Capitulo III Introducción A La Espectroscopía y Espectroscopía Molecular - Uv-Vis-ir

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
Asignatura: ANALISIS INSTRUMENTAL

Carreras: Lic. en Bromatología- Bromatología
CAPITULO III
INTRODUCCIÓN A LA
ESPECTROSCOPÍA Y
ESPECTROSCOPÍA
MOLECULAR: UV-Vis-IR
1|
INTRODUCCIÓN A LA ESPECTROSCOPÍA
Los métodos de análisis que se basan en la medición de la luz y otras formas de radiación
electromagnética son los que más se utilizan en la química analítica. La espectroscopía es una
ciencia que estudia las interacciones que suceden entre la radiación y la materia. Los métodos
espectroscópicos de análisis miden la cantidad de radiación producida o absorbida por las especies
atómicas o moleculares que se analizan. Estos métodos también se clasifican de acuerdo con la
región del espectro electromagnético que se utiliza para hacer la medición. La espectroscopía ha
jugado un papel fundamental en el desarrollo de la teoría atómica moderna. Por otra parte, también
han aportado las herramientas más utilizadas para elucidar las estructuras moleculares, así como
para identificar y obtener la composición cuantitativa y cualitativa de sustancias orgánicas e
inorgánicas.
NATURALEZA DE LA RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA

La radiación electromagnética también denominada energía radiante, es una clase de energía que
se transmite por el espacio a enormes velocidades. Adopta muchas formas, siendo las más
fácilmente reconocibles la luz y el calor radiante. Otras manifestaciones menos evidentes son la
radiación gamma, de rayos X, ultravioleta, de microondas y de radiofrecuencias.
La luz y otras formas de energía radiante parecen tener naturaleza dual. La radiación
electromagnética puede considerarse como una onda que viaja a la velocidad de la luz. Este modelo
ondulatorio es necesario para explicar la difracción, la refracción y otros efectos ópticos. Sin embargo,
algunas propiedades de la citada radiación se explican mejor si se considera que se encuentra
constituida por partículas discretas o paquetes ondulatorios de energía, conocidas como fotones,
que también viajan a la velocidad de la luz. Este modelo corpuscular ayuda a comprender que tanto la
emisión como la absorción de energía radiante se llevan a cabo mediante fotones. Este doble punto
de vista de la radiación como partícula y como onda no es mutuamente excluyente, sino
complementario.
Propiedades de onda: parámetros de interés.

La radiación electromagnética puede representarse como oscilaciones sinusoidales
perpendiculares de campos magnéticos y eléctricos, tal como se muestra en la figura 1. El
campo eléctrico se representa como un vector cuya longitud es proporcional a la fuerza del
campo. La abscisa de este gráfico puede ser el tiempo cuando la radiación pasa por un punto
fijo del espacio, o bien, la distancia a un tiempo determinado. Obsérvese que la dirección en la
que oscila el campo es perpendicular a la dirección en que se propaga la radiación.
Fig. 1. Representación de un haz de radiación monocromática polarizada en el plano (a) Campos eléctrico
y magnético perpendiculares entre sí y respecto a la dirección de propagación (b) Representación
bidimensional del vector eléctrico (Libro: “Análisis instrumental”, Skoog)
En la Figura 1b, se muestra la amplitud (A) de una onda sinusoidal como la longitud del vector
eléctrico en el máximo de la onda. El tiempo, en segundos, necesario para el paso de sucesivos
máximos o mínimos por un punto fijo del espacio se denomina el período (p) de la radiación. La
frecuencia ( ) es el número de oscilaciones del campo por segundo y es igual a 1/p. La unidad
de frecuencia es el hertz (Hz) y equivale a un ciclo por segundo (1 Hz = s -1).
Otro parámetro de interés es la longitud de onda (), que es la distancia lineal entre dos puntos
equivalentes de ondas sucesivas (por ejemplo, sucesivos máximos o mínimos).
Capítulo III Introducción a la Espectroscopia y Espectroscopia UV- Vis- IR 2|

Para medir la longitud de onda se emplean comúnmente las siguientes unidades:
m = micrómetro = 10-6 metros = 10-4 centímetros

nm = nanómetro = 10-9 metros = 10-7 centímetros
0 -10 -8
A = angstrom = 10 metros = 10 centímetros
La multiplicación de la frecuencia en ciclos por segundo por la longitud de onda en metros por
ciclo da la velocidad de propagación (i ) en metros por segundo:
i  i (ciclo/s . m/ciclo= m/s) (1)
En cierto sentido, la frecuencia es más fundamental que la longitud de onda. La frecuencia

permanece constante cualquiera sea el medio en el que se propaga o transmite la radiación. Por
el contrario, la velocidad de la radiación depende de la composición del medio que atraviesa.
Por tanto, se puede ver a partir de la ecuación 1 que la longitud de onda depende también del
medio. El subíndice i de la ecuación 1 enfatiza estas dependencias.
En el vacío, la velocidad de la radiación es independiente de la longitud de onda y alcanza su
valor máximo. Esta velocidad, representada por el símbolo c, se ha determinado que vale 2,997
x 108 m/s. La ecuación 1 puede escribirse con tres cifras significativas como:
c =  = 3,00 x 108 m/s (2)

= 3,00 x 1010 cm/s
El número de onda  , es otra forma de describir la radiación electromagnética. Se define como

el inverso de la longitud de onda en cm (1/), la unidad para  es cm-1. El número de onda se
usa mucho en espectroscopía infrarroja. Es una unidad útil porque, al revés que la longitud de
onda, es directamente proporcional a la frecuencia y a la energía de la radiación. Así pues se
puede escribir:
  k donde la constante de proporcionalidad k depende del medio y es igual a la

inversa de la velocidad (ecuación 1).
La potencia (P) de la radiación es la energía en watts (W) del haz que llega a un área dada por
segundo, mientras que la intensidad ( I ) es la potencia por unidad de ángulo sólido. Aunque
rigurosamente no es correcto, potencia e intensidad se usan a menudo como sinónimos.
Propiedades de partícula: los fotones

En muchos tipos de interacción de la radiación electromagnética con la materia, es más
adecuado considerar a la luz como paquetes de fotones o cuantos. La energía de un fotón
puede relacionarse con su longitud de onda, frecuencia y número de onda mediante la
ecuación:
(3) hc
E  h   hc h es la constante de Planck (6.63 x10
-34
J.s)

Obsérvese que, a diferencia de la longitud de onda , el número de onda y la frecuencia son
directamente proporcionales a la energía del fotón.
INTERACCIONES DE LA RADIACIÓN Y LA MATERIA

Las interacciones que son especialmente importantes en la espectroscopía son las que dan lugar a
transiciones entre diferentes niveles de energía de las especies químicas. Otros tipos de
interacciones, como la reflexión, refracción, la difracción, etc., están más relacionadas con las
propiedades gruesas de la materia que con los niveles de energía de moléculas específicas o
átomos. Aunque estas interacciones también son importantes en la espectroscopía, aquí sólo se
analizarán las interacciones que originan transiciones en los niveles de energía. Los tipos de
interacción dependen estrechamente de la energía de la radiación que se utiliza y de la forma en que
ésta se detecta.
El espectro electromagnético es el conjunto de todas las radiaciones electromagnéticas conocidas,
dispuestas según su longitud de onda. Incluye desde los rayos gama, de longitud de onda corta (más
energéticos), hasta las ondas de radio, de longitud de onda más larga.

Aumento de
longitud de
onda
Fig. 2. Diagrama de las regiones del espectro electromagnético con longitudes de onda y frecuencias de la radiación
electromagnética. (Libro: “Análisis intrumental”. Rubinson)
Obsérvese que una mínima parte del espectro corresponde a la luz la cual es la radiación
electromagnética en la región espectral visible para el ojo humano normal. El intervalo de longitud de
onda de la luz es aproximadamente de 380 a 780 nm.
La radiación ultravioleta abarca el intervalo espectral desde 180 hasta 380 nm. Para análisis se
emplea generalmente entre 200 a 380 nm. La radiación infrarroja abarca el intervalo espectral de
0.78 a 300 m aproximadamente, pero el que se emplea más comúnmente en análisis es de 2.5 a 25
m.
La Tabla 1 recoge los intervalos de longitud de onda y de frecuencia de las regiones del espectro que
interesan con fines analíticos, así como los nombres de los diversos métodos espectroscópicos
asociados con cada uno. La última columna de la tabla indica los tipos de transiciones cuánticas
nucleares, atómicas o moleculares debidas a las interacciones de la radiación con una muestra y que
constituyen el fundamento de las distintas técnicas espectroscópicas. Obsérvese que la radiación de
baja energía utilizada en la resonancia magnética nuclear (RMN) ocasiona cambios mínimos, como
los cambios de orientación en el espín; por su parte la radiación de alta energía que utiliza la
espectroscopía de rayos gamma puede inducir efectos más drásticos, como son los cambios en la
configuración nuclear. En nuestro curso, estudiaremos las transiciones debidas a la radiación en la
zona UV, visible e infrarrojo. Las primeras producen cambios en la distribución electrónica y la última
genera rotaciones y vibraciones en las moléculas.
Capa de valencia Capa interna
Orientaciones de espín Rotaciones Vibraciones Transiciones
INTERACCIÓN (transiciones (transiciones
moleculares moleculares nucleares
electrónicas) electrónicas)
MÉTODO RMN ESR Microondas IR UV / V Rayos X Rayos 
Fig. 3. Tipo de espectroscopia y las interacciones atómicas y moleculares en las cuales están basadas.

