ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD CIENCIAS
ESCUELA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA

GUIA DE LABORATORIO DE BIOFARMACIA

LUGAR DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: LABORATORIO DE TECNOLOGIA

FARMACEUTICA

PRÁCTICA No.2

“OBTENCIÓN DE ESPECTROS DE ABSORCIÓN UV- VIS PARA FARMACOS EN

SOLUCIÓN”

1. DATOS GENERALES:

NOMBRES: CODIGOS:

 Evelyn Tixi 2853

 Jonathan Rea 2841

 Huilmar Rodríguez 2847

 Santiago Cabezas 2835

FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:

2018/05/21 2018/05/31

2. OBJETIVO GENERAL
Generar por medio de la aplicación de la ley de Beer las curvas de calibración
para los principios activos en disolución en toma de sus respectivos
espectros de absorción UV-visible.
 Objetivos Específicos:
 Especificar los principios activos a analizar y someterlos a disolución para su
posterior determinación de sus absorbancias
 Realizar los cálculos pertinentes para la realización de la curva de calibración
para el paracetamol, amoxicilina, y cefalexina
 Examinar los espectros de los principios activos en disolución y comparar en
bibliografía de los datos teóricos y prácticos.
3. METODOLOGIA
Se entregará 3 principios activos: paracetamol, amoxicilina y cefalexina a cada
grupo de estudiantes debidamente codificadas, a continuación, procederán
al análisis de las mismas teniendo en consideración las directrices
extendidas por el profesor, posteriormente realizarán el análisis de los
resultados obtenidos y elaborarán el reporte respectivo.
4. FUNDAMENTO TEORICO

La espectrometría ultravioleta-visible o espectrofotometría UV-Vis implica la

espectroscopia de fotones en la región de radiación ultravioleta-visible. Utiliza la luz en
los rangos visible y adyacentes (el ultravioleta (UV) cercano y el infrarrojo (IR) cercano.
En esta región del espectro electromagnético, las moléculas se someten a transiciones
electrónicas. (Abril Díaz et al., 2010)

Esta técnica es complementaria de la espectrometría de fluorescencia, que trata con

transiciones desde el estado excitado al estado basal, mientras que la espectrometría de
absorción mide transiciones desde el estado basal al estado excitado.

APLICACIONES

La espectrometría UV/Vis se utiliza habitualmente en la determinación cuantitativa de

soluciones de iones metálicos de transición y compuestos orgánicos muy conjugados.

 Soluciones de iones metálicos de transición

Las soluciones de iones metálicos de transición pueden ser coloreadas (es decir,
absorben la luz visible) debido a que los electrones en los átomos de metal se pueden
excitar desde un estado electrónico a otro.
 Compuestos orgánicos
Los compuestos orgánicos, especialmente aquellos con un alto grado de conjugación,
también absorben luz en las regiones del espectro electromagnético visible o
ultravioleta.

La ley de Beer-Lambert establece que la absorbancia de una solución es directamente

proporcional a la concentración de la solución. Por tanto, la espectrometría UV/VIS
puede usarse para determinar la concentración de una solución. Es necesario saber con
qué rapidez cambia la absorbancia con la concentración. Esto puede ser obtenido a
partir de referencias o con más exactitud, determinándolo a partir de una curva de
calibración.

LEY DE BEER-LAMBERT

La espectrometría UV-Vis se utiliza con mayor frecuencia en forma cuantitativa para

determinar las concentraciones de especies absorbentes en solución, usando la Ley de
Beer-Lambert:
La ley de Beer-Lambert es útil para la caracterización de muchos compuestos, pero no
sirve como relación universal para la concentración y absorción de todas las sustancias.
(Abril Díaz et al., 2010)

ESPECTROFOTÓMETRO ULTRAVIOLETA-VISIBLE
El instrumento utilizado en la espectrometría ultravioleta-visible se llama
espectrofotómetro UV-Vis. Mide la intensidad de luz que pasa a través de una muestra
(I), y la compara con la intensidad de luz antes de pasar a través de la muestra (Io). La
relación I / Io se llama transmitancia, y se expresa habitualmente como un porcentaje
(%T). La absorbancia (A) se basa en la transmisión:

A = - log (%T)

