivos , luego se observó en la parte superior de los “lentes oculares” el aumento y
apertura numérica, además se observó la apertura numérica del condensador, finalmente se
anotó cada dato en la tabla 2,3 y 4 correspondiente a la primera actividad, en la tabla 5 se
anotó la resolución máxima de su microscopio y la apertura numérica del condensador y
para finalizar se determinó el límite de resolución usando los datos de la formula Límite de
resolución entregada en la guía y con el valor NA como la apertura numérica de la
interfase del aire, luego se determinó el poder de resolución usando los mismo datos pero
aplicándolos con la fórmula de poder de resolución entregada en la guía.
Actividad 2: Se utilizó el lente objetivo en 10x para observar una letra impresa fijada en
porta objetos , se hiso una comparación con la orientación de la letra en su portaobjetos
y la orientación en su campo visual , con esto responder una pregunta propuesta en la guía
,luego se observó la imagen en 40x esperando que surgiera producía algún cambio en su
orientación.
Actividad 3: Con un microscopio con el lente de lupa en 4x se observó una muestra de
portaobjetos con papel milimetrado (1cm2) , al cual se debía determinar el diámetro del
campo visual ,por tanto cada cuadrado era un metro cuadrado, entonces se escogió 4
cuadrados de la muestra y a ese valor se multiplico por un metro cuadrado , este resultado
fue el valor del diámetro de la hoja milimetrada, entonces luego para sacar el diámetro del
campo visual se utilizó la formula entregada en la guía y usando el el diámetro de la hoja
milimetrada por el aumento del objetivo dividido por el aumento pedido y por el del resto
de los lentes objetivos se calcula el dcv.
Actividad 4: Las preparaciones histológicas de frotis de sangre humana y corte de
intestino delgado de rattus norvegicus se observó en el microscopio, luego se anotaron
observaciones y finalmente se hiso el dibujó correspondiente en la guía.
Actividad 5: En esta actividad el DCV ya determinado, junto con el número de celular
(previamente contadas con un “contador de células”) se utilizó para determinar el tamaño
celular.
Actividad 6: Usando un porta objetos se puso una muestra de catafilo de cebolla luego un
cubre objetos con esto se utilizó el microscopio para hacer observación de la muestra con
tinción y sin tinción, porteriormente se dibujó en la guía, también usando el mismo
procedimiento se utilizó hojas de Elodea sp, haciendo una observación microscópica,
aumentando gradualmente el aumento, se dibujó en la guía y finalmente se utilizó lo mismo
para la observación de protozoo Euglena, se hizo observación microscópica y se dibujó en
la guía.
Resultados

Actividad 1.

Tabla Nº1: Poder de aumento y apertura numérica de los lentes objetivos.

Aumento (X) Apertura Numérica(NA)


4 0,10
10 0,25
40 0,65
100 1,25

Tabla Nº2: Poder de aumento y apertura numérica de los lentes oculares.

Aumento (X) Apertura Numérica (NA)


10 18

Tabla Nº3: Apertura numérica del condensador.

Apertura Numérica (NA)


1,25

Tabla Nº4: Apertura máxima.

Apertura del lente 100X 1,25


Apertura numérica del condensador 1,25
Apertura numérica de la interfase de aire 1,0
Apertura de la interfase de aceite 1,3 – 1,5

La apertura numérica efectiva máxima es el valor más bajo de los anteriores, siendo así la
apertura numérica de la interfase de aire (1,0). Utilizando este valor menor de apertura
numérica de trabajo, considerando λ=400 nm para calcular el límite de resolución y poder
de resolución.

A) Límite de resolución : 0,61 * 400 = 244


1,0

B) Poder de resolución: 1,0 = 4,098*10-3


0,61 * 400
Actividad 2.

Título: Manejo del microscopio y formación de


la imagen.

Dibujo N°1
Título: Letra impresa con tinta
Tipo: Permanente
Tinción: Sin tinción
Aumento del Objetivo: 10X
Aumento Total: 100X
Observaciones:
1) En esta muestra se observa la letra “e”.
2) La imagen se ve rotada en 180°.
3) El papel se ve poroso.

Pregunta 1: Compare la orientación de la letra en su portaobjetos (preparación) y en su


campo visual (lo que observa a través del ocular del microscopio). ¿A qué se debe la
diferencia?
-Se debe a que al ser un lente convexo quien refracta la luz, hace que la muestra se vea
rotada de esa manera.

