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1. OBJETIVO.
1.1.Objetivo general
Identificar bacterias mesófilas aerobias en diversas muestras mediante tinción
de Gram
1.2.Objetivos específicos.
Aplicar los conocimientos previo de desinfección y esterilización en la
practica.
Utilizar la tinción de Gram como medio de identificación de bacterias en las
muestras analizar.
2. FUNDAMENTO TEORICO.
2.1. ESTERILIZACION Y DESINFECCION
Bacterias
Las bacterias son organismos unicelulares microscópicos, sin núcleo ni clorofila, que
pueden presentarse desnudas o con una cápsula gelatinosa, aisladas o en grupos y que
pueden tener cilios o flagelos.
La bacteria es el más simple y abundante de los organismos y puede vivir en tierra, agua,
materia orgánica o en plantas y animales.
Tienen una gran importancia en la naturaleza, pues están presentes en los ciclos naturales
del nitrógeno, del carbono, del fósforo, etc. y pueden transformar sustancias orgánicas en
inorgánicas y viceversa.
Son también muy importantes en las fermentaciones aprovechadas por la industria y en
la producción de antibióticos.
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Típica formación bacteriana.
Desempeñan un factor importante en la destrucción de plantas y animales muertos.
En efecto, la vida en nuestro planeta no existiría sin bacterias , las cuales permiten
muchas de las funciones esenciales de los ecosistemas. Una bacteria de tamaño típico es
tan pequeña que es completamente invisible a la vista .
Las bacterias son muy importantes para el ser humano, tanto para bien como para mal,
debido a sus efectos químicos y al rol que juegan en diseminar enfermedades.
Las bacterias pertenecen a la clase procariota debido a que su núcleo no está rodeado por
una membrana y consiste de una sola molécula de ADN cuya división es no-mitótica.
En su efecto beneficioso, algunas bacterias producen antibióticos tales como
estreptomicina capaces de curar enfermedades.
Análogamente, las bacterias son muy importantes ya que convierten nitrógeno en una
forma útil por ciertas raíces de plantas o proveen el gusto intenso en yogurt.
Las bacterias se usan en la producción de ácido acético y vinagre, varios aminoácidos y
enzimas, y especialmente en la fermentación de lactosa a ácido láctico, la cual coagula
las proteínas de la leche, y se usan en la fabricación de casi todos los quesos, yogurt y
productos similares.
Tipos de bacterias.
Ellas también ayudan a la descomposición de la materia orgánica muerta. Actualmente,
los métodos de la ingeniería genética son usados para mejorar los tipos de bacterias con
fines comerciales y muestran una gran promesa futura.
En cosméticos, muchos de los activos, tales como proteínas y péptidos de bajo peso
molecular, ingredientes antiarrugas y antioxidantes, están siendo creados con el uso de
tipos específicos mejorados de bacterias.
La mayoría de las bacterias pueden clasificarse en tres categorías de acuerdo a su
respuesta al oxígeno gaseoso.
La bacteria aerobia crece en la presencia de oxígeno y lo requiere para su continuo
crecimiento y existencia.
Otras bacterias son anaerobias, y no pueden tolerar el oxígeno gaseoso.
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Bacterias en la lengua.
El tercer grupo es el anaerobio facultativo, el cual prefiere crecer en presencia de oxígeno,
aunque puede hacerlo sin él.
Tinción de gram
La Tinción de Gram es una técnica que permite observar las bacterias. Las bacterias son
microorganismos unicelulares que conviven habitualmente con el ser humano. En muchos
casos forman parte de nuestra flora habitual y la de nuestro entorno sin ocasionar ningún
peligro para la salud. En otras situaciones, las bacterias pueden ser patógenas, es decir,
producen infecciones de diversos tipos: cutáneas, abdominales, óseas, etc.
Una de las maneras de diferenciar a las bacterias es en base a la presencia de una pared
celular. Así, hay bacterias con una pared gruesa (formada por peptidoglicanos) y otras con
una pared mucho más delgada.
