FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES

PROGRAMA DE INGENIERÍA BIOQUÍMICA

LABORATORIO MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL
PRÁCTICA No. 1 Página
Medios de Cultivo, Métodos de Siembra y Recuento de Bacterias 1 de 11

OBJETIVOS
 Comprobar la utilidad que tienen los medios de cultivos enriquecidos, selectivos y diferenciales
para el aislamiento e identificación de microorganismos.
 Aplicar diferentes técnicas de siembra y aislamiento de cultivos de bacterias en medios sólidos,
semisólidos y líquidos.
 Reconocer diferentes morfologías, agrupaciones y otros aspectos a nivel macroscópico de
bacterias.
 Observar y caracterizar diferentes estructuras bacterianas a nivel microscópico empleando
diferentes métodos de tinción.

1. INTRODUCCIÓN
Los organismos más simples que viven en la tierra hoy en día son las bacterias. Demasiado
pequeñas para verlas a simple vista, las bacterias son las más abundantes de todos los organismos
y son las únicas que se caracterizan por la organización celular procariota. La vida en la Tierra no
podría existir sin bacterias ya que hacen posible muchas de las funciones esenciales de los
ecosistemas, incluyendo la captura de nitrógeno de la atmósfera, la descomposición de la materia
orgánica y, en muchas comunidades acuáticas, la fotosíntesis. De hecho, se cree que la fotosíntesis
bacteriana ha sido la fuente de gran parte del oxígeno en la atmósfera terrestre. La investigación
bacteriana continúa proporcionando conocimientos extraordinarios sobre genética, ecología y
medicina.

2. CONSULTAS PRELIMINARES

 Mencione algunos productos que cuyo principio activo sean bacterias.

 Mencione algunos productos que se obtienen a partir de bacterias.
 ¿Qué son los mecanismos de resistencia? Mencione algunos característicos de las bacterias.
 ¿Qué son los factores de virulencia? Mencione algunos característicos de las bacterias.
 ¿Por qué se considera Escherichia coli como un modelo biológico?
 Mencione algunas bacterias que podrían estar implicados en los siguientes procesos industriales
y el papel que cumplen: generación de hidrógeno, digestión anaerobia de residuos sólidos,
producción de bioenergía y degradación de monumentos.
 ¿Cómo interactúan los colorantes de la tinción de Gram con la pared celular?
 ¿Cómo interactúa el colorante negro de sudan con el glicocálix?
 ¿Cómo interactúa el colorante de Wayson con la espora bacteriana?
 ¿En qué consiste la tinción de Ziehl Neelsen?
 ¿Cuáles microorganismos espera usted que crezcan en los diferentes medios mencionados en la
siguiente guía? Realice la clasificación de cada uno.

3. FUNDAMENTO TEÓRICO

Las bacterias son las formas de vida más antiguas, estructuralmente más simples y más abundantes
en la tierra. También son los únicos organismos con organización celular procariota. Representadas
en las rocas más antiguas de las que se han obtenido fósiles, de 3,5 a 3,8 mil millones de años, las
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bacterias fueron abundantes durante más de 2 mil millones de años antes de que los eucariotas
aparecieran en el mundo. Las bacterias fotosintéticas (cianobacterias) alteraron la atmósfera
terrestre con la producción de oxígeno que conduce a una diversidad bacteriana y eucariota. Las
bacterias desempeñan un papel vital tanto en la productividad como en el ciclo de las sustancias
esenciales para todas las otras formas de vida.

Actualmente se reconocen cerca de 5000 tipos diferentes de bacterias, pero sin duda hay muchos
miles más a la espera de una identificación adecuada. En los años 70s y 80s se analizó un nuevo
tipo de bacteria que eventualmente condujo a la clasificación de un nuevo tipo de células procariotas,
la archeabacteria (o Archaea) y que hoy en día representan un dominio diferente a Eukarya y
Prokarya. Incluso cuando se ven con un microscopio electrónico, las diferencias estructurales entre
las diferentes bacterias son menores en comparación con otros grupos de organismos. Debido a que
las diferencias estructurales son tan leves, las bacterias se clasifican principalmente en función de
sus características metabólicas y genéticas. Las bacterias se pueden caracterizar adecuadamente
sólo cuando se cultivan en un medio definido porque las características de estos organismos a
menudo cambian, dependiendo de sus condiciones de crecimiento.

