Enzimas

MICROBIOLOGIA

CAMPOS DELGADO JULIO CESAR

CERON MEJIA JUAN CARLOS

ECHEVERRIA ARTEAGA YESSICA JAZMIN

RAMIREZ GOMEZ ITZEL BERENICE

REYNOSO GUTIERREZ DIANA GABRIELA

October 30, 2017
TORRES PALACIOS ISABELL
INTRODUCCION

La primera enzima producida de forma industrial fue la amilasa takadiastasa que es de

origen fúngico y sirve para desordenes digestivos.En 1969 se empezaron a usar en los
detergentes algunas como: las lipasas, pectanasas y oxido reductasas. Debido a
reacciones alérgicas su uso se detuvo hasta que se desarrollo la micro encapsulación,
alrededor de 80% y 85% de los detergentes en Europa continen proteasas. Cuando se
desarrollaron las amilasas y amino glucosidasas para la producción de glucosa a partir
del almidón, condujo a una nueva aplicación de las enzimas. El uso de la glucosa
isomerasa para la producción de fructuosa se ha generalizado desde 1970. Para 1977
el ingreso por la ventas de enzimas llegaba a las 150 millones en los diferentes usos:
Industriales: amilasa, proteasa, catalasa, isomersa, penicilin acilasa. Analiticos:
glucosa oxidasa, galactosa oxidasa, alcohol deshidrogenasa, hexoquiinasa,
muramidasa y colesterol oxidasa. medicinal: asparginasa, proteasas, lipasas y
estreptoquinasa. Cada una con diferente nivel de calidad y cantidad

ESTABILIZACION DE ENZIMAS

La estabilización de enzimas es necesaria para que no se pierda su efectividad por un

almacenamiento prolongado.Para que cuando tenga que actuar se desencadene el
proceso ya sea por un agente químico o bilógico. Debido a su costo de producción es
necesario garantizar la efectividad de las mismas, se presentan 4 métodos para la
estabilización: Estabilización de las enzimas solubles: la estabilización de enzimas se
ha logrado por la adición de aditivos o por modificación química. Esto le da
estabilidad frente a cambios físicos o químicos, pero como las enzimas pueden ser
muy solubles no son reusables

AMILASAS

El almidón, un polímero de glucosa, es uno de los polisacáridos vegetales más

ampliamente disponibles. Son enzimas que hidrolizan el almidón. Uno de los usos
principales de la producción de amilasas de edulcorantes para la industria alimentaria.
La hidrólisis del almidón con amilasa resulta primero en la producción de polímeros de
cadena corta denominados dextrinas, luego el disacárido maltosa y finalmente la
glucosa. La glucosa no es tan dulce como su iso mer fructosa, por lo que el siguiente
paso es la conversión de glucosa en fructosa utilizando la glucosa merasa. Los
edulcorantes comerciales basados en fructosa tienen algunas ventajas económicas y
de fabricación sobre el edulcorante sacarosa más ampliamente utilizado. Las enzimas
más importantes en el proceso de sacarificación del almidón son a-amilasas, B-
amilasas, glucoamylas, glucosa isomerasas, pululanasas e iso amilasas

a-Amilasas

a-Amilasas (14-o-glucano) son enzimas extracelulares que hidrolizan las enzimas a-

1,4 y son enlaces endógenos glicosídicos que se encuentran en el interior de las
zimas, dividiendo el sustrato inhibido por una molécula. Su acción no es no enlaces
1,6-glicosídicos, aunque tales enlaces se dividen, las bacterias y a-amilasas están
formadas por muchos hongos almidón. Se clasifican según el efecto optoalcohólico o
sacárogénico, el timum del saco, el rango de temperatura y la estabilidad. Las
amilasas producen azúcares libres, mientras que las amilasas que licúan el almidón

