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UNIVERSIDAD CATÓLICA
LOS ÁNGELES DE CHIMBOTE
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MS QF DAVID RUIDÍAS ROMERO
ULADECH CATÓLICA GUÍA DE PRÁCTICAS DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL
GUÍA DE PRÁCTICAS
DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL
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Modelo
Informe de práctica de laboratorio
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Práctica 1
Normas de seguridad en el laboratorio
OBJETIVOS.
1) El estudiante conocerá el reglamento interno y aplicará en forma eficiente la
forma de actuar en caso de accidentes en el Laboratorio de Análisis
Instrumental, aplicando los principios de primeros auxilios.
2) El estudiante conocerá las principales causas de accidentes y la forma como
prevenirlos.
INTRODUCCIÓN.
Cuando se empieza el trabajo en el Laboratorio de Análisis Instrumental se debe
de entender que se encontrará frente a sustancias y procedimientos que podrían
afectar la seguridad del estudiante, del ambiente y del ecosistema en general si
dichos materiales o procesos se utilizan de forma incorrecta.
El estudiante del curso de Análisis Instrumental debe de reconocer la importancia
de la seguridad en el laboratorio y de esta forma estará dispuesto a cumplir con
todas las normas que son para su propia seguridad y la de sus compañeros y de
esta forma mostrará responsabilidad e interés para que todas las sesiones
terminen como una enseñanza positiva y apropiada en el proceso de enseñanza-
aprendizaje, y sobre todo en la formación de su carácter científico responsable,
crítico y de superación.
Este material es el resumen de varios manuales editados para una enseñanza
apropiada de las experiencias de Análisis Instrumental y se les exige a todos los
alumnos inscritos en esta asignatura lo lean detallada, concienzudamente y lo
pongan en práctica no como una imposición sino como un estilo de vida.
REGLAMENTO BÁSICO.
Muchas son las sugerencias y consejos que se han dado sobre la seguridad en
el laboratorio aquí enumeramos algunas de ellas:
a) Conocer bien las propiedades físicas, químicas y toxicológicas de las
sustancias que se van a utilizar.
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EXPLOSIONES.
Pueden ocurrir por las siguientes condiciones:
a) Una reacción exotérmica no controlable (que provoca explosión y fuego).
b) Una explosión de residuos de peróxidos al concentrar soluciones etéreas a
sequedad.
c) Una explosión por calentamiento, secado, destilación o golpe de compuestos
inestables.
d) Mezclar sustancias incompatibles que generan vapores o gases inflamables
o explosivos.
e) Para evitar explosiones, una regla esencial es conocer las condiciones de
almacenamiento y uso de cada sustancia.
PRIMEROS AUXILIOS.
a) En caso de incendio, aléjese rápidamente y permita que su asesor lo apague
con el extinguidor que debe haber en el laboratorio. Si esto ya no es posible,
salga rápidamente del laboratorio. Si el fuego afecta ya a algún compañero,
trate de quitarle las prendas que se estén consumiendo y retírelo de la zona
del siniestro.
b) En caso de explosión, salga inmediatamente del laboratorio y, si le es posible,
ayude a sus compañeros afectados. Avise al resto del personal de laboratorio
para que presten auxilio.
c) Si se salpica la piel con ácidos, lávese inmediatamente con agua abundante
y aplíquese una disolución de bicarbonato sódico.
d) Si una sustancia lo salpica sobre los ojos, enjuáguese inmediatamente con el
lavaojos o bien con agua abundante y después con una solución de bórax
(que debe existir en el botiquín del laboratorio). Si persisten las molestias,
consulte al médico.
e) Cuando se ingiere una base se neutraliza con jugo de naranja o de uva, o
con vinagre.
f) Cuando se haya ingerido una sustancia venenosa o tóxica y sea necesario
provocar vómito, utilice un emético. Algunos eméticos son:
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RESUMEN Y CONCLUSIONES.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS.
1. FIESER, LOUIS. Organic Experiments. Septima edición. Editorial D.C. Heath
and Company. United States America. 1992.
2. GALAGOVSKY KURMAN, LYDIA. “Química Orgánica: Fundamentos teórico
– prácticos para el laboratorio”. Quinta Edición. Editorial Universitaria de
Buenos Aires. Argentina. 2002.
3. GARCIA SANCHEZ, MIGUEL ANGEL. “Manual de Prácticas de Química
Orgánica I”. Editorial Universidad Autonoma Metropolitana. Unidad
Iztapalapa. Mexico. 2002.
