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JUSTIFICACIÓN
2
3
INDICE DE PRÁCTICAS
Página
Líquidos....................................................................................... 21
Práctica No 5 Sembrado en placa de microorganismos
del medio
ambiente..................................................................... 28
Práctica No 6 Aislamiento de Hongos mediante el
método extensión en
placa.......................................................... 32
Práctica No 7 Aislamiento de bacterias mediante el
método sembrado en placa por
estrías........................................ 35
Práctica No 8 Manejo y uso del microscopio
óptico Compuesto……………………………………………………
3
4
RECOMENDACIONES GENERALES
4
5
5
6
17.- Lávese las manos con agua y jabón antes de salir del
laboratorio.
18.- Es obligación de cada equipo entregar todo el material limpio.
6
7
Azul de metileno
5.0 gr
Agua destilada
100 ml
B) SOLUCION DE LUGOL
FORMULA
Yoduro de potasio 10.0
gr
Agua destilada
20.0 ml
Yodo metálico 5.0
gr
Etanol, aforar a
100.0ml
PREPARACIÓN:
1.- Disolver el yoduro de potasio en el agua
2.- Agregar el yodo metálico y disolver
3. Aforar a 100 ml con etanol
D) COLORANTE SAFRANINA
FORMULA
Safranina
0.5 gr
7
8
Agua destilada
100.0 ml
PREPARACIÓN
Disolver la safranina en aproximadamente 20 ml de agua, después
aforara a 100 ml con más
agua.
4.- REACTIVOS DE LA TÉCNICA DE ZIEHL- NEELSEN
A) COLORANTE FUCSINA FENICADA
FORMULA:
Fucsina básica 5.0 gr
Fenol 25.0 grs
Etanol al 95% 50 ml
Agua destilada aforar a 500 ml
PREPARACIÓN
1.- Colocar el fenol en 100 ml de agua destilada y calentar en baño a
ebullición
2.- Añadir la fucsina básica y disolver
3.- Añadir el etanol y mezclar
4.- Aforar la solución a 500 ml con agua destilada
Dicromato de potasio
20.0 gr
Ácido sulfúrico concentrado
20.0 ml.
Agua destilada
250.0 ml.
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9
Práctica No 1
Nombre Del Alumno:__________________________________Semestre______
Grupo______
Nombre del
titular_____________________________________Fecha____________________
Nombre del Profr. de Laboratorio__________________________________
Calif:__________
OBJETIVO:
SUSTANCIAS QUIMICAS
MATERIAL
Detergente Extran
Matraces
Agua destilada Tubos
de ensaye
Horno a 170·C Pipetas
Termómetro Cajas de
petri
Papel
estraza
Algodón
Escobillones
INTRODUCCION.
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PROCEDIMIENTO
A) CAJAS DE PETRI
10
11
B) PIPETAS
Introduce una pequeña porción de algodón en el cuello de la pipeta,
procurando que quede lo suficientemente apretada. Con tiras de papel de 3 cm
de ancho envuélvelas, comenzando por la punta y en forma de espiral gira
hacia arriba hasta el final de la pipeta.
C) TUBOS DE ENSAYE.
Se toma el tubo con la mano izquierda y con la derecha el tapón de algodón.
Coloca algodón en la boca del tubo a 1/5 parte de la longitud del mismo
procurando que quede bien apretado, deposítalos en recipientes adecuados,
tápalos con papel estraza y átalos.
D) MATRACES.
Tapa el cuello del matraz con algodón, lo suficientemente apretado para
evitar que se destape ( se tapa en la misma forma que el tubo). Como
protección coloca un gorrito de papel estraza y átalo con cinta.
E) MATERIAL METÁLICO
El asa de platino, tijeras, bisturí, material quirúrgico no es necesario
empacarlo para su esterilización.
11
12
6.- una vez alcanzada la temperatura de 160ºC en el horno con aire caliente
coloca todo el material
que se empacó y toma el tiempo de 2 horas para su esterilización
CUESTIONARIO:
5.- Qué finalidad tienen los tapones de algodón que se colocan en los extremos
de las pipetas y de los Matraces Erlen
Meyer__________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
6.- Qué desventaja tiene el utilizar la esterilización por calor seco en este
laboratorio?
