CONVERSIÓN BIOLÓGICA DE DIÓXIDO DE CARBONO Y EL HIDRÓGENO EN EL LÍQUIDO

COMBUSTIBLES Y PRODUCTOS QUÍMICOS INDUSTRIALES

Iniciativas recientes en los EE.UU. y en otros lugares tiene el objetivo de aprovechar el

mecanismo molecular de organismos no fotosintéticos que pueden utilizar CO2 directamente
para la producción de energía densa combustibles líquidos, que ahora se conoce como ''
electrocombustibles “Electrofuel” microorganismos productores están siendo desarrollado
que requieren la experiencia complementaria de biólogos, ingenieros, metabólicas y
microbiólogos para equipar especies o autótrofos de CO2 de fijación nativos con vías para la
producción de combustible dirigida o autotrofia confieren en organismos huésped
heterotróficas, o ambos. El rango de posibles fuentes actualmente se están explorando para el
bajo potencial, electrones de alta energía para alimentar un proceso electrofuel incluye gas
hidrógeno, formiato, monóxido de carbono y electricidad. Esta revisión se centrará en las
estrategias electrofuel que el gas uso de hidrógeno como fuente de energía para la reducción
de CO2 fijación. Los microorganismos que son capaces de utilizar otras fuentes de electrones
entre ellas la electricidad directamente se discuten en una revisión de acompañamiento de
preciosos [4]. Un esquema general para la producción de electrofuel de hidrógeno y CO2 se
muestra en la Figura 2.

la fijación de CO2

La reducción de CO2, la forma más oxidada de carbono, en compuestos orgánicos

tecnológicamente útiles sigue siendo una tarea de enormes proporciones para la catálisis
química no biológica. Ahí están, en la actualidad, seis de origen natural vías biológicas para la
fijación de carbono, y éstos se han examinado de forma exhaustiva en los últimos años [5 ??,
6,7,8].

Cada camino tiene características únicas derivadas de la ecológica y molecular

contexto en el que se desarrolló. Aunque hay muchos ejemplos de CO2 carboxilasas fijadores
que se utilizan para efectos metabólicos distintos de asimilación de carbono, tales como la
conservación de la energía, anaplerosis, y redox-balanceo [1 ??, 2,3?, ?? 9, 10], esta revisión se
centrará en los autótrofos proceso de fijación de CO2 que son relevantes para electrofuel
producción, además de los microorganismos huésped primarias que están siendo considerados
actualmente que utilizan hidrógeno (Tabla 1).

La vía de fijación de CO2 más ubicuo es el calvinista Benson-Bassham ciclo (CBB) encuentra en
las plantas, algas, cianobacterias, bacterias púrpuras, y también en algunas proteobacterias,
tales como Ralstonia eutropha. R. eutropha es un metabólicamente diversa bacteria,
facultativamente autotrófico que puede crecer en azúcares, ácidos grasos, aminoácidos,
triacilglicéridos así como en H2 / CO2 [5 ??, 6,7,8,11?]. Trabajo previo en R. eutropha se ha
centrado en su capacidad de almacenar el exceso de carbono como polihidroxialcanoatos
[12,13] (PHAs) y ahora esfuerzos buscan para desviar el flujo de carbono de distancia de
almacenamiento PHA y en otras dianas moleculares. Por ejemplo, R. eutropha es un anfitrión
propuesto para la producción de isobutanol a través de la 2- vía cetoisovalerato de
aminoácidos de cadena ramificada síntesis [11?] a partir de H2 y CO2. Esta estrategia tiene
isobutanol y otros alcoholes superiores de azúcares [14,15], así como en Clostridium
cellulolyticum para producir isobutanol a partir de celulosa [16]. R. eutropha también se puede
utilizar electroquímicamente formiato generados como el donante de electrones para la
producción de isobutanol y 3-metil-1-butanol [1 ??, 2,3? 17 ??]. Además, se está utilizando R.
eutropha, de junto con la generación electroquímica in situ de de hidrógeno a través de
catalizadores polypryridyl-oxo de molibdeno atado a la superficie celular, para la producción
de una variedad moléculas que incluyen n-butanol (a través de la biosíntesis de PHA),
farneseno (a través de la biosíntesis de isoprenoides) y de cadena larga alcanos (a través de la
biosíntesis de ácidos grasos) [1 ??, 2,3?, 4,18?]. microorganismos anaerobios que se sabe que
fijar el CO2 suelen utilizar el ciclo de TCA reductora (RTCA) o la madera-Ljungdahl (W-L) y la
vía. El más energéticamente eficiente vía para la fijación de CO2 es la

