“Año del Diálogo y Reconciliación Nacional”

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Perú, Decana de América)

Facultad
Ciencias Biológicas

Escuela Profesional
Ciencias Biológicas

Asignatura
Microbiología Acuática y de Recursos Hidrobiológicos
TEMA:
PROFESOR: CORREO: …..@gmail.com
ALUMNOS: CÓDIGO:

CICLO: AULA: TURNO: Jueves 6 – 8 pm

CIUDAD UNIVERSITARIA, 2018

INTRODUCCIÓN:

En el presente informe se quiere investigar y dar a conocer el nivel de

contaminación de uno de los cuerpos de agua más conocidos en todo el
departamento de Lima, el río Chillón. el cual es afectado directamente
por la actividad humana.
Este factor de contaminación, como foco infeccioso, puede afectarnos,
si de su uso hablamos, es por eso que se analizaran el nivel de
coliformes fecales para tener una referencia del apropiado uso que
pueda darse y paso siguiente evaluar la calidad del agua con la que
estamos trabajando. Si bien este es un factor de riesgo directo para los
ciudadanos aledaños a la zona de fluido del río, somos nosotros con el
mismo arrojo de basura que causamos este nivel de contaminación, que
esta práctica sirva para el aprendizaje y concientización sobre el gran y
desastroso impacto de la actividad humana sobre los ambientes
naturales. Esperemos que les guste.
ESTUDIO DE MICROORGANISMOS EN
EL AGUA DEL RÍO CHILLÓN

MARCO TEÓRICO

Colimetria. ​El grupo de coliformes se compone de varios géneros de

bacterias pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae. La definición
de este grupo se ha basado en los métodos utilizados para detectar la
fermentación de la lactosa. Los coliformes son Gram anaeróbica
negativa, aeróbica o facultativo, no formador de esporas y fermentar la
lactosa con formación de ácido y gas cuando se incuban durante 24-48
h a 35° C.
Las pruebas para la detección de coliformes pueden ser realizadas por
la técnica de los tubos múltiples NMP (prueba utilizada aquí), por la
técnica de la membrana filtrante o por la prueba de sustrato
cromogénico. Cada técnica puede ser aplicada de acuerdo con sus
limitaciones y con los objetivos del examen.
Cuando se utiliza la técnica de fermentación con tubos múltiples, el
resultado debe describirse como el número más probable (NMP) de
microorganismos presentes en la muestra examinada. Este número,
basado en fórmulas de probabilidad estadística, es una estimación en la
densidad media de coliformes en la muestra. La densidad de coliformes,
asociada a otras informaciones de carácter ambiental o de las
instalaciones locales, proporciona una evaluación de la eficacia del
tratamiento de agua y de la calidad del agua no tratada.

Enterometria​. Los Enterococos de la familia Enterococcaceae son

Gram positivo y anaerobico facultativo. La detección y cuantificación de
estos microorganismos patógenos en el agua es importante para reducir
los riesgos asociados a la salud pública. Están presentes en las heces
de los animales de sangre caliente, son incapaces de multiplicarse en
las aguas y sobreviven largos períodos en condiciones adversas de la
naturaleza. Algunos estudios realizados con aguas recreativas y
potables consideran que los enterococos son indicadores más estables
que Escherichia coli y los coliformes fecales.
Existen dos métodos estándar para la detección de enterococos en
aguas: la técnica de fermentación de tubos múltiples y la técnica de
filtración por membrana (FM). El método FM ha sido recomendado para
la enumeración de enterococos en varios tipos de muestras de agua y
puede ser utilizado para analizar grandes volúmenes de muestra, y es
más rápido que el procedimiento NMP.
Se han desarrollado diferentes procedimientos para la detección de
enterococos en aguas. La mayoría de ellos utilizan medios de cultivo
selectivos que contienen ingredientes como la azida de sodio y las sales
biliares para inhibir el crecimiento de otros microorganismos. Por otra
parte, muchos de ellos requieren un aislamiento primario y
posteriormente una etapa de confirmación, lo que compromete la
capacidad de tomar la acción más apropiada. (Técnica usada aquí)
En la actualidad se han desarrollado medios de cultivo cromogénicos
para la detección de la actividad β-D-glucosidasa presente en
Enterococcus. Estos constituyen herramientas útiles para la
enumeración y detección específica de enterococos en agua y
contienen mezclas de sustratos cromogénicos que son escindidos por
ciertas enzimas producidas por el microorganismo, dando como
resultado colonias bacterianas de diferentes colores, proporcionando
una identificación más simple y rápida, ya que no requieren pruebas
adicionales, lo que permite obtener los resultados en menos tiempo y
con gran precisión, en comparación con los métodos tradicionales.

