UNIVERSIDAD JUAREZ DEL

ESTADO DE DURANGO

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

QUÍMICO FARMACEUTICO BIOLÓGO 7°B

Toxicología
Práctica #2
Determinación de colinesteresa
plasmática
Docente:
Dr. José de Jesús Alba Romero

Alumnos(as):
EQUIPO 3
Stephanie Arizmendi Jaramillo
Benjamín Ibarra Alba
Guadalupe Janeth Zapata Esparza
Cristóbal Rodríguez Peña

Gómez Palacio, Durango. 28 de noviembre de 2016

 DETERMINACIÓN DE COLINESTERASA PLASMÁTICA

OBJETIVO
Determinar la actividad enzimática de la colinesterasa en una muestra de plasma
sanguíneo.

INTRODUCCIÓN
La colinesterasa plasmática (EC 3.1.1.8) pertenece a un grupo de isoenzimas
hepáticas con masa molecular de aproximadamente 300000 Da. A pesar de su
amplia distribución en tejidos humanos y animales, su función fisiológica aún no se
conoce claramente. Aunque se sugiere que juega un papel importante en el
metabolismo de lípidos y lipoproteínas, regulando la concentración de la colina en
plasma o evitando la acumulación de butirilcolina, con sus efectos nicotínicos,
durante el metabolismo de ácidos grasos y lipogénesis.

La determinación de su actividad es de importancia clínica para evaluar función

hepática, detectar una exposición excesiva a los plaguicidas organofosforados y
carbamatos e identificar pacientes con formas atípicas con sensibilidad aumentada
hacia el anestésico succinilcolina. En nuestro medio, la colinesterasa plasmática ha
adquirido gran importancia clínica debido a la amplia aplicación de plaguicidas.

Desde que a principios de este siglo se confirmó la participación de la acetilcolina

en el proceso de la neurotransmisión, numerosos investigadores se dedicaron a
poner a punto técnicas para establecer la concentración del neurotransmisor en los
distintos tejidos neuronales y, naturalmente, se diseñaron también métodos para
medir la actividad de los enzimas responsables de la síntesis (colinacetiltransferasa)
e hidrólisis (acetilcolinesterasa) de este colín-éster. Si se tiene en cuenta que la
diferencia fundamental entre acetil y butirilcolinesterasa es su especificidad de
sustrato, resulta obvio que cualquier método es aplicable a ambos enzimas,
utilizando el sustrato y condiciones apropiadas para cada uno de ellos. En aquellos
tejidos en que ambos enzimas coexistan, siempre será posible inhibir
selectivamente a uno de ellos y determinar la actividad del que interese.

Métodos espectrofotométricos: de entre los que utilizan esta técnica, el más utilizado
es el de Ellman. Empleando como sustrato acetiltiocolina, se produce un
mercaptano tras la hidrólisis enzimática, el cual reacciona con el ácido 5,5'-ditiobis-
nitrobenzoico, desdoblándolo en dos productos, uno de los cuales, el ácido 5-tio-2-
nitrobenzoico, absorbe a 412 nm. Este método se ha aplicado ampliamente en la
determinación de colinesterasa de cualquier tejido y de plasma y es muy adaptable
para análisis de rutina mediante procedimientos automatizados. Otro método
espectrofotométrico muy utilizado para la determinación de colinesterasa de suero
ha sido el registro de la disminución de absorbancia a 240 nm de la benzoilcolina,
utilizada como sustrato (Kalow y Lindsay). Su aplicación está limitada al estudio de
butirilcolinesterasas, pues la benzoilcolina es sustrato específico de este enzima.
Los organofosforados y los carbamatos producen una toxicidad similar y se asocia
con la inhibición de la acetil-colinesterasa, enzima responsable de la interrupción de
la actividad biológica del neurotransmisor acetilcolina. Dentro de las colinesterasas
se incluyen la acetilcolinesterasa (E.C.3.1.1.7) o colinesterasa eritrocítica (AColE) y
la acilcolina acilhidrolasa (E.C.3.1.1.8) o colinesterasa plasmática (ColP). La enzima
plasmática tiene importancia clínica en la detección de pacientes con formas
atípicas de esta enzima, disfunción hepática o intoxicación con plaguicidas. En
contacto con plaguicidas la actividad de ColP disminuye más rápidamente que la
AColE, por lo que la primera es un índice muy sensible para prevenir intoxicación.
La determinación de la actividad de la AcolE es importante en los sistemas de
vigilancia de intoxicaciones crónicas, por permanecer disminuida mayor tiempo y se
considera mejor índice de exposición, ya que se determina la misma enzima que
actúa en el tejido nervioso y es menos afectada que la ColP por otras condiciones.
OBSERVACIONES
 Se utilizaron dos reactivos:
REACTIVO 1 (BUFFER)
REACTIVO 2 (SUSTRATO)
Y una muestra de plasma sanguíneo.

 Hay que comenzar a medir exactamente en el segundo cero. Se hace la mezcla

en un tubo o celdilla de la siguiente manera:
Reactivo 1 Reactivo 2 Muestra
(Buffer) (Sustrato) (Plasma)

3 ml 100 μL 20 μL

Se mezclan primero RVO 1 + RVO 2, y justo antes de meter al espectrofotómetro

se agrega la muestra (mezclar suave), que es cuando comienza a correr el tiempo
y se toma la primera absorbancia.

