“UNIVERSIDAD NACIONAL JOSE FAUSTINO SANCHEZ CARRION”

PRACTICA N° 2
PREPARACION Y ESTERILIZACION DE MEDIOS DE
CULTIVO

ASIGNATURA: Microbiología Ambiental

TEMA: Preparación y esterilización de medios de cultivo

DOCENTE: Huaynas Dueñas

INTEGRANTES:

 AIRE BAZAN, Sadai Gimena

 AYALA SALAZAR, Denis Ronaldo
 HERNANDEZ CHOQUE, Verónica
 MELGAREJO CARBAJAL, Édinson Víctor
 RAMOS CHAVEZ, Karen Janel
 SANCHEZ SANTIAGO, Jhonatan Junior
 SANCHEZ JURADO, Danithsa Ivett
 SALINAS MANSILLA, Carlos Mauricio
 TORIBIO OYOLA, Adán Jesus
 TORIBIO OYOLA, Hermes

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 Practica n°2
PRACTICA DE ESTERILIZACION DE MEDIOS DE CULTIVO
1) OBEJTIVO

I. EL objetivo de esta práctica es conocer y familiarizarse con algunos medios de

cultivos que nos permiten separar e identificar algunos organismos a partir de
muestras biológicas
II. Aprender a realzar el debido procedimiento de esterilización de materiales, la
preparación y separación de los medios de cultivos en tubos o placa Petri que
se va a utilizar

2) FUNDAMENTOS

I. El reconocimiento de los microorganismos son organismos microscópicos

capaces de llevar a cabo todas las funciones vitales, con organización unicelular
y capacidad de formar agrupaciones simples de células.
II. Aislamiento de microorganismos. Para obtener un cultivo puro es necesario
desarrollar técnicas que permitan el aislamiento de las células de una mezcla
inicial, de forma que la división asexual de cada célula individual genere una
colonia observable en medios sólidos.
III. Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos
es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en
el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es
el Medio de Cultivo.
IV. Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de
contener, como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas.
En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias
inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias
adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las
reacciones químicas que tengan lugar.
V. Los medios de cultivo se agrupan de acuerdo a:
 Su estado líquido o solido :
Una forma muy útil de poder aislar, identificar y conservar los
microorganismos es mediante el uso de medios de cultivo, inicialmente
ideados por Pasteur (que como ya sabemos se considera el padre de la
microbiología), quien se dio cuenta que los microorganismos podían
crecer en soluciones que tuvieran azúcar y una fuente de nitrógeno.
VI. Esterilizar
 Es el proceso mediante el cual se alcanza la muerte de todas las formas
de vida microbianas, incluyendo bacterias y sus formas esporuladas
altamente resistentes, hongos y sus esporos, y virus. Se entiende por
muerte, la pérdida irreversible de la capacidad reproductiva del
microorganismo.
  Calor húmedo: auto clave , olla a presión
 Calor seco: horno de aire caliente.
 Desinfección intensiva por inmersión: con productos químicos
VII. Un autoclave es un recipiente metálico de paredes gruesas con cierre hermé-
tico que permite trabajar con vapor de agua a alta presión y alta temperatura
que sirve para esterilizar material médico o de laboratorio.
VIII. La autoclave inactiva todos los virus y bacterias, aunque se ha llegado a saber
que algunos microorganismos, así como los priones, pueden soportar las
temperaturas de la autoclave.
IX. Control biológico: Es el método de prueba más aceptado actualmente. Se realiza
con esporas del Geobacilo Stearothermophilus, que es el microorganismo más
resistente al calor.
X. Las pipetas milimétricas y. Pasteur. Se colocan en tubos amplios que se taparan
inmediatamente después. también se pueden envolver con varias envolturas de
papel kraft.
XI. La esterilización por calor seco produce la destrucción de los microorganismos
por oxidación de sus componentes celulares. Éste es un proceso menos
eficiente que la esterilización por calor húmedo, porque los microorganismos
mueren con mayor rapidez cuando se encuentran en presencia de agua, ya que
éste permite que se altere con mayor facilidad la configuración de sus proteínas
y proporciona un medio para distribuir el calor uniformemente en toda la
cámara interna del equipo de esterilización.
XII. El principal método de esterilización que emplea calor húmedo es la
esterilización por vapor a presión. Existen otros métodos de descontaminación
que emplean este tipo de calor los cuales, aunque no permiten la destrucción
total de los microorganismos, disminuyen la carga microbiana que posee un
material.