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descomponen el polímero del almidón pero no producen azúcares libres. Muchos
producen varias a-amilasa. Las bacterias que producen son: B. cillus subtilis, B.
cereus, B. amyloliquefaciens, coagulans, B. polymyxa , B. stearothermophilus, B.
caldolyticus, B. acidocaldarius, B. subtilis var. Amy- Tres cepas muy similares que
producen a-amilasas sacaríngenas son B. subtilis Marburg, B. sub tilis var.
amylosaccharaticus y B. natto. La cepa B. amyloliquefaciens difiere de estos en que
produce una α-amilasa licuada. La concentración de sustrato determina el grado en
que las enzimas actúan de forma licuada o sacágeno. Algunos hongos productores de
a-amilasa pertenecen a los géneros Aspergillus, Penicillium, Cephalosporium Mucor,
Candida, Neurospora y Rhizopus. Los pesos moleculares de varias o-amilasas no
difieren considerablemente. Todos ellos contienen una gran proporción de tirosina y
triptófano en la proteína enzimática y la mayoría requieren calcio como estabilizador
por Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus lichenifo mis y Aspergillus oryzae. Las
amilasas de Bacillus se usan mucho más extensamente que las de As pergillus. Las
áreas de aplicación más importantes para estas dos enzimas . Producción de α-
amilasas bacterianas La producción de amilasa bacteriana implica la función de la
maquinaria celular normal para la síntesis de proteínas. Esto se muestra mediante
experimentos que incluyen la adición de antibióticos. Si los antibióticos específicos se
usan para inhibir la síntesis de proteínas en B. subtilis durante la producción de α-
amilasas, tanto el crecimiento como la producción de amilasa cesan .

B- Amilasas

B- Amilasas Las amilasas (-1,4-glucano-maltohidrolasas son generalmente de origen

vegetal, pero también se conocen algunos pro - ductores microbianos: Bacillus
polymyxa, B. cerus, B. megaterium, Streptomyces sp., Pseudomo in sp., y Rhizopus
japanicus. Aunque rendimientos bajos, las cepas silvestres han sido usualmente
mutantes descubrieron que producen 200 veces más en zimas que las B-amilasas
bacterianas tipo salvaje tienen una mayor resistencia al calor 70 ° C) que las B-
amilasas de plantas y el pH óptimo también es mayor (alrededor de pH 7.0). A
diferencia de la a-amilasa, el calcio no es necesario para la estabilización y activación
de la B-amilasa bacteriana

Glucoamilasas

Las glucoamilasas actúan sobre almidón dividiendo las unidades de glucosa del
extremo no reductor. La maltosa se rompe solo lentamente, mientras que los enlaces
1,6 en los polisacáridos ramificados no son atacados ni pasados por alto. Por lo tanto,
la glucosa, la maltosa y el límite de dextrinas son los productos finales de la acción de
la glucoamilasa.

Los microorganismos utilizados para producir glucoamilasas son Aspergillus niger, A.

oryzae, A. awamori, Rhizopus niveus, R. delemar, R. formosaensis y R. javanicus. Hoy
en día, la fermentación industrial de la glucoamilasa se lleva a cabo casi
exclusivamente en fermentadores sumergidos de hasta 150 m3 de volumen. Debido a
la creciente demanda de glucoamilasa en la producción de jarabe de fructosa, los
sistemas más pequeños que implican el crecimiento en la superficie de líquido o
sólidos ya no son económicos. Los experimentos con fermentaciones alimentadas por
lotes se han llevado a cabo con éxito durante períodos de hasta 320 horas.

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Con frecuencia, varias isoenzimas de glucoamilasa son producidas por una cepa;
además, las enzimas pueden modificarse durante el proceso de fermentación. A.
awamori var. Kawachi produce tres glucoamilasas, de las cuales una solo hidroliza
almidón de maíz crudo. Debido a la acción de proteasas y glicosidasas, que también
están presentes en diversas condiciones experimentales, se puede formar una de las
otras dos enzimas en lugar de la glucoamilasa que hidroliza el almidón de maíz crudo.
Estas otras enzimas solo pueden actuar sobre el almidón de maíz que se ha hinchado
por el calor o el tratamiento químico. Por lo tanto, los cambios en la actividad de la
glucoamilasa deben examinarse cuidadosamente cuando se aíslan cepas de alto
rendimiento y cuando se optimizan las condiciones de fermentación.

