AISLAMIENTO DE DNA DE ORIGEN VEGETAL Y SU

CARACTERIZACIÓN ESPECTROFOTÓMETRICA E HIDROLISIS DE

RNA Y DNA E IDENTIFICACIÓN DE BASES PÚRICAS Y PIRIMÍDICAS
POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

INTRODUCCION Observar gráfica anexa al reporte de absorbancia vs

longitud de onda.
Los ácidos nucleicos se encuentran en todos los seres
vivos y aún en los virus, desempeñando las funciones Con ayuda del nomograma se obtuvieron las
de almacenamiento y transmisión de la información concentraciones de DNA y proteínas, a 260 y 280 nm
genética. respectivamente:

Los ácidos nucleicos al igual que las proteínas son 𝒎𝒈

𝐶 𝐷𝑁𝐴260 = 𝟎. 𝟎𝟓𝟒 𝑐𝑜𝑛 𝑢𝑛𝑎 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 1.35
biopolímeros de alto peso molecular constituidos por 𝒎𝑳
nucleótidos, los cuales se encuentran unidos entre sí
por enlaces covalentes denominados enlaces 𝒎𝒈
𝐶 𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎 280 = 𝟎. 𝟎𝟓 𝑐𝑜𝑛 𝑢𝑛𝑎 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 0.66
fosfodiéster. Un nucleótido está formado por una base 𝒎𝑳
heterocíclica nitrogenada derivada de la purina o de la
pirimidina, de un azúcar y un grupo fosfato.
Dependiendo del tipo de nucleótido existen 2 clases de
ácidos nucleicos: el ácido desoxirribonucleico (DNA) y el  Identificación de bases púricas y pirimídicas
ácido ribonucleico (RNA). por cromatografía en capa fina

 El DNA está formado por desoxirribonucleotidos Guanina RNA hidrolizado

cuya base nitrogenada puede ser adenina,
DNA hidrolizado
guanina, citosina o timina; el azúcar 2-desoxi-D- Citosina
ribosa y el grupo fosfato.
Uracilo de RNA
 El RNA está formado por ribonucleotidos cuya Adenina
base nitrogenada puede ser adenina, guanina, Timina de DNA
citosina o uracilo; el azúcar D-ribosa y el grupo Uracilo
fosfato.
Timina
Las funciones del DNA consisten en almacenar la
información genética completa, necesaria para
especificar la estructura de todas las proteínas y en
cada una de las clases de RNA del organismo, en
programar, tanto en el tiempo como en el espacio, la
biosíntesis ordenada de los componentes de las células
Cromatografía en capa fina de
y de los tejidos, en determinar la actividad de un
DNA, RNA y bases nitrogenadas.
organismo a lo largo de su ciclo vital y finalmente, en
definir la individualidad de un organismo dado.
Tabla 1
OBJETIVOS
MUESTRA Rf
 Aislar, purificar y caracterizar DNA de espinaca. DNA hidrolizado 0.76
 Separar las bases nitrogenadas del DNA y el RNA hidrolizado 0.68
RNA por cromatografía en capa fina a partir de Guanina 0.40
hidrolizados de los mismos, identificándolas por
Adenina 0.46
la propiedad que tienen de absorber luz
ultravioleta. Citosina 0.32
Timina 0.78
RESULTADOS Uracilo 0.70