________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
12
13
OBSERVACIONES
CONCLUSIONES
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
13
14
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
Práctica No 2
Nombre Del Alumno:_________________________________Semestre______
Grupo______
Nombre del
titular_____________________________________Fecha____________________
Nombre del Profr. de Laboratorio_______________________________
Calif:_____________
OBJETIVO:
MATERIAL
SUSTANCIAS
Reloj Agua de
la llave
Autoclave u olla de presión Extran
3 Soporte universal Alkox
2 mechero fischer
Material de cristalería limpio, seco y empacado
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15
Asa de platino
INTRODUCCIÓN
PROCEDIMIENTO
15
16
5.-Deja enfriar hasta que el manómetro marque cero. Abre la válvula de salida
de vapor, para expulsar el vapor restante. Abre el autoclave y retira el material
CUESTIONARIO.
1.- Cuál material se puede esterilizar por calor seco y cuál no. ¿Porqué?
_______________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
2.- Qué tipo de material se puede esterilizar por calor húmedo?
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
3.- A qué condiciones de temperatura y presión se destruyen todas las formas
vegetativas?
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
4.- A qué condiciones de temperatura y presión se destruyen las esporas?
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
16
17
OBSERVACIONES:
17
18
CONCLUSIONES:
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
Práctica No 3
Nombre Del Alumno:_________________________________Semestre______
Grupo______
Nombre del
titular_____________________________________Fecha____________________
Nombre del Prof. de Laboratorio_________________________________
Calif:___________
OBJETIVO:
MATERIAL
SUSTANCIAS
18
19
INTRODUCCIÓN
19
20
PROCEDIMIENTO:
1.- Leer las instrucciones del fabricante para cada medio de cultivo y pesar la
cantidad necesaria según el volumen requerido.
3.- No destapar las cajas de petri, sino hasta el momento que vayan a ser
utilizadas. Es conveniente colocarse un cubre bocas la persona que va a
realizar el vaciado y evitar hablar en todo momento para no contaminar el
medio de cultivo.
20
21
base de la misma caja mientras que con la mano derecha tomar el matraz
que contiene el medio de cultivo y realizar el vaciado de aproximadamente 15
ml. A 20 ml de Agar por caja procurando que no se forman burbujas, se
procede a tapar la caja inmediatamente
7.- Cuando se vayan a utilizar los medios de cultivo preparados, será necesario
secar las placas invertidas en estufa a 37 °C. Antes de realizar el sembrado de
microorganismos.
CUESTIONARIO
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
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________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
7.-Por qué la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y
Peptona?
___________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
__8.- Escribe la composición química para cada medio de cultivo que utilizaste.
Agar nutritivo
Miuller Hinton
OBSERVACIONES.
22
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CONCLUSIONES:
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
Práctica No 4
Nombre Del Alumno:_________________________________Semestre______
Grupo_______
Nombre del
titular_____________________________________Fecha____________________
Nombre del Prof. de Laboratorio_________________________________
Calif:___________
OBJETIVO:
MATERIAL SUSTANCIAS
3 Telas de asbesto
3 Tripies o soportes Universales
2 Mecheros Fisher
2 Agitadores Medio de cultivo para caldo
nutritivo
2 Vasos de precipitado de 250 ml Medio de cultivo para caldo
triptona
2 Espátulas Fenol al 5%
2 Vidrio de reloj
Tubos de ensaye 20 X 200 mm
Tapones de algodón
Autoclave u olla de presión
Papel estraza
Equipo para Baño María
INTRODUCCIÓN
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A) ASPECTO:
B) USO
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25
PROCEDIMIENTO:
1.- Leer las instrucciones del fabricante y pesar la cantidad necesaria según el
volumen de medio de cultivo requerido.
25
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CUESTIONARIO
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
2.- Qué tipo de nutrientes requieren los microorganismos para poder crecer en
un medio de cultivo?
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
3.- ¿ Cómo nos podemos dar cuenta que existió crecimiento de
microorganismos en un medio líquido? 4.-¿Cómo se manifiesta el crecimiento
de los microorganismos en un medio de cultivo sólido?
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
5.-¿Cuál es el elemento principal del medio de cultivo que favorece su
solidificación?
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
6.- De acuerdo a su uso ¿ Qué tipo de medios de cultivos podemos encontrar
en el mercado?
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
7.- Escribe dos ejemplos de medios selectivos encontrados en el laboratorio
en donde puedan desarrollarse los microorganismos
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
8,. Qué finalidad tiene guardar invertidos los medios de cultivo ya preparados
en las cajas de petri en el refrigerador o en la estufa de incubación?
