El diagnóstico se basa en la sospecha de infección, en el conocimiento de los factores
de riesgo, en la presentación clínica y en la confirmación por pruebas de laboratorio. La demostración de anticuerpos anti-VIH puede realizarse por varios métodos, como el ensayo inmunoenzimático (ELISA) e inmunoelectrotransferencia (Western- Blot). Cuando son realizados por un laboratorio experimentado, cada uno de ellos es muy seguro para detectar anticuerpos antiVIH. El ELISA es el método más ampliamente utilizado por su bajo costo relativo, simplicidad y porque permite la detección en múltiples muestras. La sensibilidad y la especificidad del método son de 95%> a 99%. Tiene como limitaciones principales el hecho que puede ser negativo en individuos que se hallan en las primeras ocho a 12 semanas de la infección o en individuos con deficiente respuesta de anticuerpos (pacientes con enfermedad avanzada o con hipogammaglobulinemia como complicación), y el índice de falsos positivos de la prueba, que puede ser de 1% aproximadamente (dependiendo de la prevalencia local de la infección por VIH); esto último parece relacionarse con una reacción no específica de anticuerpos del suero con restos celulares de cultivos de linfocitos donde se propagó el virus utilizado en la preparación del antígeno. De ahí que si la prueba de ELISA resulta positiva, se recomiende realizar una segunda prueba más específica (prueba confirmatoria), como la inmunoelectrotransfereneia. En la inmunoelectrotransferencia o Western Blot, el suero reacciona con los antígenos virales separados electroforéticamente y en caso positivo se forman bandas características resultantes de la reacción entre el anticuerpo y las proteínas virales específicas. Esta prueba tiene una especificidad de 100%. La prueba de PCR-DNA es usada para identificar la secuencia viral del VIH en el DNA proviral en células m ononucleares de sangre periférica del paciente. La sensibilidad de una sola prueba tomada antes de las primeras 24 horas de vida es menor de 40%>, pero aumenta a más del 90%) entre la segunda y cuarta semana de vida. Hacia los 28 días de vida la PCR DNA VIH tiene una sensibilidad del 96% y especificidad del 99% en identificar DNA proviral del VIH en células mononucleares de sangre periférica. La prueba de PCR-RNA detecta RNA extracelular en el plasma y es tan sensible como PCR-DNA para diagnóstico temprano en niños expuestos al VIH. Diversos estudios han demostrado rangos de sensibilidad que varían de 25-40%) en la primera semana hasta 90-100%> entre el 2 y 3 mes de edad. La especificidad es comparable entre ambos tipos de prueba. No obstante la detección de bajos niveles de RNA VIH. Se considerará como persona infectada por el VIH o seropositiva aquella que presente: a) dos resultados positivos de pruebas de tamizaje de anticuerpos (ELISA, aglutinación o pruebas rápidas), y prueba confirmatoria Western Blot positiva, b) dos resultados positivos de pruebas de tamizaje de anticuerpos con cuadro clínico sugerente de infección. No se necesita realizar W. Blot. c) alguna prueba suplementaria positiva (cultivo, Ag p24, PCR).