Tabla 1. Modelos espectroscópicos generales basados en la radiación electromagnética.
INTERVALO HABITUAL INTERVALO HABITUAL

TIPO DE TIPO DE TRANSICION
DE LONGITUD DE DE NÚMERO DE ONDA,
ESPECTROSCOPIA -1 CUÁNTICA
ONDA cm
0
Emisión de rayos gamma 0,005 - 1,4 A ------- Nuclear
Absorción, emisión,
0
fluorescencia y difracción 0,1 - 100 A ------- Electrones internos
de rayos X
Absorción ultravioleta de 6 4
10 -180 nm 1x10 a 5 x10 Electrones de enlace
vacío
Absorción, emisión y
4 4
fluorescencia ultravioleta 180 -780 nm 5 x 10 a 1,3 x 10 Electrones de enlace
visible
Absorción y dispersión 4 1 Rotación /vibración de
0,78 – 300 m 1,3 x 10 a 3,3x10
Raman infrarroja moléculas
Absorción de microondas 0,75 -3,75 mm 13 a 27 Rotación de moléculas
Resonancia de espín Espín de los electrones

3 cm 0,33
electrónico en un campo magnético
Resonancia magnética -2 3 Espín de los núcleos en
0,6 -10 m 1,7 x10 a 1 x10
nuclear un campo magnético
En la espectroscopía se utilizan estas interacciones entre la luz y la materia a fin de obtener

información sobre el analito presente en una muestra. Esta última puede estimularse ya sea
aplicando energía en forma de calor, de electricidad, de luz, de partículas o sometiéndola a alguna
reacción química. Antes de aplicar cualquiera de estos estímulos, el analito está predominantemente
en su nivel más bajo de energía o estado fundamental o estado basal. El estímulo induce una
transición de algunas especies del analito a un estado de energía superior o estado excitado. Como
resultado de esto se producen, entre otros, fenómenos de absorción o emisión energética. Por lo
tanto, para obtener información sobre el analito, se mide la radiación electromagnética emitida
cuando éste regresa a su estado basal (espectroscopía de emisión), o puede medirse la cantidad
de radiación electromagnética absorbida como consecuencia de la excitación (espectroscopía de
absorción). A continuación analizaremos con más detalle estos fenómenos.
a) Proceso de absorción: cuando una partícula, que se encuentra en “estado de reposo” o

“estado fundamental”, interacciona con un haz de luz, absorbe energía, y pasa a lo que se
denomina “estado excitado”. En la partícula se producen cambios que dependen de las
características de la propia partícula (tipo de enlaces, etc.) y de la energía (según la longitud
de onda) de la luz que interacciona. La partícula en estado excitado tiende a regresar
espontáneamente a su estado fundamental, desprendiendo la energía absorbida en forma de
calor. Este fenómeno puede representarse de la siguiente manera:
Aº = absorbente en estado fundamental

A* = absorbente en estado excitado
Aº + h .   A*  Aº + calor h . = E = energía del fotón absorbido
h = constante de Planck
= frecuencia de la radiación
Los átomos, moléculas o iones sólo tienen un número limitado de niveles de energía discretos
y, por tanto, para que se produzca la absorción de la radiación, la energía de los fotones
excitadores debe coincidir exactamente con la diferencia de energías entre el estado
fundamental y uno de los estados excitados de las especies absorbentes.
La medida de la cantidad de luz absorbida por una solución de una especie absorbente, es el
fundamento en que se basan las técnicas de Espectrofotometría de absorción.
Con este fin, se representa la absorbancia en función de la longitud de onda o de la
frecuencia. Cada especie absorbente (cromógeno) tiene lo que se llama un “espectro de
absorción característico”. Este espectro representa la relación entre la longitud de onda
incidente y la absorbancia que presenta una solución de la especie, en condiciones definidas
de trabajo. Al gráfico que resulta de representar en un eje de coordenadas Absorbancia
(ordenadas) frente a longitud de onda (abscisas), es a lo que llamamos espectro de
absorción (figura 4).

Fig. 4. Espectro de absorción
Los espectros de absorción son de utilidad tanto para seleccionar la longitud de onda más
adecuada para una medida cuantitativa (longitud de onda a la que la absorción es máxima),
como para fines de identificación cualitativa.
En la química analítica instrumental, el término espectro posee diversas variantes. Un
espectro de emisión se obtiene por separación de las longitudes de onda individuales de la
energía emitida por una fuente de luz. Un espectro de absorción es el conjunto de líneas o,
más frecuentemente, bandas cuyas longitudes de onda son absorbidas por el medio al pasar
por éste la luz compuesta.
Los cambios en una moléculas ocasionados por absorción de luz pueden ser electrónicos
(cambio en la energía de los electrones distribuidos alrededor de los átomos de la molécula),
vibracionales (cambios en la separación promedio de los núcleos de uno o más átomos) y
rotacionales (rotación de un dipolo químico). Se necesita una radiación de energía más alta
para que se efectúen transiciones electrónicas (cambios) que la necesaria para que se
efectúen transiciones rotacionales o vibracionales.
 Absorción Atómica: el paso de radiación policromática ultravioleta o visible a través

de un medio constituido por partículas monoatómicas, como mercurio o sodio
gaseosos, produce la absorción de sólo unas pocas frecuencias bien definidas. La
relativa simplicidad de tales espectros se debe al pequeño número de posibles estados
energéticos de las partículas absorbentes. La excitación sólo puede producirse
mediante un proceso electrónico en el que uno o varios de los electrones del átomo se
promocionan a un nivel de energía más alto.
Las longitudes de onda ultravioleta y visible tienen energía suficiente para originar
transiciones sólo de los electrones más externos o electrones de enlace.
 Absorción Molecular: los espectros de absorción de las moléculas poliatómicas, y en

particular en estado condensado, son bastante más complejos que los espectros
atómicos, porque el número de estados de energía de las moléculas es, en general,
enorme si se compara con el número de átomos aislados. La energía E asociada a las
bandas de una molécula viene dada por tres componentes:
E = Eelectrónica + E vibracional + E rotacional
En síntesis, lo más importante es que la muestra absorba parte de la radiación
incidente para que se promueva la transición del analito hacia un estado excitado. En
la espectroscopía de absorción, se mide la cantidad de luz absorbida en función de
la longitud de onda utilizada, lo cual puede dar información cualitativa y cuantitativa de
la muestra.
b) Proceso de emisión: algunos compuestos tienen la propiedad, tras ser excitados, de retornar
a su estado fundamental, produciendo una emisión de energía electromagnética. La luz
emitida se puede medir, y ello constituye el principio de algunas técnicas, como la Fotometría
de llama, o la Fluorescencia. Este fenómeno puede representarse de la siguiente manera:
Aº = absorbente en estado fundamental

Aº + h . 1  A*  Aº + h . 2 A* = absorbente en estado excitado
h . 1 = E1 = energía de excitación
h . 2 = E2 = energía de emisión
La energía radiante emitida cuando el analito regresa a su estado basal, puede dar
información sobre la naturaleza del mismo y de su concentración.
La radiación electromagnética se origina cuando partículas excitadas (iones, átomos o
moléculas) se relajan a niveles de energía basal cediendo su exceso de energía en forma de
fotones. La excitación puede producirse por diversos medios, tales como el bombardeo con
electrones u otras partículas elementales, la exposición a chispas de corriente alterna de
potencial elevado, el tratamiento térmico en un arco o una llama, o la absorción de radiación
electromagnética.
Las partículas elementales radiantes (átomos o iones atómicos) que están muy separadas
entre sí, como en el estado gaseoso, se comportan como cuerpos independientes y, a
menudo, producen radiación que contiene sólo unas pocas longitudes de onda específicas.
Por tanto el espectro resultante es discontinuo y se denomina un espectro de líneas. Por otro
lado, un espectro continuo es aquél en el que todas las longitudes de onda están presentes
dentro de un intervalo apreciable, o uno en el que las longitudes de onda están tan próximas
entre sí que la resolución no es factible por medios ordinarios.
Tanto los espectros continuos como los de líneas tienen importancia en química analítica
instrumental. Los primeros se emplean con frecuencia como fuentes en métodos basados en
la interacción de la radiación con la materia, como la espectrofotometría. Por otra parte, los
espectros de líneas son importantes porque permiten la identificación y determinación de las
especies emisoras.
Esta sección se enfocará en la espectroscopía de absorción en la región UV/Visible del espectro, ya

que este tipo de análisis es el que más se utiliza en áreas tan diversas como química, biología,
ingeniería, agricultura y análisis de alimentos.
LA LEY DE LAMBERT Y BEER O LEY DE LA ABSORCIÓN

Cada especie molecular tiene la capacidad de absorber su propia frecuencia característica de la
radiación electromagnética. Este proceso transfiere energía a la molécula y provoca una disminución
en la intensidad de la radiación electromagnética incidente. En la Figura 5 se representa un haz de
radiación paralela, antes y después de haber atravesado una capa de b cm de grosor de una solución
de una especie absorbente de concentración c. La flecha más grande en el rayo incidente significa
que la energía radiante es mayor que la transmitida por la solución.
b
P0 P
Solución absorbente de
concentración c
Fig. 5. Atenuación de un haz de radiación por una solución absorbente.
Como puede verse, debido a las interacciones que suceden entre los fotones y las partículas
absorbentes, la absorción de la radiación atenúa, es decir disminuye la energía, del rayo incidente
desde P0 hasta P de acuerdo, con la ley de la absorción. Cuanto mayor sea la trayectoria del rayo
en la solución de analito de una concentración dada, habrá más especies que absorban la radiación y
la atenuación será mayor.
La transmitancia T de la solución es la fracción de radiación incidente transmitida por la solución, tal
como se muestra en la ecuación 4. A menudo, se expresa la transmitancia como un porcentaje.
P (4) P (5)
T %T  .100
P0 P0
La absorbancia A de una solución es una medida que relaciona en forma logarítmica la radiación
incidente y la que emite la muestra. Está relacionada con la transmitancia en forma logarítmica
(ecuación 5) y viene definida por la ecuación:
P P (6)
A   logT   log  log 0
P0 P
Obsérvese que el aumento en la absorbancia de una solución se acompaña de una disminución en la
transmitancia y que, a diferencia de la transmitancia, la absorbancia de una solución aumenta cuanto
mayor es la atenuación del haz.
La ley de la absorción, también conocida como ley de Lambert y Beer, o simplemente ley de Beer,
da información cuantitativa de cómo es que la atenuación de la radiación depende de la
concentración de las moléculas que la absorben y de la distancia que recorre el rayo en el medio
absorbente. Volviendo al análisis de la figura 5, la ley de absorción establece la relación entre el
grado de absorbancia de una solución y otras dos variables: la concentración del absorbente y la
longitud del trayecto que el haz de luz recorre a través de la solución. Experimentalmente se muestra
que la absorbancia es directamente proporcional a:

 Una constante que es una propiedad característica de la sustancia por sí misma así como de
la longitud de onda medida. Se denomina absortividad específica (a) si la concentración se
expresa en gramos/litro y absortividad molar () si la concentración se expresa en moles /
litro. Es deseable que su valor sea elevado en el análisis cuantitativo porque se logra una
mayor sensibilidad analítica.
 La longitud de paso óptico (b) a través del cual la luz viaja hacia la muestra. A menudo se
expresa en cm.
 La concentración de la sustancia que absorbe la luz. Puede expresarse en gramos/ litro (c) o
moles / litro (C).
Estos tres parámetros definen la expresión matemática de la ley de Lambert - Beer:
(6)
A= abc A=bC
De esto podemos deducir el enunciado de la ley de absorción:
La absorbancia de una solución es directamente proporcional a la concentración de la

sustancia y a la longitud del paso de luz.
La ley de Beer se puede utilizar en distintas maneras. Pueden calcularse las absortividades molares
de las especies si se conocen sus concentraciones. También se puede emplear el valor de la
absorbancia medida para conocer la concentración si es que se conocen la absortividad y la longitud
de la trayectoria de la radiación. Sin embargo, la absortividad es una función de diversas variables,
tales como el disolvente, la composición de la solución, la temperatura y la longitud de onda. Por esta
razón es aconsejable no depender nunca de los valores dados en la literatura para hacer un análisis
cuantitativo. Para conocer la absortividad en las condiciones de análisis, se construye una curva de
calibración.
La ley de absorción también se aplica a soluciones que contengan más de una clase de especies
absorbentes. Suponiendo que no haya interacción entre las distintas especies, la absorbancia total
para un sistema multicomponente se expresa como la suma de las absorbancias parciales en la que
los subíndices 1, 2, …., n se refieren a los componentes absorbentes.
Atotal = A1 + A2 + . . . . + An
Atotal = 1bc1 + 2bc2 + . . . + nbcn
Limitaciones propias de la ley de Beer