Por otra parte, las Enzimas 1,6-Glycoside-splitting son enzimas que pueden dividir las
cadenas laterales de la amilopectina mediante la hidrólisis de los enlaces a-1,6 son
importantes en los procesos comerciales. Estas enzimas pueden ser subdivididas en
dos grupos:

a) Aquellos que afectan directamente la amilopectina, como las pullulanasas y las

isoamilasas.
b) b) Aquellos que tienen un efecto indirecto después de la modificación
enzimática del sustrato.

La pullulanasas y la isomamilasas hidrolizan amilopectina. Además, el pullulan, el a-

glucano del hongo Pullularia Pullulans, se divide por medio de pululanasas. Esta última
reacción no puede llevarse a cabo con isoamilasas.

Hidrólisis de almidón

En la industria alimentaria, usan aditivos en la manufactura de dulces. Por ejemplo en

los jarabes usan maltosa o glucosa. Para esto, los hidrolizados de almidón afectan el
sabor, la dulzura y la textura de los productos alimenticios. Por ello, para producir un
hidrolizado, el almidón primero debe convertirse en pasta a 65-90 ° C. Durante este
proceso, la viscosidad de una solución al 20% aumenta significativamente a 3000
centipoises. El tratamiento ácido a 120-140 ° C (pH 1.8-2.0) o el tratamiento con a-
amilasas causan licuefacción del almidón en el siguiente paso; un método alternativo
es una licuefacción combinada de ácido / enzima. Las desventajas de los tratamientos
con ácido son generalmente bajos rendimientos de glucosa, mayores costos de
purificación, riesgo de deterioro y corrosión del sistema utilizado.

Glucosa isomerasas

La D-glucosacetoisomerasa causa la isomeración de glucosa a fructosa. La reacción

es reversible y se procesa una mezcla de glucosa y fructosa, dependiendo la relación
de los componentes de la enzima utilizada y las condiciones de reacción, como la
temperatura.

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PROTEASAS

Después de las amilasas, las segundas enzimas industriales más importantes

actualmente son las proteasas. las proteasas se usan principalmente en la industria de
detergentes y en la industria láctea. Otras áreas en las que se usan proteasas incluyen
la industria farmacéutica, la industria del cuero, la fabricación de hidrolizados de
proteínas, la industria alimentaria, la industria cinematográfica, y procesamiento de
residuos

PROTEASAS ALCALINAS
muchas bacterias y hongos excretan proteasas alcalinas. los productores más
importantes son cepas de bacilo tales como B. licheniformis, Bamyloliquefaciens;
cepas de streptomyces tales como S. fradiae, S. griseus, como S. rectus; y los hongos
aspergillus niger, A. sojae, A. aryzae y A. flavus. las enzimas utilizadas en detergentes
son principalmente proteasas de cepas de bacilo (bacilopeptidasas).

las proteasas de este tipo tienen muchas características de valor para su uso como
enzimas detergentes:

 estabilidad a alta temperatura

 estabilidad en el rango alcalino (ph 9-11)
 estabilidad en asociación con agentes quelantes y perboratos

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sin embargo, su estabilidad en presencia de agentes tensioactivos es baja, lo que
limita su vida útil

debido a que las enzimas deben ser estables en condiciones alcalinas, la detección de
mejores productores se realiza utilizando medios fuertemente básicos.
Colonias individuales han sido probadas en placas de agar-proteína a pH 10.0, las
cepas de B. licheniformis y B. subtilis mostraron un crecimiento óptimo en el rango de
pH de 6-7 pero algunas cepas nuevas tuvieron tasas de crecimiento máximas a pH 8-9
y crecieron un poco a pH 11
dado que los rendimientos enzimáticos de cepas de tipo salvaje son insuficientes para
la utilización industrial, se han llevado a cabo extensos estudios genéticos para
aumentar más de diez veces utilizando mutantes de B. cereus