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Práctica 2
Evaluación estadística de datos
experimentales
OBJETIVOS.
1. Determinar la media aritmética y la desviación estándar de los datos
experimentales.
2. Aceptar o Rechazar datos dudosos de una muestra experimental por medio
de la prueba Q.
3. Valorar por medio de la prueba de Kolmogorov-Smirnov si los datos
experimentales proceden de una población normal.
4. Evaluar a través de la prueba F y t de student si los datos experimentales de
dos grupos son significativamente diferentes.
FUNDAMENTO.
Es importante saber si una medición puede aceptarse con confianza o si debe
rechazarse como errónea. Una observación de seguridad desconocida tiene
escaso valor, excepto como una aproximación. Esto no significa que todas las
observaciones deben ser precisas, más bien, debe conocerse el "nivel de
confianza" en que puede tenerse cada resultado en particular.
El valor de una medición estará en función de su precisión, así como de su
exactitud. Una definición común de precisión, denominada medida de precisión,
es la desviación estándar (s), definida por la expresión:
∑ ( X i - M)2
S= (1)
n-1
donde n-1 puede denominarse "grados de libertad"; siendo n el número de
mediciones.
La desviación estándar se acepta generalmente como el índice más digno de
confianza del error casual; basándose en la probabilidad se puede calificar a una
medición individual como M ± S, en donde M es el valor medio, con la confianza
de que sólo el 30% de las veces el error en la medición excederá esos límites.
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n Q 0.90 Q 0.95
3 0.94 ------
4 0.76 0.831
5 0.64 0.717
6 0.56 0.621
7 0.51 0.570
8 0.47 0.524
9 0.44 0.492
10 0.41 0.464
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EQUIPOS Y REACTIVOS.
PROCEDIMIENTO.
1. Calibrar el pH-Metro con las soluciones buffers o tampón de pH conocido.
2. Colocar aprox. 50mL de agua potable en el vaso de precipitación de 50 mL.
3. Sumergir el electrodo del pH-Metro teniendo en cuenta que la barra
magnética no lo roce al girar y agitar moderadamente, en tales condiciones
cuando la señal de variabilidad en el DISPLAY desaparezca registrar el pH.
Debe haber suficiente agua potable en todo tiempo en el recipiente en el que
se está realizando la medida de pH, para cubrir la porción sensible de los
electrodos.
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UTILIZACIÓN DE DATOS
1) Calcular la media y desviación estándar para cada muestra.
2) Aplicar la prueba Q para los datos dudosos.
3) Aplicar la prueba de normalidad de Kolmogorov-Smirnov.
4) Aplicar la prueba F y la prueba t a las desviaciones estándar y medias
muestrales.
5) Interpretar los resultados.
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Práctica 3
Calibración de un espectrofotómetro por el
método de estándar externo
OBJETIVOS.
1. Calibrar la respuesta de un espectrofotómetro utilizando el método de
estándar externo.
2. Representar gráficamente el promedio las absorbancias versus la
concentración de las soluciones estándar.
3. Obtener la ecuación de la recta, pendiente, intercepto y coeficiente de
determinación.
4. Calcular la media o promedio, la desviación estándar y el coeficiente de
variación de las absorbancias de la solución ensayo.
5. Calcular la concentración de la solución ensayo con la ecuación de la recta.
6. Calcular la exactitud a través del error absoluto y error relativo.
FUNDAMENTO.
A menudo se obtienen representaciones gráficas (curva patrón o curva analítica)
que son lineales en un amplio intervalo de concentración (intervalo útil) lo cual
es deseable, ya que están menos sujetas a error que las curvas no lineales. Sin
embargo, no es raro encontrar representaciones gráficas no lineales, las cuales
requieren un elevado número de datos de calibrado para establecer con
precisión la relación entre la respuesta del instrumento y la concentración. Se
obtiene la ecuación de la curva de calibración por el método de mínimos
cuadrados que permite calcular directamente la concentración de las muestras.
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PROCEDIMIENTO.
1. Solución STOCK: transferir 10 mg de colorante Verde Menta a un matraz
volumétrico de 25 mL, disolver y llevar a volumen con agua destilada.
2. Solución PATRÓN: medir 5 mL de solución STOCK y transferir
cuantitativamente a matraz volumétrico de 25 mL llevando a volumen con
agua destilada, mezclar por agitación (15 segundos).
3. Solución MUESTRA: medir 4 mL de solución STOCK y transferir
cuantitativamente a matraz volumétrico de 25 mL llevando a volumen con
agua destilada, mezclar por agitación (15 segundos)
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UTILIZACIÓN DE DATOS.
