Monografía N° 2: Centrifugación

Alumnos: Almada, Castro, Velloso.

Profesor: Cirelli Héctor
Curso: 2°6ta
 Centrifugación
La centrifugación se basa en hacer girar un tubo a gran velocidad
de forma que se produzca la acumulación en el fondo del mismo
de las partículas que tienden a hundirse por tener una densidad
mayor que la del medio en la que se encuentran. Así, después de
la centrifugación, la muestra homogénea se habrá separado en dos
fracciones: sobrenadante (supernatant), fracción homogénea que
no ha sedimentado, y el sedimento (pellet) que ha quedado
adherida al fondo del tubo.

Centrífugas

Las centrífugas son instrumentos que permiten someter a las

muestras a intensas fuerzas que producen la sedimentación en
poco tiempo de las partículas que tienen una densidad mayor que
la del medio que las rodea. En general se diferencian en función
de los márgenes de aceleración a que se someten a las muestras
en:
- Centrifuga (de pocas g a aprox. 3000 g).
- Súper centrífuga (o centrifugas de alta velocidad, entre 2000
g y 20000 g).
- Ultra centrífuga (de 15000 g a 600000 g).

En las centrífugas se suele controlar la temperatura de la cámara

para evitar sobrecalentamiento de las muestras debido a la
fricción.
En una centrífuga el elemento determinante es el rotor, dispositivo
que gira y en el que se colocan los tubos. Existen varios
tipos:
-Rotor basculante: Los tubos se colocan en un dispositivo (cestilla)
que, al girar el rotor, se coloca en disposición perpendicular
al eje de giro.
-Rotor de ángulo fijo: Los tubos se insertan en orificios en el
interior de rotores macizos. El caso extremo es el de los
rotores verticales en los que el tubo se sitúa paralelo al eje
de giro.

Los parámetros a tener en cuenta en cualquier centrifugación son:

-Volumen de solución a centrifugar, que determinara el tipo de

tubos y rotores a emplear.
-Naturaleza química de la solución, que determinará la naturaleza
del tubo a emplear
-Diferencial de densidad entre la partícula a sedimentar y la
densidad del medio en el que se encuentra. En general,
cuanto mayor sea esa diferencia antes sedimentara.

Propiedades especialmente importantes son el ángulo de giro, el

radio mínimo, medio y máximo, y la velocidad máxima de
giro. La relación entre la velocidad de giro y la fuerza de
aceleración (fuerza centrífuga relativa, RCF) a que se
somete la muestra se recoge en la experiencia:

𝑅𝐶𝐹 = 1.118 × 10−5 × 𝑟 × (𝑟𝑝𝑚)2

Centrifugación diferencial
La centrifugación diferencial se basa en la existencia de
diferentes partículas en la suspensión que difieren en su
densidad de la del medio. Si se centrifuga en condiciones
suaves sedimentaran las partículas mayores y/o más densas.
Cuando el sobrenadante de la primera centrifugación es
centrifugado de nuevo, sedimentando de nuevo las partículas
más densas presentes y así sucesivamente.

Sedimentación
La sedimentación es el transporte de partículas en un campo de
fuerza de centrifugación. Permite determinar peso molecular,
densidad y forma de macromoléculas y orgánulos celulares.

Coeficiente de sedimentación
Los principios básicos de la teoría de sedimentación, se
originan de la ley de Stokes, la cual fue creada para medir la
sedimentación de una esfera en un campo gravitacional, para
así mostrar que la velocidad de la esfera alcanza un valor
constante y la fuerza neta en esta es igual a la fuerza de
resistencia de este movimiento a través del líquido.

Velocidad de sedimentación
Los coeficientes de sedimentación son usuales expresados en
Svedverg (S) o 10-13s. De esta manera una partícula cuyo
coeficiente de sedimentación es medido en 10-12s= 10x10-13s,
es decir que tiene un valor de 10S.
Una partícula en un campo gravitacional se comporta según la
LEY DE STOKES
d2(μP − μL ). g
𝑉=
18. v
Donde: V= velocidad
d= diámetro de la partícula
µP= densidad de la partícula
µL= densidad del líquido
v= viscosidad del medio
g= fuerza gravitacional

Se cumple:
-La velocidad de sedimentación es proporcional al tamaño de
la partícula.
-La velocidad de sedimentación es proporcional a la diferencia
entre la densidad del medio circundante y la densidad de la
partícula.
-La velocidad de sedimentación es 0, cuando la densidad de la
partícula es igual a la densidad del medio circundante.
-La velocidad de sedimentación disminuye al aumentar la
viscosidad del medio.
-La velocidad de sedimentación aumenta al aumentar la fuerza
del campo centrífugo.

El coeficiente de sedimentación es una constante característica

de cada organelo o molécula, y sus unidades se dan en
Svedvergs, tomando el nombre de su descubridor.
El tiempo de centrifugación hasta la clarificación de una
organela se define por:

𝐾
T (horas)=
𝑆

Donde: S= coeficiente de sedimentación de la organela.

K= constante del rotor. (Depende del ángulo de
inclinación del tubo de centrifugación con respecto al eje de
rotación).