Pregunta 2 ¿Hay algún cambio en la orientación de la letra al observar la muestra con el


objetivo 40X?
-No existe un cambio, sigue teniendo su rotación en 180°, al cambiar al aumento no
influiría en su orientación.

Actividad 3.

Título: Determinación del diámetro del campo vidual.

Determine el diámetro del campo visual del lente 4X:

Diámetro= 4 * 1mm2= 4 mm2


DCV obj. X = 4mm2 *4X = 4 mm2
4X
4mm2 * 10-3 = 0,04 um

Calcule el diámetro del campo vidual del lente 10X, 40X Y 100X:

1) DCV obj. X = 4 mm2 * 4X = 1,6 mm2 * 10-3 = 0,16 um


10X
2) DCV obj. X = 4 mm2 * 4X = 0,4 mm2 * 10-3 = 4* 10-3 um
40X
3) DCV obj. X = 4 mm2 * 4X = 0,16 mm2 * 10-3 = 1,6* 10-3 um
100X
Actividad 4.

Título: Observación de preparaciones biológicas permanentes: frotis de sangre humana y


corte de intestino delgado de Rattus Norvegicus
(berkenhout).

Dibujo N°2
Nombre: Frotis de sangre humana
Tipo de muestra: Permanente
Tinción: Con tinción
Aumento del Objetivo: 40X
Aumento Total: 400X
Observaciones:
1) los glóbulos rojos se agrupan y están sobre
posicionadas.
2) Hay glóbulos más rojos que otros.
3) A pesar de que existe mucha unión, de puede
ver espacios entra ellas.

Dibujo N°3
Nombre: Corte de intestino delgado de berkenhout
Tipo de muestra: Permanente
Tinción: Con tinción
Aumento del Objetivo: 10X
Aumento Total: 100X
Observaciones:
1) Se puede ver diferentes tonalidades en las
estructuras.
2) Existen estructuras delimitadas las cuales a la
vez se rodean por una superficie.
3) Se puede ver una especie de membrana
delimitada.

Actividad N°5.

Título: Determinación del tamaño celular (TC).

Tc= (DCV obj. X ) = 4 * 10-3 = 7,17*10-6


N° de células 558
Actividad N°6.

Título: Observación de preparaciones frescas con y sin tinción.

Dibujo Nº4
Nombre: Cetafilo de cebolla
Tipo de muestra: Fresca
Tinción: Azul de metileno
Aumento de Objetivo: 10X
Aumento Total: 100X
Observaciones:
1) El tejido de la tela de cebolla presenta múltiples
celdas, todas con diferentes formas y tonalidades.
2) Presente sobre celdas, estructuras delimitadas
(como forma de anillo), que permite ver y apreciar las
celdas que están bajo de forma desenfocado.
3) En una zona de la tela de cebolla que tiene menos
capas, se empieza a notar menos las celdas y se puede
observar estructuras que parecen “cristales” y está lleno
de líneas porciones no muy claras.
En conclusión, las celdas y las capas son transparentes.

Título: Observación de preparaciones frescas sin tinción.

Dibujo Nº5
Nombre: Elodea sp
Tipo de muestra: Fresca
Tinción: Sin tinción
Aumento del objetivo: 10 X
Aumento total: 100X
Observaciones:
4) Se puede apreciar que el objeto observado
presenta celdas, en forma de filas, están
ordenadas.
5) En su centro se nota una división que
atraviesa de extremo a extremo.
6) En su contorno presenta pequeñas
estructuras terminadas en punta y tienen un
color diferente al resto del objeto o planta
que no se ve a simple vista.
Dibujo Nº6
Nombre: protozoos Eugenia sp
Tipo de muestra: Fresca
Tinción: Sin tinción
Aumento del objetivo: 10X
Aumento Total: 100X
Observaciones:
1) Tiene una vida temporal en el exterior.
2) Se mueven muy rápido.
3) De vez en cuando, se mueven o giran en
parejas.
Discusión

Al inicio de este trabajo, nos preguntamos el funcionamiento del microscopio, el cual es


capaz de observar detalles que a simple vista el ojo humano no ve, permitiéndonos ver
detalles como estructuras, colores, tamaños de diferentes muestras, los cuales nos ayuda
para la determinación de este trabajo y la factibilidad de ser esto valido.