Las bacterias son omnipresentes en la Tierra. Muchos de los ambientes más extremos en los que se
encuentran las bacterias serían letales para cualquier otra forma de vida. Las bacterias viven en
aguas termales, ambientes hipersalinos que deshidrataran otras células y en atmósferas ricas en
gases tóxicos como metano o sulfuro de hidrógeno que matarían a la mayoría de los otros
organismos. Estos ambientes ásperos pueden ser similares a las condiciones presentes en la Tierra
temprana, cuando la vida comenzó. Es probable que las bacterias evolucionaron a vivir en estas
duras condiciones temprano y han conservado la capacidad de explotar estas áreas como el resto de
la atmósfera ha cambiado.

3.1 Morfología Bacteriana

Las bacterias son en su mayoría simples en forma y exhiben tres tipos de morfologías básicas: bacilo
recto y en forma de barra, cocos esféricos y espirilos largos y helicoidales, también llamado
espiroqueta. Las espiroquetas generalmente no forman asociaciones con otras células y nadan
individualmente a través de sus ambientes. Tienen una estructura compleja dentro de sus
membranas celulares que les permiten girar sus cuerpos en forma de sacacorchos que los impulsa a
lo largo. Algunas bacterias en forma de bacilos y cocos forman colonias, adheridas de extremo a
extremo después de que se han dividido, formando cadenas. Algunas colonias bacterianas crecen
en filamentos largos, ramificados o forman estructuras erectas que liberan esporas, cuerpos
unicelulares que se convierten en nuevos individuos bacterianos. Algunas bacterias filamentosas son
capaces de deslizarse por el movimiento, a menudo combinadas con la rotación alrededor de un eje
longitudinal.

3.2 Diferenciación

Los Procariotas -eubacteria y archaea- difieren de los eucariotas en numerosas características

importantes. Estas diferencias representan algunas de las distinciones más fundamentales que
separan a los procariotas de cualquier otro grupo de microorganismos.
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1. Multicelularidad. Todos los procariotas son fundamentalmente unicelulares. En algunos tipos, las
células individuales se adhieren entre sí dentro de una matriz y forman filamentos, sin embargo las
células conservan su individualidad. Las cianobacterias, en particular, son propensas a formar tales
asociaciones, pero su citoplasma no está directamente interconectado, como suele suceder en los
eucariotas multicelulares. Las actividades de una colonia bacteriana son menos integradas y
coordinadas que las de los eucariotas multicelulares. Una forma primitiva de organización colonial
ocurre en las bacterias de deslizamiento, que se mueven juntas y forman esporas. Tales formas
multicelulares coordinadas son raras entre las bacterias.

2. Tamaño de la célula. A medida que se descubren nuevas especies de bacterias, descubrimos

que el tamaño de las células procariotas varía enormemente, en hasta cinco órdenes de magnitud.
La mayoría de las células procariotas tienen sólo 1 micrómetro o menos de diámetro. La mayoría de
las células eucarióticas tienen más de 10 veces ese tamaño.

3. Cromosomas. Las células eucariotas tienen un núcleo de membrana que contiene cromosomas
compuestos de ácidos nucleicos y proteínas. Las bacterias no tienen núcleos ligados a la membrana,
ni tienen cromosomas del tipo presente en eucariotas, en el que el ADN forma un complejo
estructural con proteínas. En cambio, su ADN circular desnudo se localiza en una zona del
citoplasma llamada nucleoide.

4. División celular y recombinación genética. La división celular en eucariotas tiene lugar por
mitosis e implica husos compuestos de microtúbulos. La división celular en las bacterias tiene lugar
principalmente por fisión binaria. La reproducción sexual verdadera ocurre solamente en eucariotas e
implica la singamia y la meiosis, con una alternancia de formas diploides y haploides. A pesar de su
falta de reproducción sexual, las bacterias tienen mecanismos que conducen a la transferencia de
material genético. Estos mecanismos son mucho menos regulares que los de los eucariotas y no
implican la participación igualitaria de los individuos entre los cuales se transfiere el material
genético.

5. Compartimentación interna. En eucariotas, las enzimas para la respiración celular se envasan

en las mitocondrias. En las bacterias, las enzimas correspondientes no se envasan por separado
sino que se unen a las membranas celulares. El citoplasma de las bacterias, a diferencia de los
eucariotas, no contiene compartimentos internos ni citoesqueleto y organelos excepto ribosomas.

