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Tinción de Gram
Procedimiento
Medios de cultivo
Una placa de agar, un ejemplo de crecimiento medio bacteriano. Las líneas y los
puntos naranjas son colonias bacterianas.
Un medio de cultivo es una técnica de laboratorio (véase microbiología) que
consta de un gel o una solución que contiene los nutrientes necesarios para
permitir, en condiciones favorables de pH y temperatura, el crecimiento
de virus, microorganismos, células, tejidos vegetales o incluso
pequeñas plantas. Según lo que se quiera hacer crecer, el medio requerirá unas
u otras condiciones. Generalmente se presentan desecados en forma de polvo
fino o granular antes de ser preparados; ya preparados pueden encontrarse en
estado sólido, semisólido o líquido. El objetivo último del cultivo es
variado: antibiograma, identificación, multiplicación.
Uno de los sistemas más importantes para la identificación
de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias
artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen
los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de
cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad
y presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o
alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de
crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante.
Los virus, por ejemplo, son obligados parásitos intracelulares, por lo que
necesitan un medio que contenga células vivas.
Clasificación:
Según sus cualidades física
líquidos
semisólidos
sólidos
Gaseosos
Según su origen
Naturales: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen
animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya
composición química no se conoce exactamente.
Sintéticos: son los medios que contienen una composición química
definida cualitativamente y cuantitativamente. Se utilizan para obtener
resultados reproducibles.
Semisintéticos: son los sintéticos a los que se les añaden factores de
crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo, como por
ejemplo extracto de levadura.
Según su formulación
Químicamente definidos: se conoce la cantidad exacta de cada uno de los
compuestos que hay en el medio.
Complejos: se realizan a partir de extractos naturales (extracto
de levadura, sangre, etc.); no se conoce exactamente cuál es la
composición del medio; sin embargo, presenta la ventaja de que ya están
presentes todos o casi todos los elementos que una célula puede requerir.
Según su uso
Medio general: medio en donde crecen todo tipo de microorganismos,
excepto los que necesitan condiciones especiales (por ejemplo, agar
CLED).
Medio selectivo: permite seleccionar el crecimiento de una especie o
grupo determinado (hongos, bacterias entéricas, protozoos...).
Medio diferencial: permite identificar una especie con otra, ambas en el
mismo medio. Puede ser por su crecimiento, su metabolismo,su
respiración, etc. (por ejemplo, medio de McConkey).
Medio de enriquecimiento: contiene los nutrientes necesarios para apoyar
el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, se utiliza para
la cosecha de diferentes tipos de microorganismos en un mismo medio.
Medio mínimo: contiene la mínima cantidad de nutrientes posible que
permite el crecimiento de una especie.
Medio de transporte: preparado para servir como almacenamiento
temporal a especímenes transportados o en transferencia; mantienen su
viabilidad y su concentración simple.
Conteo bacteriano
Generalmente, tras analizar un cultivo, se realiza un conteo bacteriano, con el fin
de saber cuál es la densidad de población microbiana que se encuentra en el
medio.
PCR (Reacción en cadena de la polimerasa)
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica de laboratorio que
permite amplificar pequeños fragmentos de ADN para identificar gérmenes
microscópicos que causan enfermedades.
PCR son las siglas por las que se conoce a la reacción en cadena de la
polimerasa (en inglés Polymerase Chain Reaction), una técnica científica
avanzada que fue inventada por el bioquímico estadounidense Kary Mullis en
1985. Esta técnica permite amplificar pequeñas regiones específicas del ADN en
laboratorio. Es decir, consigue que un pequeño segmento de ADN que pasaría
desapercibido en un análisis cualquiera se multiplique millones de veces y así
sea fácil de detectar.
Gracias a esta técnica se han podido realizar estudios genéticos en cualquier
campo de la ciencia. Por ejemplo, se utiliza diariamente para la identificación de
cadáveres o en el estudio de escenas del crimen para buscar rastros del
culpable. También se emplea en la biología, para identificar cadenas genéticas
de plantas, animales o, sobre todo, microorganismos. En la medicina se reúne la
experiencia de todos esos campos y se usa principalmente para identificar
gérmenes agresores que se encuentran en nuestro organismo.
Cuando se desarrolló la prueba de la PCR por primera vez se trataba de una
técnica cara y algo engorrosa de realizar, pero pronto se generalizó su uso y se
empezaron a desarrollar equipos sencillos y muy baratos que se utilizan todavía
hoy en muchos centros diagnósticos.