Pocas excepciones pueden encontrarse a la idea generalizada de que existe una relación lineal
entre la absorbancia y la longitud de la trayectoria. Por el contrario, cuando b es constante se
suelen encontrar desviaciones a la proporcionalidad directa entre la absorbancia medida y la
concentración. Algunas de esas desviaciones son fundamentales y representan limitaciones
reales a la ley. Otras ocurren como consecuencia de la manera en que se realizan las medidas
de absorbancia, o como resultado de los cambios químicos asociados a las variaciones de
concentración, estas dos últimas se conocen a veces, respectivamente como desviaciones
instrumentales y desviaciones químicas.
 Limitaciones reales: la ley de Beer sólo describe bien el comportamiento de la

absorción en soluciones diluidas, en este sentido, es una ley límite. A concentraciones
elevadas (mayores a 0,01 M), la distancia promedio entre las especies responsables de
la absorción disminuye hasta el punto en que cada una afecta a la distribución de carga
de sus vecinas. Esta interacción, a su vez, puede alterar la capacidad de que las
especies absorban a una determinada longitud de onda de radiación. Dado que el grado
de interacción depende de la concentración, el hecho de que ocurra este fenómeno
causa ciertas desviaciones de la relación lineal entre la absorbancia y la concentración.
Aunque el efecto de las interacciones moleculares no suele ser significativo a
concentraciones por debajo de 0,01 M, se encuentran algunas excepciones entre ciertos
iones o moléculas orgánicas de gran tamaño.
 Desviaciones químicas Se producen desviaciones de la ley de Beer cuando un

analito se disocia, asocia o reacciona con un disolvente, para dar lugar a un producto
que presenta un espectro de absorción diferente que el del analito. Los indicadores
ácido/base constituyen un ejemplo frecuente de este comportamiento.
 Desviaciones instrumentales El cumplimiento estricto de la ley de Beer sólo se
observa con una radiación verdaderamente monocromática. Esta observación
constituye también otra manifestación del carácter límite de esta ley. Por desgracia, rara
vez se puede usar de forma práctica una radiación que se limite a una sola longitud de
onda, ya que los dispositivos que aíslan partes de la señal de salida de una fuente
continua, originan en torno al valor deseado una banda más o menos simétrica de
longitudes de onda. Esto causa que la curva de absorbancia – concentración se desvíe
hacia el eje de las concentraciones. Otra de las desviaciones instrumentales se debe a la
presencia de radiación parásita. La radiación que sale de un monocromador suele estar
contaminada con pequeñas cantidades de radiación dispersada o parásita, la cual llega
a la rendija de salida debido a la dispersión y a las reflexiones en las diversas superficies
interiores. A menudo, la radiación parásita difiere bastante en longitud de onda respecto
a la radiación principal y, además, puede no haber atravesado la muestra.
ESPECTROSCOPÍA UV – V –IR
Los primeros instrumentos espectroscópicos se desarrollaron para utilizarse en la región
visible y por tanto se denominaron instrumentos ópticos. Hoy en día, este término se ha ampliado con
el fin de incluir también a los instrumentos diseñados para las regiones ultravioleta e infrarroja.
Aunque la terminología no es estrictamente correcta, sirve para subrayar los numerosos aspectos
comunes a los instrumentos usados en esas tres importantes regiones espectrales.
El objetivo de este capítulo es describir aquellos componentes de los instrumentos
ópticos que son comunes a todas las diversas técnicas ópticas espectroscópicas que se
tratan.
Los instrumentos para estudios espectroscópicos de regiones más energéticas que la
ultravioleta y menos que la infrarroja poseen características que difieren sustancialmente de las de los
instrumentos ópticos.
1- COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS ÓPTICOS:

Los métodos ópticos se basan en seis fenómenos- denominados: (1) absorción, (2)
fluorescencia, (3) fosforescencia, (4) dispersión (5) emisión y (6) quimioluminiscencia. Para medir
dichos fenómenos la mayoría de los componentes de los instrumentos son muy parecidos, aunque
difieren algo en su configuración. Además, las propiedades necesarias de dichos componentes son
las mismas prescindiendo de su aplicación a la región ultravioleta, visible o infrarroja del espectro.
Los instrumentos espectroscópicos característicos incluyen cinco componentes: (1) una fuente
estable de energía radiante, (2) un recipiente transparente para contener la muestra, (3) un
dispositivo para realizar la medida que aísle una región restringida del espectro, (4) un detector de
radiación, que convierte la energía radiante en una señal utilizable (en general eléctrica) y (5) un
sistema de tratamiento y lectura de la señal, el cual visualiza la señal transducida en una escala
medidora, en un tubo de rayos catódicos, en un medidor digital o en un registrador gráfico.
Fuente de lámpara Selector de Sistema de

Cubeta de Detector
(a) o de sólido
la muestra longitudes de
fotoeléctrico tratamiento y
incandescente onda lectura de señales
(2) (4)
(1) (3) (5)
Cubeta de Selector de Sistema de

Detector
la muestra longitudes de tratamiento y
(b) fotoeléctrico
(2) onda lectura de señales
(4)
(3) (5)
Fuente de lámpara
o de sólido
incandescente
(1)
Fuente y cubeta con Selector de Sistema de

(c) la muestra longitudes de
Detector
tratamiento y
fotoeléctrico
(1 y 2 ) onda lectura de señales
(4)
(3) (5)

La figura ilustra las tres formas de configuración de estos componentes para realizar los seis
tipos de mediciones espectroscópicas mencionadas antes. Como puede verse en la figura los
componentes (3),(4) y (5) se colocan de igual manera para cada tipo de medida.
Las dos primeras configuraciones instrumentales, que se usan para la medida de absorción,
fluorescencia, fosforescencia y dispersión necesitan una fuente externa de energía radiante. Para la
absorción, el haz procedente de la fuente pasa directamente de la muestra al selector de longitud de
onda (en algunos instrumentos, la posición de la muestra y el selector se invierte). La última de las
tres corresponde a espectroscopía de emisión aquí la fuente es la propia muestra, retenida en un
recipiente para emitir radiación fluorescente, fosforescente o dispersada que se mide a un ángulo
dado (por lo general 90 grados) respecto de la fuente.
Fuentes de radiación
Para utilizarse en espectroscopía una fuente debe generar un haz de radiación con potencia
suficiente para que se detecte y mida con facilidad. Además su potencia de salida debe ser
estable durante períodos de tiempo razonables.
Típicamente, la potencia radiante de una fuente varía de manera exponencial con el potencial de la
fuente de alimentación eléctrica.
Para proporcionar la estabilidad necesaria, a menudo, se utiliza una fuente reguladora de potencia.
El problema de la estabilidad de la fuente se soluciona con diseños de doble haz en los que la
relación de la señal de la muestra respecto a la de la fuente en ausencia de muestra sirve como
parámetro analítico. En dichos diseños, las intensidades de los dos haces se miden simultánea o
casi simultáneamente de manera que el efecto de las fluctuaciones de la señal de salida de la
fuente se anula en gran parte.
Las fuentes espectroscópicas más ampliamente utilizadas son de dos tipos: continuas y de líneas.
a - Fuentes continuas:
Las fuentes continuas se usan mucho en espectroscopia de absorción y de fluorescencia . La
fuente más común para la región ultravioleta es la lámpara de deuterio. Cuando se precisa
una fuente particularmente intensa, se utilizan lámparas de arco llenas de un gas, argón,
xenón o mercurio a alta presión. Para la región visible del espectro, la lámpara de filamento
de tungsteno se usa casi universalmente. Las fuentes de infrarrojo más comunes son sólidos
inertes calentados a 1500-2000 K, una temperatura a la que la máxima salida radiante se
produce entre 1,5-1,9 µm.
Fuentes de radiación para la región Ultravioleta:

- Lámparas de deuterio e hidrogeno: La excitación eléctrica de deuterio o hidrógeno a
baja presión produce un auténtico espectro continuo en la región
ultravioleta. El mecanismo por el cual se produce un espectro continuo,
supone la formación inicial de una especie molecular excitada para dar
dos especies atómicas más un fotón ultravioleta.
Tanto la lámpara de deuterio como la de hidrógeno dan lugar a un
especto continuo utilizable en la región de 160 a 375 nm. Puesto que
el vidrio absorbe fuertemente a longitudes de onda menores de unos
350 nm, las lámparas de deuterio e hidrogeno deben utilizar ventanas
de cuarzo..
- Lámpara de filamento de tungsteno: Es la más común de radiación visible y del

infrarrojo cercano. La distribución de energía de esta lámpara se
aproxima a la de un cuerpo negro y por tanto depende de la temperatura,
es útil para la región de longitud de onda entre 350 y 2500 nm. El límite
inferior lo impone la cubierta de vidrio que aloja al filamento. Necesita
mantener un control de voltaje para estabilizarla, utilizando
transformadores de voltaje constante.
Las lámparas de tungsteno/ halógeno contienen una pequeña cantidad
de yodo dentro de la cubierta de cuarzo que aloja al filamento de tungsteno. Dada la
elevada temperatura de la lámpara (3500 K) hay que utilizar cuarzo. La vida media es
más del doble de la de una lámpara ordinaria. Estas lámparas son bastantes mas
eficientes y extienden su intervalo de salida hasta bien entrada la región ultravioleta. Por
estas razones, son las que se emplean en muchos instrumentos espectroscópicos
modernos.
Fuentes de radiación para la región Infrarrojo

Consisten en un sólido inerte que se calienta eléctricamente a una temperatura comprendida
entre 1500 y 2200 K. Como resultado se obtiene una radiación continua.
Capítulo III Introducción a la Espectroscopia y Espectroscopia UV- Vis- IR 10 |

- Emisores de Nernst: Constituido por oxido de tierras raras, tiene forma cilíndrica con un
diámetro de 1 a 2 mm y una longitud de unos 20 mm. Los extremos del cilindro están
unidos a unos conductores de platino que permiten el paso de la electricidad alcanzando
temperaturas de 1200 y 2200K.
- Fuente globar: Es una varilla de carburo de silicio que por lo general tiene unos 50 mm
de longitud y 5 mm de diámetro. Se calienta también eléctricamente (1300 a 1500 K).
- Fuente de filamento incandescente: Una fuente de intensidad algo menor, con vida útil
más prolongada en comparación con un Globar o un emisor de Nernst, es un espiral muy
apretado de alambre de nicromo, que se calienta por el paso de una corriente eléctrica.
Alambres de rodio, introducidos en el interior de cilindros de cerámica.
- El arco de mercurio: Para el infrarrojo lejano (  50 m) ninguna de las fuentes antes
descriptas, proporcionan suficiente energía para una detección adecuada. En este caso se
utiliza un arco de mercurio de alta presión. Es un tubo de cuarzo que contiene vapor de
mercurio a una presión mayor que una atmósfera.
- Lámpara de filamento de tungsteno: Esta es una fuente adecuada para la región del
infrarrojo cercano 4000 a 12800 cm-1.
b - Fuentes de líneas:
Las fuentes que emiten unas pocas líneas discretas se usan ampliamente en espectroscopia
de absorción atómica, en espectroscopia de fluorescencia atómica y molecular y en
espectroscopia Raman (la refractometría y la polarimetría también emplean fuentes de líneas)
Las familiares lámparas de vapor de mercurio y de sodio, utilizadas en distintos instrumentos
espectroscópicos, proporcionan unas pocas líneas agudas en las regiones ultravioleta y
visible.
Las lámparas de cátodo hueco y de descarga sin electrodos son las fuentes de líneas más
importantes para los métodos de absorción atómica y de fluorescencia.
Con el fin de realizar mediciones de la absorción molecular, se necesita una fuente continua
cuya potencia no varíe bruscamente en un intervalo considerable de longitudes de onda.
Selectores de longitud de onda