Heterotróficos​. Las bacterias heterotróficas (heterótrofas) se definen

como aquellas bacterias que usan compuestos del carbono orgánico
como fuente de energía y el carbono para su crecimiento, en
contraposición con las bacterias autotróficas que utilizan los compuestos
inorgánicos como fuente de energía y el C02, como fuente de carbono.
Esta definición de bacteria heterótrofa es amplia e incluye tanto a las
bacterias saprofíticas como a las patógenas. Por lo tanto, tanto las
bacterias que causan como las que no causan enfermedades son
heterótrofas.
Los medios RHP (Recuento Heterotrófico en Placas) empleados para
enumerar los heterótrofos encontrados en el agua se consideran medios
no selectivos porque no tienen compuestos inhibidores no selectivos
para un determinado grupo de bacterias. Algunos compuestos que se
usan en los medios selectivos son las sales biliares, sulfato de laurilo de
sodio o desoxicolato de sodio (usado en medios para la detección de
coliformes), azida de sodio (selectiva para enterococcus), colorantes
(verde brillante) y antibióticos. Las condiciones de incubación, incluida la
temperatura, pueden ser selectivas y por consiguiente tales condiciones
deben estar especificadas para las bacterias particulares que se procura
detectar o enumerar.
MATERIALES​:

- 21 Tubos de ensayo (9 para colimetría, 9 para

enterometría y 3 para recuento de NeuBauer)
- 3 Placas petri (recuento de NeuBauer)
- Solución Buffer
- Muestra de agua contaminada
- Lector de colonias bacterianas (últimamente adquirido)
- Mechero de combustión
- Gradilla
- Guantes
- drigalski spatula
MUESTRA UTILIZADA
La muestra se colectó debajo del puente vehicular que atraviesa
el Rio Chillon, el cual conecta la avenida cordialidad con la
ensenada, ubicado pues en la urbanización Pro, distrito de Los
Olivos, provincia de Lima, departamento de Lima. Pro se
encuentra en el kilómetro 22 de la carretera Panamericana
Norte, en muchos de los tramos de este río se vierten colectores
de todo tipo, cabe resaltar, que uno se encontraba a 20 metros
de la toma de muestra.

METODOLOGÍA

COLIMETRÍA - ​turbidez y gas ( burbuja en tubo durham + )

Prueba probable (​48H ​x ​37ºC)

Prueba confirmativa - ​ tubos con burbuja​ (​24H ​x​ 37ºC / 44.5ºC) (+)
ENTEROMETRÍA - ​turbidez y sedimento en botón (+)

Prueba probable (​48H ​x​ 37ºC)

Prueba confirmativa - ​Los tubos con sedimento en botón

- Lectura: colonias positivas tipo rocío, color verde olivo o negras

- Resistencia de enterococos ​(48H ​x​ 37ºC)

RECUENTO DE HETEROTRÓFICOS

- Lectura: recuento de UFC/mL (Temperatura ambiente 48-72H)

RESULTADOS
COLIMETRÍA

Prueba Presuntiva
Prueba de confirmación. Coliformes totales y Coliformes fecales

NMP/100ml = >1100

Código de Presuntivo 3 3 3
ENTEROMETRIA
HETEROTRÓFICOS
Recuento de heterotróficos

La carga microbiana realizada en una placa dio como resultado 39 x 10​4 ​UFC/ml
Se seleccionan las placas que contienen entre 30 a 300 colonias.

Recuento en Cámara Neubauer

1 cuadrante a 40X ------- 113

113 × 400 × 1000

1 × 0.1 × 1 = 452000000 cel/mL
CONCLUSIONES Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS

● Por lo observado en las muestras obtenidas y los resultados

correspondientes, la concentración es bastante alta y requeriría agregar más
tubos para saber si de acuerdo a ley las concentraciones tanto de coliformes
(superior a 1100 NMP) y enterococos (superior a 1100 NMP) permitirían al
agua del río chillón ser apta para ser potabilizada y para el consumo humano,
sin embargo es usada para ello, además esta agua también es usada para
regar plantas bajas, tomando en cuenta que la ley no establece presencia de
enterococos, por lo tanto no sería apta para agua potable, ni para el riego de
plantas de tallo bajo y alto, siendo un foco infeccioso para los receptores.

● Con respecto al recuento en Neubauer, los resultados superan los valores

establecidos para ser potabilizados incluso con un tratamiento avanzado,
esto puede deberse al gran impacto que se encuentra sometido por la
presión urbana.

● Se ha observado además que las aves pescan en estas aguas además de

beber dicha agua y se dirigen hacia la plaza central de pro, en donde anidan,
y por tanto, defecan, dejando las veredas llenas de heces contaminadas
siendo también un foco infeccioso para la localidad de pro.

● El agua también se filtra por el subsuelo y en ocasiones es usada para el

consumo humano a través de puquios, fuente de agua para criaderos de
ganado porcino e incluso algunas personas sacan agua de este río para lavar
vegetales o llevarla en baldes.

● Sería conveniente alcanzar este informe a las autoridades sanitarias para dar
alerta de la emergencia que se tiene en dicho cuerpo de agua para que se
tomen las medidas correctivas del caso.