6. Flagelo. Los flagelos bacterianos son de estructura simple, compuestos de una sola fibra de la
proteína flagelina. Los flagelos eucariotas son complejos y tienen una estructura 9 + 2 de
microtúbulos. Los flagelos bacterianos también funcionan de manera diferente, girando como hélices,
mientras que los flagelos eucariotas tienen un movimiento parecido a un hilo.

7. Diversidad metabólica. Sólo un tipo de fotosíntesis se produce en eucariotas e implica la

liberación de oxígeno. Las bacterias fotosintéticas tienen varios patrones diferentes de fotosíntesis
anaeróbica y aeróbica, involucrando la formación de productos finales como azufre, sulfato y
oxígeno. Las células procariotas también pueden ser quimioautotrófas utilizando la energía
almacenada en enlaces químicos de moléculas inorgánicas para sintetizar carbohidratos.
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3.3 Superficie Bacteriana

La pared celular bacteriana es una estructura importante porque mantiene la forma de la célula y
protege a la célula del hinchamiento y la ruptura. La pared celular suele consistir en peptidoglicano,
una red de moléculas de polisacáridos conectados por enlaces cruzados polipéptidicos. En algunas
bacterias, el peptidoglicano forma una red gruesa y compleja alrededor de la superficie externa de la
célula. Esta red está entrelazada con cadenas peptídicas. En otras bacterias una fina capa de
peptidoglicano se encuentra intercalada entre dos membranas plasmáticas. La membrana externa
contiene grandes moléculas de lipopolisacáridos, lípidos con cadenas de polisacáridos unidas. Estos
dos tipos principales de bacterias pueden identificarse usando un proceso de tinción llamado tinción
de Gram. Las bacterias Gram positivas tienen la pared más gruesa del peptidoglicano y se tiñen de
un color púrpura. Las bacterias Gram negativas más comunes contienen menos peptidoglicano y no
conservan el colorante de color púrpura quedando rosadas. La capa de membrana externa hace que
las bacterias Gram negativas resistan a muchos antibióticos que interfieren con la síntesis de la
pared celular en bacterias Gram positiva. En algunos tipos de bacterias, una capa gelatinosa
adicional, la cápsula, rodea la pared celular.

Muchos tipos de bacterias tienen flagelos delgados y rígidos compuesto de la proteína flagelina.
Estos flagelos varían de 3 a 12 micrómetros de longitud y son muy finos, sólo de 10 a 20 nanómetros
de espesor. Están anclados en la pared celular y giran tirando de las bacterias a través del agua
como una hélice.

El Pili (singular, pilus) son otras estructuras más cortas que los flagelos bacterianos y ayudan a las
células bacterianas a adherirse los sustratos apropiados y el intercambio de información genética.

Algunas bacterias forman endosporas de paredes gruesas alrededor de su cromosoma y una

pequeña porción del citoplasma circundante cuando están expuestas a condiciones pobres en
nutrientes. Estas endosporas son altamente resistentes al estrés ambiental, especialmente el calor, y
pueden germinar para formar nuevos individuos después de décadas o incluso siglos.

3.4 Estructura Interna

La característica fundamental de las células bacterianas es su organización procarióta. Las células
bacterianas carecen de la compartimentación funcional extenso observado dentro de las células
eucariotas.

1. Membranas internas. Muchas bacterias poseen regiones invaginadas de la membrana

plasmática que funcionan en la respiración o la fotosíntesis.

2. Región del nucleótido. Las bacterias carecen de núcleos y no poseen los cromosomas
complejos característicos de los eucariotas. En su lugar, sus genes están codificados dentro de
un único anillo de doble cadena de ADN que se amontonan en una región de la célula conocida
como la región nucleóide. Muchas células bacterianas también poseen pequeños círculos de
ADN que se replican independientemente llamados plásmidos. Los plásmidos contienen sólo
unos pocos genes, generalmente no esenciales para la supervivencia de la célula. Se los
considera mejor como una porción extirpada del cromosoma bacteriano.
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3. Ribosomas. Los ribosomas bacterianos son más pequeños que los de eucariotas y difieren en el
contenido de proteína y ARN. Los antibióticos como la tetraciclina y el cloranfenicol pueden decir
la diferencia: se unen a los ribosomas bacterianos y bloquean la síntesis de proteínas, pero no se
unen a los ribosomas eucarióticos.