W-L vía, que se encuentra exclusivamente en anaeróbico, acetogénicos bacterias y arqueas

metanogénicas [5 ??, 6,7,8,14,15]. acetogénicos bacterias son bien conocidos por su capacidad
para crecer en H2 / CO2 o gas de síntesis (CO / H2) y producir acetato, pero también varias
especies naturalmente generar etanol, butirato, butanol y 2,3 butanodiol como productos
finales [1 ??, 2,3?, ?? 9, 10,16,19,20].

Estos organismos son obvias para los anfitriones electrofuel el desarrollo, la producción y ya
butanol ha sido diseñado en Clostridium ljungdahlii [5 ??, 6,7,8,11?, ?? 17, 21?]. Acetógenos,
como Sporomusa ovata, también están siendo exploradas por su capacidad para crecer
directamente sobre cátodos de grafito y aceptar electrones para síntesis microbiana
[12,13,22].

Las vías más recientemente descubiertos para biológica la fijación de CO2 implica la
producción de 3-hidroxipropionato (3HP), dicarboxilatos (DC) y / o 4-hidroxibutirato

(4HB). Una versión se encuentra en los miembros de la termoacidofílicos fin de arqueas

Sulfolobales, que incluye especies de los géneros Sulfolobus y Metallosphaera [5 ??, 6,7,8,11?,
23]. Una vuelta de los conversos de ciclo dos moléculas de CO2 a acetil-CoA utilizando NADPH
como la donador de electrones con 3HP y 4HB como intermedios,

A pesar de los estudios que utilizan sustratos marcados con isótopos mostraron que la mayor
parte del flujo de carbono entra metabolismo central a través de la succinil-CoA en lugar de
acetil-CoA [9 ??, 10,14,15,24]. Los detalles enzimáticas de esta vía recientemente se ha
completado con la bioquímica caracterización de una epimerasa y una mutasa [11?, 16,25], y
la identificación del gen que codifica una CoA-ligasa [26]. La vía de 3HP / 4HB está siendo
diseñado en un huésped hipertermofílico, Pyrococcus Furiosus, para la producción de n-
butanol a partir de H2 / CO2 [3?, 12,13], donde la diferencia 308C casi óptima entre la
temperatura de crecimiento de P. Furiosus (Topt = 988C) y M. sedula (Topt = 738C) está siendo
explotada por un temperatura dependent estrategia de producción. Alrededor 708c, donde el

enzimas de M. sedula son más activos, P. Furiosus metabolismo es prácticamente inactivo,

minimizando de ese modo las necesidades de energía de mantenimiento para el anfitrión.
Recientemente, se ha utilizado esta estrategia depende de la temperatura para producir 3HP
en P. furiosus utilizando los primeros tres enzimas de la vía de 3HP / 4HB [27 ??].