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
9.- Escribe dos medios de cultivos que nos permiten determinar alguna prueba
bioquímica_____________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
_
OBSERVACIONES:
Dibuja todos los pasos del proceso de vaciado del Agar en cajas de petri
esterilizadas
26
27
CONCLUSIONES:______________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
_
Práctica No 5
Nombre Del Alumno:_________________________________Semestre______
Grupo_______
Nombre del
titular_____________________________________Fecha____________________
Nombre del Profr. de Laboratorio_________________________________
Calif:___________
OBJETIVOS
MATERIAL
3 cajas de Petri estériles preparadas con Agar nutritivo
Caja de hisopos estériles sin abrir toallas de papel
3 cajas de petri estériles preparadas con Agar sangre.
Cinta pegante
Marcador permanente o lápiz de cera
Un desinfectante con 70% de solución de alcohol, 10% de una solución
blanqueadora , jabón líquido Extran o alkox.
27
28
INTRODUCCIÓN
PROCEDIMIENTO
28
29
6. Esteriliza los hisopos usados con desinfectante y descártalos. Pon las cajas
en un lugar apartado y déjalas incubar a la temperatura de 37·C durante 24 a
48 horas. Limpia tu área de trabajo con la solución desinfectante y lava tus
manos.
7.- Repite todo el experimento utilizando Cajas de cultivo con Agar sangre sólo
que ahora selecciona otro Fomite que no hayas empleado
29
30
7. Después de que hayan pasado dos días, mira las cajas de Petri iniciales. No
la abras. A la vez examina las otras cajas de Petri sin abrirlas. Crea una tabla
que compare las cajas sembradas antes y después de limpiar el objeto (mira la
tabla de ejemplo). Asegúrate de indicar si los microbios crecieron en cada
siembra.
CUESTIONARIO
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
2.- Qué es in inóculo?
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
3.- Físicamente en un medio de cultivo de microorganismos cuando se dice
que no forma un cultivopuro?
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
4.- Qué tipo de técnica empleaste para la siembra de microorganismos?
________________________________________________________________________________
5.- ¿En cuál caja crecieron más y más grandes las colonias? ¿Por qué piensas
eso?
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
6.-¿Cómo es el patrón que observas en el tamaño y cantidad de colonias en
cada caja?
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
7.- ¿Cómo podemos controlar la contaminación microbiana?
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
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31
Siembra 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
Crecimient
o
Siembra 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
Crecimient
o
CONCLUSIONES___________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
__
Práctica No 6
Nombre Del Alumno:_________________________________Semestre______
Grupo_______
Nombre del
titular_____________________________________Fecha____________________
Nombre del Profr. de Laboratorio_________________________________
Calif:___________
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32
OBJETIVO:
INTRODUCCION
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33
PROCEDIMIENTO
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varilla . Permite que arda hasta que se queme todo el alcohol. Deja que la
varilla de vidrio se enfríe por un minuto
11.- Utiliza el brazo corto de la varilla para dispersar uniformemente la gota
de cada dilución sobre toda la superficie de cada placa de Agar inicia con las
diluciones 10-5
12.- Invierte la caja de petri, incúbala a temperatura de 37ºC por 24 horas.
CUESTIONARIO
34
35
OBSERVACIONES
Dibuja todo el proceso llevado a cabo para el aislamiento del cultivo puro de
microorganismo por extensión en placa, así como los resultados obtenidos al
cabo de 24 horas.
CONCLUSIONES
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
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Práctica No 7
Nombre Del Alumno:_________________________________Semestre______
Grupo_______
Nombre del
titular_____________________________________Fecha____________________
Nombre del Profr. de Laboratorio_________________________________
Calif:___________
OBJETIVO:
MATERIAL MATERIAL
BIOLÓGICO
INTRODUCCIÓN
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37
PROCEDIMIENTO:
37
38
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
GELOSA SANGRE
Para el aislamiento, cultivo y detección de actividad hemolítica de
Staphylococcus, Streptococcus y otros microorganismos fastidiosos. Se
observan colonias blancas casi grises, Grandes, convexas de consistencia
butirácea, Presentan bordes regulares. Se observa que Presenta hemólisis. Las
colonias en medio sólido son redondeadas, uniformes, Estos crecen
rápidamente a 37 C pero tienden a formar pigmentos mejor a temperatura
ambiente (20 C).