ESPECTRO ULTRAVIOLETA-VISIBLE
Un espectro ultravioleta-visible es esencialmente un gráfico de absorbancia de luz
frente a una longitud de onda en el rango del ultravioleta o la luz visible. Este espectro
puede ser producido directamente con los espectrofotómetros más sofisticados, o bien
pueden registrarse los datos de una sola longitud de onda con los instrumentos más
simples. La longitud de onda se representa con el símbolo. (Abril Díaz et al., 2010)

Las longitudes de onda de los picos de absorción pueden correlacionarse con los tipos
de enlace en una determinada molécula, y son valiosos para determinar los grupos
funcionales dentro de la molécula. La absorción UV-Vis no es, sin embargo, una prueba
específica para ningún compuesto determinado.

Factores que pueden influir

La naturaleza del disolvente, el pH de la solución, la temperatura, la concentración
de electrolitos, y la presencia de sustancias interferentes pueden influir en los espectros
de absorción de los compuestos, así como las variaciones en la anchura de la hendidura
(ancho de banda efectivo) en el espectrofotómetro. (Abril Díaz et al., 2010)

Espectro UV del paracetamol

(Нуштаева & Вилкова, 2014)

Espectro UV de la cefalexina
 Cefalexina

(Blazheyevskiy Mykola, 2017)

Espectro UV de la amoxicilina

(Bariccatti, Silva, Souza, Lindino, & Rosa, 2008)

5. EQUIPOS Y MATERIALES:

EQUIPOS Y MATERIALES:
Equipos

Espectrofotómetro Balanza

Reactivos:
Agua destilada Paracetamol
 Amoxicilina Cefalexina

Materiales:
Balones de aforo de 500 y 100 mL Vasos de precipitación de 150mL

Probeta de 100 mL Piseta

Pipeta de 10 mL Pipeta de 5 mL
 6. PROCEDIMIENTO:

7. RESULTADOS Y DISCUSIONES
7.1. RESULTADOS
PARACETAMOL
Longitud de onda: 241nm
Tabla N° 1.- Absorbancias del Paracetamol
Concentración (ppm) Absorbancia
10 0,243
20 0,453
30 1,565
12 (VALOR TEÓRICO) 0,225
12 (Muestra problema) 0,254

Gráfica N° 1.- Curva de calibración del paracetamol

CURVA DE CALIBRACIÓN DEL

y = 0.661x - 0.5683
PARACETAMOL R² = 0.8657

1.8
1.6
1.4
1.2
ABSORBANCIA

1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
CONCENTRACIÓN (PPM)
 |0.225 − 0,254|
%𝒆𝒓𝒓𝒐𝒓 = × 100 = 12,89%
0.225

AMOXICILINA
Longitud de onda: 272nm
Tabla N° 2.- Absorbancias de la Amoxicilina
Concentración (ppm) Absorbancia
100 0,028
200 1,070
300 1,722
200 (VALOR TEÓRICO) 0,946
200 (Muestra problema) 0,910

Gráfica N° 2.- Curva de calibración de Amoxicilina

CURVA DE CALIBRACIÓN DE AMOXICILINA y = 0.847x - 0.754

R² = 0.9826
2

1.8

1.6

1.4

1.2
Absorbancia

0.8

0.6

0.4

0.2

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
Concentración (ppm)

|0.946 − 0,910|
%𝒆𝒓𝒓𝒐𝒓 = × 100 = 3,81%
0.946

CEFALEXINA
Longitud de onda: 262nm
Tabla N° 3.- Absorbancias de Cefalexina
Concentración (ppm) Absorbancia
40 0,070
60 0,092
80 0,107
20 (VALOR TEÓRICO) 0,052
20 (Muestra problema) 0,056
 Gráfica N° 3.- Curva de calibración del Cefalexinal