3) MATERIALES
 Medios de cultivos a utilizar ( Agar Nutritivo, Agar Mac Conkey
 Balanza analítica o mecánica
 Espátulas o cucharas plásticas
 Agua destilada
 Erlenmeyers de vidrio pyrex de 250ml de capacidad
 Probeta de vidrio Pyrex de 100ml de capacidad
 Algodón hidrófilo
 Papel Kraft
 Papel manteca
 Ovillo de pabilo
 Autoclave u olla a precio
 Horno o estufa eléctrica
 Placas Petri o tubos de ensayo limpios estériles
 Mechero de alcohol
4) PROCEDIMIENTOS
I. Se procedió con el reconocimiento de materiales tanto como los de vidrio y los
tipos de papel ( Kraft . manteca )

II. Se pasó a medir y a cortar el papel Kraft para cada uno de los materiales de
vidrio que se van a esterilizar con el autoclave en este caso olla a presión
III. Antes de proceder a envolver los respectivos materiales, con el algodón se
procedió a prepárale un corcho a cada envase de vidrio.

IV. Después de los procedimientos ya antes mencionados se procedió a envolver

los materiales con el papel Kraft de una manera diferente por cada
material.(en caso de la pipeta se procedió hacer una tira y envolver en un
Angulo de 45° )
 V. Para luego todos los materiales envueltos asegúralos con el pabilo o con los
dobles necesario.

VI. Luego se lleve a la olla a presión para su posterior esterilizado

VII. Se realizó el pesaje del medio de cultivo utilizando una balanza mecánica y
utilizado el papel manteca ya que debido a su textura este materia no retendrá
los granos del medio de cultivo
VIII. Se midió la cantidad de agua oxigenada para el preparado y para ingresar al
Erlenmeyers de vidrio. I se ingresó el medio de cultivo

IX. Se procedió a cubrir el medio de cultivo con el papel Kratf y el corcho de

algodón
X. Después de asegurar el envase se procedió a llevar al autoclave u olla de
presión
5) CONCLUSIONES:

I) Que el proceso de esterilización tiene que salir satisfactorios ya que las los
recipientes de la muestra tienes que estar sumamente esterilizada para que no
pueda contaminar las muestras
II) Las muestras bilógicas a analizar debe ser manipuladas con las medidas
necesarias para poder evitar el contagio o la propagación, debido a que son
muestras biológicas de bacterias
III) Que los cultivos para los microorganismos se manipulan con seguridad
6) CUESTIONARIO

¿Defina lo que es un medio de cultivo y mencione los componentes del mismo?

Son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones

físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Son esenciales en el
Laboratorio de Microbiología por lo que un control en su fabricación, preparación,
conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los
resultados obtenidos.
Los componentes de un medio de cultivo dependen del microorganismo que se
pretende cultivar y de la finalidad del cultivo. A continuación se describe que es general
la necesidad de utilizar: agua, sustancias orgánicas y sustancias inorgánicas. Los medios
de cultivo sólidos llevan además un agente solidificante.

¿Clasificación de los medios de cultivos, explique brevemente y ponga

ejemplos?

SEGÚN SU ESTADO FISICO

- Medios Líquidos: se utilizan preferentemente para favorecer el desarrollo
bacteriano de células estresadas. En determinadas ocasiones no se pueden sustituir por
los medios sólidos, por ejemplo en la síntesis de exotoxinas, pigmentos, enzimas, etc. -
Ejemplo: Agua peptonada, Caldo común, Caldo Cerebro Corazón, Caldo Saboureaud,
etc.

- Medios Sólidos: se utilizan para obtener bacterias aisladas por la formación de

colonias sobre la superficie del medio de cultivo y para el estudio de la morfología de las
colonias, lo que no permiten los medios líquidos. Se diferencian porque tienen una
sustancia de sostén, que puede ser agar-agar. Ejemplo: Agar Común, Agar SS, Agar
Cerebro Corazón, Agar Saboureaud, etc.

- Medios Semisólidos: se utilizan para estudiar la motilidad de las bacterias.

Tienen un menor porcentaje de agar, por lo que no solidifican totalmente a la
temperatura ambiente. - Ejemplo: Agar MIO, Agar SIM.

SEGÚN SU UTILIDAD PRÁCTICA

- Medios corrientes: son aquellos medios apropiados para el cultivo y mantención
de la mayoría de las bacterias. Sirven de base para la preparación de los medios
especiales. - Ejemplo: Caldo común, Agua peptonada, Agar nutritivo, etc.

- Medios especiales: son aquellos medios de cultivo que por su riqueza nutritiva,
sirven para el cultivo de bacterias muy exigentes. Contienen en su formulación
sustancias inhibidoras para ciertas bacterias, que permiten el aislamiento y diagnóstico
precoz de aquellas bacterias que nos interesan por ser los agentes etiológicos de las
enfermedades infecciosas. También pertenecen a este grupo aquellos medios que por
adicción de sustancias químicas determinadas, facilitan el diagnóstico por
características bioquímicas de algunas especies microbianas.

SEGÚN SU ORIGEN
- Naturales: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal
o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se
conoce exactamente.