DESCRIPCION DE LA FIGURA:

Electrofuel la producción de H2 y CO2. (A) Comparación de la eficiencia global-fotón-

combustible de los biocombustibles frente a electrocombustibles. Los porcentajes representan
la eficiencia acumulativa de conversión de energía solar en diferentes etapas. Aunque la
eficiencia de conversión de un proceso electrofuel es actualmente desconocido, la mejora de
la eficiencia del hidrógeno solar en comparación con azúcares fotosintéticos indica que un
proceso electrofuel solar requeriría menos la superficie terrestre que los biocombustibles
actuales. (B) las entradas de hidrógeno para electrocombustibles son altamente flexibles y
estrategias de generación pueden incluir la electrólisis del agua por renovables la energía
eólica, la electrólisis del agua por la electricidad convencional (por ejemplo carbón), o por
reformación de vapor de metano, que se muestra con una eficiencia de conversión de cada
proceso. Abreviaturas: PS - fotosíntesis, EH - hidrólisis enzimática, PV - fotovoltaica, WEHP -
Agua electrólisis Producción de Hidrógeno,
SMR - reformación de vapor de metano, TBD - A ser determinado. aZhu et al. [76], bAssuming
almidón del grano representa el 40% de la biomasa total de maíz, cConrado et al. [1 ??],
dParida et al. [77], eAssuming 65% de eficiencia de la electrólisis en general, fHolladay et al.
[78].

DESCRIPCION DE LA FIGURA:
Dibujo esquemático de los módulos primarios bioquímicos implicados en la formación de
electrofuel. Intracelular reducción de la potencia se genera a partir de gas de hidrógeno a
través de las enzimas hidrogenasa. ciclo de la fijación de carbono incorpora el carbono
inorgánico en el metabolismo central a través de intermediarios clave. la síntesis microbiana
de la molécula de combustible objetivo pasa a través endógeno y / o las vías metabólicas de
ingeniería.

Una importante característica intrínseca a los diversos CO2- la fijación de las vías es la
tolerancia de las enzimas y redox moléculas portadoras de oxígeno. El ciclo de CBB, el 3HP
bicicleta, y el ciclo de 3HP / 4HB (con la excepción de unasola enzima, deshidratasa 4
hidroxibutiril-CoA) son todas las vías tolerantes de oxígeno que operan en aeróbico
organismos. El ciclo de RTCA, la vía W-L, y el ciclo de DC / 4HB se encuentran todos en los
organismos anaerobios; todos éstos utilizan ferredoxina reducida como sensible al oxígeno
portador de electrones y contienen enzimas sensibles al oxígeno, por ejemplo, CO
deshidrogenasa / acetil-CoA sintasa y sintasa piruvato [6]. Algunas especies de aeróbica H2-
oxidante bacterias, tales como Hydrogenobacter thermophilus, utilizan el ciclo RTCA; sin
embargo, tienen bioquímica especial adaptaciones para proteger contra procesos aeróbicos
[28]. En la práctica, el requisito de O2 para apoyar crecimiento microbiano presenta desafíos
de seguridad explosión electrofuel a la producción a gran escala utilizando gas hidrógeno como
sustrato. Hay algunos diseños de reactores que intentan minimizar el riesgo con
electrocombustibles hosts aerobios (como Ralstonia), manteniendo separados los gases de
oxígeno e hidrógeno [11?]. Utilizando hosts anaerobias, tales como Clostridium spp. y P.
Furiosus, evita el problema por completo. Sin embargo, un estudio reciente de la
desintoxicación de oxígeno en P. Furiosus mostró que el organismo es notablemente aero-
tolerante (Hasta 8% O2 vol / vol). Esta propiedad sería ventajoso en el procesamiento
biológico, especialmente bajo condiciones donde mantener estricta anoxia es costoso [11?,
29].

Análisis computacional de la fijación de CO2

El creciente interés en la fijación del carbono biológico para producción microbiana de los
combustibles y productos químicos básicos ha dado lugar a un extenso análisis de la
termodinámica y características cinéticas de las seis vías conocidas. Boyle y Morgan realizó el
análisis de flujo para determinar la el flujo de carbono y la demanda de energía para la síntesis
de biomasa de CO2, utilizando la máxima producción de biomasa como la función objetivo
[30?]. Ellos encontraron que la energética coste de metabolitos básicos comunes variaron en
los diferentes Vías para la fijación de CO2, lo que indica que ciertas vías pueden ser más
eficientes en la producción de un determinado producto de una precursor sola. En promedio,
encontraron que el W-L vía y el ciclo RTCA fueron la mayor cantidad de energía rutas
eficientes, seguido por el ciclo de DC / 4HB, la ciclo de 3HP / 4HB, el 3HP-bicicleta, y por último
la CBB camino. La misma tendencia se ha observado en otro flujo analiza el equilibrio [31].