CURVA DE CALIBRACIÓN DE CEFALEXINA y = 0.4335x - 0.5007

R² = 0.769
1

0.8

0.6
Absorbancia

0.4

0.2

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5

-0.2
Concentración (ppm)

|0.052 − 0.056|
%𝒆𝒓𝒓𝒐𝒓 = × 100 = 7,69%
0.052
7.2. DISCUSIONES
De acuerdo a los resultados obtenidos de las absorbancias se puede sacar la
ecuación con la cual se obtuvieron los valores teóricos y así se pudo sacar el
porcentaje de error de cada uno de los medicamentos de experimentación
(paracetamol, amoxicilina y cefalexina).
Para el caso del paracetamol, presenta un % de error de 12,89% entre el valor
teórico y el valor practico, lo que refleja que existe un error significativo en la
práctica lo cual se puede atribuir a un error de pipeteo al momento de realizar la
dilución correspondiente, a un mal aforado de la solución o también puede
atribuirse a un error propio del material usado, como lo son las pipetas y balones
de aforo.
En el caso de la amoxicilina, presenta un % de error de 3,81% entre el valor teórico
y el valor practico, el cual no es muy significativo, se podría decir que está dentro
del límite permisible de error, dado a que las condiciones de aforado y pipeteo
fueron las adecuadas.
Finalmente, en el caso de la cefalexina, presenta un % de error de 7,69% entre el
valor teórico y el valor practico, este porcentaje ya es un poco más significativo al
de la amoxicilina y puede estar inmersos los factores que provocaron el porcentaje
de error del paracetamol, es decir probablemente fue provocado por una
combinación de varios factores de error como el factor humano y los materiales
usados. Otra causa puede ser la incorrecta preparación de las soluciones madre de
las cuales se obtuvieron las diluciones. Llevando a si a tal punto que tengamos este
erro significativo.
8. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
8.1. CONCLUSIONES:
 En la práctica se usó los siguientes principios activos en disolución paracetamol,
amoxicilina, y cefalexina para poder tener los espectros a longitudes de onda como es
241nm, 272nm, y 262nm respectivamente para posterior realización de su curva de
calibración y conocer si existe o no una desviación.
 Aplicando los cálculos para la preparación de las soluciones a las concentraciones
adecuadas en donde, por medio de la ecuación presentada en los resultados, se
obtuvo los porcentajes de error que poseen en comparación.
 , Se puede apreciar que para el paracetamol entre el dato teórico y práctico hay un
porcentaje de error del 12,89%, al igual en la cefalexina hay un porcentaje de error
de 7,69% ambos son mediadamente significativos mientras que en la amoxicilina
presenta un porcentaje de error menor que es de 3,81%, dichos errores pueden ser
representados por un mal manejo de materiales o errores de pipeteo, aforo, entre
otros.
8.2. RECOMENDACIONES:
 Leer la guía técnica para conocer bien el procedimiento que se vaya a realizar y
cualquier inconveniente darlo a conocer al técnico encargado del laboratorio
 Llevar el equipo de bioseguridad de la manera adecuada y correcta para minimizar
riesgos.
 Manejar con cuidado los materiales de vidrio y equipos con el fin de mantenerlos en
buen estado, y en caso de equipos para no descalibrarlos
 No pipetear con boca o manejar sin guantes sustancias que puedan ser tóxicas o muy
volátiles.

9. BIBLIOGRAFIA

 Abril Díaz, N., Bárcena Ruiz, J. A., Fernández Reyes, E., Galván Cejudo, A., Jorrín Novo, J.,
Peinado Peinado, J., … Túnez Fiñana, I. (2010). Espectrofometría : Espectros de
absorción y cuantificación colorimétrica de biomoléculas. Campus Universitario de
Rabanales. Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, 1, 1-8. Recuperado a partir
de https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRIA.pdf
 Bariccatti, R. A., Silva, C., Souza, M. L., Lindino, C. A., & Rosa, M. F. (2008). Degradação
hidrolítica e fotoquímica da amoxicilina na presença de β-ciclodextrina. Eclética Química,
33(4), 79-84. https://doi.org/10.1590/S0100-46702008000400010
 Blazheyevskiy Mykola. (2017). Comparación de tres métodos independientes para la
detección de cefalexina usando el potasio de caroata. Ars Pharmaceutica (Internet),
58(2), 59-65. https://doi.org/10.4321/s2340-98942017000200003
 Нуштаева, А. В., & Вилкова, Н. Г. (2014). Chemical Sciences Твердые
Стабилизаторы Дисперсных Систем : Свойства И Применение. AstonJournals.