38
39
ESTAFILOCOCO S110
S110 Colonias blancas un poco amarillentas, Se observan colonias chicas,
convexas, De consistencia butirácea y bordes Regulares.
CUESTIONARIO:
39
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2.- Qué tipo de bacterias son encontradas con mayor frecuencia en nuestra
piel y que pretenden aislarse en esta práctica?
_____________________________________________________________________________
3.-¿ Qué finalidad tiene humedecer el hisopo con solución salina estéril?
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
4.- ¿Por qué no es recomendable utilizar el mismo hisopo para descargar en
las cinco cajas de petri con los medios ya preparados?
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
5.- ¿Por qué se recomienda enfriar el asa de platino en el medio de cultivo
ya preparado antes de realiza el sembrado por estrías de los
microorganismos?
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
6 ¿En qué cosiste el aislamiento por estrías?
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
7.- Después de haber incubado a 25·C por 48 horas describe las colonias obtenidas en cada
medio de cultivo utilizado
OBSERVACIONES:.
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41
CONCLUSIONES:
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
Práctica No 8
Nombre Del Alumno:_________________________________Semestre______
Grupo_______
Nombre del
titular_____________________________________Fecha____________________
Nombre del Profr. de Laboratorio__________________________________
Calif:__________
OBJETIVO
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42
INTRODUCCION.
El microscopio es el instrumento más frecuentemente utilizado y el más
útil en un laboratorio de microbiología, proporciona la amplificación o
agrandamiento que nos permite ver organismos y estructuras invisibles a
simple vista. Los microscopios permiten una amplia gama de amplificaciones,
desde cien veces a cientos miles de veces.
Las dos categorías de microscopios disponibles son los microscopios
ópticos y los microscopios electrónicos. Los microscopios ópticos utilizan un
sistema de lentes ópticas y comprenden los microscopios de campo claro,
campo oscuro, fluorescencia y contraste de fases. Los microscopios
electrónicos emplean haces de electrones en lugar de ondas de luz para
producir una imagen ampliada.
42
43
PROCEDIMIENTO
B)
1.- Centrífuga aproximadamente 10 ml de orina a 2,500 rpm durante 5
minutos.
2.- Desecha el líquido sobrenadante y procede a mezclar el sedimento urinario
3.- Coloca una gota del sedimento mezclado en el centro de un portaobjetos
limpio y seco
4.- Sobre el sedimento pon un cubreobjetos y observa con el objetivo de 40X
y 60X
C)
1.- En un tubo de 13 X 100mm coloca las tres cuartas partes de solución salina
fisiológica
2.- Con un aplicador de madera toma muestra de excremento de varias partes
de la muestra y deposítalo dentro del tubo con la solución salina, agita
uniformemente.
3.- En un portaobjetos limpio y seco, coloca una gota de muestra preparada en
los pasos anteriores
4.-Coloca un cubreobjeto sobre la preparación y observa en el microscopio con
objetivo 40X y 60X
43
44
2.- Con un palillo de madera toma una pequeña cantidad de muestra fecal y
deposítala en el portaobjetos mediante movimientos de rotación y extendiendo
la muestra por toda la gota
En el paso No 2 Puedes utilizar la muestra salina preparada en
el inciso C en lugar de la muestra de excremento en forma
directa
3.-Coloca un cubreobjeto sobre la preparación y observa en el microscopio
CUESTIONARIO:
1.- ¿Que es poder de resolución?
OBSERVACIONES.
Dibuja lo observado en los diferentes objetivos para cada
muestra que preparaste durante el experimento.
44
45
CONCLUSIONES
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
Práctica No 9
Nombre Del Alumno:_________________________________Semestre______
Grupo_______
Nombre del
titular_____________________________________Fecha____________________
Nombre del Profr. de Laboratorio_________________________________
Calif:___________
OBJETIVO
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46
MATERIAL
INTRODUCCION
PROCEDIMIENTO
TINCION DE CÁPSULA
A) METODO DE DUGUID
1.- Poner con el asa una gota pequeña de tinta china en el centro de un
portaobjetos limpio.