1. Representar gráficamente el promedio los datos de absorbancia versus la
concentración de las soluciones estándar.
2. Obtener la ecuación de la recta, la pendiente (m), el intercepto (b) y el
coeficiente de determinación (R2).
∑
3. Calcular la media o promedio = ; la desviación estándar =
∑ ( )
; y el coeficiente de variación = ×100% de las
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Práctica 4
Calibración de un espectrofotómetro por el
método de adición estándar
OBJETIVOS.
FUNDAMENTO.
KVS C S KV X C X
S= + (1)
Vt Vt
S = mVS + b (2)
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KC S KV X C X
m= (3) y b= (4)
Vt Vt
b VX C X bC S
= o CX = (5)
m CS mV X
2 2 2
SC S S
= m + b (6)
CX m b
2 2
Sm Sb
SC = C X + (8)
m b
También se puede dibujar manualmente una gráfica de los datos, y la parte recta
de la misma se extrapola hasta interceptar el eje de las X. La diferencia entre el
volumen añadido de patrón en el origen (cero) y el valor del volumen en el punto
de intersección de la línea recta con el eje de las X (Vx)0, es el volumen de patrón
que equivale a la cantidad de analito en la muestra.
KVS C S KV X C X
S = + = 0 (9)
Vt Vt
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(VS )0 C S
CX = − (10)
VX
PROCEDIMIENTO.
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UTILIZACIÓN DE DATOS.
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Práctica 5
Verificación de las características de un
espectrofotómetro
OBJETIVOS.
1. Examinar las características de operación de un espectrofotómetro de
absorción ultravioleta visible.
2. Determinar automáticamente por medio de un espectrofotómetro la
concentración de un analito en solución.
3. Comprobar los colores del espectro visible a las longitudes de onda
seleccionadas.
FUNDAMENTO.
El espectrofotómetro de absorción UV/Visible UNICO modelo 2100 UV está
equipado con un microprocesador que controla el rango UV/Visible, cubriendo el
rango de longitud de onda de 200 a 1000 nm, con un ancho de banda espectral
de 5 nm.
El monocromador es un diseño de Czerny Turner de haz simple que incorpora
una red de difracción holográfica de 1200 líneas/mm y un arreglo de supresión
automática en la respuesta de segundo orden. Las fuentes de radiación
electromagnética lo constituyen una lámpara Halógena de Tungsteno y otra de
Deuterio.
Los botones o teclas de comando son del tipo almohadilla, se encuentran en el
panel frontal derecho, de arriba hacia abajo: a) MODE, permite seleccionar el
tipo de función Transmitancia, Absorbancia, Concentración y Factor; b) 0ABS /
100%T, se usa para ajustar el cero de absorbancia o el cien por ciento de
Transmitancia con la solución blanco; c) PRINT, para utilizar la unidad de
impresión, d) WAVELENGTH / ▲ y ▼, para realizar aumento o disminución de
la longitud de onda a la que el investigador quiere trabajar, f) W, enciende o
apaga la lámpara Halógena de Tungsteno cuando está en el Mode de
Transmitancia o Absorbancia, g) D2, enciende o apaga la lámpara de Deuterio
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Agua destilada.
PROCEDIMIENTO.
VERIFICACIÓN DE CARACTERÍSTICAS Y DETERMINACIÓN DE CONCENTRACIÓN.
1. Conmutar el switch VOLTAJE SELECTOR a la posición correcta de
alimentación, conectar el cable de alimentación a la fuente de energía eléctri-
ca.
2. Cerrar la cámara de muestra, pero antes verificar que se encuentre vacía y
en la posición correcta y encender: Power on el instrumento; dejar calentar
15-30 minutos.
3. Seleccionar la longitud de onda requerida para el análisis con el botón o tecla
de control de longitud de onda: WAVELENGTH/▲ y ▼
4. Seleccionar Transmitancia usando la tecla MODE.
5. Cerrar la cámara de muestra. Fijar el 100 %T por presión de la tecla
0ABS/100%T.
6. Medir aprox. 3 mL de AGUA DESTILADA y depositar en la cubeta. Colocar
ésta en el portacubetas y cerrar la cámara de muestra. Fijar el 100 %T por
presión de la tecla 0ABS/100%T. Si se ha seleccionado la opción
Absorbancia con la tecla MODE, en la pantalla debe aparecer CERO al
presionar la tecla 0ABS/100%T.