Otro análisis termodinámico de las reacciones de fijación de carbono examinado el requisito

de ATP y la reducción potencial de transportadores de electrones, así como otros factores,
incluida la forma y concentración de carbono inorgánico, y los efectos asociados de pH celular
e iónica fuerza [32 ??]. Varias explicaciones posibles se pusieron remitir para dar cuenta de las
diferencias en la ATP requerido por las diversas vías que son, en la mayoría de los casos, mayor
que la requerida para hacer que la reacción neta termodinámicamente factible. Una
explicación común para esto se basa en los diferentes transportadores de electrones
utilizados. Por ejemplo, ferredoxina (Eo '<? 400 mV) tiene un menor potencial de reducción de
NAD (P) H (Eo '=? 320 mV), pero el aporte extra de energía oxidante dos moléculas ferredoxina
en comparación con una molécula de NADPH en condiciones estándar (? 20 kJ mol? 1) no es
igual la energía liberada por la hidrólisis de ATP (más de 50 kJ mol? 1) [33]. Además, este
efecto no es suficiente para tener en cuenta la grandes diferencias en el costo de ATP para la
formación de piruvato entre, por ejemplo, el ciclo de RTCA (2 ATP) y la bicicleta 3HP (7 ATP) [5
??].

Una mirada más cercana a la termodinámica de la persona

Las reacciones en las vías de fijación de carbono ayudó a una mayor dilucidar las limitaciones
termodinámicas locales que conforman la energética global y reveló un patrón característico
en el perfil de las reacciones de las enzimas de fijación de carbono [34 ??]. La inspección de los
potenciales de reducción de halfreactions en las vías de fijación de carbono revela
generalizada agrupaciones de reacciones basadas en el tipo de reacción. Es específicamente la
reducción de carboxilación y carboxilo reacciones que son los más energéticamente
desfavorable en la vía y por lo tanto requieren la mayor parte del empuje energético para
superar. Esto se logra ya sea directamente por el acoplamiento de la reacción a la liberación de
energía a partir de ATP hidrólisis, o indirectamente mediante el acoplamiento de la hidrólisis
de otro enlace de alta energía (por ejemplo tioéster) a la energía reacción desfavorable. Casi la
totalidad de las inversiones de ATP en cada vía de fijación de carbono están acoplados directa
o indirectamente a la carboxilación y las reacciones de reducción de carboxilo.

Algunos caminos apuntan a reducir los requisitos de ATP de fijación de carbono mediante el
acoplamiento desfavorable reacciones a exergónica reacciones distintas de la hidrólisis de ATP.

En el caso de la vía de W-L en acetógenos, este estrategia se usa para reducir la inversión ATP a
un solo molécula de ATP durante la formación de piruvato [5 ??]. rutas sintéticas no están
limitados por el enzimática el perfil de las vías naturales. Más bien, la perspectiva de la
combinación de enzimas en formas novedosas parece prometedor para mejorar la eficiencia
de la vía o reducir el coste energético. El uso de un modelado basado en restricciones enfoque
y el dibujo de todo el conjunto de aproximadamente 5000 conocidas enzimas metabólicas,
Bar-Incluso et al. predicho en vías silico con tasas más rápidas que cinéticos los de origen
natural [35]. Ellos describen una familia de rutas sintéticas que utilizan PEP carboxilasa y la
núcleo del ciclo C4 en plantas, lo que ellos llaman el "C4- ciclos glyoxylate '. Todas estas vías
producen glioxilato, el cual se asimila con el metabolismo central a través de la vía glicerato
bacteriana similar, y se prevé que tienen tasas globales de CO2 a la formación de productos
que son 2-3 veces más rápido que los del proceso de CBB. Sin embargo, Estas tasas son
inferiores a los reportados para el RTCA, DC / 4HB, y 3HP / 4HB ciclos.