2.-Poner una gota de agua del mismo tamaño junto a la gota de tinta china
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CUESTIONARIO
5.- Investiga de qué está compuesta la capa de material mucosa que forma la
cápsula
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
47
48
OBSERVACIONES
CONCLUSIONES:
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
TINCIONES SELECTIVAS
Práctica No 10
Nombre Del Alumno:_________________________________Semestre______
Grupo_______
Nombre del
titular_____________________________________Fecha____________________
48
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OBJETIVO
El alumno aplicará la técnica de tinción específica para lograr observar en el
microscopio la pared celular y endoesporas en distintas muestras
bacteriológicas
MATERIAL
INTRODUCCIÓN
PARED CELULAR
Debajo de las sustancias extracelulares tales como las cápsulas o capas
mucosas y externas a la membrana citoplasmática está la pared celular que es
una estructura muy rígida y que da forma a la célula. El espesor de la pared
celular oscila entre 10 y 35 nm, sin embargo algunas paredes celulares son
considerablemente más gruesas.
Las paredes celulares bacterianas son esenciales para el crecimiento y la
división. Todas las bacterias poseen paredes celulares rígidas que protegen a la
célula de explotar en medios de baja presión osmótica.
Composición química de las paredes celulares.- Los peptidoglicanos
proporcionan a la pared celular una estructura rígida. Estos grandes polímeros,
están compuestos de tres clases de bloques estructurales: N- Acetil-
Glucosamina, Ácido N- Acetil-Murámico y un péptido que consta de cuatro o
cinco aminoácidos que son: L- alanina, D-Alanina, _D-Ácido Glutámico y Lisina.
Además contiene proteínas con polisacáridos, lipoproteínas y lipopolisacáridos
Propiedades y Funciones: 1= Brinda protección y resistencia a la bacteria frente
a los posibles cambios de presión osmótica del medio en el que se encuentra y
a la acción de ciertos agentes externos.2= Presenta Poros que actúan como
filtros, permitiendo el pasaje de agua y metabolitos esenciales.3= Presenta
49
50
PROCEDIMIENTO
A) TINCIÓN DE LA PARED CELULAR
1.- Prepara un frotis húmedo relativamente concentrado de Bacillus Suptillus
sobre un portaobjetos limpio . NO LO FIJES A LA FLAMA. Prepara otro con B.
cereus
2.-Antes de que la suspensión bacteriana se seque sobre el portaobjetos,
adiciónale la solución del ácido fosfomolíbdico cubriéndola por completo.
3.- Déjalo reaccionar 4 minutos.
4.- Inclina completamente el portaobjetos sobre el fregadero para eliminar
totalmente el ácido fosfomolíbdico
5.-Agrega el verde de metilo directamente sobre el frotis húmedo y déjalo
reaccionar 5 minutos.
6.- Lava suavemente en la llave. Es inevitable que al lavar en la llave, algo del
material se
desprenda del frotis, trata de minimizar el desprendimiento pero al mismo
tiempo lava bien, hasta que el agua ya no arrastre colorante.
7.- Seca al aire y después examina con aceite de inmersión
50
51
51
52
CUESTIONARIO
1.- Menciona dos funciones que tiene la pared celular en las bacterias
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
2.-¿Cuáles son los principales compuestos orgánicos de las paredes celulares?
_______________________________________________________________________________
3. ¿Qué característica y que color tiñeron las paredes celulares de las
bacterias que lograste observar?
_______________________________________________________________________________
4.- Investiga las diferencias de la pared celular de las bacterias Gram positivas
y Gram negativas
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
5.- Describe dos diferencias para distinguir a una endospora de una
exospora
_______________________________________________________________________________
6. ¿Qué característica y que color tiñeron las esporas observadas en las
distintas muestras
microbiológicas?
______________________________________________________________
________________________________________________________________________________
7.- Menciona algunos microorganismos capaces de producir esporas
________________________________________________________________________________
OBSERVACIONES
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53
CONCLUSIONES
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
TINCIÓN DE GRAM
Práctica No 11
Nombre Del Alumno:_________________________________Semestre______
Grupo_______
Nombre del
titular_____________________________________Fecha____________________
Nombre del Profr. de Laboratorio_________________________________
Calif:___________
OBJETIVO
MATERIAL
SUSTACIAS COLORANTES
Colorante violeta cristal de Gram
Solución decolorante alcohol acetona
53
54
Safranina de Gram
Yodo de Gram o lugol para gram
INTRODUCCIÓN
TINCION DE GRAM.