7. Solución STOCK: transferir 10 mg de colorante verde menta a un matraz
volumétrico de 25 mL, llevar a volumen con agua destilada mezclar por
agitación (15 segundos).
8. Solución PATRÓN: medir 3 mL de solución STOCK y transferir
cuantitativamente a un matraz volumétrico de 25 mL llevando a volumen con
agua destilada, mezclar por agitación (15 segundos).
9. Solución MUESTRA: medir 1,5 mL de solución STOCK y transferir
cuantitativamente a un matraz volumétrico de 25 mL llevando a volumen con
agua destilada, mezclar por agitación (15 segundos).
10. Retirar la cubeta del portacubetas, reemplazar el AGUA por la solución
PATRÓN y observar en el display los valores de Transmitancia %T y
Absorbancia (ABS) utilizando la tecla MODE.
11. Para medir la concentración seleccionar Concentración con la tecla MODE.
Fijar el valor de concentración de la solución PATRÓN (μg/mL) mediante las
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UTILIZACIÓN DE DATOS.
1. Elaborar un esquema o flujograma de los pasos a seguir para calcular la
concentración de la muestra en el espectrofotómetro UV/Visible UNICO 2100
UV.
2. Realizar los cálculos, comparar e informar sobre la concentración de las
soluciones PATRÓN y MUESTRA, con la concentración obtenida
automáticamente por el espectrofotómetro UV/Visible UNICO 2100 UV.
3. Determinar el error relativo de la concentración obtenida automáticamente
por el espectrofotómetro UV/Visible UNICO 2100 UV.
4. Elaborar un cuadro de doble entrada entre la longitud de onda y el color del
espectro visible observado.
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Práctica 6
Determinación de la longitud de onda analítica
OBJETIVOS.
1. Adquirir un conjunto de datos mediante un espectrofotómetro UV-Visible.
2. Elaborar los espectros de absorción de soluciones patrón.
3. Determinar la longitud de onda de máxima absorbancia de una sustancia
absorbente presente en solución.
FUNDAMENTO.
Cada molécula absorbe sus propias frecuencias características de radiación
electromagnética. Este proceso transfiere energía a la molécula y disminuye la
intensidad de la radiación electromagnética incidente. La absorción indica
cuantitativamente la forma en que el grado de atenuación depende de la
concentración de las moléculas absorbentes y de la longitud de onda del trayecto
en el que ocurre la absorción. Cuando la luz atraviesa un medio que contiene un
analito absorbente, disminuye su intensidad como consecuencia de la excitación
del analito.
La absorbancia de una solución se relaciona con la transmitancia de manera
logarítmica reduciéndose la transmitancia a medida que aumenta la absorbancia.
Una sustancia disuelta absorbe preferentemente determinadas porciones del
sector ultravioleta y/o visible del espectro electromagnético. Con fines analíticos
es conveniente conocer la denominada longitud de onda de máxima
absorbancia.
Esta longitud de máxima absorbancia también se conoce como Lambda máximo:
λmáx, correspondiente a la frecuencia fotónica que mayor efecto produce en el
estado energético de la especie material absorbente, así se tendrá la mayor
respuesta cuando el analito se encuentre a muy bajas concentraciones en
solución. Obteniendo la absorbancia de una solución del analito a concentración
adecuada en todo el rango del espectro electromagnético de interés (ultravioleta,
visible); graficando el espectro de absorción (absorbancia vs longitud de onda),
es posible determinar la longitud de onda de máxima absorbancia del analito.
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PROCEDIMIENTO.
1. Encender el espectrofotómetro y dejar que realice los pasos de prueba
interna.
2. Verificar que el espectrofotómetro se inicie con un 100 %T a 546 nm y dejar
calentar de 15 a 30 minutos antes de hacer las lecturas.
3. Solución STOCK: transferir 10 mg de colorante Verde Menta a un matraz
volumétrico de 25 mL, llevar a volumen con agua destilada mezclar por
agitación (15 segundos).
4. Soluciones PATRÓN:
1. Solución PATRÓN 1: medir 0,25 mL de solución STOCK y transferir
cuantitativamente a un matraz volumétrico de 10 mL llevando a volumen
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UTILIZACIÓN DE DATOS.
1. Organizar los datos obtenidos longitud de onda (nm) y absorbancia (ABS) en
un cuadro de doble entrada.
2. Graficar los datos absorbancia vs longitud de onda de las soluciones
PATRÓN 1, 2 y 3: Espectros de absorción.