Para la mayoría de análisis
espectroscópicos se necesita una radiación
constituida por un grupo limitado y continuo
de longitudes de onda estrechas
denominado banda. Un ancho de banda
estrecho tiende a aumentar la sensibilidad
de las medidas de absorbancia, puede
hacer más selectivos tanto los métodos de
Figura: Anchuras de banda efectiva para dos tipos de filtros absorción como los de emisión y con
frecuencia es una exigencia con miras a
obtener una relación lineal entre la señal óptica y la concentración.
La señal de salida de un selector de longitud de onda correspondería, idealmente a una radiación de
una única longitud de onda o frecuencia.
No existe ningún selector de longitud de onda que se aproxime al caso ideal, en su lugar lo que se
obtiene es una distribución de longitudes de onda como en la figura.
En este caso, se representa el tanto por ciento de radiación incidente de una determinada longitud de
onda, transmitida por el selector, en función de la longitud de onda. El ancho de banda efectivo,
definido en la figura es una medida inversa de la calidad de dispositivo, siendo la resolución mejor
cuanto más estrecho es el ancho de banda.
Existen dos clases de selectores de longitud de onda, los filtros y los monocromadores.
Filtros (sistemas aislamiento de )
Dos tipos de filtros se emplean para la selección de la longitud de onda, los de absorción (se limitan
a la región visible del espectro) y los de interferencia (operan en las regiones ultravioleta, visible e
infrarroja).
- Filtros de absorción: En general son mas baratos que los filtros de interferencia, se utilizan para la
selección de bandas en la región visible. Estos filtros funcionan absorbiendo ciertas zonas del
espectro. El tipo mas usual es un vidrio coloreado o una suspensión de un colorante en gelatina que
se coloca entre dos placas de vidrio. El primero tiene la ventaja de una mayor estabilidad térmica.
Los filtros de absorción tienen anchos de banda entre 30 y 250 nm. Los filtros de corte tienen
transmitancia de casi 100% en una zona del espectro visible, pero luego disminuyen, con rapidez,
hasta un valor de transmitancia igual a cero en el resto. Una banda espectral estrecha puede aislarse
si se acopla un filtro de corte con un segundo filtro.

De la figura resulta evidente que las características de funcionamiento de los filtros de absorción son
bastantes inferiores a las de los filtros de interferencia . No solo son sus bandas mayores sino que,
para anchos de banda estrechos, la fracción de luz transmitida también es menor.
- Filtros de interferencia: Éstos se basan en las interferencias ópticas para así proporcionar bandas
de radiación bastante estrechas
Un filtro de interferencia consiste en un dieléctrico transparente (con
frecuencia fluoruro de calcio o de magnesio) que ocupa el espacio entre dos películas metálicas
semitransparentes. Esta disposición se coloca entre dos placas de vidrio y otros materiales
transparentes
El grosor de la capa dieléctrica se controla con cuidado y

determina la longitud de onda de la radiación transmitida.
Cuando un haz perpendicular de radiación colimada incide
en esta disposición, una fracción atraviesa la primera capa
metálica, mientras que la restante se refleja. La parte que
ha pasado, sufre una partición similar cuando incide en la
segunda película metálica. Si la parte reflejada de la
segunda interacción es de longitud de onda adecuada, se
refleja en parte desde la cara interior de la primera capa
en fase con la luz incidente de la misma longitud de onda.
El resultado es que se refuerza esta determinada longitud
de onda, mientras que la mayoría de las otras, fuera de
fase, sufren una interferencia destructiva.
La relación entre el grosor de la capa dialéctica t y la
longitud de onda transmitida  puede encontrarse con la
ayuda de la figura parte (b).
Monocromadores:
En muchos métodos espectroscópicos, es preciso o deseable poder variar, de forma continua
y en un amplio intervalo, la longitud de onda de la radiación. Este proceso se denomina barrido de un
espectro. Los monocromadores se diseñan para realizar barridos espectrales. Los monocromadores
para las radiaciones ultravioleta, visible e infrarroja son similares en cuanto a construcción mecánica
ya que todos ellos utilizan rendijas, lentes, espejos, ventanas y redes o prismas. Para garantizar el
barrido, los materiales con los que se fabrican estos componentes, dependen de la región de
longitudes de onda a la que se pretende trabajar.
- Componentes de los monocromadores:
La figura muestra los elementos ópticos de todos los monocromadores:

(1) una rendija de entrada que proporciona una imagen óptica rectangular
(2) una lente o espejo colimador que produce un haz paralelo de radiación
(3) un prisma o red que dispersa la radiación en sus longitudes de onda individuales
(4) un elemento focalizador que forma de nuevo la imagen de la rendija y la enfoca en una
superficie plana denominada plano focal
(5) una rendija de salida en el plano focal, que aisla la banda espectral deseada.
Además la mayoría de los monocromadores tienen ventanas de entrada y salida, cuyo diseño
protege a los componentes de polvo y los humos corrosivos del laboratorio.
Como se muestra en la figura en los monocromadores hay dos clases de elementos dispersantes:
redes de reflexión y prismas. Como ilustración se muestra un haz constituido por solo dos longitudes
de ondas 1 y 2(1  2)
La radiación que entra en los monocromadores a través de una estrecha abertura rectangular
o rendija, se colima y entonces incide en la superficie del elemento dispersante con un ángulo dado.
Para un monocromador de red, la dispersión angular de las longitudes de onda origina la difracción
que se produce en la superficie de deflexión, para un prisma, la refracción en las dos caras da lugar
a una dispersión angular de la radiación tal como se muestra. En ambos casos, la radiación
dispersada se enfoca en el plano focal AB en el que aparece en forma de dos imágenes
rectangulares de la rendija de entrada (una para 1 y la otra para 2). Por rotación del elemento
dispersante, se puede enfocar una u otra banda en la rendija de salida.
Antiguamente, la mayoría de los monocromadores eran instrumentos de prisma. Sin embargo
actualmente casi todos los monocromadores comerciales se basan en redes de reflexión porque son
más baratas, proporcionan mejor separación de longitudes de onda para un mismo tamaño de
elemento dispersante y dispersan linealmente la radiación.
Características de funcionamiento de los monocromadores: La calidad de un monocromador

depende de la pureza de su radiación de salida, de su capacidad para resolver longitudes de onda
adyacentes de su poder de captación de luz y de su anchura espectral.
Recipientes para muestras : cubetas ó celdas
Todos los estudios espectroscópicos, con excepción de la

espectroscopia de emisión precisan recipientes que contengan
la muestra. Al igual que los elementos ópticos de los
monocromadores, las celdas o cubetas que contienen las
muestras deben fabricarse de un material que permita el paso
de la radiación de la región espectral de interés. Así para
trabajar en la región ultravioleta (por debajo de los 350 nm) se
necesita cuarzo o sílice fundida, ambas sustancias son
trasparentes en la región visible y también en la infrarroja
hasta unos 3m. Los vidrios de silicato pueden emplearse en la
región de 350 a 2000 nm. Los recipientes de plástico, también
se utilizan en la región visible. La sustancia mas comúnmente empleada para las ventanas de las
celdas para la región infrarroja es el cloruro de sodio cristalino, también pueden usarse con este fin
los demás materiales transparentes al infrarrojo.

Debido a la tendencia de los disolventes a absorber, las cubetas para el infrarrojo suelen ser mucho
mas estrechas (0,1 a 1 mm) que las empleadas en las regiones ultravioleta y visible. Las
concentraciones de muestra de 0,1 a 10%. Con frecuencia, las celdas son desmontables, con
espaciadores de teflón permitiendo variar la longitud del camino óptico.
Las ventanas de cloruro de sodio son las más utilizadas, se pulen con un polvo amortiguador
volviendo a su condición original.
Las mejores cubetas tienen ventanas que son perfectamente perpendiculares a la dirección
del haz para minimizar las pérdidas por reflexión. Para los trabajos en las regiones ultravioleta y
visible, la longitud mas común de la cubeta es 1 cm, estas son contrastadas y calibradas. También
pueden tener caminos ópticos desde 0,1 hasta 10 cm. Especial cuidado hay que tener en repetir la
posición de la cubetas respecto al haz, de otro modo, las variaciones del camino óptimo y las
pérdidas por reflexión en las superficies curvas cuando las cubetas son cilíndricas pueden causar
errores significativos.
La calidad de los datos de absorbancia depende de manera crítica de la forma en que se usen
y mantengan las cubetas contrastadas. Las huellas dactilares, la grasa u otras manchas en las
paredes, alteran de forma notable las características de transmisión de una cubeta.
Por lo tanto es obligada una limpieza a fondo, antes y después de usarlas, las superficie de las
ventanas no debe tocarse durante su manipulación. Las celdas contrastadas no deberían secarse
nunca calentándolas en una estufa o con una llama. Para su limpieza se recomienda, con papel
para lentes empapado con metanol de grado espectrométrico, el metanol se evapora dejando las
superficies de las cubetas libre de impurezas.
Técnicas para la manipulación de la muestra

Vimos que en espectroscopia ultravioleta y visible los espectros se obtienen a partir de soluciones
diluidas del analito. En espectroscopia de infrarrojo, podemos analizar muestras líquidas, sólidas y
gaseosas.
Líquidos puros
Cuando la cantidad de muestra es pequeña o
cuando no se dispone del disolvente
apropiado, es habitual obtener los espectros
del líquido puro. En este caso solo una
película muy delgada tiene un camino óptico
suficientemente corto como para producir
espectros satisfactorios. Una gota del líquido
puro se comprime entre dos placas de sal de
roca para obtener una placa con un grosor de
0,01 mm o menos. Las dos placas se
mantienen unidas por capilaridad y se colocan
entonces en la trayectoria del haz.
Sólidos
Los espectros de sólidos que no pueden disolverse
en un disolvente transparente al infrarrojo, se
obtienen con frecuencia dispersando el analito en
una matriz liquida o sólida y analizando la mezcla
resultante.
Estas técnicas requieren que el tamaño de
partícula del sólido suspendido sea menor que la
longitud de onda del haz infrarrojo.
Se tritura de 2 a 5 mg de una muestra finamente
pulverizada (tamaño de partícula  2m) en
presencia de unas gotas de un aceite pesado de un
hidrocarburo (Nujol).
Otra técnica consiste en partir de un miligramo o
menos de muestra finamente triturada que se
mezcla íntimamente con unos 100mg de polvo de
Figura: Prensa de preparación de pastillas de
bromuro de potasio desecado.
KBr
La mezcla se puede efectuar con un mortero y mejor aun en un pequeño molino de bolas. La mezcla
se comprime luego en un troquel especial a una presión de 700 a 1000 Kg/cm 2 obteniendo un disco
transparente, mejores resultados si el disco se forma al vacío eliminando el aire ocluido. Luego el
disco se coloca en el haz del instrumento para su análisis espectroscópico.