Tinción empleada en microbiología para la visualización de bacterias en
muestras clínicas. También se emplea como primer paso en la diferenciación
bacteriana. El examen con microscopio óptico de preparación con tinción de
Gram se emplea de rutina para determinar la forma de las bacterias. Las
formas comunes son cocos ( esféricas), bacilos (alargadas) y formas
espiraladas
Las bacterias pueden diferenciarse con esta tinción en dos grupos. Los
microorganismos Gram. positivos se tiñen de azul, mientras que
aproximadamente un tercio de los cocos, la mitad de los bacilos y todos los
organismos espira lados se tiñen de rojo y se dice que son
gramnegativos.
Las aplicaciones más comunes de la coloración de Gram son las
siguientes:
La presencia de cocos grampositivos agrupados sugiere estafilococos;
en cadenas sugiere estreptococos; en forma de lanceta a los diplococos
La presencia de diplococos gramnegativos son características de
especies de Neisseria
Los bacilos Gram. positivos grandes sugieren especies de Bacillus o
clostridium, los bacilos Gram. positivos pequeños sugieren especies de
Listeria o una de las corineiformes ( difteroides)
Los bacilos Gram. negativos son las bacterias mas comunes halladas
en los laboratorios clínicos e incluyen a Enterobacteriaceae, bacilos no
fermentados y especies de Haemophilus.
El valor diagnóstico de esta tinción es variable; normalmente permite una
buena orientación al microbiólogo para seleccionar las técnicas de cultivo más
adecuadas y también tiene valor en orientar hacia un diagnóstico etiológico, en
especial para instaurar un tratamiento inicial.
PROCEDIMIENTO
54
55
necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y
extender una gota de la suspensión bacteriana, que se toma con el asa
de siembra, directamente sobre el portaobjetos.
3. Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación
acercando el porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener
mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las células
pueden deformarse o romperse.
A) TINCIÓN DE GRAM
CUESTIONARIO
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
2.- ¿Con qué finalidad se fija la muestra de microorganismos en el porta
objetos?
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
55
56
9.- Menciona tres bacterias que tiñen Gram positivas y escribe la enfermedad
que causa cada una de ellas
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
OBSERVACIONES:
56
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CONCLUSIONES:
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
Práctica No 12
Nombre Del Alumno:_________________________________Semestre______
Grupo_______
Nombre del
titular_____________________________________Fecha____________________
Nombre del Profr. de Laboratorio_________________________________
Calif:___________
OBJETIVO:
MATERIAL:
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58
REACTIVOS
* Fucsina de Ziehl- Neelsen
* Azul de metileno
* Alcohol acidulado
INTRODUCCIÓN
Los microorganismos pertenecientes al género Mycobacterium se
caracterizan por tener una pared celular completamente diferente a las
restantes bacterias. La pared de las Mycobacterias posee un alto contenido de
lípidos que la hace impermeable a los agentes hidrofílicos, por lo tanto estos
microorganismos no se tiñen adecuadamente con los reactivos utilizados en la
coloración de Gram y no pueden ser clasificados como Gram positivos o
negativos. Las Mycobacterias son teñidas adecuadamente por el método de
Ziehl-Neelsen (Tinción Ácido-Rápida o Acid-Fast Stain) que utiliza como
solución decolorante una mezcla de etanol y ácido clorhídrico. Son bacilos
ácido-alcohol resistentes por lo que la tinción de Zieh1Neelsen es útil para la
coloración de estos microorganismos obtenidos de muestras clínicas o de
cultivo. Con esta tinción, los bacilos aparecen de color rojo brillante sobre un
fondo azul. Los bacilos tuberculosos son difíciles de teñir con la tinción de
Gram, y se observan como bacilos gram positivos con tinción irregular. Estos
microorganismos una vez coloreados son resistentes a la decoloración ácido-
alcohólica y por eso se denominan Bacilos Ácido Alcohol Resistentes
(BAAR). El género Mycobacterium incluye más de 100 especies que pueden
clasificarse en seis grupos desde el punto de vista bacteriológico, pero con
fines didácticos se dividen en tres apartados: Complejo tuberculosis. Incluye
las especies M. tuberculosis, Mycobacterium bovis (incluida la cepa BCG) y
Mycobacterium africanum, productoras todas ellas de tuberculosis. Se incluye
también Mycobacterium microti, productor de tuberculosis en rata Complejo
lepra. En el que se incluyen las especies M. leprae, productor de la lepra
humana, y Mycobacterium lepraemurium, que produce lepra en roedoresel. El
Mycobacterium leprae que es un parásito intracelular obligado que se
multiplica lentamente en células fagocitarias mononucleares como los
histiocitos de la piel y en las células de Shwan de los nervios Otras
Micobacterias. Micobacterias no comprendidas en los dos grupos anteriores.
