OBTENCIÓN DE GLUCÓGENO DE HÍGADO DE RATA Y

SU CARACTERIZACIÓN QUIÍMICA

INTRODUCCION RESULTADOS

El glucógeno, es el principal polisacárido de almacena- Glucógeno obtenido: 0.25 g

miento de energía de las células animales. Su molécula
está formada por cadenas que pueden ramificarse de Porcentaje de glucógeno en hígado de rata:
moléculas de glucosa, en vertebrados se almacena
principalmente en el hígado, llegando a ser hasta el 10% (𝑔 𝑑𝑒 𝑔𝑙𝑢𝑐ó𝑔𝑒𝑛𝑜)
del peso del hígado, aunque otros tejidos como el % 𝑔𝑙𝑢𝑐ó𝑔𝑒𝑛𝑜 = 𝑥 100
(𝑔 𝑑𝑒 ℎí𝑔𝑎𝑑𝑜)
músculo pueden también almacenar pequeñas
cantidades de glucógeno, 1% del peso muscular o en (0.025 𝑔)
células glía, acompañantes de las neuronas, también se % 𝑔𝑙𝑢𝑐ó𝑔𝑒𝑛𝑜 = 𝑥 = 0.96%
(2.6 𝑔)
han detectado pequeñas cantidades. En células
hepáticas, el glucógeno se encuentra almacenado en
gránulos grandes que contienen además, unida en
Caracterización química del glucógeno
forma muy íntima, las enzimas responsables de su
síntesis. PRUEBA OBSERVACION

Biuret Negativo
Ninhidrina Negativo
Molish Positivo

Tabla 1. Caracterización química del glucógeno sin hidrolizar

Estructura general del glucógeno

La molécula de glucógeno está formada por glucosas

unidas entre sí mediante enlaces glucosídicos alfa 1-4,
es decir se unen dos glucosas a través del oxígeno de
los carbonos 1 y 4. De manera parecida las
ramificaciones se llevan a cabo mediante enlaces
glucosídicos alfa 1-6, de modo similar al que sucede en Imagen 1. Tubo testigo y Problema para cada una de las pruebas
la amilopeptina (como en el almidón). De esta manera de Biuret, Ninhidrina y Molish (de izquierda a derecha)
pueden unirse un gran número de glucosas,
normalmente las pequeñas ramificaciones cuentan con
entre 12 y 18 glucosas y las moléculas enteras pueden
llevar a contar con más de 100 mil monómeros de
Hidrolisis Acida Testigo Enzimática Blanco
glucosa. Una de las ventajas de las ramificaciones es
que aumentan los puntos por los cuales se pueden 1 2 4 Glucógeno Con 1:2 Agua
obtener las glucosas libres y además la presencia de las N N N sin
ramificaciones ayuda a solubilizar la molécula, de otra hidrolizar
manera insoluble y que forma coloides. Fehling + + + - + + -
Lugol - - - + - - -
OBJETIVOS Seliwanof + + + - + + -

Aplicar una estrategia para aislar, purificar y caracterizar Tabla 2. Caracterización química del glucógeno hidrolizado.
al glucógeno.