3. Determinar la longitud de onda de máxima absorbancia (λmáx) para el
colorante Verde Menta.
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Práctica 7
Determinación del error fotométrico en la
concentración
OBJETIVOS.
1. Determinar el error fotométrico en la concentración y graficarlo versus la
transmitancia.
2. Determinar la desviación estándar relativa de la concentración y graficarlo
versus la absorbancia.
3. Determinar el rango de concentraciones donde la medición está afectada del
menor error relativo en la concentración originado por la incertidumbre en la
transmitancia.
FUNDAMENTO.
A partir de la expresión de la Ley de Beer se puede conseguir una expresión
para la dependencia de la incertidumbre relativa para la concentración respecto
de la incertidumbre relativa o ruido en la transmitancia proveniente de los tres
pasos de medida. A = εbc = - log T (1)
Despejando para la concentración:
log T log e ln T 0,4343
C=− =− =− ln T ( 2)
εb εb εb
Para una especie absorbente y longitud de trayectoria dadas, ε y b son
constantes y todo el error en la concentración determinada, puede atribuirse a la
incertidumbre dT en la transmitancia medida T; entonces, derivando respecto al
cambio de la transmitancia y reordenando términos:
dC 0 ,4343 dT
=− ( 3)
C log T T
Donde (dC/C), IRC incertidumbre relativa en la concentración y (dT/T), IRT
incertidumbre relativa en la transmitancia. En otro orden:
dC/C 0 , 4343
= - = ERC ( 4 )
dT T log T
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∑ ( T i - T) 2
S T = dT = (5)
N -1
Donde Ti, valores individuales de T; N, número de medidas repetidas; T,
promedio para las N medidas para cada una de las soluciones ensayo.
Con el mismo criterio, mejor medida y más útil del ruido dC es la desviación
estándar SC; en base a la ecuación (3), la desviación estándar relativa en
términos de concentración (Sc/C) es:
Sc 0.4343 S T
= - (6 )
c log T T
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PROCEDIMIENTO.
Preparar 100 mL de solución STOCK de 100 ug/mL de colorante Verde Menta;
a partir de esta solución, preparar con el mismo disolvente en matraces
volumétricos de 10 mL, soluciones de menor a mayor concentración, observando
el siguiente criterio: “La menos concentrada debe tener una transmitancia
aproximada de 0,900 y la más concentrada una transmitancia aproximada de
0,046 en la longitud de onda analítica”.
UTILIZACIÓN DE DATOS.
1. Calcular para cada una de las soluciones el ERC, utilizar la ecuación (4) y
graficar los resultados vs la transmitancia respectiva.
2. Calcular para cada una de las soluciones; la desviación estándar de la
transmitancia (ST) con la ecuación (5) y la desviación estándar relativa de la
concentración (Sc/c), con la ecuación (6). Graficar estos últimos valores vs la
absorbancia respectiva.
3. Hacer las interpretaciones correspondientes de cada gráfica.
4. Determinar el rango de concentración donde la medición de la concentración
está afectada del menor error fotométrico.
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Práctica 8
Ley de Beer en el análisis cuantitativo
OBJETIVOS.
1. Demostrar la utilidad de la Ley de Beer en el análisis cuantitativo.
2. Elaborar la curva de calibración en la región visible del espectro E.M.
3. Determinar la concentración por medio de la ecuación de la recta.
FUNDAMENTO.
La absorción depende a) del medio, es decir, de su composición cuali-
cuantitativa y b) de la longitud de la trayectoria óptica en el medio. Esta
dependencia está expresada mediante la Ley de Beer.
Es importante tomar en cuenta las suposiciones que se hacen al obtener esta
ley, ellas son:
1) La radiación incidente es monocromática,
2) Los centros absorbentes (moléculas y iones) actúan independientemente
unos de otros, sin tomar en cuenta su número o tipo, y
3) La absorción está limitada a un volumen de corte seccional uniforme.
La siguiente expresión define la absorbancia A y es la presentación matemática
más simple de la ley de Beer:
log P 0 = A = ε b C
P
Donde: ε, absortividad molar; b, longitud de trayectoria óptica y C, concentración
del absorbente en moles/litro.
La proporcionalidad de la absorbancia respecto a la concentración está en
relación con la segunda suposición y a concentraciones > 0,01M -primer límite
real a la validez de la ley de Beer- la distancia media entre las especies
absorbentes puede permitir distorsión en la capacidad de absorción de radiación
EM; manifestándose como una desviación de la linealidad de la ley de Beer. Este
efecto similar puede ocasionar la concentración alta de electrolitos, aunque las
especies absorbentes se encuentren a concentración baja. Estas interacciones
moleculares generalmente carecen de importancia a concentraciones menores
que 0,01M.