Gases:
El espectro de un líquido de bajo punto de ebullición o de un gas se puede obtener permitiendo a la

muestra que se expanda en una cubeta en la que se ha hecho el vacío.
Existe una variedad de cubetas para este objeto, con longitudes de camino óptico que varían desde
unos pocos centímetros a varios metros.
Detectores de radiación
Estos dispositivos son transductores que convierten la energía radiante en una señal eléctrica.
El detector ideal debería tener, un amplio intervalo de longitudes de onda, una elevada sensibilidad,
una elevada relación señal/ruido y una respuesta constante. Además debería poseer un tiempo de
respuesta rápido y una mínima señal de salida en ausencia de iluminación. Por ultimo, la señal
eléctrica producida por el transductor debería ser directamente proporcional a la potencia radiante P.
Esto es: S = k P S= respuesta eléctrica en términos de corriente , voltaje o resistencia

K= sensibilidad de calibración.
Existen dos tipos de transductores de radiación uno responde a los fotones y el otro al calor.
- Detectores de fotones: (también llamados detectores fotoeléctricos o cuánticos) tienen una

superficie activa capaz de absorber radiación. Existen diferentes tipos:
 Fotocélulas o células fotovoltaicas semiconductoras, o células con capa de barrera.
Consisten en una lámina de cobre sobre la que se ha depositado una capa de material
semiconductor, como selenio ú óxido cuproso. Esta capa está cubierta por una capa de
metal transparente que sirve como electrodo colector. Al iluminarse a través del electrodo
transparente, se produce un flujo de electrones que puede ser medido con un amperímetro.
Estos detectores son resistentes, relativamente económicos, y sensibles desde el UV hasta
los 1000 nm. No se requiere ningún aporte externo de energía, y la corriente producida es
directamente proporcional a la energía de llega.
Las fotocélulas muestran el llamado “efecto de fatiga”, consistente en que presentan una
subida
inicial de corriente que luego decrece gradualmente hasta el equilibrio. Por ello, conviene
esperar unos 30-60 segundos entre lecturas.
 Fototubos multiplicadores. Es un tubo que contiene en su interior un cátodo consistente en

una placa de metal que emite electrones de forma proporcional a la energía que incide
sobre ella.
Contiene además un ánodo, que recoge los electrones, y de 9 a 14 dínodos o nieveles de
energía.
Los electrones producidos en el primer choque contra el cátodo pasan a chocar contra una
superficie secundaria, donde cada electrón produce entre 4 y 6 electrones adicionales que
van a otro nivel (sínodos), y así sucesivamente, multiplicándose de este modo el efecto del
primer choque de la luz contra el cátodo, hasta que los electrones llegan al ánodo, y la señal
se amplifica en cientos o miles de veces.
Los fototubos tienen un rápido tiempo de respuesta, no muestran efectos de fatiga tan altos
como otros detectores, y son muy sensibles.
- Detectores de calor:
Los detectores de fotones analizados anteriormente no pueden ser utilizados para medir la
radiación infrarroja, ya que los fotones de esta región carecen de la energía suficiente para
causar la fotoemisión de electrones. Por lo tanto, deberán emplearse detectores térmicos.
Desafortunadamente, sus características de funcionamiento son definitivamente inferiores a las
de los anteriores.
- Detectores térmicos Un detector térmico consiste en un a fina superficie ennegrecida
que absorbe la radiación infrarroja y como consecuencia, aumenta la temperatura.
Este aumento se transforma en una señal eléctrica que posteriormente se amplifica y
se mide. Los cambios de temperatura son pequeños.
- Termopares: Un par de uniones que se forman soldando los extremos de dos piezas
de un metal como el bismuto y otro metal distinto como el antimonio. Entre las dos
uniones se genera un potencial que varia en función de su diferencia de temperatura.
La unión se ennegrece (para mejorar su capacidad de absorber calor) y se sella en
una cámara de vacío con una ventana transparente a la radiación infrarroja.
- Detectores piroeléctricos: Se construyen con laminas cristalinas de materiales

piroeléctricos, son aislantes (materiales dieléctricos) con unas especiales propiedades
térmicas y eléctricas. Al colocar el cristal piro eléctrico entre las placas de dos
electrodos (uno de los cuales es transparente a la radiación infrarroja) se produce una
capacitancia que depende de la temperatura, al incidir la radiación infrarroja cambia la
temperatura y se altera la distribución de carga a través del cristal lo que se puede
detectar como una corriente en un circuito eléctrico externo conectado a las dos caras
del condensador.
Procesadores de señales y dispositivos de lectura

Es un dispositivo electrónico que amplifica la señal electrónica del detector; además puede alterar la
señal de corriente continua a alterna (o a la inversa), cambiarla de fase y filtrarla. Asimismo puede
ser necesario que realice operaciones matemáticas con las señales tales como diferenciar, integrar o
convertir en logaritmo.
Los instrumentos modernos incorporan distintos tipos de dispositivos de lectura. Por ejemplo
medidores digitales, escalas de los potenciómetros, registradores y tubos de rayos catódicos.
2- TIPOS GENERALES DE INTRUMENTOS PARA MEDICIONES DE ABSORCIÓN MOLECULAR
a)
b)
Figura: Instrumentos para mediciones de absorción ultravioleta/visible/ Infrarrojo cercano.

a) De un sólo haz; b) de doble haz .
En la figura se muestra unos diagramas de bloques que indican los sistemas ópticos de dos tipos de
instrumentos para medidas de absorción ultravioleta/visible/infrarrojo cercano.
Instrumento de un solo haz, correspondiente a la parte (a) es el tipo más sencillo:
El selector de la longitud de onda es un filtro o un monocromador.
La determinación de la transmitancia supone tres etapas sucesivas separadas en el tiempo:
1) ajuste del 0% de T colocando un obturador en posición,
2) ajuste del 100% de T con el disolvente en la trayectoria de la luz y
3) medición del % de T con la muestra colocada.
El instrumento requiere que la fuente y el sistema electrónico presenten un comportamiento
constante durante el tiempo necesario para completar las tres etapas.
Instrumento de doble haz, en la parte (b) de la figura. El espejo sectorizado rotatorio dirige la
radiación procedente del filtro o monocromador, alternativamente, a la cubeta de referencia y a la
cubeta de muestra.
El instrumento de doble haz suele ser de tipo nulo, en los cuales el haz que atraviesa la referencia
se atenúa mecánicamente hasta que su intensidad justo se iguala con la del haz de la muestra.
Un instrumento de doble haz proporciona una señal libre, de las derivadas de la fuente y del
detector, sin necesidad de unos componentes y una fuente altamente estable y cara.
En los instrumentos de un solo haz y de doble haz, la muestra se suele colocar entre el selector
de longitud de onda y el detector. Esta disposición es necesaria en los instrumentos
ultravioleta/visible, para poder minimizar la fotodescomposición de las especies que resultan de la
exposición a toda la potencia de la fuente.
Fuente : lámpara Cubeta de Sistema de

Selector de Detector
(1) muestra (3) tratamiento y
longitudes fotoeléctrico
de onda (2) (4) lectura de señales
(5)
Fotómetros: son sencillos y bastante económicos para realizar análisis de absorción. Los fotómetros
de filtro son más convenientes, robustos y fáciles de mantener y usar que los espectrofotómetros más
sofisticados. Tienen elevado rendimiento energético y buena señal/ruido con componentes y
detectores bastante sencillos y económicos Los análisis cuantitativos se realizan con mucha
exactitud.

Espectrofotómetros: Hay numerosos espectrofotómetros comerciales, algunos diseñados solo para
la región visible, otros se aplican en las regiones ultravioleta y visible. Unos pocos pueden realizar
medidas desde el ultravioleta hasta el infrarrojo cercano (185 a 3000 nm).
- Instrumentos de un solo haz para la región ultravioleta / visible: Existen distintos instrumentos
de un solo haz sin registrador, que se pueden usar para mediciones tanto en el ultravioleta como en
el visible. Para estos instrumentos la longitud de onda varia desde 190 - 210 nm a 800 -1000 nm.
Todos ellos provistos de lámparas intercambiables de tungsteno e hidrógeno. La mayoría emplea
tubos fotomultiplicadores como detectores y redes para la dispersión. Algunos con dispositivos de
lectura digital.
En la figura se muestra un espectrofotómetro sencillo y barato, el Spectronic 20. Apareciendo

en el mercado en los años 50, aún se utiliza principalmente con fines de enseñanza, por su bajo
costo económico y sus adecuadas características de funcionamiento.
El Spectronic 20 emplea una fuente de luz de filamento de tungsteno, la cual funciona
mediante una fuente de alimentación estabilizada que proporciona una radiación de intensidad
constante.
Después de la difracción, en una sencilla red de reflexión, la radiación pasa a través de la
cubeta de muestra o de referencia hacia el fototubo. La señal eléctrica del detector amplificada,
acciona un medidor con una escala de 14 cm, calibrada en transmitancia y absorbancia.
El instrumento esta dotado de un obturador consistente en una placa que se coloca de forma
automática entre el haz y el detector, siempre que la cubeta se retira del porta cubetas, entonces se
realiza el ajuste del 0% de T. El dispositivo de control de la luz mostrado en la figura parte (b),
consiste en una ranura en forma de V que puede moverse hacia dentro y hacia fuera del haz, para así
colocar el medidor al 100% de T.
El intervalo del Spectornic 20 va de 340 a 625 nm, un fototubo auxiliar amplia este intervalo
hasta 950 nm.
- Instrumentos de doble haz: En la figura se muestra algunos detalles de la estructura de un

espectrofotómetro de ultravioleta/visible manual de doble haz y bastante barato. La radiación se
dispersa con una red cóncava, que a su vez enfoca el haz en un espejo rotatorio sectorizado. El
instrumento tiene un intervalo de longitudes de onda de 195 a 850 nm. Dichos instrumentos son muy
adecuados para trabajos cuantitativos donde no se necesita obtener un espectro completo.
Figura : Espectrofotómetro manual de doble haz para la región Ultravioleta/ visible, modelo Hitachi 100-60
Los espectrofotómetros de infrarrojo que se encuentran en el comercio son por lo general

instrumentos de doble haz con registrador, que utilizan redes de reflexión para la dispersión de la
radiación.
En general, los diseños ópticos de los instrumentos dispersivos no difieren demasiado de los
espectrofotómetros ultravioleta/visible de doble haz, excepto que en los instrumentos de infrarrojo el
compartimiento de la muestra y de referencia siempre se colocan entre la fuente y el monocromador.
Esta disposición es posible debido a que la radiación infrarroja, a diferencia de la radiación
ultravioleta/visible no es suficientemente energética para provocar la descomposición química de la
muestra. No obstante, colocar la muestra y la referencia delante del monocromador tiene la ventaja
de que la mayor parte de la radiación dispersada, que se genera dentro del compartimiento de
cubetas, se elimina por el monocromador y así no alcanza el detector.