1

Imagen 2. Prueba de Fehling, tubos 1 al 7 de izquierda a
derecha.
Imagen 3. Prueba de Lugol, tubos 1 al 7 de izquierda a
derecha.
Imagen 4. Prueba de Seliwanoff, tubos 1 al 7 de izquierda a
derecha.
DISCUSIONES
 Obtención de glucógeno
Para la obtención de glucógeno se utilizó el hígado de
una rata y no el algún otro mamífero (pollo, res, pez,
etc.) ya que se conoce que el genoma de una rata tiene
más del 90% de coincidencia con el del humano,
además de que todos los genes humanos conocidos por
su vinculación a enfermedades tienen su equivalente en
la rata. También las ratas son pequeñas y es fácil su
manipulación, y su periodo de gestación es de sólo 20
días. Hay ciertos factores que afectan la cantidad de
glucógeno que se produce en el hígado de las ratas,
como su edad, sexualidad y su dieta, la rata que
utilizamos en el laboratorio era macho con 4 semanas y
una dieta rica en carbohidratos (una dieta rica en estos
compuestos provoca que se genere más glucógeno).
Primeramente se sacrificó a la rata, teniendo cuidado de
no estresarla (asustarla, incomodarla, etc.), ya que si se
estresa se libera adrenalina, la cual activa a la enzima
alfa-amilasa que a su vez actúa al hidrolizar al
glucógeno en el hígado y por lo tanto se libera glucosa.
Una vez sacrificada la rata, se extrajo su hígado y se
procedió a lavarlo a chorro de agua para quitar la sangre
que lleva a la hormona adrenalina y puede activar a la
enzima alfa-amilasa e hidrolizar al glucógeno como se
mencionó anteriormente. De inmediato se pesó el
hígado y se cortó el hígado en pequeños trozos y se
trasladó a un mortero previamente enfriado, esto debido
a que a bajas temperaturas las enzimas no pueden
realizar su actividad.
Posteriormente se adicionó ácido tricloroacético al 10%,
(en una proporción de 1mL por cada gramo de hígado),
este desempeña la función
de precipitar a las
proteínas, las cuales
tendrán un color blanco.
También se adiciono una
cucharada de arena, esta
con la finalidad de romper
a los hepatocitos que
contienen dentro de ellos al
glucógeno, una vez que se
tiene la mezcla en el
mortero, se procedió a
triturar el hígado hasta
formar una pasta homog-
énea (Imagen 1).
Imagen 5: Hígado de
rata triturado
Una vez obtenida la pasta, se procedió a centrifugarla
durante 5 minutos a 2000 rpm, al finalizar se formaron 2
fases, se decantó el sobrenadante sobre un vaso de
precipitados y se mantiene en hielo, por otro lado el
sólido (pastilla color café) se lavó con ácido
tricloroacético al 5% al igual que el mortero y el pistilo
para recolectar residuos de la pasta y se volvieron a
centrifugar por 5 minutos a 2000 rpm. De nuevo se
formaron 2 fases, se decantó el sobrenadante y se
reunió con el de la primera centrifugación, esto con el fin
de obtener la mayor cantidad de glucógeno posible. Por
último se desechó la pastilla café.
Después se añadieron 2 volúmenes de etanol por
volumen de sobrenadante, esto se realizó con la
finalidad de separar al glucógeno (carbohidrato) del
sobrenadante, ya que al cambiar la constante dieléctrica
con la adición del etanol, el glucógeno precipitó (floculo).
De inmediato se centrifugó por 5 minutos a 2000 rpm, se
desechó el sobrenadante y el precipitado (glucógeno) se
resuspendió con un pequeño volumen de agua. Por
último se volvió a precipitar con 2 volúmenes de etanol,
esto para obtener más glucógeno, se centrifugó, y se
decantó el sobrenadante, el sólido se suspendió con 2
mL de alcohol y se trasladó a una charola para que se
secara y cristalizara.
 Caracterización química del glucógeno
Se preparó 15 mL de una solución de glucógeno.
2
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA DEL GLUCÓGENO SIN
HIDROLIZAR.
Prueba de Biuret
Esta prueba identifica proteínas y péptidos de cadena
no menor de 3 unidades de aminoácidos. La formación
de un color violáceo será positiva, para el glucógeno
obtenido la prueba es negativa, debido a no hay enlaces
peptídicos en su estructura y por lo tanto no es un
péptido ni proteína.
Prueba de Ninhidrina
Identifica los grupos α amino libres presentes en
aminoácidos y proteínas, la prueba es positiva al
observarse un color azul o violeta, la prueba fue
negativa para nuestro glucógeno, debido a que no
presenta aminoácidos ni proteínas en su estructura.
Prueba de Molish
Identifica aldosas y cetosas, es positiva al observarse la
formación de un anillo color violeta en la interfase, como
es el caso de nuestro glucógeno es positiva la prueba,
esto quiere decir que es un carbohidrato ya que
presenta en su estructura glucosas que son aldosas.
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA DEL GLUCÓGENO
HIDROLIZADO
Prueba de Fehling
En la hidrólisis ácida como en la hidrólisis enzimática se
observó la formación de un precipitado color rojo que
corresponde a una prueba positiva para los tubos
hidrolizados, entre más se hidrolice, mas precipitado
color rojo se observara, como es el caso de los tubos
con amilasa concentrada y HCl al 4N. Esta prueba se
realiza para identificar los carbonilos potencialmente
libres que estén involucrados en enlaces glicosídicos
(azucares reductores) gracias a esto podemos decir que
en nuestra muestra de glucógeno hay presencia
carbohidratos como la glucosa. En el tubo testigo del
glucógeno sin hidrolizar dio negativo, debido a que sus
grupos están bloqueados debido a los enlaces α 1-4 y α
1-6; no posee iones libres para que se lleve a cabo la
reacción.
Prueba de Lugol
Los polisacáridos ramificados presentan un color café,
como es el caso del tubo 4 (glucógeno sin hidrolizar)
que dio positivo, en los demás tubos que se han
hidrolizado se observa un color amarillo.
Prueba de Seliwanoff
Esta reacción diferencia aldosas y cetosas, aunque
ambas den positiva la reacción, las cetosas la dan más
rápido que las aldosas. La prueba será positiva al
observarse un color rojo para cetosas y rosa para
aldosas. Los resultados fueron positivos para los 5 tubos
de ambas hidrolisis ya que se observó una coloración
rosa palo, por lo tanto podemos decir que el azúcar que
compone al glucógeno es una aldosa (glucosa), el tubo
5 que contiene a la amilasa concentrada da con mayor
tonalidad la reacción debido a que hidroliza casi en su
totalidad al glucógeno, produciendo así mayor cantidad
de glucosa a comparación de los demás tubos. El tubo
testigo del glucógeno dio negativo debido a que no se
hidrolizo.
CONCLUSIONES
 El glucógeno se encuentra abundantemente en
el hígado y en el musculo esquelético de los
mamíferos.
 La amilasa presente en la saliva hidroliza al
glucógeno rompiendo los enlaces 1,4 para
liberar glucosa.
 El glucógeno es un polisacárido (carbohidrato)
ramificado compuesto de subunidades de
glucosa.
 El glucógeno no es un péptido ni proteína, ya
que no presenta enlaces peptídicos ni
aminoácidos en su estructura.
 Entre más ramificado sea un polisacárido, es
más compacto y se puede almacenar, como el
glucógeno.
BIBLIOGRAFÍA
1. E. Conn Eric, “Bioquímica fundamental”,
Universidad de California, Editorial Limusa, 2001,
México D.F.
2. Voet Donald, “Fundamentos de Bioquímica”,
Editorial Médica Panamericana, 2ª Edición, 2007,
Madrid, España.
3. Gabriela Torres. BBC. “¿En que se parecen los
ratones y los humanos? 20 febrero del 2014.
(http://www.bbc.com/mundo/noticias/2014/02/1401
30_salud_laboratorio_ratones_gtg)
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