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BACTERIÓLOGO PARASITÓLOGO
PARASITÓLOGO

REPORTE DE LABORATORIO
Fecha:23/Marzo/2018 Grupo: 4QM1
Integrantes: Equipo: 1 Sección: 1
· Bolaños Nicolás Lilia
· Mérida Romano Adarely Nayfé
EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO SOBRE LA VELOCIDAD DE
LA REACCIÓN E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
Tabla No 1: Efecto de la concentración de
OBJETIVOS sustrato sobre la actividad de la invertasa
● Analizar el efecto de la concentración (Continuación).
del sustrato sobre la velocidad de
Tubo No 3 4 5 6
reacción.
● Determinar la Km de forma gráfica Absorbencia 0.493 0.631 0.602 0.716
por los métodos de Michaelis-Menten
Azúcar reductor 5.4 6.95 6.65 7.9
y Lineweaver-Burk.
(µmoles)/2.0mL
● Determinar el tipo de inhibición
producida por la anilina sobre la Velocidad
actividad de la invertasa. (unidades de 0.54 0.695 0.665 0.79
invertasa)
RESULTADOS Concentración de
Tabla No 1: Efecto de la concentración de sustrato 0.03 0.05 0.08 0.1
sustrato sobre la actividad de la invertasa. (moles/L=M)
Tubo No Testigo 1 2
CÁLCULOS
Absorbencia 0 0.306 0.435

Azúcar
reductor 0 3.4 4.8
(µmoles)/2.0mL

Velocidad
(unidades de 0 0.34 0.48
invertasa)

Concentración
de sustrato 0 0.01 0.02
(moles/L=M)
 Cálculo de la concentración de sustrato Azúcar
reductor 0 0.65 0.95
(µmoles)/2.0mL

Velocidad
(unidades de 0 0.065 0.095
invertasa)

Concentración
de sustrato 0 0.01 0.02
(moles/L=M)

Tabla No 2: Inhibición enzimática

(Continuación)
Tubo No 3 4 5 6

Absorbencia 0.126 0.050 0.098 0.141

Azúcar reductor 1.35 0.5 1 1.55

(µmoles)/2.0mL

Velocidad
(unidades de 0.135 0.05 0.1 0.155
invertasa)

Concentración de
sustrato 0.03 0.05 0.08 0.1
(moles/L=M)

CÁLCULOS

Tabla No 2: Inhibición enzimática Tabla No 3: Datos obtenidos de la

Tubo No Testigo 1 2 concentración del sustrato para la gráfica de
Lineweaver-Burk
Absorbencia 0 0.063 0.088
Sustrato
 1/ V 1/S

2.94 100

2.08 50

1.80 33.3

1.43 20

1.50 12.5

1.26 10

En la primera parte, a bajas concentraciones

Tabla No 4: Datos obtenidos del inhibidor de sustrato, la velocidad es proporcional a la
para la gráfica de Lineweaver-Burk concentración de sustrato, de tal manera que
Inhibidor si se duplica la concentración de sustrato, se
duplica la velocidad (reacción de primer
1/ V 1/S orden). La segunda parte de la curva, a
concentraciones intermedias de sustrato, la
15.38 100 velocidad se incrementa menos que en la
10.52 50 primera parte con el incremento de la
concentración, iniciando alrededor de la ½ de
7.4 33.3 la Vmax. La última parte de la curva, a altas
concentraciones de sustrato, la velocidad es
20 20
independiente de la concentración de sustrato
10 12.5 (reacción de orden cero), así la velocidad
alcanzada es cercana a la máxima.
6.45 10
Ocasionalmente en una reacción simple
DISCUSIONES catalizada por enzimas la dependencia de la
Para observar los fenómenos de la velocidad sobre la concentración de sustrato
concentración de sustrato y el uso de nota una curva hiperbólica la velocidad
inhibidores en la reacción enzimática de la puede alcanzar un máximo y luego de que a
sacarosa con la invertasa se trazaron curvas medida que se incrementa la concentración
que nos brindan información esencial, como de sustrato este fenómeno se llama inhibición
lo es la velocidad máxima que tiene la por sustrato el cual observamos al
enzima para la formación de productos y la incrementar la concentración de la sacarosa.
constante de Michaelis; generalmente se
obtiene una dependencia hiperbólica de la La Km es llamada la constante de Michaelis-
velocidad respecto a la concentración de Menten. El valor de Km de una enzima para
sustrato, distinguiéndose 3 partes distintas en un sustrato específico es la concentración del
la curva. sustrato a la cual la velocidad de la reacción
es la mitad de la velocidad máxima. La
Vmax es la velocidad teórica máxima de la
reacción catalizada por la enzima. A
concentraciones muy altas de sustrato el ● Fieser L.. (2004). Experimentos de
valor de la velocidad se aproxima al de la química orgánica. España:
velocidad máxima de la reacción, pero nunca REVERTÉ, S.A. 140-142 pp.
se llega a ésta. Los valores de Km y Vmax ● Nelson D.L & Cox M. ( 2000) “
son característicos de una enzima, y se Principios de bioquímica” 3° Edición
conocen como parámetros cinéticos de la omega, 113-124 pp.
enzima. Es por ello que a partir de nuestras ● Rosa P., Oliver I. & Rodríguez A.
gráficas los calculamos. (2003) “Bioquímica: Técnicas y
métodos”, Madrid: Hélice pp. 216-
En la práctica hicimos uso de un inhibidor (la 231.
anilina). Por medio de las gráficas de cinética
enzimática observamos como se ve afectado
el Km o bien la Vmax. Un inhibidor es una
sustancia que cuando interacciona con una
enzima provoca una disminución de la
actividad catalítica; una inhibición
enzimática puede ser reversible si se produce
la formación de un complejo enzima
inhibidor no covalente o puede ser
irreversible si se forma un complejo
covalente entre enzima e inhibidor. Para el
caso de la inhibición enzimática reversible se
tienen tres tipos: la competitiva, la no
competitiva la acompetitiva. Como resultado
obtuvimos que la anilina lleva a cabo una
inhibición no competitiva, esto se comprobó
al trazar la gráficas y obtener los valores de
Km y Vmax, y observar que los valores de
Vmax son iguales y los valores de Km
difieren.

CONCLUSIÓN

Al aumentar la concentración de sustrato, la

velocidad de la reacción aumenta hasta un
punto máximo, incrementos posteriores en la
concentración de sustrato no producen efecto
sobre la velocidad de reacción,

La anilina es un inhibidor de tipo no

competitivo.

BIBLIOGRAFÍA