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Durante muchas décadas, la espectroscopia Raman se ha aplicado con éxito para investigar
propiedades y estructuras moleculares. El éxito de la espectroscopía Raman se basa en su
instrumentación simple que básicamente consiste en una poderosa fuente de luz, un
monocromador bien disperso y un dispositivo de detección sensible. Además, no se deben hacer
esfuerzos especiales para preparar las muestras para la grabación los espectros. Además, se
puede llevar a cabo una interpretación completa de los espectros Raman mediante análisis
vibracionales asistidos por la mecánica cuántica, que son proporcionados rápidamente por las
computadoras modernas. Por otro lado, la espectroscopía Raman tiene una desventaja intrínseca.
Desde el comienzo de la medición de los espectros Raman, se han realizado múltiples intentos
para obtener señales más grandes con el fin de registrar transiciones más débiles o estudiar
señales
a partir de pequeñas concentraciones de muestra.. Comparado con las emisiones de
fluorescencia molecular, Las señales de Raman son notoriamente débiles. La magnitud de la
radiación dispersa depende linealmente de la intensidad de la fuente de luz láser de excitación, del
número de moléculas expuestas, de la cuarta potencia del número de onda de dispersión absoluta
y de la suma de los elementos cuadrados del tensor de dispersión, respectivamente . La
pequeñez de esta última cantidad determina el pequeño rendimiento de los fotones de Raman. En
general, un millón de fotones láser generan un solo fotón Raman. La magnitud de elementos de
tensor de dispersión puede aumentarse haciendo coincidir la frecuencia del láser con una
transición electrónica ópticamente permitida de las moléculas molares que se estudian. En este caso,
ciertas señales Raman de la molécula pueden ser fuertemente
mejorado por efectos de resonancia
. Junto a esta propiedad, el aumento de la frecuencia y la potencia de la fuente de
excitación así como la extensión del ángulo sólido de la luz dispersa son otras
herramientas para mejorar la intensidad de dispersión. En esta contribución, nos
preocupamos por una mejor detectabilidad de las señales de Raman mejorando los
componentes instrumentales, especialmente la formación de imágenes de la luz dispersa
(Steinert et al., 1997, 1998). Las mejores condiciones de imagen de nuestra configuración
permite el registro de señales de dispersión de volúmenes sampie de pequeño tamaño
generalmente presentes en separaciones cromatográficas y hacen posible la aplicación
de Raman espectroscopia como dispositivo de detección para HPLC (Iriyama y cols.,
1983, Koizumi y Suzuki 1987).
7.1.1 Enfoque experimental
Como la intensidad de la luz dispersa depende linealmente de la intensidad de la luz que
expone la muestra, la celda de muestra se colocó dentro de un resonador láser
modificado.. En el caso de las muestras líquidas, las fluctuaciones dentro del líquido pueden causar
considerables
fluctuaciones de intensidad de la luz láser. Teniendo en cuenta las condiciones de flujo HPLC, estas posibles
fluctuaciones no pueden ser compensadas por tiempos de detección más largos. Para evitar esto, el sampie se
colocó en una cavidad separada que estaba acoplada ópticamente al resonador láser original.
La figura 7.1 presenta la configuración experimental. La unidad de excitación consiste en un láser de iones de
argón, un filtro de paso de banda (F I), una lente de enfoque (Lf), un agujero de alfiler (P) y el espejo de
retroalimentación (M3). Después de pasar la celda sampie (S), el rayo láser se acopla nuevamente al láser
mediante el espejo de realimentación (radio 60 cm, reflectividad 99,9%). Esto mejora la potencia del láser a
un factor de 2.7 dentro de la sampie en comparación con el ordinario
excitación láser Para lograr este aumento en la potencia, el espejo de retroalimentación debe ajustarse de tal
forma que su radio de curvatura se ajuste al radio del frente de fase del rayo láser.
El filtro de paso de banda, que consiste en una rejilla de difracción holográfica entre dos prismas de cuarzo,
reduce las líneas de emisión espontánea de la descarga de argón. Esta tarea se logra dirigiendo efectivamente
el rayo láser excitante en un ángulo de 90 grados. Las líneas espectrales adyacentes, ahora con dispersión
angular, son rechazadas por un agujerito (P). El orificio (diámetro 3 mm) se taladra en un reflector de acero
inoxidable (R). El reflector R también forma parte de la unidad de recogida de luz. La lente Lf produce un
enfoque nítido del rayo láser con un diámetro de aproximadamente 10 11m en la muestra.