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PROCEDIMIENTO.
1. Encender el espectrofotómetro y dejar que realice los pasos de prueba
interna.
2. Verificar que el espectrofotómetro se inicie con un 100 %T a 546 nm y dejar
calentar de 15 a 30 minutos antes de hacer las lecturas.
3. Reactivo de GRIESS A: pesar 100 mg de Ácido sulfanílico y transferir a un
matraz volumétrico de 10 mL, adicionar 0,5 mL de Ácido fosfórico
concentrado y llevar a volumen con agua destilada mezclando por agitación
10 segundos.
4. Reactivo de GRIESS B: pesar 10 mg de N-1-naftil etilendiamina y transferir a
un matraz volumétrico de 10 mL, llevar a volumen con agua destilada
mezclando por agitación 10 segundos.
5. Solución STOCK: pesar 25 mg de Nitrito de sodio y transferir a un matraz
volumétrico de 25 mL, llevar a volumen con agua destilada y mezclar por
agitación 10 segundos.
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UTILIZACIÓN DE DATOS.
1. Graficar el promedio de los datos de absorbancia versus la concentración de
las soluciones estándar.
2. Elaborar la curva de calibración y establecer la ecuación de la recta
experimental para la Ley de Beer.
3. Determinar la concentración de las soluciones ENSAYO con la ecuación de
la recta.
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Práctica 9
Titulación potenciométrica de un ácido débil
OBJETIVOS.
1. Obtener la gráfica del pH de la solución versus el volumen gastado de
solución titulante.
2. Realizar la gráfica de la primera derivada versus el volumen gastado de
solución titulante.
3. Determinar de forma gráfica el punto final en una valoración potenciométrica
utilizando datos de pH y volúmenes de la solución valorante normalizada.
FUNDAMENTO.
Una de las aplicaciones analíticas de la potenciometría es la medición del
potencial de una pila en el curso de una valoración, empleando la variación de
potencial para localizar el punto final. En el caso de una valoración ácido-base
se sigue la variación del pH; éste es definido en términos de la f.e.m. de la celda
E, como sigue:
(E - E 0 ) F
pH = pH 0 +
2.3026 RT
donde: pH0 y E0 son, respectivamente, el pH y la f.e.m. de una solución modelo
amortiguadora, F es el Faraday y R y T conservan su significado acostumbrado.
En la región del punto de equivalencia hay cambios de un céntuplo o mayores
en la concentración de las especies químicas involucradas, por lo que la
f.e.m. cambiará bruscamente permitiendo establecer con precisión el punto
final.
En el caso de titulaciones de ácidos y bases en medio acuoso para que los
análisis sean precisos deben ser satisfechos dos requisitos:
1. El ácido o base debe ser apreciablemente más fuerte que el agua como un
ácido o una base, respectivamente, y
2. La concentración del ácido o la base debe ser suficientemente mayor que la
del hidrógeno o (esencialmente) los iones hidroxilo del agua.
Un ácido débil reacciona en forma incompleta con una base fuerte y en el punto
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EQUIPOS Y REACTIVOS.
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Ácido ascórbico.
Fenolftaleína al 1%.
PROCEDIMIENTO.
1. Calibrar el pH-Metro con las soluciones buffers o tampón de pH conocido.
2. Disolver 150 mg de ácido ascórbico, pesados exactamente en 20 mL de agua
destilada recién hervida y fría en un vaso de precipitación de 50 mL, agregar
dos gotas de fenolftaleína al 1%, introducir la barra magnética y llevar todo
sobre el agitador magnético.
3. Sumergir el electrodo teniendo en cuenta que la barra magnética no lo roce
al girar y agitar moderadamente, en tales condiciones cuando la señal de
variabilidad en el DISPLAY desaparezca registrar el pH. Debe haber
suficiente solución, en todo tiempo, en el recipiente en el que se está
realizando la titulación, para cubrir la porción sensible de los electrodos.
4. Cargar la bureta con 25 mL de NaOH 0.1N estandarizado, empezar la
titulación y registrar el pH cada vez que se agrega la base. Inicialmente,
pueden agregarse grandes proporciones de solución titulante (posiblemente
5 mL); pero cerca del punto de equivalencia, las cantidades deben reducirse
a 0.1 o 0.05 mL y tener un volumen idéntico si va a hacerse una gráfica
ΔpH/ΔV, a fin de obtener la máxima precisión al obtener varios puntos en esa
región; mientras más grande sea la pendiente en el punto final, más
pequeños deben ser los incrementos.