MUESTRA
FUENTE MONOCROMADOR DETECTOR
Esquema de un espectrofotómetro de doble haz

3- APLICACIONES DE LA ESPECTROSCOPIA MOLECULAR DE ABSORCION UV/ V E
INFRARROJO
Las medidas de absorción basadas en la radiación ultravioleta o visible encuentran extensa
aplicación en la determinación cualitativa y cuantitativa de especies moleculares. Mientras que en el
infrarrojo su aplicación principal es cualitativa.
La radiación ultravioleta abarca el intervalo espectral desde 10 hasta 380 nm, para análisis se emplea
generalmente los intervalos entre 200 a 380 nm
Para la región visible la región espectral va entre los intervalos 350 a 800 nm.
La región infrarroja del espectro incluye la radiación con números de onda comprendidos entre los
12800 y los 10 cm-1 lo que corresponde a longitudes de onda de 0,78 a 1000 m1.
Tanto desde el punto de vista de las aplicaciones como de los instrumentos, es conveniente
subdividir el espectro infrarrojo en tres regiones denominadas infrarrojo cercano, medio y lejano.
Región Intervalo de longitud de onda Intervalo de números Intervalo de
() m de onda () cm -1
frecuencias () Hz
Cercano 0,78 a 2,5 12800 a 4000 3.8x1014 a 1,2 x 1014
Medio 2,5 a 50 4000 a 200 1,2 x 1014 a 6,0x1012
Lejano 50 a 1000 200 a 10 6,0x1012 a 3,0 x1011
La más utilizada 2,5 a 15 4000 a 670 1,2 x 1014 a 2,0x1013
En tabla se indican aproximadamente los limites de cada una de ellas, la mayoría de las
aplicaciones están comprendidas en el infrarrojo medio los 4000 y los 400 cm -1 (de 2,5 a 25 m).
a) Especies absorbentes:
La absorción de radiación ultravioleta o visible por una especie atómica o molecular M se puede
considerar que es un proceso en dos etapas, la primera de las cuales implica una excitación
electrónica como muestra la ecuación
M + hv M
El producto de la reacción entre M y el fotón hv es una especie electrónicamente excitada que
se presenta por M. El tiempo de vida de la especie excitada es breve (10-8 a 10-9 s) su
existencia acaba por alguno de los diversos procesos de relajación. El tipo más común de
relajación implica la conversión de la energía de excitación en calor, esto es
M M + calor
La relajación puede tener lugar también por descomposición de M dando nuevas especies,
un proceso de este tipo se llama reacción fotoquímica.
La absorción de radiación ultravioleta o visible proviene de la excitación de los electrones
enlazantes y como consecuencia, las longitudes de onda de los picos de absorción pueden
correlacionarse con los tipos de enlaces que existen en las especies en estudio. La
espectroscopia de absorción molecular es por tanto valiosa para la identificación de los grupos
funcionales de una molécula. Sin embargo, son más importantes las aplicaciones de
espectroscopía de absorción ultravioleta y visible para la determinación cuantitativa de
compuestos que contienen grupos absorbentes.
Se distingue tres tipos de transiciones electrónicas y clasifica las especies absorbentes en
base a ellas. Las tres transiciones consideradas implican (1) electrones  , y n, (2) electrones d
y f y (3) electrones de transferencia de carga.
Los electrones que contribuyen a la absorción por una molécula orgánica son: (1) aquellos que
participan directamente en la formación del enlace entre átomos y que están además asociados a
más de un átomo y (2) los electrones no enlazantes o externos que no participan y que están
localizados alrededor de átomos como el oxígeno, los halógenos, el azufre y el nitrógeno.

Cambios bipolares durante las vibraciones y las rotaciones:
Por lo general, la radiación infrarroja no es suficientemente energética como para producir las
transiciones electrónicas que se dan cuando se trata de las radicaciones ultravioleta y visible.
La absorción de radiación infrarroja se limita en gran parte a especies moleculares para
las cuales existen pequeñas diferencias de energía entre los distintos estados vibracionales y
rotacionales.
Para absorber radiación infrarroja, una molécula debe experimentar un cambio neto en el
momento bipolar como consecuencia de su movimiento de vibración o de rotación. Si la frecuencia de
la radiación iguala exactamente a la frecuencia de vibración natural de la molécula ocurre una
trasferencia neta de energía que da lugar a un cambio en la amplitud de la vibración molecular, como
consecuencia se absorbe la radiación. Cuando se trata de especies homonucleares como el O2,
N2, o Cl2 el momento bipolar no se altera durante la vibración o la rotación y en consecuencia este
tipo de compuestos no absorben en el infrarrojo.
Transiciones rotacionales:
La energía necesaria para provocar un cambio a nivel rotacional es muy pequeña y
corresponde a radiaciones de 100 cm-1 o menores. Como los niveles rotacionales estan cuantizados,
la absorción por los gases en esta región del infrarrojo cercano se caracteriza por líneas discretas
bien definidas. Sin embargo en líquidos o sólidos los choques e interacciones intramoleculares
causan el ensanchamiento de las líneas resultando un espectro continuo.
Tipos de vibraciones moleculares:
Las posiciones relativas de los átomos en una molécula no están exactamente fijas, sino que
fluctúan continuamente como consecuencia de multitud de diferentes tipos de vibración.
Pueden distinguirse dos tipos básicos de vibraciones: tensión y flexión. Una vibración de
tensión supone un cambio continuo en la distancia interatómica a lo largo del eje del enlace entre dos
átomos. Las vibraciones de flexión se caracterizan por un cambio en el ángulo entre dos enlaces y
son de cuatro tipos: tijereteo, balanceo, aleteo y torsión. Los cuales se representan en la siguiente
figura.
Figura 10: Tipos de vibraciones moleculares . Nota: + Indica un movimiento del plano de la página
hacia el lector. - Indica un movimiento del plano de la página alejándose del lector
- Especies absorbentes que contienen electrones  , y n

Las moléculas e iones orgánicos, al igual que gran número de aniones inorgánicos, se
incluyen dentro de las especies absorbentes que contienen electrones  , y n.
Todos los compuestos orgánicos son capaces de absorber radiación electromagnética, ya que
todos tienen electrones de valencia que pueden ser excitados a niveles superiores de energía.
Las energías de excitación asociadas a los electrones que forman los enlaces más sencillos son
suficientemente elevadas para que la absorción por ellos este restringida a las región llamada del
ultravioleta de vacío (  185 nm) donde los componentes de la atmósfera también absorben
fuertemente.
La absorción de radiación ultravioleta y visible de longitud de onda larga se restringe a un
número limitado de grupos funcionales (llamados cromóforos) que contienen electrones de
valencia con energías de excitación relativamente bajas.
Los espectros electrónicos de moléculas orgánicas que contienen cromóforos son
normalmente complejos, ya que la superposición de transiciones vibracionales sobre las
transiciones electrónicas da lugar a una combinación compleja de líneas solapadas, el resultado es
una banda ancha de absorción que a menudo parece continua.
- Cromóforos orgánicos
En la tabla se da una lista de los cromóforos orgánicos comunes y la localización aproximada
de sus máximos de absorción. Estos datos pueden servir tan solo como guía aproximada para la
identificación de los grupos funcionales, debido a que las posiciones de los máximos se ven
también afectadas por el disolvente y por los detalles estructurales de la molécula que contiene los
cromóforos.

Tabla: Características de absorción de algunos cromóforos comunes
b) Aplicación de las medidas de absorción al análisis cualitativo

La espectrofotometría ultravioleta y visible tiene una aplicación algo limitada para el análisis
cualitativo, ya que el número de máximos y mínimos de absorción es relativamente pequeño.
- Disolventes:
Las consideraciones que se tienen que hacer al elegir un disolvente no son solo respecto a
su transparencia, sino también respecto a sus posibles efectos sobre el sistema absorbente.
Normalmente, los disolventes polares tales como el agua, alcoholes, esteres, y cetonas
tienden a eliminar la estructura fina del espectro como resultado de los efectos vibracionales
y de hecho espectros que se aproximen a los de fase gas se observan mas fácilmente en
disolventes no polares como los hidrocarburos.
Además, las posiciones de los máximos de absorción están afectadas por la naturaleza del
disolvente.
Es imprescindible utilizar el mismo disolvente cuando se comparan espectros de absorción
para propósitos de identificación. El agua y los alcoholes se utilizan rara vez como
disolventes en espectroscopía IR, no solo porque absorben intensamente sino porque
también atacan a los haluros de metal alcalino, que son los materiales mas comunes que se
utilizan en las ventanas de las cubetas.
Algunos disolventes utilizados son: Disulfuro de carbono. Tetracloruro de carbono.
Tetracloroetileno, Cloroformo. Dioxano. Ciclohexano. Benceno
En la tabla se muestra una lista de algunos disolventes comunes y la longitud de onda
aproximada por debajo de la cual no pueden usarse debido a la absorción. Este mínimo
depende mucho de la pureza del disolvente. Entre los disolventes comunes para
espectrofotometría ultravioleta se incluyen el agua, el etanol del 95%, el ciclohexano y el 1,4-
dioxano. Para la región del visible, cualquier disolvente incoloro es útil.
Disolventes para las regiones del ultravioleta y el

visible
Disolvente Mínimo * aproximado de transparencia
(nm)
Agua 190
Etanol 210
n- Hexano 195
Ciclohexano 210
Benceno 280
Dietiléter 210
Acetona 330
1,4-Dioxano 220
* para cubetas de 1 cm
Ejemplos de Aplicacion de Espectroscopia Ultra Violeta - Visible
1- Compuestos aromáticos poli nucleares de carácter cancerígeno, en alimentos, bebidas, cigarrillos.
2- Productos naturales con esteroides y clorofila.
3- Sustancias colorantes.
4- Vitaminas (vit. A).
5- Distintas estructuras aromáticas quinónicas que absorben a distintas longitudes de onda.
6- Investigación de fotosíntesis y tejidos vivos.
7- Determinación de impurezas en muestras orgánicas, tales como residuos de plantas industriales.
8- En agricultura: determinación de pesticidas en plantas, ríos y animales, que comen y beben
sustancias
contaminadas.
9- En medicina: análisis de enzimas, vitaminas, hormonas, esteroides, alcaloides, barbitúricos
(diagnóstico
de enfermedades).
10-En farmacia: determinación de pureza de productos manufacturados.
11-Determinación de Nitritos, Nitratos, ( en agua, carnes).
12- Determinación de oligoelementos en plantas.
13- Determinar la conformación de proteínas globulares.
14- Determinación enzimática de glucosa en vinos.
15- Detección de grupos funcionales: A pesar de que no permite una identificación inequívoca de un
compuesto orgánico, el espectro de absorción en las regiones del ultravioleta y visible es muy útil
para detectar presencia de ciertos grupos funcionales que actúan como cromóforos. Por ejemplo para
grupos carbonilos, anillos aromáticos, aminas aromáticas o una estructura fenólica
Aplicaciones cualitativas de absorción en el infrarrojo medio