Además de las enzimas que catalizan carboxilaciones y las reacciones de reducción carboxilo,
la conversión de CO2 e hidrógeno para electrocombustibles también depende de
las dos enzimas que activan estos dos gases, a saber,

anhidrasa carbónica y hidrogenasa, respectivamente. En el

siguiendo las propiedades de estas dos enzimas relevantes para

Se considerará la producción electrofuel.

la utilización de hidrógeno

El hidrógeno se utiliza como fuente de energía por los microorganismos

a partir de los tres ámbitos de la vida [36] y se activa por

hidrogenasa, que cataliza la interconversión reversible

de hidrógeno molecular y los protones en presencia de

un portador de electrones adecuado. Basado en estructural y bioquímica

análisis, Hydrogenases se pueden clasificar por

los átomos de metal en sus sitios activos: [NiFe] -hydrogenases,

[] FeFe -hydrogenases, y [Fe] -hydrogenases

[37,38]. Desde anfitriones electrofuel que contienen la fijación de CO2

vías deben coordinar adquisición de reductor con

el flujo de carbono, los tipos de hidrogenasa presentes en el huésped

portadores de microorganismos y el electrón que se utilizan son

de suma importancia.

Extenso trabajo sobre [NiFe] -hydrogenases de Desulfovibrio

gigas [39-43] y los [] FeFe -hydrogenases de

Clostridium pasteurianum [44] y Desulfovibrio desulfuricans

[45] ha demostrado que ambos tipos de enzimas albergan profundamente

enterrado sitios activos en la que el sitio de la reactividad H2 es una

solo átomo de hierro coordinado por ligandos diatómicas (monóxido de carbono y cianuro). En
los -enzimas [NiFe], el hierro

también está coordinado a un átomo de níquel, mientras que en el [FeFe] -

Hydrogenases está obligado por un segundo átomo de hierro y vinculado

a un 4Fe-cluster. Ambos tipos de enzimas contienen también

varios clústeres [4Fe-4S], así como gas hidrófoba

canales, que conectan los sitios catalíticos a la molecular

superficie [46]. Estas dos enzimas difieren con respecto a

su distribución en la naturaleza, la sensibilidad a la desactivación de oxígeno,

y en el montaje y la maduración de su

sitios catalíticos [47]. Por ejemplo, [NiFe] -hydrogenases

están muy extendidas entre las bacterias y arqueas, la [FeFe] -

las enzimas se encuentran en las bacterias anaerobias y anaerobias

eucariotas, pero no en las arqueas, y la [Fe] -hydrogenases

sólo se encuentran en cierta arqueas metanogénicas.

El anfitrión de producción electrofuel R. puertos eutropha H16

[tres] NiFe -hydrogenases, todos los cuales han sido

caracterizado bioquímicamente [48]. Dos de ellos se utilizan

para oxidar hidrógeno, y proporcionar con ello la reducción de

equivalentes para el organismo, tanto para la conservación de energía

y la biosíntesis, mientras que el tercer tipo H2 detecta en el

medio ambiente y sirve un papel regulador. el citoplasmática

NAD (P) -la reducción de hidrogenasa (SH) se compone de

un módulo heterodimérica H2-activación (HoxHY) y una

módulo heterodimérica NADH deshidrogenasa (HoxFU)

