LABORATORIO DE FUNDAMENTOS EN QUÍMICA

PRÁCTICA NÚMERO 4

CROMATOGRAFIA

ESTUDIANTES

ANGIE DIAZ CALDERON

JUAN DAVID PAREDES

PROFESOR

ARTURO SANCHEZ TORO

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA

MICROBIOLOGIA Y BIOANALISIS

MEDELLÍN
OBJETIVOS

 Separar una mezcla de compuestos orgánicos en solución, mediante cromatografía en

capa fina.
 Ensayar varias mezclas de solventes en diferentes proporciones y escoger cuál de ellas
efectúa la mejor separación.
 Identificar cada uno de los compuestos separados comparándolos con muestras patrones.
 Calcular el valor del Rf para cada compuesto en la proporción de solvente escogida.

INTRODUCCION

ASPECTOS TEORICOS:

La cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de mezclas complejas,

la cual tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia; permite la separación de los
componentes de una mezcla por el arrastre selectivo que ejerce un solvente liquido o gaseoso que
se mueve a través de un material poroso, permitiendo identificar y determinar las cantidades de
dichos componentes. Se constituye principalmente en dos fases, una móvil (el solvente) y una
estacionaria (material poroso).(1)

Adsorbente y eluyentes

Son muchos los sólidos que se han utilizado como fase estacionaria en cromatografía de
adsorción. Los más importantes son alúmina, silicato de aluminio, silicagel, óxido, silicato y
carbonato de magnesio, óxido, carbonato y fosfato de calcio, como inorgánicos; y carbón,
almidón y azúcares como orgánicos. Normalmente deben ser sometidos a un proceso térmico de
activación superficial antes de su utilización. Como eluyentes se utilizan, alcoholes, cetonas,
esteres, cloroformo, tetracloruro de carbono, etc. Su capacidad de elución depende de su
polaridad, del absorbente y de las especies a eluir.(2)

Electroforesis

El fundamento de la técnica consiste en depositar sobre un medio poroso una mezcla de especies
cargadas (algunas pueden ser neutras). Por aplicación de un campo eléctrico entre los extremos
del soporte poroso las especies se separan en función de su carga y su movilidad iónica en ese
medio. Para favorecer el paso de la corriente se utilizan disoluciones fondo conductoras
(electrolitos), que son generalmente disoluciones reguladoras en las que se empapa previamente
el soporte poroso, debidamente escogidas para que no formen precipitados con las especies del
problema. Como soportes se han utilizado alúmina, lana de vidrio, almidón, agar- agar, gel de
sílice, etc. tanto en columna como en capa fina, pero quizás el método más utilizado es el que
emplea como soporte papel. Se suelen utilizar tiras de acetato de celulosa, casi transparentes, que
por poseer una estructura más uniforme y un poro menor que el del papel filtro, tienen un mayor
poder de resolución. A estas ventajas del acetato de celulosa se añade su fácil solubilidad en
ácidos, lo que facilita la posterior determinación de las especies separadas.(2)

La emigración de las distintas especies en el papel depende de la magnitud y signo de su carga,

del tamaño de la partícula, de las propiedades adsorbentes de soporte (que deben atenuarse en lo
posible), del voltaje aplicado y de la intensidad de corriente.(2)

Cromatografía en capa fina

En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un pequeño
espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascenderá, por capilaridad, por la placa y
arrastrará los componentes a lo largo de ésta produciendo "manchas" de los componentes.(3)
En la cromatografía en capa fina (ccO, el grado de elución de las sustancias depende tanto de su
propia polaridad como de la polaridad del eluyente utilizado.(3)
El adsorbente se coloca en forma de una capa delgada adherida sobre un soporte rígido, que
pueden ser placas de vidrio, aluminio o poliéster. Los tamaños de la placa para ccf convencional
son: 20 x 20 ; 10 x 20 y 5x2 cm.(3)
Hay adsorbentes que contienen un indicador de fluorescencia para facilitar la identificación de
muestras. Si no se usa indicador y los componentes no son coloridos, se requerirán otras técnicas
de revelado.(3)