 Caracterización espectrofotométrica del DNA

1
DISCUSIONES
Para la obtención de DNA de origen vegetal, se
utilizaron hojas de espinaca, las cuales se colocaron en
un mortero y se procedió a triturar, de esta forma se
está rompiendo la pared celular de estas células
vegetales y a su vez separarlas. Al finalizar se adiciono
5 mL solución de EDTA-Tris-NaCl y se siguió triturando,
en esta solución el EDTA protege al DNA al no permitir
que lo ataquen las nucleasas (enzimas que atacan
ácidos nucleicos) que tienen como cofactor al Mg+2, ya
que el EDTA forma un complejo con el cofactor y por lo
tanto no permite que las nucleasas realicen su función,
el Tris es una sal que da amortiguamiento de pH para
dar estabilidad al DNA.
Posteriormente se 0.3 mL de amilasa, la cual se
encarga de romper el almidón en moléculas más
pequeñas, se mezcló y se incubo durante 10 minutos a
temperatura ambiente, de inmediato se agregaron 10
mL de una solución saturada de NaCl, la cual favorece
la ruptura de la célula, ya que con esta se ejerce una
presión osmótica muy alta y por lo tanto las membranas
se rompen, por lo tanto se libera almidón, lípidos
proteínas, etc. También se adiciona 5 mL de SDS al
10%, el cual rompen las membranas también y se libera
el DNA, una vez adicionas estas soluciones se filtró el
homogeneizado a través de una tela sintética en un
embudo, colocando el filtrado en un tubo Falcon. Más
tarde se adiciono 15 mL de la mezcla cloroformo:
alcohol isoamílico, en donde los lípidos son afines al
cloroformo y se van con él, mientras que el alcohol
isoamílico desnaturaliza a las proteínas, por lo tanto
estas precipitan.
Posteriormente se procedió a centrifugar la mezcla a
4000 rpm durante 10 minutos, una vez finalizado esto,
se recuperó el sobrenadante (ahí se encuentra el DNA)
con una pipeta Pasteur, evitando tocar la interfase
donde se encuentran las proteínas. Se vertió el
sobrenadante a un frasco que contenga 30 mL de
alcohol 96° frío.
 Caracterización espectrofotométrica del DNA
Se recuperó el DNA con una varilla de vidrio y se vertió
en un tubo que contenga 3 mL aproximadamente de
agua, para posteriormente leer en el espectrofotómetro
en un intervalo de longitud de onda de 200 a 300 nm.
Las bases nitrogenadas son cíclicas y aromáticas,
debido a la presencia de dobles ligaduras conjugadas,
por lo tanto pueden absorber en el espectro ultravioleta.
Una vez obtenida la gráfica de absorbancia vs longitud
de onda, se observa a la longitud de onda de 260 nm
una campana en la gráfica, la cual corresponde al DNA,
mientras que a la longitud de onda de 280 nm se
observa otra campana pero más pequeña que la de 260
nm, esta corresponde a las proteínas. Lo anterior
significa que se tiene más DNA que proteínas, lo cual se
puede comprobar cuando obtenemos las
concentraciones de estos con ayuda de nomograma, en
el cual se tienen que la concentración de DNA es de
0.054 mg/mL, mientras que en las proteínas se tiene
una concentración de 0.05 mg/mL.
 Identificación de bases púricas y pirimídicas
por cromatografía en capa fina
Para la cromatografía se utilizó DNA y RNA hidrolizados
de los cuales se colocaron 5 aplicaciones sobre el
cromatograma, y también se colocaron 2 aplicaciones
de las bases nitrogenadas. Se desarrolló la placa de
cromatografía, utilizando como fase móvil una mezcla
de butanol: ácido acético: agua. Una vez desarrollado el
cromatograma se revelo por exposición a la luz
ultravioleta en un cuarto oscuro. Se puede observar en
el cromatograma, dos manchas muy amontonas, las
cuales corresponden al DNA y RNA (de derecha a
izquierda) y estas al estar hidrolizados se tiene una
impureza y por lo tanto no se distingue la separación de
manchas, estas largas manchas tienen a su lado
izquierdo las manchas de guanina, adenina y citosina
(de derecha a izquierda), lo cual significa que tanto DNA
como RNA contienen estas 3 bases nitrogenadas.
Las 3 bases nitrogenadas que contienen el DNA y el RNA.
Por último, lo que sí se puede distinguir en las primeras
manchas de DNA hidrolizado y de RNA hidrolizado, es
una mancha en la parte superior para ambas, al
camparlas con las manchas de timina y uracilo (de
derecha de izquierda), tenemos que la mancha de DNA
se encuentra a la misma distancia que la mancha de
2
timina, y la mancha de RNA se encuentra a la misma
distancia que la mancha de uracilo, con esto podemos
decir que el DNA y RNA tienen las mismas bases
nitrogenadas (adenina, guanina y citosina) a excepción
de una última, que en el DNA corresponde a timina y en
el RNA corresponde a uracilo.

Las bases nitrogenadas timina y uracilo, que se

encuentran en DNA y RNA respectivamente.

CONCLUSIONES

 El DNA se encuentra en una mayor

concentración en las células vegetal que las
proteínas.
 Las bases nitrogenadas al ser aromáticas y
tener dobles enlaces conjugadas pueden
absorber la luz ultravioleta.
 El DNA y el RNA contienen adenina, guanina y
citosina, lo único que lo diferencia es la timina
presente en DNA y el uracilo presente en RNA.

BIBLIOGRAFÍA

1. E. Conn Eric, “Bioquímica fundamental”,

Universidad de California, Editorial Limusa,
2001, México D.F.
2. Voet Donald, “Fundamentos de Bioquímica”,
Editorial Médica Panamericana, 2ª Edición,
2007, Madrid, España.