[49]. HoxH alberga el sitio [NiFe], mientras que HoxY contiene

un clúster de hierro-azufre. HoxF y HoxU contienen múltiples

racimo de hierro-azufre y una flavina y estos electrones de canal

a NAD +. SH también contiene un quinto subunidad (HoxI)

que se cree que se requiere para la reducción de NAD +. los

NADH y NADPH generado por SH se utilizan principalmente

para procesos de biosíntesis, incluyendo CO2 autotrófico

fijación. El otro hidrogenasa en R. eutropha utiliza para

la activación de H2 es una membrana heterodimérica cota

[NiFe] -hydrogenase (MBH), que se enfrenta el periplasma

y está anclado a la membrana [50]. Se oxida H2 y

alimenta electrones a la piscina de la quinona respiratoria aeróbica

cadena. MBH se compone de dos subunidades: HoxG es

mientras que la subunidad catalítica HoxK alberga tres de hierro

racimos de azufre. Un HoxZ di-hemo-tipo b es el citocromo

También parte de la cadena respiratoria y que se vincula a la MBH

piscina quinona [48,50]. Por lo tanto, R. eutropha puede eficientemente

utilizar H2 para la fijación de carbono tanto en términos de la biosíntesis

a través de SH y en términos de la síntesis de ATP mediante la respiración aeróbica

a través de MBH.

P. Furiosus está siendo diseñado para fijar el CO2 a través de la 3HP /

ciclo 4HB y contiene tres [NiFe] -hydrogenases, todo

de los cuales se han caracterizado bioquímicamente [51].

Dos de ellos se encuentran en el citoplasma (SHI, Shii)

y uno es unida a la membrana (MBH). MBH es una respiratorio

complejo codificado por 14 genes que oxida el

ferredoxina reducida generada a partir de la fermentación de azúcar

y evoluciona H2 y genera un gradiente iónico que se usa

para la síntesis de ATP. SHI y Shii se cree que reciclar

el H2 producido por MBH para fines biosintéticos.

Cada uno consta de cuatro subunidades que contienen la [NiFe]

sitio catalítico, varios clústeres de hierro-azufre, y flavina

dinucleótido de adenina. SHI sólo utiliza NADP + como un electrón

aceptor, mientras Shii también utiliza NAD + [52]. Por lo tanto,

a pesar de P. furiosus es, naturalmente, un heterótrofo, lo hace

tener la capacidad de utilizar H2 y generar tanto

NADPH (a través de SHI y Shii) y NADH (a través de shii) que

podría ser utilizado para fijar el CO2 por una vía sintética. En el

caso del ciclo 3HP / 4HB, NADPH es la fuente de

reductor y, por lo tanto, SHI sería la enzima clave para

electrofuel generación. En este sentido, el recientemente

informaron capacidad de sobre-SHI productos en un orden de

magnitud en una cepa de P. Furiosus ingeniería [53] podría

llegar a ser muy útil para la producción de biocombustibles.

En otros organismos que se consideran para la producción electrofuel,

la situación no es tan sencilla. por

ejemplo, hay cinco hidrogenasas codificados en el

genoma de Clostridium ljungdahlii [21?], pero ninguno ha

ha caracterizado bioquímicamente. Se trata de un [NiFe] -

enzima que se prevé que sea unida a la membrana, mientras

los otros cuatro son del tipo [FeFe], y todos se predice

que se citoplásmica. Dos de los Hydrogenases [FeFe]

parece estar asociada con otras proteínas que podrían

permitir a NAD + reducción [21?]. La membrana-bound

[NiFe] hidrogenasa es similar a la H2-oxidante

MBH de R. eutropha se discutió anteriormente, pero la naturaleza de

su portador de electrones fisiológica no se conoce. Por consiguiente,

no se entiende cómo podía C. ljungdahlii

activar H2 y proporcionar poder reductor para la fijación de CO2,

que obviamente se requiere antes de que el proceso podría ser

optimizado a través de ingeniería metabólica.

la captura de dióxido de carbono

Cualquier combustible o productos químicos orgánicos producidos a partir de CO2 que

se basa en la fijación de carbono biológico depende de la concentración

de CO2 en el medio ambiente. Como tales, los mecanismos

para concentrar el CO2 han evolucionado para compensar

el desequilibrio entre la gran demanda del inorgánica

de carbono y baja concentración de CO2 ambiente. Está bien

sabe que algunos quimioautótrofos, varios photoautotrophic

microorganismos, algas verdes y las plantas tienen

distintos mecanismos desarrollados para aumentar la concentración

de CO2 en las proximidades de ribulosa-1,5-bisfosfato

carboxilasa / oxigenasa (Rubisco), el CO2-fijación

enzima de la vía CBB [54,55]. Esto es necesario

Rubisco porque tiene una baja afinidad por el CO2 y no lo hace

discriminar bien entre el CO2 y el sustrato competidor,

O2. La actividad oxigenasa O2 dependiente de

Rubisco es responsable de la fotorrespiración, un despilfarro

reacción secundaria que conduce a una pérdida neta de carbono [56].