Concepto de Rf
Rf es el registro, es una relación de distancias, y se define como:
Rf = (a) distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicación
(b) distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente.
MATERIALES

 2 placas cromatográficas  2 capilares

 2 cámaras  Silica gel
 Cámara de yodo

SUSTANCIAS

 Mezcla de ácido gálico, resorcinol y  Acetato de etilo

β-naftol  Hexano
 Muestras problema: solución de
ácido gálico, resorcinol y β-naftol

PROCEDIMIENTO

Se tomaron 2 placas cromatográficas y con la ayuda de un capilar sembramos una mezcla que
contenía acido gálico, resorcinol y naftol. Al lado de esta se sembró una muestra problema (#47)
y se introdujo la placa en una cámara que contenía hexano-acetato de etilio en proporción 8:2. Se
repitieron estos pasos, pero se colocó en una cama en proporción 6:4. Después cuando subió el
efluente en cada una de las placas se procedió a colocarlas en una cámara de yodo.
RESULTADOS

Placa 1 Placa 2

8:2

6:4

Placa 1 Placa 2
B-naftol 0.4 cm 0.5 cm
Resorcinol 1.7 cm 2.7 cm
Acido gálico 3.0 cm 4.0 cm

Factor de retardo (RF)

Distancia recorrida por el componente / Distancia recorrida por el disolvente

B-naftol

Placa 1: 0.4 cm / 4.8 cm = 0.08

Placa 2: 0.5 cm / 4.8 cm = 0.10

Resorcinol

Placa 1: 1.7 cm / 4.8 cm = 0.35

Placa 2: 2.7 cm / 4.8 cm = 0.56

Acido gálico

Placa 1: 3.0 cm / 4.8 cm = 0.6

Placa 2: 4.0 cm / 4.8 cm = 0.83

DISCUSION DE RESULTADOS
Estas dos placas fueron obtenidas en el laboratorio por medio de cromatografía para determinar la
separación de los componentes en ambas placas a diferentes proporciones de disolventes.

Placa 1: Constituida por una mezcla de patrones de referencia (B-naftol, resorcinol y acido
gálico) y una muestra problemas #47 a uno proporción 8:2 de hexano de etilo.

Placa 2: Constituida por una mezcla de patrones de referencia (B-naftol, resorcinol y acido
gálico) y una muestra problemas #47 a uno proporción 6:4 de hexano de etilo.

El reactivo revelador empleado es Yodo, el cual forma complejos coloreados con los
componentes orgánicos con tono amarillo y marrón. Las manchas que se pueden apreciar en
ambas placas se obtuvieron debido a que después de que la elución ascendiera, fueron llevados a
una cámara de yodo, donde fueron revelados.

El orden de los compuestos tanto en la placa 1 como en la 2 se incrementa al aumentar la

polaridad de la fase móvil, debido a que los disolventes empleados se caracterizan por tener bajos
puntos de ebullición lo que permite desplazarse con mayor rapidez. Sabiendo que hexanos tiene
menor polaridad que acetato de etilo.

En la cromatografía de columna se espera una mezcla por medio de un eluyente o fase móvil que
logra separa la mezcla en sus partes originales, donde el proceso de separación vara por grado de
absorción de cada componente y su resistencia a la fase móvil, lo que nos muestra a simple vista
que una queda arriba y la otra abajo.