Rtejilla=grating
Slit=abertura
Para las separaciones por HPLC, la célula sampie fue reemplazada opcionalmente por una celda de flujo
y se eligió un volumen de inyección de 100 / lL para cada medición. La velocidad de flujo de la fase móvil
agua / acetonitrilo (50%) se estableció en el valor comúnmente seleccionado de 1 mL / min.
La unidad de recolección de luz consiste en dos lentes asféricas de elementos múltiples ("lentes Fresnel"),
hechas de plástico acrílico, y el reflector esférico (R). La primera lente (LI) tiene un orificio de 3 mm de
diámetro en su centro para dejar pasar el rayo láser sin enfocar.
La segunda lente (L2) sostiene el espejo de retroalimentación M3, que se ajusta en un agujero en su centro.
Esta construcción reduce al mínimo la sombra de la luz dispersa por el espejo y su soporte. Además, la parte
de la luz que se dispersa en la dirección de la parte posterior de las lentes de formación de imagen es recogida
por el reflector R que contiene un orificio (P) para dejar pasar el rayo láser. Las lentes de elementos múltiples
son excelentes para generar imágenes de una fuente de luz puntual en
una imagen puntual, es decir, para iluminar la rendija de entrada de un espectrómetro. Además, dan mejores
proporciones de longitud focal a diámetro, por lo tanto se pueden lograr ángulos sólidos más grandes de luz
dispersada y se corrigen mejor para la aberración esférica que las lentes normales.
La unidad de detección de luz contiene el espectrógrafo con una gran relación de entrada
(f / 1.8), una cámara CCD enfriada con nitrógeno líquido (-90 ° C) y equipada con un chip
de 1024x256 píxeles. El espaciado de los píxeles y la dispersión del monocromador
proporcionar una resolución espectral de alrededor de 10 ern-I. Dentro de la carcasa del
espectrógrafo, se inserta un filtro de muesca holográfica entre el plano de entrada del
espectrógrafo y la ranura interna (SL, 100 f ... lm). Este filtro suprime la dispersión de
Rayleigh que generaría una gran cantidad de luz dispersa. La reducción de la luz parásita
mejora considerablemente la relación señal / fondo. La sensibilidad de las mediciones
está limitada por la cantidad de señal de fondo. Esto depende del número de columnas de
píxeles en el área de píxeles seleccionada y en el número total de fotones entrantes en la
misma área. Para obtener los mejores resultados, el rango espectral debe establecerse
en una región que sea característica del examinado moléculas y no congestionadas por
las señales Raman del solvente. Para evitar los efectos de saturación del CCD, el tiempo
de medición total (típicamente 150 s) es dividido en una secuencia de varias exposiciones
individuales (típicamente de 10 a 50 s cada una).
Cerca del límite de detección, la evaluación de los datos consta de varios pasos. El
espectro medido se corrige para las señales de fondo restando un espectro a escala del
disolvente puro. El fondo restante puede contener fluorescencia señales, que tienen un
ancho de banda espectral mucho más grande que el Raman señales, y pueden mostrar
estructuras artificiales amplias que surgen de correcciones imperfectas. Ambas
contribuciones a la señal de fondo se eliminan para obtener una línea de base plana. Esto
se lleva a cabo restando un gráfico cuidadosamente suavizado del fondo. Finalmente, hay
estructuras periódicas restantes en los espectros causados por la cámara CCD. Estas
estructuras muestran una desviación estándar más grande que la señal Raman y el fondo,
y de esta forma limitan la sensibilidad de las mediciones. El espectro resultante es filtrado
de Fourier. Definimos el límite de detección por la relación de la altura de las señales de
Raman a la altura de las señales originadas a partir de las estructuras residuales
adyacentes. El límite de detección se alcanza, si la relación es la unidad.