La anhidrasa carbónica (CA), un componente esencial de CO2

mecanismos de concentración, cataliza la conversión reversible

de CO2 y agua al bicarbonato (HCO3-

?, El pKa

de ácido carbónico es 6.4) [57,58]. AC son tanto estructural

y funcionalmente muy diversa, con cinco clases (A, B, G, D,

y z) distribuye ampliamente entre plantas, animales, hongos, arqueas y bacterias, aunque la

mayor parte de la clase B son

prevalente en los organismos fijadores de CO2 [59,60?, 61]. El catalítica

la actividad de CA se basa en un cofactor de metal, la mayoría

comúnmente de zinc, que es coordinado por tres histidina

residuos (a, g, d) o dos cisteínas y una histidina (b y z).

El a, b, y g-clases todos comparten un hidróxido de zinc de dos pasos

mecanismo, siendo enzimas extremadamente rápidas (kcat / Km hasta

108 M? S 1? 1).

Mecanismos de concentración de carbono sólo han sido

descrito para los organismos que utilizan el ciclo de CBB, sin embargo

explotación de origen natural vías de CO2 de fijación

para la producción microbiana electrocombustibles puede requerir ingeniería

de CA o la atención a los detalles moleculares de cómo

CO2 es alimentado a la maquinaria de carbono de fijación con el fin de

optimizar la producción electrofuel. El CO2-fijación

enzimas de 3HP, 3HP / 4HB y DC / ciclos 4HB todo uso

bicarbonato en lugar de CO2 como sustrato [32 ??], por lo tanto, una

CA funcional es probablemente un requisito clave para una eficiente

Proceso de producción del electrofuel. Por ejemplo, el acetogénica

C. acetobutylicum contiene B y G-tipos, mientras

la archaea heterótrofos P. Furiosus, que no lo hace

naturalmente utilizar CO2 como fuente de carbono, pero es el anfitrión para

una vía 3HP / 4HB ingeniería, parece contener

solamente un tipo G CA [58]. El grado en que el Ca (s)

del huésped podría limitar la utilización de CO2 por un heteróloga

vía es clara en la actualidad. Además, como todavía no caracterizado

mecanismos de CO2 de concentración pueden estar presentes

en organismos huésped potenciales. En cualquier caso, los medios

para concentrar y / o hidratación de CO2 es, obviamente, una

área que merece atención para el desarrollo electrofuel.

el desarrollo de acogida

El desarrollo de los ejércitos electrofuel requiere la disponibilidad

de herramientas genéticas, así como un buen conocimiento de

la regulación génica y el metabolismo en el host de destino. Corriente

electrofuel proyectos se están aprovechando de una establecida

conjunto de conocimientos para la manipulación genética en

organismos bien estudiados, como R. eutropha y Clostridium

spp., mientras que otros están trabajando con el recién desarrollado

sistemas genéticos (Tabla 2). Hay dos vías básicas

electrofuel para el desarrollo de acogida: diseñar un producto natural

autótrofo-H2 que utiliza para producir la deseada electrofuel,

o diseñar un heterótrofo adecuada para utilizar CO2 / H2 para

electrofuel producción. En este último caso, la elección de una

huésped adecuado no sólo depende de la disponibilidad de una

sistema genético sino también herramientas para el análisis a nivel de sistemas

y la aptitud del organismo para la producción de bioprocesos.