PROCESO DE FERMENTACIÓN
el crecimiento inicial se lleva a cabo en matraces agitados y se usan fermentadores
pequeños. la producción de proteasas extracelulares está regulada principalmente por
la composición del medio

el proceso de lotes alimentados generalmente se usa para mantener baja la

concentración de iones de amonio y aminoácidos, ya que estos materiales
nitrogenados reprimen la producción de proteasas

las proteasas deben convertirse en forma de partículas antes de agregarlas a los

detergentes, ya que si los trabajadores o usuarios de la producción inhalan polvo de
enzimas secas, la reacción alérgica puede dar lugar a que los concentrados de
enzimas se comercialicen en forma microencapsulada

para hacer un producto encapsulado adecuado, una pasta húmeda de enzima se

funde a 50-70 ° C con una sustancia hidrófoba como el polietilenglicol y se convierte
en partículas diminutas. estas partículas esféricas solidificadas no son peligrosas
cuando se agregan directamente al detergente

PROTEASAS NEUTRAS
las proteasas neutras son excretadas tanto por bacterias como por
hongos. organismos productores lncluyen. bacillus subtilis, B. cereus, B. megaterium,
las proteasas neutrales son relativamente inestables; se debe agregar zinc para una
actividad máxima y calcio para estabilizar. el rango de pH de actividad es bastante
estrecho y estas enzimas no son muy estables a temperaturas elevadas. las proteasas
neutras también son rápidamente inactivadas por proteasas alcalinas

PROTEASAS ÁCIDAS
en esta categoría son las proteasas de tipo renina de los hongos que se utilizan
principalmente en la producción de queso. además, otras proteasas ácidas que son
similares a la pepsina de mamífero también están en el mercado. estas enzimas tienen
un pH óptimo de 2-3. la mayoría de las proteasas ácidas se usan en medicina; los de
las cepas de Aspergillus se utilizan para descomponer el gluten de trigo en la cocción

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L-ASPARAGINASAS
Las L-asparaginasas se usan como agentes antitumorales en el tratamiento de
algunas leucemias y linfomas.

el principio detrás del uso de esta enzima como agente antitumoral es el siguiente:
el metabolismo de estas células tumorales requiere L-asparagina, y como la
asparagina se divide en ácido aspártico y iones de amonio por la asparaginasa, estas
células malignas pueden destruirse. la enzima es producida por varias bacterias pero
para producción comercial solo mutantes de Escherichia coli ATCC 9637, serratia,
marcescens ATCC 60, un acetato de sodio y 0,2% de sulfato de amonio a pH 7,0,
utilizados en reactores de hasta 80 m3 en volumen. el suministro de oxígeno es crítico
durante la fermentación de 16 a 40 horas.

al final del proceso de fermentación, las células se rompen para liberar la enzima
intracelular, ya que la enzima se inyecta en el cuerpo humano, debe ser prevenida
hasta el punto de cristalización

RENNIN

La cuajada para la producción de queso se producía mediante la acción sobre la

caseína de la leche de los microorganismos que estaban presentes de forma natural
en la leche. Estos organismos produjeron ácidos orgánicos principalmente ácido
láctico, que redujo el pH al punto isoeléctrico de la caseína, lo que condujo a una
precipitación natural de caseína en forma de cuajada que podría eliminarse fácilmente
del suero de leche. Otra posibilidad para la producción de cuajada, salazón, rara vez
se utiliza. Un tercer método posible es la precipitación del calor, pero este método se
usa solo para unos pocos procesos. Un cuarto método, la adición de la enzima
coagulante de la leche rennin, se ha conocido durante mucho tiempo y se usa en la
mayoría de los casos hoy (solo o en combinación con la precipitación de pH).