3.5 Mutación

Las mutaciones pueden surgir espontáneamente en las bacterias, ya que se producen errores en la
replicación del ADN. Ciertos factores tienden a aumentar la probabilidad de que ocurran tales errores
como radiación, luz ultravioleta y diversos productos químicos. En una bacteria típica como
Escherichia coli hay unos 5000 genes. Es muy probable que una mutación ocurra por casualidad en
uno de cada millón de copias de un gen. Con 5000 genes en una bacteria, las leyes de probabilidad
predicen que 1 de cada 200 bacterias tendrá una mutación. Una cucharada de tierra típicamente
contiene más de mil millones de bacterias y por lo tanto debe contener algo del orden de 5 millones
de individuos mutantes. Con alimentos y nutrientes adecuados, una población de E. coli puede
duplicarse en menos de 20 minutos. Debido a que las bacterias se multiplican tan rápidamente, las
mutaciones pueden propagarse rápidamente en una población y pueden cambiar las características
de esa población. La capacidad de las bacterias para cambiar rápidamente en respuesta a nuevos
desafíos a menudo tiene efectos adversos en los seres humanos. Recientemente han aparecido
varias cepas de Staphylococcus aureus asociadas a infecciones graves en pacientes hospitalizados,
algunas de ellas con frecuencia alarmante. Desafortunadamente, estas cepas han adquirido
resistencia a la penicilina de modo que las infecciones causadas por ellos son muy difíciles de tratar.
Las infecciones por estafilococos proporcionan un excelente ejemplo de la forma en que la mutación
y la selección intensiva pueden provocar un cambio rápido en las poblaciones bacterianas.

4. SEGURIDAD DURANTE LA PRÁCTICA

a. Normas de seguridad:

El estudiante debe referirse al manual de normas de seguridad.

b. Equipos de protección personal:

Usar durante todo el desarrollo de la práctica los siguientes elementos de seguridad:

• Bata de laboratorio.
• Guantes de nitrilo.
• Gafas de seguridad.

Mantener los elementos personales de seguridad identificados y en buen estado. Está prohibido su
intercambio con los demás compañeros de laboratorio.

c. Manejo de residuos químicos:

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Tanto por razones de seguridad como por respeto al medio ambiente, es importante disponer los
residuos generados en las prácticas del laboratorio de química en forma adecuada. Por ello el
estudiante debe:

 Emplear los recipientes destinados para eliminar los residuos o desechos de laboratorio, los
cuales están debidamente identificados según el tipo de sustancia a desechar.

 Verter únicamente los residuos en el recipiente correspondiente para evitar reacciones no

controladas y potencialmente peligrosas.

 No arrojar por el desagüe los desechos o residuos químicos obtenidos durante el desarrollo de la
práctica. Si tiene alguna inquietud al respecto comuníquela al responsable del laboratorio, quien
le indicará la forma correcta de hacerlo.

5. PROCEDIMIENTO

5.1 MATERIALES

Tabla 1. Listado de materiales necesarios para el desarrollo de la práctica por grupo:

ITEM DESCRIPCION DEL ITEM CANTIDAD U.M. OBSERVACIONES

1 Cultivo de Staphylococcus aureus 1 UN
2 Cultivo de Escherichia coli 1 UN
3 Cultivo de Klebsiella pneumoniae 1 UN
4 Cultivo de Bacillus subtilis 1 UN
5 Cultivo de Streptomyces sp 1 UN
6 Cultivo de Pseudomonas sp 1 UN
7 Asas desechables 15 UN
8 Láminas porta objetos 10 UN
9 Laminillas cubre objetos 10 UN
10 90mL de Caldo Casoy estéril 2 mL
11 Cajas con Agar BHI 18 UN
12 Cajas con Agar XLD 6 UN
13 Cajas con Agar MACCONKEY 9 UN
14 Cajas con Agar MRS 6 UN
15 Cajas con Agar Leche 6 UN
16 Cajas con Agar ALMIDÓN 6 UN
17 Cajas con Agar Cetrimide 6 UN
Tubos de 16 * 150 con 9mL de
18 10 UN Estériles
agua peptonada estéril
19 Rack de puntas de 1mL 1 UN Estéril
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5.2 REACTIVOS