La identificación de un compuesto orgánico a partir de este tipo de espectros es un proceso en
dos etapas. La primera implica la determinación de los grupos funcionales que parecen más
probables que estén presentes, examinando la región de frecuencias de grupo que abarca radiación
comprendida desde los 3600 a los 1200 cm-1.
La segunda etapa consiste en una comparación detallada del espectro desconocido con los
espectros de compuestos puros que contienen los grupos funcionales encontrados en la primera
etapa. En este caso la región de huella digital de 1200 a 600 cm-1 es muy útil, la coincidencia de los
picos en esta región entre los espectros de dos compuestos constituye casi una evidencia de su
identidad.
Aplicaciones en infrarrojo
Identificación y determinación de sustancias orgánicas:
Identifican grupos funcionales.
Impurezas de materias primas - en industria control de calidad laboratorio de investigación
- determinación de parafinas, compuestos aromáticos, olefinas, acetileno, alcoholes, aldehídos,
cetonas, ácidos carboxílicos, fenoles, ésteres, éteres, aminas, compuestos de azufre o haluros .
- determinar compuestos responsables de olor y sabor en alimentos.
- distinguir un polímero de otro.
- distinguir disolvente usado en pinturas.
- ceras de suelos - muebles.
Limitaciones del infrarrojo:

- no usar para determinar pesos moleculares
- no determina posiciones relativas de los distintos grupos funcionales.
- no diferencia compuestos puros de mezclas con un solo espectro. Ej: mezcla de parafinas y
alcoholes da igual que alcohol de peso molecular más elevado.
Valioso:
-Caracterizar sustancias puras.
-Caracterizar mezclas de compuestos.
Representación grafica de los espectros:
La gráfica muestra una reproducción del registro de un espectrofotómetro de infrarrojo. La
ordenada corresponde a una escala lineal de transmitancia y la abscisa mide linealmente los
números de onda en unidades en cm-1. La abscisa cambia de escala a partir de 2000 cm-1.
La región de la huella digital entre 1200 y 700 cm-1 (8 a 14m). En esta región del espectro
pequeñas diferencias en la estructura y la constitución de las moléculas originan cambios importantes
en la distribución de los picos de absorción.

c) Análisis cuantitativo mediante medidas de absorción

La espectroscopia de absorción es una de las herramientas mas útiles y ampliamente utilizada por
el químico en el análisis cuantitativo. Las características importantes de los métodos
espectrofotometricos y fotométricos incluyen (1) amplia aplicabilidad tanto a sistemas orgánicos
como inorgánicos, (2) altas sensibilidades, (3) moderada a alta selectividad, (4) buena precisión y (5)
fácil y adecuada adquisición de datos.
Las primeras etapas de un análisis fotométrico o espectrofotométrico implican el
establecimiento de las condiciones de trabajo y la preparación de una curva de calibrado que
relacione la concentración con la absorbancia.
- Selección de la longitud de onda

Las medidas espectrofotométricas de la absorbancia se hacen normalmente a una longitud de
onda correspondiente a un pico de absorción, ya que el cambio en la absorbancia por unidad de
concentración es mayor en este punto y se alcanza, por tanto, la sensibilidad máxima. Además, la
curva de absorción es a menudo plana en esta región; bajo estas circunstancias, se puede esperar
una buena absorbancia de la ley de Beer. Finalmente, las medidas son menos sensibles a las
fluctuaciones que provienen de la falta de precisión en la selección de la longitud de onda del
instrumento.
- Variables que influyen en la absorbancia

Las variables que influyen en el espectro de absorción de una sustancia incluyen la naturaleza
del disolvente, el pH de la disolución, la temperatura, las concentraciones elevadas de electrolito y la
presencia de sustancias interferentes. Los efectos de estas variables se deben conocer y las
condiciones para el análisis deben elegirse de manera que la absorbancia no esté prácticamente
afectada por variaciones pequeñas e incontroladas en sus magnitudes.
- Determinación de la relación entre la absorbancia y la concentración

Después de decidir las condiciones del análisis, es necesario preparar la curva de calibrado a
partir de series de soluciones estándares. Estos estándares deben aproximarse a la composición
global de las muestras y deben cubrir un intervalo de concentración razonable de analito. Raramente,
o nunca, se puede asumir la absorbancia de la ley de Beer y utilizar un único estándar para
determinar la absortividad molar. Los resultados de un análisis no deben basarse nunca en los
valores de la bibliografía para las absortividades molares.
Además de su uso en análisis cualitativo, las medidas en el infrarrojo también están
encontrando un uso cada vez mayor en el análisis cuantitativo, haciendo posible la cuantificación de
una sustancia en una mezcla compleja, no siendo necesario la separación previa.

GUÍA TEÓRICA
INTRODUCCIÓN A LA ESPECTROSCOPIA
ESPECTROSCOPIA MOLECULAR: UV-Vis-IR
1) Defina los siguientes conceptos:

Espectroscopía:
Radiación electromagnética:
Longitud de onda:
Frecuencia:
Potencia de la radiación:
Proceso de absorción de energía:
2) Definir transmitancia y absorbancia. ¿Qué relación existe entre estos términos?
3) Enunciar la ley de Lambert – Beer. Escribir la expresión matemática correspondiente.
4) Indique los factores que ocasionan las desviaciones de la ley de Beer.
5) Esquematice un espectrofotómetro de simple y de doble haz. Señale sus partes.
6) Explique cómo se tratan las muestras sólidas – líquidas – gaseosas en espectroscopia Infrarrojo. Mencione
los solventes que pueden utilizarse en cada zona.

6) Complete el siguiente cuadro:
ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIÓN
UV Vis IR
FUENTES DE
EMISIÓN
REGIÓN DE
EMISIÓN
SELECTOR DE
LONGITUD DE
ONDA
CUBETAS
DETECTORES
APLICACIONES
ESPECTROS

TRABAJO PRÁCTICO Nº 2
ESPECTROSCOPIA MOLECULAR
Uno de los métodos fisicoquímicos más empleados en análisis es el de la medida de absorción o

emisión de radiación electromagnética. La espectroscopía es una ciencia que estudia las
interacciones que suceden entre la radiación y la materia. Generalmente, el análisis es muy rápido,
una vez que se ha establecido el método, a no ser que se requiera tratamiento previo para eliminar
interferencia. El método es, por tanto, muy cómodo para medidas repetidas de un mismo analito,
como sucede en la rutina del análisis de control. Además, es aplicable a la determinación exacta de
cantidades de analitos mucho menores que con los métodos gravimétricos o volumétricos; por esta
razón es de mucha utilidad para el análisis de trazas. Con frecuencia es un método no destructivo de
la muestra. Los métodos espectrométricos tienen tal importancia, que son los más utilizados en casi
todos los laboratorios industriales, de análisis de alimentos y agronómicos.
Las técnicas espectrales empleadas se basan en el conocimiento de la naturaleza de la radiación
electromagnética y sus propiedades, así como de los fenómenos que se producen al interaccionar luz
y materia.
Las técnicas espectrales más habituales son:
a) Espectroscopía Molecular:
Absorción en Ultravioleta (UV), Visible (V) e Infrarrojo (IR)
b) Espectroscopia Atómica:
Absorción
Emisión (Fotometría de llama)
Naturaleza de la radiación electromagnética

La radiación electromagnética también denominada energía radiante, es una clase de energía que
se transmite por el espacio a enormes velocidades. La luz y otras formas de energía radiante parecen
tener naturaleza dual. La radiación electromagnética puede considerarse como una onda que viaja a
la velocidad de la luz.
Parámetros ondulatorios:
 Longitud de onda (): es la distancia lineal entre dos puntos equivalentes de ondas
sucesivas por ejemplo, sucesivos máximos o mínimos. Esta distancia se expresa, según el
Sistema Internacional de Unidades (SI), en nanómetros (nm, 10-9 m) Se pueden encontrar
0
otras unidades, ya obsoletas, que serían angstroms ( A ) y milimicras (m) La relación entre
estas medidas es:
0
1 nm = 1 m = 10 A = 10-9 m
 Frecuencia (): Es el número de oscilaciones en el campo o ciclos por segundo. Es inversa
a la longitud de onda.
c
 Siendo: c = velocidad de la luz

 Número de onda  , es el inverso de la longitud de onda en cm (1/). Por lo tanto, la
unidad para  es cm-1. El número de onda se usa mucho en espectroscopía infrarroja. Es
una unidad útil porque, al revés que la longitud de onda, es directamente proporcional a la
frecuencia y a la energía de la radiación. Así pues se puede escribir:
  k donde la constante de proporcionalidad k depende del medio y es igual

a la inversa de la velocidad.
 Potencia (P) de la radiación es la energía en watts (W) del haz que llega a un área dada
por segundo, mientras que la intensidad ( I ) es la potencia por unidad de ángulo sólido.
Aunque rigurosamente no es correcto, potencia e intensidad se usan a menudo como
sinónimos.
Carácter energético: algunas propiedades de la radiación electromagnética se explican mejor

si se considera que se encuentra constituida por partículas discretas o paquetes ondulatorios
de energía, conocidas como fotones, que también viajan a la velocidad de la luz. Este modelo
corpuscular ayuda a comprender que tanto la emisión como la absorción de energía radiante
se llevan a cabo mediante fotones. La energía de un fotón depende de su frecuencia y de su
longitud de onda:
hc
E  h   hc

Siendo: h = constante de Planck (6,62 . 10-27 erg/seg)

Como se puede observar en la relación anterior, la relación entre la longitud de onda y la energía
de una radiación electromagnética es inversa, de manera que cuanto mayor es la longitud de
onda de un haz de luz, menor es su energía.
El espectro electromagnético es el conjunto de todas las radiaciones electromagnéticas
conocidas, dispuestas según su longitud de onda. Se divide en regiones que abarcan intervalos
de longitudes de onda más estrechos, desde los rayos gamma, de longitud de onda corta, hasta
las ondas de radio, de longitud de onda larga.
El ojo humano responde a radiación electromagnética entre los 380-780 nm aproximadamente
(V), pero actualmente disponemos de instrumentos que suplen nuestra limitación, y permiten la
medida de radiaciones de longitudes de onda mayores (IR) y menores (UV). La sensación de
color es la respuesta a una serie de estímulos combinados físicos, químicos y biológicos de
ciertas partes de la retina del ojo para la radiación electromagnética a determinadas longitudes
de onda. La colorimetría se emplea para designar la medida de la fracción de “luz blanca” de una
lámpara incadescente que pasa a través de un medio líquido o en disolución.
La luz solar, o la luz emitida por un filamento de tungsteno, es una mezcla de radiaciones de
distinta longitud de onda que al ojo humano se reconoce como “blanca”. En la región visible, la
luz se descompone en colores y sus colores complementarios. Si hacemos incidir un haz de luz
blanca sobre una solución que absorbe luz a una longitud de onda determinada, ésta transmitirá
todas las demás longitudes de onda, apareciendo a la vista del color complementario al que
corresponde a la longitud de onda absorbida.
En consecuencia, una luz que se observa de un color determinado al ojo humano, deberá ser
iluminada para las mediciones fotométricas con un haz de luz de longitud de onda del color que
absorbe, es decir, el complementario. Ejemplo: una solución de color rojo se irradia con luz de
aproximadamente 500 nm (azul verde).
Tabla 1. Descomposición del espectro visible en colores y sus complementarios

