Determinación de mercurio en sangre entera y orina por espectrometría de masas por plasma de

acoplamiento inductivo.

Resumen

El método convencional para la determinación de mercurio en muestras clínicas es la espectrometría

de absorción atómica con vapor frío. La digestión de muestra o el pretratamiento requieren grandes
volúmenes de muestra y largos tiempos de preparación de muestra. El método de espectrometría de
masa por plasma de acoplamiento inductivo (ICP-MS) desarrollado en este estudio requiere sólo 100
pt de muestra prácticamente sin preparación, excepto por la dilución con diluyente. Esto permite
ahorros significativos en volúmenes de muestra. Reactantes, tiempo del técnico, y tiempo de
análisis. Entre los distintos tipos de diluyentes, el que contiene ácido, terc-butanol, y dicromato de
potasio dio el mejor resultado al remover el efecto de memoria del mercurio. Las precisiones del
interensayo para sangre entera y orina fueron <5% y <8% respectivamente, y las precisiones del
intra-ensayo fueron <3% y <7%, respectivamente. Los límites de detección más bajos fueron de 0.13,
0.17, y 0.26 pg/L para estándar acuoso, orina, y sangre entera respectivamente. El método
desarrollado de ICP-MS se correlaciona bien con el método de absorción atómica y puede ofrecer
una alternativa al método de absorción atómica para el análisis del mercurio con un requerimiento
menor de volumen de muestra, así como también un tiempo de análisis más corto.

Introducción

El mercurio está ampliamente distribuido en la naturaleza, circulando entre varios medios, y se

encuentra en diferentes estados (gas, líquido, y sólido) y diferentes formas químicas (mineral,
orgánico), exhibiendo varios niveles de toxicidad. El mercurio puede causar daño renal, desórdenes
del sistema nervioso central, deterioro intelectual, e incluso la muerte (1). Por lo tanto, la evaluación
eficiente de una presunta intoxicación por mercurio a través de la determinación de los niveles del
mismo en diversas matrices biológicas, particularmente la sangre y la orina, es de importancia vital.
Varios métodos para la determinación del mercurio toral se han reportado, incluyendo
espectrometría por fluorescencia atómica (2), espectrometría de absorción atómica (3), por plasma
de acoplamiento inductivo – espectrometría de emisión atómica (4), y espectrometría de masa ICP
(5-10).

El método convencional para la determinación de mercurio en muestras clínicas es la espectrometría

de absorción atómica por vapor frío (CVAAS) (11-15). Se requiere digestión de muestra o
pretratamiento para descomponer los compuestos de mercurio orgánico, y entonces el mercurio
total poder ser determinado por reducción con cloruro de estaño (15, 16). Este método requiere
grandes volúmenes de muestran y largos tiempos de preparación de muestra. Ya que se utilizan
abundantes cantidades de ácidos y oxidantes fuertes para asegurar la descomposición del mercurio
orgánico, este método también es peligroso. En la última década, ha habido un rápido avance del
uso de ICP-MS por su gran poder de detección y la posibilidad de análisis multi-elementales en una
sola ejecución. La versatilidad de la técnica de la ICP-MS hace de esta una herramienta analítica
multi-disciplinar. Puede ser utilizada en ciencias geológicas y medioambientales (17), industrias
nucleares e industrias electrónicas de semiconductores (18), ciencia de los materiales, medicina (19),
agricultura (20), alimentos, y ciencias biológicas (21). Recientemente, ha habido un creciente interés
en el uso de la ICP-MS para el análisis en la medicina de laboratorio. Este estudio investigó la
aplicación de la ICP-MS en análisis clínicos utilizando técnicas de dilución simple. El método de ICP-
MS desarrollado requiere sólo 100 L de muestra prácticamente sin preparación, a excepción de la
dilución con diluyente con ácido, terc-butanol, y dicromato de potasio. Se lograron ahorros
significativos en volúmenes de muestra, reactantes, tiempo de técnico, y tiempo de análisis.
El bien conocido “efecto de memoria del mercurio” es el principal obstáculo en la cuantificación del
mercurio por ICP-MS. Mucho tiempo después de que una muestra que contiene mercurio ha sido
nebulizada en una cámara de spray convencional, una significante señal residual de mercurio puede
detectarse, indicando su falla al regresar a la base de referencia. Se han observado la persistencia del
mercurio residual en las cámaras de spray y los largos tiempos de lavado por ácidos (22). El mercurio
se adhiere a las paredes de la cámara y/o permanece como vapor a interior de la cámara spray.
Limitar la solución a ácido sólo evita la absorción del mercurio en las paredes de la cámara, pero la
volatilidad del mercurio persiste (23). Este problema es superado a través de la adición de oro o
dicromato, el cuál evita que la volatilización del mercurio y las pérdidas por adsorción (23). El uso de
un nebulizador de inyección directa (24) puede también resolver estos problemas. Sin embargo, su
operación es tan complicada que esta impide sus aplicaciones de rutina (22).

Este artículo describe el uso de 60 mg/L de dicromato de potasio en 2% de HCl y 5% de terc-butanol

como diluyente para el análisis de mercurio en sangre entera y orina. Como alternativa a la
combinación de ácido con dicromato, el oro también fue evaluado ya que se ha utilizado en el
análisis del mercurio por décadas. El uso común de dicromato como modificador-oxidante para
CVAAS (25), para determinación de mercurio en horno de grafito (26), e incluso como un
preservante efectivo para soluciones estándares de mercurio (23) nos ha llevado a considerar su uso
en este estudio. Ya que el dicromato es una oxidante fuerte, compuestos como el sulfuro de
mercurio (cinabrio) son completamente solubilizados y permanecen como solución (25). Para reducir
aún más el efecto de memoria del mercurio, se utilizó una cámara de spray ciclónica de menor
tamaño, y se disminuyó la tasa de flujo del nebulizador. Este enfoque es un híbrido entre sistemas
de introducción de muestra convencionales y un nebulizador de inyección directa.

Materiales y métodos

El análisis se llevó a cabo en una ICP-MS PerkinElmer Sciex ELAN DRCPlus 6100 (PerkinElmer Sciex,
Thornhill, ON, Canadá) equipada con un automuestrador (AS 93 plus, PerkinElmer) y un nebulizador
concéntrico de cuarzo Meinhard. Se utilizó una cámara de spray de cinabrio de tamaño reducido (25
ml) (Glass Expansion, West Melbourne, Australia) para minimizar el efecto de memoria del mercurio.
Se utilizaron un mostrador de níquel y conos de sumergimiento (skimmer cones). El flujo de gas
nebulizador y los lentes de voltaje se ajustaron diariamente para dar un conteo mínimo de nivel de
óxido e iones doblemente cargados y máximo conteo para indio. Las condiciones de ejecución para
ICP-MS se resumen en la tabla 1.