En los procesos modernos, se agregan cultivos iniciadores que convierten la lactosa

en ácido láctico y disminuyen el pH. Las cepas más comúnmente utilizadas incluyen
Streptococcus lactis, S. cremoris, S. ther. Lactobacillus helveticus y L. bulgaricus.

Estos organismos se cultivan industrialmente y el cultivo seleccionado depende de la

estructura y sabor deseados de la cuajada, una producción mínima de gas durante la
fermentación, una baja sensibilidad a los bacteriófagos y el grado de producción de
ácido. El cuajo se ha usado por generaciones como una enzima coagulante de la
leche. Es un extracto del cuarto estómago de terneros de 3 a 4 semanas que se han
criado con leche. La enzima purificada se llama renina, quimasa o quimosina.

Debido a la creciente producción de queso en 1974, se fabricaron seis millones de

toneladas en todo el mundo) y una disminución en el número de terneros sacrificados,
se han realizado investigaciones intensivas desde 1960 para desarrollar productos de
renina de origen microbiano Los sistemas enzimáticos deben cumplir los siguientes
requisitos:

 Buena coagulación de caseína sin hidrólisis

 Buen olor y estructura del queso
 Sin olor desagradable propio Proteólisis

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  no tóxica
 baja para evitar el desarrollo de amargor en el proceso de maduración
 Baja actividad de la lipasa, para evitar la rancidez del desarrollo en el queso

Una variedad de hongos y bacterias se han aislado como productores y se han

examinado para las características anteriores.

Los siguientes son los géneros más importantes de bacterias:

Alcaligenes, Bacillus, Corynebacterium, Lactobacillus, Pseudomonas Serratia

Streptococcus y Streptomyces. Las cepas de Bacillus (B. subtilis, B. polymyxa y B.
mesentericus) se han comercializado, pero no han demostrado ser comercialmente
exitosas.

Hay varios géneros de hongos que producen enzimas coagulantes de la leche:

Aspergillus Candida, Coriolus, Endo Enthomophthora,Mucor, Penicillium, Rhizopus,
Sclerotium y Torulopsis.

Solamente tres cepas de hongos se usan en todo el mundo en producción. Se

subdividen en 2 grupos Tipo 1 Mucor pusillus var. Superficie sólida Cultivo Lindt Tipo II
Endothia parasitica cultivo sumergido Mucor miehei Cultivo sumergido. Aún no ha sido
posible cultivar Mucor pusillus con éxito mediante el proceso sumergido; en un
biorreactor agitado, solo se forma aproximadamente la mitad de la actividad de renina
que el proceso facial.

Además, hay productos secundarios sustanciales en la fermentación sumergida, como

la prohibición de las proteasas y lipasas directas, cuyo uso de preparaciones
enzimáticas sin extensivo se produce en la purificación. La enzima, cuya superficie
procesa a 30 ° C en 70 horas, es una proteasa ácida.

La renina producida por Endothia parasitica fue la primera renina comercializada en el

mercado en 1967.

PECTINASAS

Las preparaciones de pectinasa contienen al menos seis enzimas, dividiendo las

pectinas en diferentes sitios de la molécula. La estructura básica de la pectina es un
ácido galacturónico a-1,4-enlazado, con hasta un 75% de sus grupos carboxilo
esterificados con metanol.

Las pectinasas se clasifican según su punto de ataque sobre la molécula de pectina.

Varias firmas comerciales producen alctonasas divertidas usando Aspergillus niger o
A. wentii y una planta de fermentación usa Rhizopus. Se usan procesos superficiales y
sumergidos. Las pectinasas se han descubierto en otros hongos y también en
bacterias, protozoos, insectos y plantas superiores. Se utilizan principalmente para
clarificar los jugos de frutas al reducir la viscosidad y eliminar

LIPASAS

Las lipasas (glicerol éster hidrolasas) dividen las grasas (ésteres de glicerol) en di- o
monoglicéridos y ácidos grasos. Generalmente son enzimas extracelulares.