7.1.2 Resultados
Fig. 7.2. Espectros Raman de los dicloro-fenoles individuales y el espectro de suma. Los
espectros están indicados por los patrones de sustitución de los compuestos en el eje de
ordenadas. Los fuertes aumentos dentro del gráfico de suma resultan del procedimiento
de procesamiento de la señal.
patrón de sustitución=
Siguiendo el enfoque de las vibraciones normales, cada átomo de la molécula se mueve durante
una vibración. Al comparar una gran cantidad de compuestos orgánicos, se ha observado que
ciertas vibraciones pueden atribuirse a tipos específicos de enlaces. Estas frecuencias grupales
cambian ligeramente al pasar de un compuesto a otro. Los rangos de frecuencia grupal se
observan principalmente para las vibraciones de estiramiento, pero son modos de deformación
lejana bastante inválidos en los que se alteran los ángulos de unión y los ángulos deshielos
predominantemente (Sverdlov et al., 1974). Estas últimas frecuencias de modo fundamental
dependen sensiblemente de los cambios en la distribución de las masas atómicas y las constantes
de fuerza internas, de modo que los espectros de los isómeros difieren considerablemente. Por lo
tanto, el patrón de frecuencia de los modos de deformación C-H en el plano y fuera del plano es
muy característico para cada dicloro-fenol. Como se puede ver en la figura 7.2, esta propiedad nos
permitió identificar cada compuesto de dicloro entre todos los isómeros restantes y este ejemplo
muestra las posibilidades de resolver problemas de análisis de rastreo mediante la combinación de
HPLC con espectroscopía Raman. Para concentraciones considerablemente más bajas y el análisis de
muestras de rastros, es
seguramente necesario para hacer uso de los efectos de resonancia Raman. Para esto, el esquema experimental
principal no debe ser alterado. Dado que la mayoría de las moléculas analíticamente relevantes absorben luz
ultravioleta, la fuente de luz láser debe emitir preferiblemente luz en el rango ultravioleta. Por el hecho de que
para un conocimiento amplio
los lentes de cuarzo multi-elemento no están disponibles, se han elegido lentes estándar. Supuestamente, esto
representará solo la mitad de un orden de magnitud de la señal, mientras que la mejora por resonancia
mejorará la sensibilidad del espectrómetro Raman en un factor de aproximadamente cien o más.
láser de desorción
Traductor de placas TL
haz molecular
haz de iones
rejilla de aceleración
7.3 Espectroscopia del anillo descendente de la cavidad de la fase condensada
7.3.1 Introducción
El rayo láser se adapta a la cavidad con lentes de modo que se excita preferentemente el TEMoo de la
cavidad. La cavidad se llena con el medio absorbente y está sellada en ambos lados por espejos altamente
reflectantes para mejorar la longitud de absorción. Para nuestros experimentos de fase gaseosa usamos espejos
con reflectividad
de 99.98% y una longitud de cavidad de casi 0.5 m, lo que resulta en una ruta efectiva de absorción-Longitud
de unos tres kilómetros. Debido a esta alta longitud de absorción, el CRDS es muy sensible. Después de
acoplar un pulso de láser en la cavidad, la intensidad de la luz
disminuye con cada pasada dentro del resonador debido a las pérdidas de reflexión de los espejos y las
pérdidas de absorción del medio. Por lo tanto, se obtiene una disminución exponencial de la intensidad en el
detector. Este decaimiento se especifica por el tiempo de caída 't, que normalmente está en el orden de
magnitud de IlS. Por supuesto, la absorción del astrónomo en la cavidad provoca una disminución más rápida
y, por lo tanto, se produce un tiempo de desintegración más corto. Se puede deducir [ver (Zalicki y Zare 1995,
Ruth 1999)] que el tiempo de decaimiento de la
La señal CRDS es inversamente proporcional al coeficiente de absorción lineal k v:
En 1999, Engeln et al. (Engeln et al., 1999) integraron la placa de ZnSe sólida en su cavidad y recubrieron la
placa con C60 para medir una línea de absorción de IR de este fullereno. Debido a la presencia de la placa de
ZnSe de 3 mm de espesor, hubo pérdidas masivas debido a la dispersión. Para evitar estas pérdidas y poder
medir los espectros de banda ancha, Pipino et al. desarrolló la técnica evanescente CRDS (Pipino et al., 1997,
1997; Pipino 1999). A pesar de varios años de investigación, esta técnica no ha logrado un gran avance hasta
la fecha debido a su alta complejidad experimental. Desarrollamos el método de recubrimiento directo de los
espejos de la cavidad para minimizar tanto la complejidad de la configuración experimental como los efectos
de dispersión. Este método nos permitió registrar el espectro de una capa monomolecular de yodo
sin ninguna dispersión adicional. El espectro de yodo ha sido publicado en
(Kleine et al., 2001) junto con una discusión de los detalles de nuestro experimento
configuración y posibles aplicaciones futuras de la fase condensada CRDS.