DEMOSTRACION DE LA DIGESTION DE LAS GRASAS IN VITRO

ACCION EMULSIFICANTE DE LAS SALES BILIARES SOBRE LAS GRASAS. ACCION DE LA LIPASA
PANCREATICA Y EFECTO DE LAS SALES BILIARES.

I. INTRODUCCION:

Los triglicéridos son los principales lípidos de la dieta, aportan 9kcal por gramo. Las lipasas sublingual y
gástrica actúan en el estómago sobre los triglicéridos liberando los ácidos grasos en la posición 3 sn, que
si son de cadena corta o medina son directamente absorbidos en el estómago. Las contracciones gástricas
contribuyen al fraccionamiento mecánico de las partículas grasas.

La principal digestión ocurre en el duodeno y yeyuno por acción de la lipasa pancreática, en la interfase
agua-lípido y su velocidad depende de la superficie de la interfase, la cual es muy incrementada por el
movimiento peristáltico del intestino combinado con la acción emulsificante de las sales biliares. La lipasa
pancreática cataliza la hidrólisis de los triglicéridos en las posiciones 1 y 3 para formar secuencialmente 1-
2 diacilglicerol y 2 acilglicerol, junto con ácidos grasos. La unión de la lipasa a la interfase agua-lípido
requiere de la colipasa, una proteína de 90 residuos que forma un complejo 1:1 con la lipasa, con cambios
conformacionales que forma una superficie hidrofóbica y deja libre el centro activo

Los ácidos biliares son moléculas anfipáticas sintetizados por el hígado, a partir del colesterol y secretados
en la bilis como conjugados de glicina y taurina formando las sales biliares al unirse a al sodio. Son
substancias tensoactivas, disminuyen la tensión superficial y por su carácter anfipáticos permiten la
formación de micelas con las cabezas polares en la superficie y las colas no polares en el interior. De este
modo las partículas de lípidos son fraccionados y al ser hidrofóbicos pasan al interior de las micelas. Esto
trae consigo el aumento de la interfase agua-lípido y favorece la acción de la lipasa pancreática. La
alteración en la digestión o absorción de las grasas produce esteatorrea

La finalidad de la práctica es demostrar la acción emulsificante de las sales biliares sobre las grasas
comparando su efecto con el agua. Asimismo la acción de la lipasa pancreática sobre los triglicéridos y el
efecto de las sales biliares.

II. MATERIALES Y REACTIVOS A UTILIZAR:

- Aceite vegetal de olivo
- Solución de sales biliares
- Agua destilada
- Buffer fosfato 0.1 pH 8,0
- Emulsificación de aceite vegetal
- Solución de fenolftaleína (solución lcohólica)
- Hidróxido de sodio (NaOH) 0.1 N

III. ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES (Procedimiento)

Acción emulsificante de las sales biliares sobre la grasas

 Utilizando tubos de 15x125 mm, armar el siguiente sistema.

 COMPONENTES Tubo 1 Tubo 2
Aceite de olivo(gotas) 3 3
Agua destilada (ml) 5 3
Sañes biliares (ml) - 2

 Agitar enérgicamente los tubos.

 Dejar en reposo y anotar los resultados para interpretarlos.

Acción de la lipasa pancreática sobre los triglicéridos y efecto de las sales biliares sobre la reacción
enzimática

 Utilizando tubos de 20-25 x 150 mm, armar el siguiente sistema

COMPONENTES Tubo I Tubo II Tubo III Tubo IV

Emulsificación de -- 3 3 3
aceite vegetal
Buffer fosfato 0.1M 2 2 2 2
pH 8.0
Solución de sales 2 2 - 2
biliares al 1 %
Solución de extracto 2 - 2 2
pancreático 1 %
Agua destilada 3 2 2 -

 Mezclar los 4 tubos y llevar al baño maría a 37 °C por 30 minutos, agitando de vez en cuando.
 Al finalizar el tiempo de incubación retirar los tubos y agregar a cada uno 3 gotas de fenolftaleína.
Mezclar bien y luego realizar la titulación.

 TITULACION: Utilizando una pipeta graduada de 1 ml dejar caer gota a gota NaOH 0.1 N en el fondo
de cada tubo del sistema, mezclar bien hasta la aparición de un color rosado tenue persistente.
 Anotar la cantidad de NaOH 0.1 N gastados.
 Anotar los resultados para su interpretación

IV. CUESTIONARIO:
1. Explique lo que son las sustancias anfipáticas

2. Diferenciar emulsión de solución.

3. ¿Cuántas clases de lipasas actúan en el tubo digestivo?

4. ¿Cuál es la importancia de las sales biliares?

5. ¿Cuál de los métodos para medir la actividad enzimático se ha empelado en esta práctica. Explique
el papel de la fenolftaleína en la titulación