Además, se han diseñado PCR más específicas que se pueden elegir según sea
la muestra a estudio. Los diferentes tipos de PCR, además de la básica, son:
PCR anidada: consigue amplificar muestras mínimas de ADN a miles de
millones de fragmentos. Es capaz por lo tanto de detectar trazos
minúsculos.
PCR in situ: permite la detección de ADN en el mismo lugar de la muestra,
sin tener que procesarla primero con técnicas de laboratorio. Se suele
utilizar para biopsias o raspados de células.
PCR múltiple: con este tipo de PCR se consiguen detectar varios trazos
de ADN a la vez y con una sola muestra.
PCR con transcriptasa inversa: en este caso se utilizan cadenas de ARN
para detectar moldes de ADN. Se utiliza la enzima transcriptasa inversa,
la misma que utiliza el VIH entre otros virus.
PCR en tiempo real o PCR cuantitativa: se añade un componente
fluorescente que permite medir la luz. A más luz, más cantidad del ADN
detectado.
Prueba de tinción de yodo
Vista esquemática de una hélice de amilosa, con iones I 3− embebidos.
La prueba del yodo es una reacción química usada para determinar la presencia
o alteración de almidón u otros polisacáridos. Una solución de yodo
- diyodo disuelto en una solución acuosa de yoduro de potasio - reacciona
con almidón produciendo un color púrpuraprofundo.
Este tipo de prueba puede realizarse con cualquier producto que contenga
almidón como ser patatas, pan o determinados frutos.
Esta reacción es el resultado de la formación de cadenas de poliyoduro a partir
de la reacción del almidón con el yodo presente en la solución de
un reactivo llamado Lugol. La amilosa, el componente del almidón de cadena
lineal, forma hélices donde se juntan las moléculas de yodo, formando un color
azul oscuro a negro. La amilopectina,1 el componente del almidón de cadena
ramificada, forma hélices mucho más cortas, y las moléculas de yodo son
incapaces de juntarse, obteniéndose un color entre naranja y amarillo. Al
romperse o hidrolizarse el almidón en unidades más pequeñas de carbohidrato,
el color azul-negro desaparece. En consecuencia, esta prueba puede determinar
el final de una hidrólisis, cuando ya no hay cambio de color constituyendo una
evidencia experimental ampliamente utilizada.
La solución de yodo también reacciona con el glucógeno, aunque el color
producido es más castaño y mucho menos intenso.
Esta prueba se utiliza como indicador del grado de madurez de los frutos.
El fruto cuando está inmaduro contiene altas cantidades de almidón, que son
detectadas a través de la tinción con la prueba de almidón, apareciendo como
grandes zonas en el fruto teñidas de azul. Mientras que cuando un fruto esta
maduro, ese almidón se ha transformado en azúcares y por lo tanto no se tiñe
en la prueba.
En la industria, la hidrólisis del almidón es ampliamente utilizada para
producir glucosa a partir del almidón presente en la pulpa del fruto de banano
verde. El proceso consta de tres etapas:
1. Gelatinización:
Consiste en calentar los gránulos de almidón en agua y separar la amilosa de
la amilopectina. (Lixiviación).
2. Dextrinización:
Luego de la gelatinización del almidón, se procede a obtener polisacáridos de
bajo y alto peso molecular (maltodextrinas) aplicando una hidrolización parcial.
Las dextrinas también pueden experimentar cambio de coloración cuando
reaccionan con una solución de yoduro de potasio. La coloración obtenida va a
depender del grado de hidrólisis de la molécula, (en este caso se trata de
macromoléculas las cuales están conformadas por una cantidad importante
de átomos en su estructura).2
3. Sacarificación:
En esta etapa, se hidrolizan totalmente las maltodextrinas a glucosa,
completándose el proceso.3
En el procedimiento industrial anteriormente detallado, puede utilizase la prueba
de yodo para realizar seguimiento de las reacciones de hidrólisis. Cuando el
almidón se degrada totalmente a glucosa, ya no se obtiene la coloración azul
oscura que caracteriza a la reacción entre el almidón y la solución de yodo-
yodurada.
Introducción
https://es.wikipedia.org/wiki/Medio_de_cultivo
http://www.pv.fagro.edu.uy/fitopato/cursos/fitopato/practicas/Hipersensibilidad_
en_no_huesped.html
https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram
http://www.pv.fagro.edu.uy/fitopato/cursos/fitopato/practicas/tecnica_koh.html
http://www.pv.fagro.edu.uy/fitopato/cursos/fitopato/practicas/bacterias.html
https://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/pcr-13299
https://es.wikipedia.org/wiki/Prueba_del_yodo