Universidad Católica De Santa María

Facultad De Ciencias Farmacéuticas Bioquímicas Y Biotecnológicas

P.P. De Ingeniería Biotecnológica
Inmunología practicas

INFORME DE FAGOCITOSIS IN VITRO

Elaborado por: Santibáñez C. Jhon J.

1. INTRODUCCION:

Varias células tienen la capacidad de ingerir partículas, sin embargo, sólo los leucocitos
polimorfonucleares neutrófilos (PMNs) y los macrófagos (MFs) lo hacen “de manera profesional” y
esta es su principal función. Las etapas de la fagocitocis comprenden la quimiotaxis, la adhesión, la
endocitosis (la cual se optimiza por la opsonización de las partículas, principalmente por el
complemento y anticuerpos), y los cambios físicos y bioquímicos intracelulares que capacitan a los
fagocitos para endocitar, matar y digerir a los microorganismos: el incremento en el metabolismo
general de las células, la formación del fagosoma, la interacción del fagosoma con endosomas y
lisosomas para formar el fagosoma maduro (fagolisosoma), la acidificación del fagolisosoma, la
formación de metabolitos reactivos del oxígeno y del nitrógeno, la activación de las hidrolasas
lisosomales, y finalmente la expulsión del material de desecho mediante el proceso de la
exocytosis En la presente práctica se realizará una infección in vitro con un cultivo de Candida sp y
muestra sanguínea para ver la capacidad de fagocitosis de los neutrofilos y monocitos frente a
levaduras.

2. MATERIALES

2.1 Biológico  Tubos de 15 ml

 Cultivo fúngico  Asa de Cohle
 Voluntario para la  Placas Petri
extracción de Sangre  Lamina portaobjetos
2.2. Equipo  Cubreobjetos
 Pipetas Pasteur  Microscopio óptico
 Micropipetas y puntas
de 50 ul
3. METODOLOGIA:

1. Preparar una suspensión de C. albicans que se corresponda con el tubo N°3 en la

escala de McFarland.
2. Extraer 2ml de sangre en un tubo con heparina agitar.
3. Posteriormente, en un tubo estéril aparte agregamos 0.5 ml de la sangre heparinizada
y 0.5 ml de la suspensión de C. albicans (relación 1:1).
4. Homogeneizar y colocar en la estufa a 37°C durante 30 minutos.
5. Agitar cada cinco minutos.
6. Sacar el tubo de ensayo de la estufa y realizar un frotis en una lámina portaobjetos.
7. Colorear la lámina con tinción de Wright.
8. Observar al microscopio óptico bajo lente de inmersión 100X
4. Resultados

• Hacer un esquema de los pasos seguidos para desarrollar la práctica.

• Colocar una foto de la fagocitosis observada.
• Reportar el número de neutrófilos que se vieron fagocitando y el numero C. albicans en su interior.
5. Cuestionario

1. Describe a través de un gráfico los pasos de la fagocitosis

2. ¿Cómo se pueden clasificar las actividades antimicrobianas en la fagocitosis?

I. Mecanismos dependientes de oxígeno:

A. intermediarios reactivos de oxígeno (ROI)
B. intermediarios reactivos de nitrógeno (RNI)
II. Mecanismos independientes de oxígeno: proteínas antimicrobianas preformadas:
A. péptidos catiónicos como las defensinas
B. catepsina G (proteinasa neutra)
C. lisozima
D. lactoferrina (secuestra Fe y altera las proteínas de Fe

3. ¿Cómo participan el complemento y los anticuerpos en la opsonización?

La opsonización por anticuerpos es el proceso por el que se marca a un patógeno para su

ingestión y destrucción por un fagocito, El complejo receptor-opsina también puede crear
otros productos como las proteínas del sistema del complemento, estos componentes se
depositan en la superficie celular del patógeno y contribuyen a su destrucción y a través
de anticuerpos se puede decir que se puede destruir la célula por un proceso denominado
citotoxicidad.