5. Después de cada adición, debe permitirse un tiempo breve para obtener la
mezcla y la respuesta. La magnitud del período dependerá fuertemente de
factores tales como la velocidad de agitación, el volumen de la solución, la
ubicación del electrodo indicador y la naturaleza del punto de contacto.
Posiblemente 30 segundos sea un margen apropiado para lograr el equilibrio
en la mayoría de las titulaciones manuales. Una regla razonable es, esperar
hasta que la lectura de pH no cambie más de 0.02 de unidad de pH por
minuto.
UTILIZACIÓN DE DATOS.
1. Elaborar un cuadro con los datos obtenidos en la experiencia realizada,
donde se consigne: N°, mL de NaOH, pH, ∆mL, ∆pH, ∆pH/∆mL y T°C.
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Práctica 10
Titulación potenciométrica de una base débil
OBJETIVOS.
1. Obtener la gráfica del pH de la solución versus el volumen gastado de
solución titulante.
2. Realizar la gráfica de la primera derivada versus el volumen gastado de
solución titulante.
3. Determinar de forma gráfica el punto final en una valoración potenciométrica
utilizando datos de pH y volúmenes de la solución valorante normalizada.
FUNDAMENTO.
Una de las aplicaciones analíticas de la potenciometría es la medición del
potencial de una pila en el curso de una valoración, empleando la variación de
potencial para localizar el punto final. En el caso de una valoración ácido-base
se sigue la variación del pH; éste es definido en términos de la f.e.m. de la celda
E, como sigue:
(E - E 0 ) F
pH = pH 0 +
2.3026 RT
donde: pH0 y E0 son, respectivamente, el pH y la f.e.m. de una solución modelo
amortiguadora, F es el Faraday y R y T conservan su significado acostumbrado.
En la región del punto de equivalencia hay cambios de un céntuplo o mayores
en la concentración de las especies químicas involucradas, por lo que la
f.e.m. cambiará bruscamente permitiendo establecer con precisión el punto
final.
En el caso de titulaciones de ácidos y bases en medio acuoso para que los
análisis sean precisos deben ser satisfechos dos requisitos:
1. El ácido o base debe ser apreciablemente más fuerte que el agua como un
ácido o una base, respectivamente, y
2. La concentración del ácido o la base debe ser suficientemente mayor que la
del hidrógeno o (esencialmente) los iones hidroxilo del agua.
Una base débil reacciona en forma incompleta con un ácido fuerte y en el punto
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EQUIPOS Y REACTIVOS.
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PROCEDIMIENTO.
1. Calibrar el pH-Metro con las soluciones buffers o tampón de pH conocido.
2. Disolver 75 mg de bicarbonato de sodio, pesados exactamente en 20 mL de
agua destilada en un vaso de precipitación de 50 mL, agregar dos gotas de
indicador anaranjado de metilo, introducir la barra magnética y llevar todo
sobre el agitador magnético.
3. Sumergir el electrodo teniendo en cuenta que la barra magnética no lo roce
al girar y agitar moderadamente, en tales condiciones cuando la señal de
variabilidad en el DISPLAY desaparezca registrar el pH. Debe haber
suficiente solución, en todo tiempo, en el recipiente en el que se está
realizando la titulación, para cubrir la porción sensible de los electrodos.
4. Cargar la bureta con 25 mL de H2SO4 0.1N estandarizado, empezar la
titulación y registrar el pH cada vez que se agrega el ácido. Inicialmente,
pueden agregarse grandes proporciones de solución titulante (posiblemente
5 mL); pero cerca del punto de equivalencia, las cantidades deben reducirse
a 0.1 o 0.05 mL y tener un volumen idéntico si va a hacerse una gráfica
ΔpH/ΔV, a fin de obtener la máxima precisión al obtener varios puntos en esa
región; mientras más grande sea la pendiente en el punto final, más
pequeños deben ser los incrementos.
5. Después de cada adición, debe permitirse un tiempo breve para obtener la
mezcla y la respuesta. La magnitud del período dependerá fuertemente de
factores tales como la velocidad de agitación, el volumen de la solución, la
ubicación del electrodo indicador y la naturaleza del punto de contacto.
Posiblemente 30 segundos sea un margen apropiado para lograr el equilibrio
en la mayoría de las titulaciones manuales. Una regla razonable es, esperar
hasta que la lectura de pH no cambie más de 0.02 de unidad de pH por
minuto.