CONCLUSIONES

 Es importante tener en cuenta que la velocidad al desplazarse depende de la concentración

en el punto de siembra.
 Los valores del factor de retención se pueden modificar variando la relación entre el tipo
de fase móvil con el tipo de muestra.
 La cromatografía son técnicas utilizadas en la determinación de la identidad de sustancias,
en la separación de componentes de las mezclas y en la purificación de compuestos. Esta
técnica es muy efectiva por lo tanto se pudo concluir dicha práctica de manera segura
logrando así los objetivos propuestos, debido a esto se puede reconocer o identificar de
que sustancias está compuesta una mezcla y por ende separar dichas sustancias o
compuestos de la mezcla en capa fina y en columna.
 Como influye la polaridad de los solventes utilizados en la cromatografía la cual
determina el resultado y nos muestra sus diferentes compuestos
 Se puede observar que la cromatografía es sencilla, rápida y no requiere aparatos
complicados.
  El disolvente hexano acetato 6:4 resulto mejor que el 8:2 pues se dio un mayor
desplazamiento.

CUESTIONARIO

1. ¿Qué tipos de cromatografía se utilizan según la fase estacionaria?

RTA: Cromatografía plana. La fase estacionaria se sitúa sobre una placa plana o sobre un
papel. Las principales técnicas son:
 Cromatografía en papel
 Cromatografía en capa fina
Cromatografía en columna. La fase estacionaria se sitúa dentro de una columna. Según el
fluido empleado como fase móvil se distinguen:
 Cromatografía de líquidos
 Cromatografía de gases
 Cromatografía de fluidos supercríticos
La cromatografía de gases es útil para gases o para compuestos relativamente volátiles, lo
que incluye a numerosos compuestos orgánicos.

2. ¿Para qué se utiliza la cromatografía y en qué se diferencia de la electroforesis?

RTA: Se utiliza para separar componentes y permite analizar cantidades infinitesimales de
cualquier sustancia compleja. La cromatografía separa sustancias por intercambio iónico y
la electroforesis separa moléculas ya sean proteínas o ácidos nucleicos a partir de sus cargas
eléctricas.

3. ¿En qué campos es más útil la cromatografía sobre papel?

RTA: En medicina para pruebas de sangre, en análisis desustancias contenidas en plantas
y en general en todas las aplicaciones a la identificación de compuestos líquidos en
pequeñas cantidades.

4. Mencione cinco solventes que se utilicen en TLC

RTA: Los más comunes mezclados en diferentes proporciones son: Hexano,
Diclorometano, Éter dietílico, Acetato de etilo, Metanol.

5. ¿Se podrá utilizar agua como solvente en TLC? Explique.

RTA: No, ya que si la sustancia sometida a cromatografía fuera completa e
instantáneamente soluble en el disolvente que avanza en este caso agua no actuaran fuerzas
de retardo y la sustancia ascenderá desde el origen hasta donde llega el diluyente.

6. Si se tiene como eluente hexano-éter 1:1 y necesita aumentar la polaridad de éste,

¿Cuál de los dos componentes necesita aumentar? ¿por qué?
RTA: éter ya que este es un poco mas polar que el hexano que es un alcano y por tanto no
polar.
 7. A un eluente benceno-cloroformo 1:1 se requiere disminuir la polaridad, ¿Cuál de los
dos componentes aumentaría? ¿por qué?
RTA: El benceno ya que es un alqueno y por tanto no polar.

8. ¿En qué se diferencian los términos adsorción y absorción?

RTA: Porque realizando la cromatografía sobre columna es como nos damos cuenta de las
condiciones óptimas para realizar la CC.

REFERENCIAS

1. ¿Qué es la Cromatografía? » TP - Laboratorio Químico [Internet]. [cited 2018 Mar 16].

Available from: https://www.tplaboratorioquimico.com/laboratorio-
quimico/procedimientos-basicos-de-laboratorio/que-es-la-cromatografia.html
2. Carey FA. Química Orgánica. 2006. 1245 p.
3. C¡omatosrafia en caoa fina CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA. [cited 2018 Mar 16];
Available from: http://organica1.org/1311/1311_6.pdf

Manual de prácticas de fundamentos de química orgánica. Wilson Cardona Galeno, Roberto

Amarís Amarís y Cecilia Ramírez Ramírez. Universidad de Antioquia.