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Los hongos que producen lipasas incluyen Aspergillus, Mucor, Rhizopus, Penicillium,
geotrichum y las levaduras Torulopsis y Candida. Las bacterias que producen lipasas
incluyen Pseudomonas, Achromobacter y Staphylococcus. De estos organismos, solo
Aspergillus, Mucor, Rhizopus y Candida se usan comercialmente.

En la mayoría de los casos, la producción de enzimas debe ser inducida mediante la

adición de aceites y grasas. Sin embargo, hay algunos casos en que las grasas no
tienen ningún efecto sobre la producción de lipasa, y con Penicillium roqueforti, en
realidad reprimen la producción de enzimas. Con frecuencia se producen isoenzimas
con diferentes óptimos de pH, óptimas de temperatura o especificidades de sustrato.
Las lipasas bacterianas tienen un pH óptimo en el rango neutro o ligeramente alcalino,
mientras que las lipasas fúngicas tienen su pH óptimo en el rango neutral o
ligeramente ácido. La temperatura óptima para ambas elevaciones generalmente es
alrededor de 30-45°C

El uso comercial de lipasa ha sido limitado. Se comercializan principalmente con fines

terapéuticos como enzimas digestivas para complementar las lipasas pancreáticas.
Las enzimas también encuentran algo en la industria láctea. Dado que el uso de
ácidos grasos libres determina el olor y el sabor del queso, y el proceso de maduración
del queso se ve afectado por lipasas originadas por microorganismos que existen en la
leche, las lipasas de Micrococcus y Lactobacillus se usan actualmente en la
preparación del queso.

.PENICILINA ACILASAS

Las penicilina aciliasas son enzimas empleadas durante la generación de penicilinas s

emisintéticas. Se trata deuna familia de hidrolasas ampliamente empleadas que permit
en generar el núcleo de las penicilinas medianteeliminación de la cadena lateral de la
penicilina G producida en cultivos microbianos de cepas del hongoPenicillium.

Las penicilinas acilasas están presentes en una gran variedad de microorganismos

que incluyen bacterias gram positivas y negativas, hongos filamentos y levaduras

Los antibióticos de penicilina utilizados en medicina se producen semisintéticamente

mediante la modificación química de la estructura básica del anillo de penicilina. La
penicilina G acilasa (PGA) cataliza la reacción mediante la cual se obtiene el ácido 6-
aminopenicilánico (6-APA) usado en la síntesis de antibióticos β-lactámicos semi-
sintéticos, la PGA hidroliza el enlace amida que se establece entre el anillo -lactámico
y la cadena lateral acilo de las penicilinas,es por ello que es de gran importancia para
las industrias química y farmacéutica.

El 6-APA es el núcleo fundamental para la síntesis de penicilinas semisintéticas como

ampicilina, amoxicilina, oxacilina, carbenicilina, piperacilina, etc.

6-APA es excretado en bajas concentraciones para penicillum chysogenum cuando el

organismo se cultiva en un medio con ácido fenilico como precursor. este proceso para
la producción del sistema de anillo básico actualmente no se puede utilizar
comercialmente debido a su alto costo.

también se puede producir mediante la división de la cadena lateral de acilo de

penicilina G producida microbianamente con la enzima penicilina acilasa. Es esencial

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usar con esta enzima el anillo beta lactamico no abierto. Las penicilinas acilasas tienen
así un uso comercial en la producción de penicilinas semisintéticas

CLASIFICACIÓN DE PENICILINA ACILASAS

penicilina acilasa son producidas por levaduras, hongos y bacterias. Ellos pueden
subdividirse en 2 tipos.