TABLA 1.
3.2.Reactivos
TABLA 2.
Etanol: alude al alcohol etílico, una sustancia cuya fórmula química es CH3-CH2-OH. Se
trata de un líquido que se genera a partir de la fermentación de productos que presentan
una elevada cantidad de carbohidratos. El etanol, en condiciones normales de temperatura
y presión, es inflamable e incoloro. En cualquier proporción, por otra parte, es soluble en
agua; la obtención del etanol se realiza a través de la fermentación anaeróbica de una
disolución que contiene levadura y azúcares. Mediante la destilación, se puede separar el
etanol del agua.
Agar nutritivo: El medio contiene extracto de carne, peptona y agar, siendo una
formulación suficiente para el desarrollo de los microorganismos. El extracto de carne
proporciona al medio fuente de carbohidratos, de nitrógeno y vitaminas. El empleo de
este medio es de acuerdo al tipo de estudio por realizar. PREPARACION: Rehidratar 23
g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15 minutos. Calentar agitando
frecuentemente hasta el punto de ebullición durante 1 minuto para disolverlo por
completo. Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) durante 15 minutos. Enfriar
aproximadamente a 45ºC. Vaciar en cajas de Petri estériles. Conservar en refrigeración
de 2 a 8ºC.
La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la técnica. Sirve para hacer una
tinción de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas. Al término del
protocolo, las Gram positivas se verán azul-violáceas y las Gram negativas, se verán rosas
(si no se hizo la tinción de contraste) o rojas (si se usó, por ejemplo, safranina).
4. Procedimiento
5. DATOS.
6. CALCULOS Y RESULTADOS
28 𝑔𝑟. −1000 𝑚𝑙
𝑥 − 150 𝑚𝑙
Regla de 3
𝑥 = 4.2 𝑔𝑟
Según lo observado, se vieron bacterias del tipo coco y diplococos, también se vieron
esteptococos.
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Por datos bibliográficos se tiene: Bacillus spp.
7. CONCLUSIONES
Se lograron identificar bacterias en las muestras, en este caso leche. Donde se tuvieron
un poco de dificultades al contar las colonias ya que son de tamaño muy pequeño.
8. CUESTIONARIO
8.1.¿Qué son las Unidades Formadoras de Colonias?
-UFC es el número mínimo de células separables sobre la superficie, o dentro, de un
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medio de agar semi-sólido que da lugar al desarrollo de una colonia visible del orden de
decenas de millones de células descendientes. Las UFC pueden ser pares, cadena o
racimos, así como células individuales Unidad formadora de colonias.
8.2.¿Por qué se diluyó la muestra en relaciones 1:10 y 1:100?
-Esta dilución se la realizo para no tener la muestra demasiado concentrada, a la vez
saturada ya que se cultivó para su propagación y crecimiento de bacterias.
8.3.Detalle la función específica que realiza cada reactivo utilizado en la tinción de
Gram.
-Violeta de genciana: colorante catiónico, penetra en todas las células bacterianas (tanto
Gram positivas como Gram negativas) a través de la pared bacteriana.
-Safranina: Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración
de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina.
Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que
las Gram positivas permanecen violetas.
8.4.Explique por qué tanto bacterias Gram + como Gram – presentan coloraciones
características. ¿A qué se debe este fenómeno?
-Se debe a la resistencia de la pared celular las Gram – a diferencia de las Gram + tienen
menos resistencia por lo que son más fácil de romper, con lo cual no retiene el colorante,
pasa lo contrario con las Gram +, que si adquieren mejor coloración.
9. BIBLIOGRAFIA
PROCEDIMIENTO, Guía de laboratorio
TINCION DE GRAM, fecha de consulta 30 de mayo de 2018,
https://www.salud.mapfre.es/pruebas-diagnosticas/otras-pruebas-
diagnosticas/tincion-de-gram/
BACTERIAS, fecha de consulta 29 de mayo de 2018,
http://www.profesorenlinea.cl/Ciencias/Bacteria.htm
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