Tabla 2. Listado de reactivos necesarios para el desarrollo de la práctica por grupo:

ITEM DESCRIPCION DEL ITEM CANTIDAD U.M. OBSERVACIONES

Demostración de preparación de medios de
1 Frasco de Agar Casoy 1 UN cultivo
Demostración de preparación de medios de
2 Frasco de Agar Chromocult 1 UN cultivo

5.3 EQUIPOS

Tabla 3. Listado de equipos necesarios para el desarrollo de la práctica por grupo:

ITEM DESCRIPCION DEL ITEM CANTIDAD U.M. OBSERVACIONES

1 Microscopio 1 UN
2 Mechero 1 UN
3 Soporte universal 1 UN
4 Malla de asbesto 1 UN
5 Balanza analítica 1 UN
6 Micropipeta 100 – 1000µL 3 UN
7 Vórtex 1 UN

5.4 SOLUCIONES

Tabla 4. Listado de soluciones que requieren estar listas para el día de la práctica:

ITEM DESCRIPCION DEL ITEM CANTIDAD U.M. OBSERVACIONES

1 Kit de tinción de Gram 10 mL
1 Aceite de Inmersión 10 mL
1 Verde Malaquita 10 mL
1 Nigrosin 10 mL

5.5 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

5.5.1 Desinfección del Área de Trabajo

 Desinfectar toda el área de trabajo con alcohol 70% (v/v). Deje que la superficie se seque.
 Organice todo su material de trabajo de acuerdo a lo que va a ir siendo empleado a lo largo de
esta guía.

5.5.1.1 Técnica de Sedimentación

 Marcar una caja de agar BHI, MACCONKEY y MRS con el nombre sitio aleatorio y la fecha y
hora.
 Dirigirse al punto de muestreo, abrir la caja con la exposición del agar hacia arriba y dejarla en
contacto con el ambiente durante 30 minutos.
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 Finalizado el tiempo de exposición, incubar a una temperatura de 35°C ± 2°C durante 48 horas.

5.5.1.1.1 Recuento
 Finalizado el tiempo de incubación, contar las colonias obtenidas en cada uno de los medios de
cultivo.
 Realizar la descripción macroscópica de las colonias observadas.
 Reportar el número de colonias en UFC/30 minutos

5.5.1.1.2 Siembra por estrías en superficie

 Pesar 10g/10mL de la muestra en 90mL de caldo casoy estéril.
 Incubar durante 30 minutos para realizar un enriquecimiento rápido.
 Tomar una asada del cultivo y realizar una siembra masiva en ¼ de la superficie de la caja con
medios BHI, XLD, MACCONKEY, MRS, Leche, Cetrimide y Almidón.
 Realizar una siembra por agotamiento siguiendo la imagen a continuación:

 Incubar a una temperatura de 35°C ± 2°C durante 48 horas bajo condiciones aerobias.
 Realizar la descripción de las colonias obtenidas.

5.5.1.2 Técnica de Dilución

 Pesar 10g/10mL de la muestra en 90mL de caldo casoy estéril.
 Agitar vigorosamente durante 5 segundos. Este frasco corresponde a dilución 10-1.
 Tomar 1mL de la dilución 10-1 y adicionarlos en 9mL de agua peptonada 0.1% (p/v) estéril. Este
frasco corresponde a la dilución 10-2.
 Agitar en vórtex durante 3 segundos.
 Realizar este procedimiento hasta completar la dilución 10-7.

5.5.1.3 Siembra en superficie

 Marcar las cajas de Petri con la siguiente información: Medio de cultivo, nombre de la muestra,
dilución y fecha de siembra.
 Tomar 0.1mL de cada dilución y adicionarlo en la caja de Petri respectiva de cada dilución.
Realizar cambio de punta entre dilución.
Nota: Recuerde abrir lo menos posible las cajas de Petri y tenga mucha precaución con la cercanía
al mechero.
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 Incubar a una temperatura de 35°C ± 2°C durante 48 horas bajo condiciones aerobias.
 Finalizado el tiempo de incubación, realizar el recuento de las UFC obtenidas.