- Sintéticos: son los medios que contienen una composición química definida cuali
y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.

- Semisintetico: son los sintéticos a los que se le añaden factores de crecimiento

bajo una forma de un extracto orgánico complejo, como por ejemplo extracto de
levadura.

¿Cuál es el gelificante usado en la formulación de un medio sólido, explique su

origen?

Agar: se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivos. En el
agar bacteriológico el componente dominante es un polisacárido que se obtiene de
ciertas algas marinas y que presenta la indudable ventaja de que a excepción de algunos
microorganismos marinos, no es utilizado como nutriente. Un gel de agar al 1-2% se
licua alrededor de los 100ºC y se gelifica alrededor de los 40ºC, dependiendo de su grado
de pureza.

Origen: El agar, cuyo nombre completo es agar-agar, fue descubierto por el japonés
Minora Tarazaemon, quien notó que una sopa de alga en un clima frío se solidificó en
una noche. Por esta razón, en Japón el agar es llamado Kanten o “cielo congelado”. A
partir de este momento el agar comenzó a ser usado por los europeos en la industria de
los alimentos. No fue hasta 1881 que se comenzó a usar el agar como un agente
solidificante en el cultivo de microorganismos. Walther Hesse, el asistente de Robert
Koch, fue quien sugirió el uso de agar para los cultivos, sin embargo, esto no puede
atribuírsele solo a él, ya que de hecho fue su esposa, Fannie, quien tuvo la idea de usar
el agar en el laboratorio

¿Describa 5 medios de cultivos, su composición, aplicación e interpretación del

crecimiento microbiano?

Agar sangre:
Es un medio enriquecido que se utiliza además para la investigación de los diversos tipos
de hemolisis. Se utiliza para el crecimiento de estreptococos. Para la preparación del
agar sangre se puede utilizar el agar nutritivo enriquecido con otras sustancias como
Columbia o el tripticase de soja. La adición de sangre a un medio de cultivo no
proporciona las sustancias que están en el interior de los hematíes, pero si puede añadir
factores inhibidores del crecimiento bacteriano presentes en el suero.
Agar S.S:
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de salmonella spp a partir de heces,
alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia.
Agar Hektoen: es un medio más diferencial y menos selectivo que el agar s.s. Se utiliza
para facilitar el aislamiento de las enterobacterias. La presencia de tres azucares
(lactosa, sacarosa y salicilina) permiten ampliar el poder diferencial de este medio. Este
medio es capaz de detectar los gérmenes formadores de SH2.

C.P.S. ID3:
Medio cromogenico desarrollado por Biomerieux, que permite la identificación de E.
Coli, P. Mirabilisy E. Faecalis, con la simple visualización del cambio de color de la colonia
sobre el medio (rojo burdeos, azulo marron).

Agar Mueller-Hinton:
Es un medio utilizado para realizar las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana en
microorganismos aeróbicos por el método de Bauer-Kirby.

¿Defina el proceso de esterilización?

La esterilización no debe entenderse como sólo una acción, sino, que como un proceso
donde cada una de sus etapas es importante y va a influir en los resultados. Estas etapas
deben ser supervisadas y evaluadas para garantizar el producto.
Para conseguir material estéril, se requiere una serie de procedimientos independientes
que son:
• Lavado/descontaminación,
• Inspección
• Preparación/empaque
• Exposición al método de esterilización,
• Almacenamiento y entrega.
Cada uno de estos procedimientos tiene importancia en el resultado, y si existen fallas
en cualquiera de ellos, el material no puede considerarse estéril aun cuando haya sido
sometido al proceso completo.

¿Explique los procesos de esterilización tanto con agentes físicos como

químicos?
Controles físicos o mecánicos: Aseguran el funcionamiento correcto del esterilizador y
que las condiciones internas de la cámara alcancen los parámetros de la esterilización.
Permiten detectar fallas en forma precoz. Ejemplo: Termómetro, registro de impresora,
pantalla informática.
Controles químicos: Elementos que sirven para monitorear uno o más de los parámetros
que intervienen en un ciclo de esterilización, confirmando que se han cumplido ciertas
condiciones necesarias en el proceso de esterilización.
Controles biológicos: Son unidades de contienen microorganismos cuya concentración
y resistencia ante un agente esterilizante es conocida, y que se pueda esperar que
mueran al ser expuestas a ciertos parámetros.
 7) BICBLIOGRAFIA

https://libroslaboratorio.files.wordpress.com/2012/09/medios-de-cultivo-en-un-laboratorio-
de-microbiologc3ada.pdf

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Esterilizaci%C
3%B3n_por_calor_seco.pdf

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Esterilizaci%C
3%B3n_por_calor_h%C3%BAmedo.pdf

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Esterilizaci%C
3%B3n_por_calor_h%C3%BAmedo.pdf

http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%2027.pdf