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O microscópio ótico composto apresenta-se sob duas formas: o monocular e o binocular. É constituído por
uma parte óptica e uma mecânica. Os seus constituintes, bem como as respectivas funções apresentam-se no
quadro.
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Cuidados a ter com o microscópio
O microscópio é um aparelho caro. Usa-o com cuidado.
- Antes de pegar na caixa do microscópio verifica se esta está fechada.
- Transporta o microscópio com ambas as mãos, apoiando numa delas a base do microscópio e segurando o braço, ou
coluna, deste com a outra.
- Coloca o microscópio sobre a mesa, suficientemente afastado do bordo desta. Mantém sobre a mesa de trabalho o
material estritamente necessário.
- Evita molhar a platina do microscópio quando executares preparações temporárias, nas quais utilizes água ou qualquer
outro líquido como meio de montagem.
- As lentes do microscópio devem ser limpas com material próprio e em movimentos circulares.
Mudança da objetiva
- Se necessitares de utilizar uma objetiva de maior poder ampliador, sem alterar a focagem anterior, deves rodar
lentamente o revólver para a objetiva de poder ampliador imediatamente superior e afinar a focagem com o parafuso
micrométrico. Não movimentes a platina.
- Regula a iluminação ajustando convenientemente a posição do diafragma e do condensador – uma objetiva de maior
ampliação obriga a uma maior abertura do diafragma.
A ampliação é obtida por dois sistemas de lentes: sistema das objetivas e da ocular.
Ampliação Total = Ampliação ocular X Ampliação Objetiva
Cada objetiva é formada por uma associação de lentes inseridas num suporte metálico que tem inscrito, na
parte externa, o poder de ampliação.
Limite de Resolução – é a distância mínima a que esses dois pontos devem estar colocados para que o
microscópio tenha poder de resolução.
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□ O limite de resolução do olho humano é 0,1 mm (100 µm), ou seja, para que dois objetos sejam
visualizados separadamente têm que se encontrar separados por uma distância de 0,1 mm.
□ O limite de resolução do microscópio óptico composto é de 0,15 µm (150 nm).
□ O limite de resolução do microscópio eletrónico é de 0,1 nm.
Profundidade do campo do MOC – quando se observa nitidamente um plano, os que estão acima e abaixo
dele ficam desfocados. Quanto menor for o poder de ampliação da objetiva, maior é a profundidade do campo
do microscópio. Esta característica pode ser ultrapassada focando cada um dos diferentes planos
isoladamente.
Ex: quando se observam dois fios de cabelo cruzados
Técnicas de coloração
A dificuldade de visualizar, ao microscópio ótico, as estruturas celulares, é devida à transparência e ao fraco
contraste ótico das células, quando colocadas em meio aquoso. As diferentes partes das células deixam, em
geral, passar quantidades de luz semelhantes, devido a serem constituídas por uma percentagem de água
muito elevada.
Em microscopia utilizam-se, frequentemente, duas técnicas para aplicação do corante no material biológico:
- coloração por imersão (usando o corante como meio de montagem)
- coloração por irrigação (colocando a gota de corante junto a um dos bordos da lamela e aspirando-o
do lado oposto, com papel de filtro). Esta técnica é realizada sempre que se pretende substituir o meio de
montagem de uma preparação temporária já efetuada.
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Solução de Ringer- Líquido fisiológico que permite manter as células vivas.
Soro fisiológico- Líquido fisiológico que permite especificamente manter células de mamíferos vivas.