UTILIZACIÓN DE DATOS.
1. Elaborar un cuadro con los datos obtenidos en la experiencia realizada,
donde se consigne: N°, mL de H2SO4, pH, ∆mL, ∆pH, ∆pH/∆mL y T°C.
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Práctica 11
Cromatografía en columna CC
OBJETIVOS.
1. Introducir en las sofisticadas técnicas de cromatografía líquida de alta
resolución (HPLC) y cromatografía de gases (GC).
2. Utilizar las técnicas de separación de cromatografía líquida en capa fina y
columna.
3. Separar de los componentes de un extracto fluido preparado en el laboratorio.
FUNDAMENTO TEÓRICO.
La cromatografía en columna es la técnica de separación e identificación de
sustancias químicas, por la diferente retención que experimentan los
componentes de una mezcla, al ser más o menos adsorbidos por los
componentes de una fase fija situada en una columna, cuando son arrastrados
por un fluido (fase móvil). Si la fase móvil es líquida hablamos de cromatografía
líquida y si es gas será cromatografía de gases. El adsorbente, suele ser gel de
sílice o alúmina, pero pueden ser otros. Intervienen los fenómenos de adsorción
y disolución, por consiguiente, es fundamental tener en cuenta la polaridad, tanto
de las sustancias a arrastrar como del disolvente, si queremos tener una buena
separación.
El disolvente al descender arrastra las sustancias a distinta velocidad según la
mayor o menor retención que experimenten, y salen de la columna a distinto
tiempo. La técnica, en forma generalizada, comprende:
Preparación del disolvente.
Preparación de la columna.
Desarrollo del cromatograma.
Estudio del tiempo de retención.
Revelado de las sustancias separadas, si no son visibles.
El tiempo de retención es un parámetro útil porque es constante cuando se
reproduce el experimento en todas las condiciones, se pone en tablas y sirve
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PROCEDIMIENTO.
Preparación de la columna
Se toma una bureta como columna, se sujeta en el soporte con las pinzas. Se
engrasa la llave y se mantiene en posición de cerrado. Se introduce hasta el
fondo un pequeño trozo de algodón ayudándose con la varilla de vidrio, se
agregan 3 ml del eluyente más apropiado encontrado en la cromatografía en
capa fina y se presiona suavemente el algodón para que quede bien colocado y
sin burbujas, se prepara una suspensión de 7,5 g de Sílica Gel 60, 230-400 mesh
en 25 mL del eluyente apropiado y se agita durante 5 minutos para eliminar las
burbujas. A través del embudo se vierte la suspensión en la columna golpeando
ligeramente con los dedos para que el empacado sea uniforme. Se abre la llave
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UTILIZACIÓN DE DATOS.
1. Dibujar o fotografiar claramente en la columna cromatográfica las
separaciones coloreadas de los componentes del extracto fluido de corteza y
tallo.
2. Realizar esquemas de las distancias recorridas cada intervalo de tiempo (20-
25 minutos) de los componentes separados del extracto fluido de corteza y
tallo.
3. Identificar el tiempo de retención de cada fracción separada.
4. Separar, rotular e identificar en viales los componentes de cada fracción para
su posterior caracterización.
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Práctica 12
Determinación de Acetaminofeno en tabletas
por HPLC
OBJETIVOS.
1. Identificar un ingrediente farmacéuticamente activo: Acetaminofeno en
tabletas, mediante cromatografía liquida de alta performancia o HPLC.
2. Determinar el contenido de un ingrediente farmacéuticamente activo:
Acetaminofeno en tabletas, por cromatografía líquida de alta performancia o
HPLC.
FUNDAMENTO.
La cromatografía en columna brinda la posibilidad de identificar y cuantificar los
componentes de una mezcla si previamente se ha establecido los requisitos para
una óptima resolución o separación; esto implica entre otras operaciones pre y
pos cromatográficas, establecer la fase móvil y flujo adecuado.
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PROCEDIMIENTO.
1. Fase Móvil: Preparar una cantidad adecuada de una mezcla desgasificada
de metanol en agua ultrapura (1:3).
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1000 C ( ru / rs )
UTILIZACIÓN DE DATOS
1. Identificar el tR para el acetaminofén en el cromatograma del Estándar y la
Muestra. Asimismo, comparar los tiempos de retención si se corresponden
entre sí.
2. Determinar el contenido en porcentaje de acetaminofeno en las tabletas
analizadas.
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