En el caso de autótrofos potencialmente adecuados, puede ser

que estas herramientas no están disponibles o están todavía en los primeros

etapas de desarrollo. De hecho, a pesar de la

maquinaria de fijación de CO2 endógena podría ser optimizado,

desviar el flujo de carbono a una electrofuel en lugar de

metabolismo celular nativo puede llegar a ser problemática.

Lo contrario es cierto para el enfoque heterótrofo, donde

la prevención de carbono CO2 derivadas de la entrada en el anfitrión de

metabolismo nativa puede ser clave para el establecimiento de un eficiente

proceso. Todavía es demasiado pronto para determinar si el 'autótrofos'

o la estrategia 'heterotrófica' es más adecuado para

la generación de electrocombustibles.

R. eutropha sirve como un ejemplo de la 'autótrofa'

enfoque. Existe una variedad de herramientas y técnicas para

la ingeniería genética de esta autótrofa H2-utilización

organismo y hay tanto de expresión basado en plásmido

sistemas [62] y modificaciones cromosómicas vía homóloga

recombinación [63-66], así como a nivel de sistemas

Las herramientas de análisis incluyendo microarrays [67]. Mientras algunos

especies de Clostridium también son autótrofos naturales H2-utilización,

herramientas genéticas para estos organismos se siguen

desarrollado. Hasta el momento se incluyen basada en un plásmido y inducible

la expresión de genes, ARN antisentido knock-down, y

Los sistemas indicadores [68,69], pero las técnicas para cromosómica

modificaciones han surgido recientemente [70 ??]. Estas

los esfuerzos deberían permitir a los ejércitos clostridiales sean flexibles electrofuel

organismos productores de la plataforma en un futuro próximo

[70 ??, 71]. También hay un informe reciente de la alteración del gen

por complementación entre especies en el H2-oxidante,

autótrofo facultativa, Metallosphaera sedula [72], aunque

el potencial para la ingeniería metabólica en este organismo

requerirá el desarrollo continuo de su sistema genético.

La segunda vía para el desarrollo utilizando electrofuel

heterótrofos se demostró recientemente por primera vez en P. furiosus [27 ??]. La expresión
heteróloga de la primera

cinco genes de la vía 3HP / 4HB permitió P. Furiosus

para utilizar H2 y CO2 incorporar en 3HP, una fundamental

intermedio en la vía de la fijación de carbono y una valiosa

componente químico industrial. Esto se logró

mediante el uso de una cepa altamente competente que permite

cromosómico modificación [73], la secuencia del genoma de

que se informó recientemente [74]. La nueva genética

sistema también se ha utilizado con éxito para la sobreexpresión

de hidrogenasa citoplasmática I (SHI) [53],

con lo que potencialmente permite la oxidación de H2 y fácil

producción de NADPH. Sobre la base de estos prometedores preliminar

resultados, se están realizando esfuerzos para la construcción de

el host de producción que utiliza el electrocombustibles completa

M. Sedula vía 3HP / 4HB para la activación biológica de

dióxido de carbono en una variedad de moléculas químicas y de combustibles

[3?].

Conclusión

Electrocombustibles son un paradigma prometedor que podría mejorar

en la relativamente pobre eficiencia de fotosintéticamente

producido biocombustibles y abrir un programa para escalable,

la producción de combustible líquido renovable basada en la energía flexibles

insumos. Un puñado de organismos electrofuel están en desarrollo

o si ha estado informado, pero las oportunidades

existen para ampliar el concepto. El potencial de aprovechamiento

la fijación biológica de carbono para la producción de industrial clave

biomoléculas representa una gran promesa para el desplazamiento

materiales de alimentación a base de petróleo [75].

Expresiones de gratitud

Este trabajo se describe aquí fue financiada en parte por el Departamento de EE.UU.

Investigación de la Energía a través del Programa electrocombustibles ARPA-E (DEAR0000081

a RMK y MWA) y la División de Ciencias Químicas,

Geociencias y Biociencias, Oficina de Ciencias Básicas de la Energía (DE-FG05-

95ER20175 a MWA).