Sólo algunas de ellas suelen ser patógenas, otras pueden ser patógenas
oportunistas y finalmente otras suelen ser saprofitas. Producen las
denominadas micobacteriosis las infecciones producidas por M. avium, M.
kansakii, M. fortuitum y M. chelonei son consideradas oportunistas y no
tuberculosas
PROCEDIMIENTO
58
59
CUESTIONARIO
OBSERVACIONES:
59
60
CONCLUSIONES:
________________________________________________________________________________
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Práctica No 13
Nombre Del Alumno:_________________________________Semestre______
Grupo______
Nombre del
titular_____________________________________Fecha____________________
Nombre del Profr. de Laboratorio_________________________________
Calif:___________
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OBJETIVO:
El alumno manejará las técnicas para observar el efecto de la presión
osmótica que ejerce el Cloruro de sodio y la Sacarosa sobre el
crecimiento microbiano
MATERIAL:
CEPAS: AGARES
Escherichia Coli * Agar sangre
Staphylococcus aureus * Agar Nutritivo
Klebsiella pneumoniae * Caldo nutritivo
INTRODUCCIÓN:
A) PRESIÓN:
La osmosis es la difusión a través de una membrana semipermeable que
separa a dos soluciones con distintas concentraciones de sustrato. El proceso
tiende a igualar la concentración de soluto a ambos lados de la memoran.
Cuando a ciertas células bacterianas se les suspende en una solución que
contiene una concentración elevada de cloruro de sodio (20%), el agua pasará
desde la región de menor concentración de sustancia disuelta ( el interior de la
célula tiene una baja concentración salina) a través de la membrana
citoplasmática que es semipermeable a la solución que rodea a la célula. Así la
célula se deshidrata produciéndose plasmólisis. Si las bacterias se colocan en
una solución que contiene menos del 1% de cloruro de sodio, el flujo de agua
se invertirá, es decir ocurrirá la difusión, ya que fluirá el agua desde la solución
externa al interior de la célula y originará la plasmotipsis. Dentro de la célula se
establece una presión osmótica a causa de la gran cantidad de agua que se
acumula allí, esta presión hará que se hinchen e incluso las células pueden
reventar. El mecanismo de inhibición microbiana es la plasmólisis: las células
se deshidratan y por lo tanto Son incapaces de metabolizar o crecer, pueden
morir o permanecer vivas pero en condiciones durmientes. Sin embargo
también existen microorganismos que requieren altas concentraciones salinas
y son denominadas halófilos, y los que requieren presiones osmóticas elevadas
se les conoce como osmófilos. La mayor parte de las bacterias pueden tolerar
una amplia gama de presiones osmóticas externas y fuerzas iónicas debido a
su capacidad de regular la osmolaridad interna y la concentración iónica. La
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PROCEDIMIENTO:
B) EFECTO DE LA SACAROSA
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CUESTIONARIO:
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2.- ¿Qué es plasmólisis y cuando ocurre?
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3.- ¿Qué sucedió con las bacterias al incrementar la concentración del NaCl y
sacarosa en los distintos caldos nutritivos?
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4.- ¿Qué nombre reciben las bacterias que soportan grandes presiones
osmóticas?
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5.- ¿Quién es el responsable en la célula bacteriana controlar la presión en
medios hipotónicos?
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6.- ¿Cuándo se establece un medio hipotónico?
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RESULTADOS:
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OBSERVACIONES
CONCLUSIONES:
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Práctica No 14
Nombre Del Alumno:_________________________________Semestre______
Grupo_______
Nombre del
titular_____________________________________Fecha____________________
Nombre del Profr. de Laboratorio__________________________________
Calif:__________
OBJETIVO
MATERIAL
INTRODUCCIÓN:
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PROCEDIMIENTO
1.- Colocar en una gradilla una serie de 4 tubos de 13 X 100 para cada tipo
de bacteria a estudiar
3.- Marcar cada tubo con el nombre de la cepa que se va a estudiar.