Esto se debe gracias a su función principal aumentar la resolución y a su vez el aumento de


magnificación, la cual tiene la capacidades de permitirnos hacer perceptible objetos de gran
tamaño y con nitidez. Al comprender esto realizamos la Actividad 1 que contaba en realizar
cálculos para determinar el límite de resolución (la distancia mínima que debe existir entre
dos puntos para poder distinguirlos por separado) y el poder de resolución (capacidad que
permite hacer perceptible por separado, dos puntos situados muy próximos entre sí en el
objeto). (3)

Luego en la actividad 2 comprendimos el manejo del microscopio y el cómo se forma la


imagen, al observar la letra “e” invertida en 180° y cuestionarnos si éramos nosotros los
que estábamos en posición invertida y la imagen simplemente estaba bien, y el como
nosotros visualizamos cada objeto en la vida diaria, hasta darnos cuenta de cómo se forma
La imagen en un microscopio se forma por la transmisión de los rayos provenientes de una
fuente luminosa a través del objeto. Los rayos luminosos atraviesan el diafragma, que a
manera de iris, delimita el diámetro del haz lumínico que penetra por el condensador. Este
último, está formado por un sistema de lentes convergentes que concentra y proyecta el haz
lumínico sobre el objeto a examinar, a través de la abertura de la platina. El objetivo recoge
la luz que atravesó el objeto examinado y proyecta una imagen real, invertida y aumentada
que se forma dentro del tubo y que es recogida por el ocular que es la segunda lente, la cual
forma una imagen virtual, invertida y aumentada del objeto examinado. (4)

Siguiendo con la actividad 3 observamos un papel milimetrado, del cual cada cuadrado
media 1mm2 con el objetivo de determinar el diámetro de campo visual del lente 4X, y
además calculando el diámetro visual del lente 10X, 40X y 100X.

En la actividad 4 recién comenzamos con las observaciones de muestras permanentes Frotis


de sangre humana y corte de intestino delgado de rata, lo cual nos ayudó al poder
identificar y comprender que toda muestra permanente lleva consigo un procedimiento
largo para obtener su fijación, además de saber que toda muestra permanente debe llevar
tinción para poder identificar diferentes estructuras y facilitar una investigación. A su vez
ver la imagen con más detalles posibles, determinando de esta manera el aumento total de
cada muestra.

Al pasar a la actividad 5 tuvimos que retroceder a la actividad 3 para poder calcular la


determinación del tamaño de la célula, mostrando nuestras habilidades matemáticas y el
contar glóbulos rojos lo cual es un proceso con demasiada determinación, puede ser un
cálculo fácil, ya que las formulas están dadas desde un principio pero a la vez se
necesitamos mucha concentración para este conteo, que finalmente se pudo lograr.
Finalmente en la actividad 6 se divide en 3 por las diferentes muestras que debemos ver que
en este caso son frescas, dependiendo si no tenían tinción o en el caso de tener tinción, esto
se realiza debido a que las células además de ser muy pequeñas, son translucidas, lo que
hace imposible su observación y poder distinguir sus estructuras lo que conlleva a la
realización de métodos químicos y físicos por los cuales se logra la visualización directa de
diferentes substancias celulares a través del microscopio, con el fin de teñir y localizar
sitios celular en específicos. (5)
Conclusión

En vista de nuestro trabajo, y nuestros avances en clases de laboratorio, nuestro grupo


observó distintos tipos de células (y sus diferencias estructurales a través de la citoquímica,
por ejemplo, al aplicarles azul de metileno) y puso en práctica los conocimientos
previamente estudiados sobre microscopía, por lo tanto, se reconoce la importancia de la
teoría celular y su avance en estudios con microscopios, ya que a causa de ello los hemos
usado así a nuestro favor y dejando así registro de ello en cálculos previos de sus
resoluciones, resoluciones máximas, y sus límites de aumento, los cuales nos fueron de
gran utilidad en este práctico.

Bibliografía

(1) https://www.vix.com/es/btg/curiosidades/2010/10/09/quien-invento-el-microscopio

(2) Universidad Andrés Bello. Guía de laboratorio N°3: Microscopía, curso BIO035
Biología general, 2018.

(3) Universidad Andrés Bello. Guía de laboratorio N°3: Microscopía, curso BIO035
Biología general, 2018.

(4) http://dea.unsj.edu.ar/biologia1/micro.pdf

(5) Universidad Andrés Bello. Guía de laboratorio N°3: Microscopía, curso BIO035
Biología general, 2018.