Acilasas tipo 1, también llamadas tipo hongo, la división fenoximetil penicilina

(penicillin V) pero atacar la bencil peicilina (penicillin G) de manera mucho menos
eficiente. saben que los productores de estas acilasas son penicillium s.p., P.
Crhysogenum, Aspergillus ochraceus, Trichophyton mentagrophytes, epidermiphyton
floccosum, Cephalosporium sp., and Fusarium semitectum. aparte de los hongos, la
bacteria streptomyces lavendulae también produce este tipo de acilasa. además de
penicilina V, penicilina K (heptil penicilina), dihidropenicilina F (pentyl penicillin), y una
cantidad de penicilinas sintéticas se dividen. Estas acilasas, que suelen ser
extracelulares, tienen un pH óptimo de oh 10 y una temperatura de 50 ° C.

Acilasas tipo 2, también designado como tipo bacteriano, son producidos por
Enterobacter, alcaligenes, Bordetella, Cellulomonas, Corynebacterium, Erwinia
Escherichia, Flavobacterium, Micrococcus, Nocardia, Proteus, Pseudomonas,
Salmonella, Sarcina y Xanthomonas. la temperatura óptima es de 40 ° C y el pH
óptimo es el pH 8, que es más bajo que el de las acilasas tipo 1.

las acilasas extracelulares e intracelulares de diversos microorganismos difieren en las

especificidades del sustrato. La especificidad del sustrato está determinada por la
naturaleza del grupo acilo y no por el 6-APA

Muchas cadenas laterales de aminoácidos N-acilo se dividen, pero el residuo de ácido

fenilacético se elimina más rápidamente.

PENICILINA ACILASA PARA ESCHERICHIA COLI

Las penicilinas acilasas de Escherichia coli se usan casi exclusivamente para la

producción de 6-APA. Las cepas de producción son mutantes de Escherichia coli
ATCC 11105 y Escherichia coli ATCC 9637.

la producción de acilasa intracelular se induce en cepas de tipo 2 mediante la adición

de ácido fenilacético.

La glucosa reprime la producción de enzimas y, por lo tanto, debe estar presente en el

medio de cultivo solo en bajas concentraciones. La tasa de producción también se ve
fuertemente afectada por la presión parcial de O2. Aunque E. coli puede crecer sin
condiciones anaeróbicas, los rendimientos de las enzimas son bajos; sin embargo, la
producción de enzimas también se suprime por las altas tasas de aireación.

Un medio nutriente adecuado consiste en un 2% de agua de maceración de maíz a pH

7,0. El inóculo consiste en 0,25% de un precultivo de 18 horas. Para inducir la

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formación de enzimas, después de 8 horas de fermentación a 24 ° C, se agrega 0.1%
de una solución estéril de fenilacetato de amonio a intervalos de una hora durante las
próximas 13 horas.

Las células se concentran 20 veces en el separador y luego se vuelve a analizar la

enzima mediante el uso de un desintegrador a presión (500 Kg 7 cm ^ {2} de presión).
La preparación enzimática cruda así obtenida se purifica posteriormente por
procedimientos bioquímicos convencionales.

La producción comercial del rendimiento enzimático se ha mejorado sustancialmente

mediante la optimización del medio de cultivo y mediante el uso de técnicas genéticas
clásicas. Las técnicas de ADN recombinante prometen aumentar aún más los
rendimientos. Por ejemplo, clonando el gen de la penicilina acilasa en un plásmido
multicopia, se han obtenido cepas que tienen un aumento de 28 veces en la velocidad
de formación de enzimas en la fermentación no inducida y un aumento adicional de 6
veces en la fermentación inducida.

Hay 3 métodos usados comercialmente para producir 6-APA a partir de penicilina G.

Un método estrictamente químico implica convertir la penicilina G en una serie de
pasos en éster de N-iminometoxiepenilina, que se hidroliza con amoníaco acuoso
hasta 6-APA. Se usan dos métodos microbianos para la conversión enzimática, uno
que usa una suspensión bacteriana y el otro que usa penicilina acilasa unida a un
soporte.

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