4.- Anotar en cada tubo las temperaturas siguientes testigo, 37·C, 70·C,
y ebullición
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1.- Colocar en una gradilla una serie de 4 tubos de 13 X 100 para cada tipo de
bacteria a estudiar
2.- Marcar cada tubo con el nombre de la cepa que se va a estudiar
3.- Anotar en cada tubo los tiempos que se indican a continuación: Testigo, 5
minutos, 15 minutos, 30 minutos
4.- colocar en cada tubo 0.5 ml de la suspensión bacteriana que preparaste con
agua, jugo de naranja y puré de tomate a estudiar
5.- Calentar en baño maría a 70·C para todos los tubos y respetando los
tiempos indicados ( el tubo testigo NO SE CALIENTA)
6.- Vaciar el contenido de cada tubo sobre la superficie de una placa de Agar
nutritivo y
homogeneizar por rotación sobre la mesa o extensión con varilla de vidrio
doblado a 90 grados
7.- Incubar las placas a 37·C durante 24- 48 horas
8.- Observar si presenta o no crecimiento
CUESTIONARIO:
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4.- ¿En qué consiste el tiempo térmico letal?
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7.- ¿Qué muestras después de la incubación reporta el tiempo óptimo para la
destrucción de las bacterias en los distintos diluyentes?
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RESULTADOS:
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OBSERVACIONES:
Dibuja los pasos que seguiste para la realización de la práctica
CONCLUSIONES:
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INHIBIDORES BACTERIANOS
Práctica No 15
Nombre Del Alumno:_________________________________Semestre______
Grupo_______
Nombre del
titular_____________________________________Fecha____________________
Nombre del Profr. de Laboratorio_________________________________
Calif:___________
OBJETIVO:
El alumno manejará algunas técnicas para poner de manifiesto la
actividad de los antibióticos sobre el crecimiento microbiano.
MATERIAL:
Cajas de petri con medios de cultivo Muller-Hinton, o Agar nutritivo
Asa bacteriológica
Mechero Fisher
Sensidiscos ( antibiogramas)
Fenol al 5%
SUSTANCIAS BIOLÓGICAS
Cultivo de en caldo nutritivo de 24 horas de Bacillus subtilis ( lactó bacilos)
Cultivo de 24 horas Staphylococcus aureus en manitol sal Agar (msa)
Cultivo de 24 horas de Escherichia Coli en medio Macconkey
INTRODUCCIÓN:
ANTIBIÓTICOS
Son sustancias capaces de destruir y eliminar los microorganismos causantes
de una infección producida por bacterias (faringitis, bronquitis, otitis,
neumonía, amigdalitis, etc). No son eficaces cuando la infección es producida
por virus (gripe).
Cada tipo de antibiótico será efectivo para destruir una clase de
microorganismos en función de su modo de actuación..Se les llama antibióticos
de amplio espectro a los que son efectivos frente a un gran número de agentes
microbianos: los microorganismos causantes de la infección son capaces de
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ANTIBIOGRAMAS
Para estudiar la sensibilidad de un microorganismo por técnicas de
difusión se dispone de dos sistemas, el de discos de papel impregnados con el
antibiótico y las tabletas, consistentes en una suspensión del antibiótico
liofilizada y comprimida en material inerte. Los fabricantes recomiendan
conservar los discos a –20 °C para largos periodos o entre 2 y 8 °C si se utilizan
en el plazo de una semana. Por el contrario, las tabletas se han considerado
más estables, pudiéndose almacenar a temperatura ambiente y manteniendo
su actividad más tiempo que los discos .Por lo que respecta a la temperatura
de conservación, al comparar para cada antibiótico los diámetros de los halos
de inhibición de los discos conservados entre 4 y 6 °C con los conservados a
temperatura ambiente no se encontraron diferencias significativas a lo largo de
todo el estudio; tampoco se encontraron diferencias al comparar los halos de
las pastillas conservadas entre 4 y 6 °C con las conservadas a temperatura
ambiente, de modo que tanto los antibióticos que permanecieron estables
durante el tiempo del estudio como los que disminuyeron su actividad lo
hicieron de modo paralelo a ambas temperaturas
PROCEDIMIENTO:
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CUESTIONARIO
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5.-Escribe dos Fuentes naturales de donde se puedan obtener los antibióticos
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6.-Según los resultados de tu práctica . ¿Qué medicamentos puedes utilizar
para destruir y eliminar a los microorganismos como: Staphylococcus y
Escherichia Coli?
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OBSERVACIONES
CONCLUSIONES
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BIBLIOGRAFÍA
5) http://html.rincondelvago.com/biologia_41.html
6) http://html.rincondelvago.com/tincion-de-gram.html
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