5.5.2 Métodos de Tinción

5.5.2.1 Tinción de Gram

 Marcar la lámina con el nombre del microorganismo.
 Adicionar una pequeña gota de agua destilada en el centro de la lámina portaobjetos.
 Tomar una pequeña porción de la colonia del cultivo.
 Homogenizar en la lámina con la gota de agua sobre toda la superficie de la lámina.
 Dejar secar al lado del mechero.
 Adicionar de 5 – 10 gotas de Cristal Violeta sobre la lámina y dejar actuar durante 1 minuto.
 Retirar el colorante con agua evitando tocar directamente la muestra.
 Adicionar de 5 – 10 gotas de Lugol sobre la lámina y dejar actuar durante 1 minuto.
 Retirar el colorante con agua evitando tocar directamente la muestra.
 Adicionar de 5 – 10 gotas de Alcohol Acetona sobre la lámina y dejar actuar durante 30
segundos.
 Retirar el colorante con agua evitando tocar directamente la muestra.
 Adicionar de 5 – 10 gotas de Fucsina sobre la lámina y dejar actuar durante 1 minuto.
 Retirar el colorante con agua evitando tocar directamente la muestra.
 Dejar secar al lado del mechero.
 Observar en el microscopio las diferentes morfologías y características.

5.5.2.2 Tinción de Esporas

 Marcar la lámina con el nombre del microorganismo.
 Adicionar una pequeña gota de agua destilada en el centro de la lámina portaobjetos.
 Tomar una pequeña porción de la colonia del cultivo.
 Homogenizar en la lámina con la gota de agua sobre toda la superficie de la lámina.
 Dejar secar al lado del mechero.
 Colocar la lámina sobre un vaso de precipitado a baño maria.
 Colocar una tira de papel de cocina sobre la lámina y saturar con colorante Verde Malaquita.
 Cuando se comiencen a emitir vapores, adicionar más colorante durante 5 minutos sin dejar que
el colorante se seque.
 Retirar la lámina del calor y retirar la tirilla de papel.
 Dejar enfriar la lámina.
 Retirar el colorante con agua evitando tocar directamente la muestra.
 Adicionar de 5 – 10 gotas de Fucsina sobre la lámina y dejar actuar durante 2 minutos.
 Retirar el colorante con agua evitando tocar directamente la muestra.
 Dejar secar al lado del mechero.
 Observar en el microscopio las diferentes morfologías y características.

5.5.2.3 Tinción de Cápsula

 Marcar la lámina con el nombre del microorganismo.
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 Adicionar una pequeña gota de nigrosin en el centro de la lámina portaobjetos.

 Tomar una pequeña porción de la colonia del cultivo.
 Homogenizar en la lámina en la gota de agua nigrosin.
 Con ayudar de otra lámina, repartir la gota de nigosin en toda la superficie de la lámina.
 Dejar secar al lado del mechero.
 Adicionar de 5 – 10 gotas de Fucsina sobre la lámina y dejar actuar durante 2 minutos.
 Retirar el colorante con agua evitando tocar directamente la muestra.
 Dejar secar al lado del mechero.
 Observar en el microscopio las diferentes morfologías y características.

5.6 PAUTAS PARA EL ANÁLISIS DE RESULTADOS

 Complete la tabla a continuación realizando la descripción de las colonias observadas y el
recuento obtenido:

Sitio de Exposición
Agar BHI Agar MACCONKEY Agar MRS

 Complete la tabla a continuación realizando la descripción de las colonias observadas:

Nombre de la Muestra
Agar BHI Agar MRS Agar XLD Agar MACCONKEY

Agar MOSSEL Agar ALMIDÓN Agar Cetrimide Agar Leche

 ¿Cuáles posibles géneros pueden estar asociados al tipo de muestra dependiendo del
crecimiento en los medios de cultivo? En caso de presentarse, ¿A qué se debe el no crecimiento
en alguno de los medios de cultivo?

 Complete la tabla a continuación:

Morfología de las Tinción de Tinción de

Microorganismo Tinción de Gram
Colonias Esporas Cápsula

 ¿Cómo interactúan los diferentes colorantes en cada una de las estructuras evaluadas?
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6 BIBLIOGRAFÍA
 Brock T.D. Madigan M.T. Martenko J.J. y Parker J. (Eds) Biología de los microorganismos. 13ª
Edición. Prentice Hall International. (2014).
 Mammert J. Techniques in Microbiology: A student Handbook. Pearson. (2007).