 Ajustar espectrofotómetro a 0 abs con agua destilada. Llevar a 405 nm para hacer
a medición. Se debe medir a los segundos: 0, 30, 60 y 90.

 Los cálculos se realizan de la siguiente manera: se saca la diferencia entre

lecturas y se divide entre tres. Esto es igual a ≠ABS. ≠ABS se multiplica por el
FACTOR (A 30 °C). F=23460 UI/L.

 Los valores de referencia son: 3714 – 11513 UI/L

DIAGRAMA DE FLUJO

Muestra de plasma Preparar el

sanguíneo tubo/celdilla
(previa indicación)
 Vaciar a la celdilla (indicaciones) y
medir en espectrofotómetro a 405
nm en segundo 0.
Cronometrar el tiempo
para tomar abs a los 3,
60 y 90 seg.

Realizar los cálculos y

comparar con los
VALORES DE REFERENCIA

RESULTADOS
Lecturas Absorbancia Diferencias
(segundos)
1 .670 (1 y 2 )
(0 segundos) 0.261
2 .931 (2 y 3)
(30 segundos) .290
3 1.221 (3 y 4)
(60 segundos) .282
4 1.503 TOTAL:
(90 segundos) .833

≠ABS = DIFERENCIAS / 3
≠ABS = .833/3
≠ABS = 0.277
≠ABS X FACTOR = UI/L de colinesterasa
.277 x 23460 UI/L = 6498.42 UI/L

DENTRO DE LOS VALORES DE REFERENCIA.

NO ESTÁ DISMINUIDO.

BIBLIOGRAFIA
Jiménez, M. & Martínez, V., 2000. Validación de la determinación de colinesterasa plasmática
humana a 340 nm. Revista Biomédica, 11(2), pp. 91-98.

Jiménez, M., Schosinsky & Karl, 2000. Valores de referencia de colinesterasa plasmática y
eritrocítica en población costarricense. Comparación del desempeño clínico de ambas enzimas..
Revista Costarricense de Ciencias Médicas, 21(3-4).

Vidal, C., 1981. Colinesterasas séricas. s.l.:Universidad de Murcia .

Wiener Laboratorios S.A.I.C., 2000. Colinesterasa. Rosario: http://www.wiener-lab.com.ar/.

CONCLUSIONES
1. Conclusión de Stephanie Arizmendi Jaramillo
Esta prueba es de gran utilidad por el tipo de análisis realizado. Al poder medir la
actividad que tiene la enzima (y no simplemente si está presente o no como en otras
pruebas), nos proporciona los datos adecuados para interpretar si el paciente está
intoxicado o no. Sabemos que la enzima está inactiva cuando el valor se ve
disminuido, ya que al estar unida al compuesto organofosforado no puede unirse al
sustrato (NO FUNCIONA) y por ello no presenta actividad incrementada. Estos
resultados, aunados a los signos, síntomas e historia clínica del paciente, pueden
hacer que el diagnostico y tratamientos sean oportuno.

OTRAS CONCLUSIONES
PRACTICA SALICILATOS EN ORINA
Conclusión de Stephanie Arizmendi Jaramillo
Una parte de las sustancias que consumimos, incluidos los salicilatos, son
excretados de forma renal, es decir, por medio de la orina. Muchas veces, se
realizan análisis para corroborar la presencia de los metabolitos excretados en
orina, pero no siempre puede resultar positivo aunque el individuo haya consumido
la droga. Como por ejemplo, en esta práctica, las personas a las que pertenecían
las muestras de orina habían consumido aspirina, sin embargo, las pruebas dieron
negativo. Esto puede suceder porque bien, la droga no ha sido metabolizada o no
se ha excretado todavía.

PRACTICA DROGAS DE ABUSO

Conclusión de Stephanie Arizmendi Jaramillo
Realizar estas pruebas al ser parte de la química legal, son pruebas que requieren
de seriedad por parte del laboratorio que las lleva a cabo y que se hacen
responsables de la cadena de custodia del análisis de la droga, donde se debe
cuidar desde la toma de muestra hasta la entrega de los resultados
correspondientes. Son pruebas simples de realizar, pero sin embargo, con
fundamentos especiales como las reacciones inmunológicas por inhibición
(cromatografía de capa fina en papel de celulosa), ya que al encontrarse el antígeno
(en la orina donde se encuentran los metabolitos de la droga) con el anticuerpo
correspondiente en la fase fija hace que se neutralice y el color desaparece. Al igual
que las otras sustancias (como salicilatos) las pruebas pueden resultar negativas
aunque el individuo haya consumido la droga, cuando no ha sido metabolizada o
excretada. Otras pruebas suelen ser más amplias, pues se hacen además análisis
físicos y químicos para la identificación de sustancias con sospecha a ser drogas
de abuso. Es importante como químico estar consciente de todo eso, para no caer
en el error de creer que es simplemente una prueba más, que aunque requiere de
profesionalismo, muchas veces se cometen errores por querer buscar un camino
fácil.