Color complementario
Longitud de onda Color absorbido
340-430 Violeta Amarillo-verdoso

430-475 Azul Amarillo
475-495 Verde-azul Naranja
495-505 Azul-verde Rojo
505-555 Verde Púrpura
555-575 Verde-amarillo Violeta
575-600 Amarillo Azul
600-620 Naranja Azul-verde
620-700 Rojo Verde-azul
Fenómenos de interacción entre luz y materia

En la espectroscopía se utilizan estas interacciones entre la luz y la materia a fin de obtener
información sobre el analito presente en una muestra. Esta última puede estimularse ya sea
aplicando energía en forma de calor, de electricidad, de luz, de partículas o sometiéndola a alguna
reacción química. Antes de aplicar cualquiera de estos estímulos, el analito está predominantemente
en su nivel más bajo de energía o estado fundamental o estado basal. El estímulo induce una
transición de algunas especies del analito a un estado de energía superior o estado excitado. Como
resultado de esto se producen, entre otros, fenómenos de absorción o emisión energética. A
continuación analizaremos con más detalle estos fenómenos.
c) Proceso de absorción: cuando una partícula, que se encuentra en “estado de reposo” o
“estado fundamental”, interacciona con un haz de luz, absorbe energía, y pasa a lo que se
denomina “estado excitado”. La partícula en estado excitado tiende a regresar
espontáneamente a su estado fundamental, desprendiendo la energía absorbida en forma de
calor. Este fenómeno puede representarse de la siguiente manera:
Aº = absorbente en estado
fundamental
Aº + h .   A*  Aº + calor
A* = absorbente en estado
excitado
h . = E = energía del fotón
Cada especie absorbente (cromógeno) tiene lo absorbido
que se llama un “espectro de absorción
característico”. Al gráfico que resulta de representar
h =en un eje de
constante de coordenadas
Planck Absorbancia
(ordenadas) frente a longitud de onda (abscisas), = frecuencia
es a lo de
quela llamamos
radiación espectro de
absorción. Se necesita una radiación de energía más alta para que se efectúen transiciones
electrónicas (cambios) que la necesaria para que se efectúen transiciones rotacionales o
vibracionales.

d) Proceso de emisión: algunos compuestos tienen la propiedad, tras ser excitados, de retornar
a su estado fundamental, produciendo una emisión de energía electromagnética. La luz
emitida se puede medir, y ello constituye el principio de algunas técnicas, como la Fotometría
de llama, o la Fluorescencia. Este fenómeno puede representarse de la siguiente manera:
Aº = absorbente en estado
Aº + h . 1  A*  Aº + h . 2 fundamental A* =
absorbente en estado excitado
h . 1 = E1 = energía de excitación
La energía radiante emitida cuando el analito hregresa . 2 = E2a = su estado
energía basal, puede dar
de emisión
información sobre la naturaleza del mismo y de su concentración.
Ley de absorción
En la Figura 1 se representa un haz de radiación paralela, antes y después de haber atravesado una
capa de b cm de grosor de una solución de una especie absorbente de concentración c. La flecha
más grande en el rayo incidente significa que la energía radiante es mayor que la transmitida por la
solución.
b
P0 P
Solución absorbente de
concentración c
Fig. 1 Atenuación de un haz de radiación por una solución absorbente.
Como puede verse, debido a las interacciones que suceden entre los fotones y las partículas
absorbentes, la absorción de la radiación atenúa, es decir disminuye la energía, del rayo incidente
desde P0 hasta P.
 Transmitancia, T: es la fracción de radiación incidente transmitida por la solución. A
menudo, se expresa la transmitancia como un porcentaje.
P P
T %T  .100
P0 P0
 Absorbancia, A: es una medida que relaciona en forma logarítmica la radiación incidente

y la que emite la muestra. Esto es:
P P
A   logT   log  log 0
P0 P
La relación logarítmica entre A y %T se traduce en dos escalas:
%T  va de 0 a 100
A  va de 2 a 0
En la práctica se emplea, en lugar del valor de Transmitancia, el de Absorbancia (A), ya que la
relación entre la concentración de una solución y su Transmitancia es inversa y logarítmica, mientras
que la relación entre la Absorbancia y concentración es directamente proporcional.
En los aparatos que se usan hoy en día, las lecturas de %T son transformadas en Absorbancias y
presentadas así al operador, pero conviene no olvidar que la absorbancia no es en sí misma una
cantidad medible, sino que se obtiene por cálculo matemático a partir de los datos de Transmitancia
que mide el sistema fotométrico.
Si representamos gráficamente en un eje de coordenadas la relación entre la Absorbancia y
concentración, obtenemos una línea recta, y la proporción es directa. La gráfica resultante de
representar %T frente a concentración es una curva, y la proporción es inversa. Si empleamos papel
semilogarítmico, la gráfica de %T frente a concentración se convierte en una recta.
Figura 2. Representación gráfica de absorbancia y porcentaje de transmitancia frente a concentración: a)

%Tescala lineal, b) %T escala logarítmica y c) A en escala lineal

Como hemos dicho, al aumentar la concentración del compuesto absorbente en solución, más luz es
absorbida y menos transmitida, lo que se observa en las gráficas de la figura 5.
La relación entre las cantidades de absorbente en una solución y el grado en que esta solución
absorbe la luz, se encuentra regida por las Leyes de absorción.
La ley de la absorción, también conocida como ley de Lambert y Beer, o simplemente ley de Beer
establece la relación entre el grado de Absorbancia de una solución y otras dos variables: la
concentración del absorbente y la longitud del trayecto que el haz de luz recorre a través de la
solución. Según esta ley, la absorbancia de una solución es directamente proporcional a la
concentración y a la longitud del paso de luz: A = a. b. c A = . b. C
Siendo:
 A = absorbancia (no tiene unidades es adimensional).
 a ,  = coeficiente de absorción o absortividad específica (a) o absortividad molar (). Es
una constante, relacionada con la naturaleza química del soluto, y para un compuesto
dado cuando se fijan condiciones de longitud de onda ( = 1/mol.cm; a = 1/g.cm).
 b = paso óptico o longitud del paso de luz en centímetros.
 c, C = concentración de absorbente (c = g/L ; C = mol/L)
En la práctica: cuanto mayor sea  en una sustancia (cromóforo) para condiciones de trabajo
determinadas, mayor será la absorbancia de ese compuesto en esas condiciones de trabajo y, por
tanto, mayor será la sensibilidad del método que lo emplea.
La Ley de Beer constituye la base del análisis cuantitativo de las determinaciones
espectrofotométricas, basándonos en la relación lineal entre Absorbancia y concentración, podemos
conocer la concentración de una solución problema.
Desviaciones de la ley de Beer

Son desviaciones producidas en la linearidad de la relación entre concentración y
absorbancia. La recta se curva antes de su límite de linearidad. Pueden causarlas diversos
factores:
 Se miden concentraciones muy elevadas de cromógeno. Por lo cual se trabaja a
concentraciones menores a 0,01M.
 La radiación incidente no es monocromática, lo cual es muy frecuente en la práctica.
 La luz es transmitida por otros mecanismos (luz errática, o luz monocromática que llega al
detector). Esta radiación se denomina parásita.
 Si hay interferentes (otros cromógenos absorben también a esa longitud de onda).
Medición de la transmitancia y de la absorbancia

La transmitancia y la absorbancia, no pueden medirse directamente en el laboratorio, porque la
solución de analito debe colocarse en alguna clase de recipiente transparente, o cubeta. Como indica
la Figura 3, se produce reflexión en las dos interfases aire/pared así como en las dos interfases
pared/solución. Además, la atenuación del haz puede producirse por dispersión debida a moléculas
grandes, y a veces por absorción en las paredes del recipiente. Para evitar interacciones por parte del
solvente o de la cubeta, y considerar así sólo la absorción del compuesto de interés, hay que hacer
una primera medida con una solución de referencia o blanco, que contiene todos los posibles
compuestos que participan en la lectura, menos el compuesto a medir.
Todas las medidas que se hagan con posterioridad serán referidas a esta medida inicial y se deben
hacer en la misma cubeta que se utilizó para la medida del blanco.
Por lo tanto, para los análisis, se hacen dos medidas de la cantidad de luz absorbida. En la primera
se mide la cantidad de luz (a la longitud de onda elegida) que llega al transductor, cuando se coloca
un blanco. Se denomina intensidad del blanco P0 es cuando la concentración del material analizado
es cero. Llamamos P a la intensidad que se mide con las muestras o con el estándar. La comparación
que siempre se hace implica la relación P/P0 o con ambas intensidades medidas en las mismas
condiciones del instrumento.
La absorbancia experimental que se aproxima mucho a la verdadera absorbancia, se puede obtener
de esta forma con la ecuación:
A = log Pdisolvente / P solución  log P0 / P

Haz
incidente
P
0
Fig 3. Pérdidas por reflexión y dispersión
Como muestra la Figura 4, los fotómetros y espectrofotómetros manuales suelen ir provistos de una
pantalla que tiene una escala lineal que va de 0 a 100% de T. Para que la lectura directa del
instrumento se haga en tanto por ciento de transmitancia, se realizan dos ajustes iniciales,
denominados ajuste de corriente oscura o del 0% de T, y ajuste del 100% de T.
El ajuste del 0% de T se realiza bloqueando la llegada de radiación al detector por medio de un
obturador mecánico. En ausencia de radiación muchos detectores presentan una pequeña corriente
oscura; por tanto, el ajuste del 0% de T supone la aplicación de una señal opuesta de tal magnitud,
que dé una lectura cero en la escala.
Fig.4. Escala de un fotómetro barato.

El ajuste del 100 % de T se realiza con el obturador abierto y con el disolvente o blanco de reactivos
en la trayectoria de la luz. Este ajuste se lleva a cabo de tal forma que dé exactamente una lectura en
la escala del 100 % de T. En efecto, esta etapa sirve para ajustar a 100 el valor de P0.
Por lo tanto, cuando la cubeta del disolvente se reemplaza por una conteniendo la muestra, la escala
indica la forma directa el tanto por ciento de transmitancia. Obviamente, tal como se muestra es la
Fig. 4, en el dispositivo de la lectura se puede marcar también una escala de absorbancia que va de 0
a 2. Tal escala no será lineal a menos que la señal de salida se transforme en una función
logarítmica. Los instrumentos modernos traen escalas lineales de absorbancia y algunos tienen una
computadora que calcula la absorbancia a partir de las mediciones.
Métodos de medición de luz transmitida.

El operador visual no puede recordar matices o intensidades, así que debe comparar la luz transmitida
por dos soluciones, una junto a la otra, con los tubos de Nessler; los cuales pueden ser observados por
la parte superior.
 Método de la Serie Estándar.

1. Se llenan varios tubos de Nessler hasta la marca, con soluciones que contienen diversas
cantidades conocidas del componente que se busca.
2. Se prepara el problema y se hace una comparación de su color con los colores de las
soluciones conocidas, observando todos los tubos verticalmente con la misma fuente de luz.
3. Cuando el color de una solución problema es igual al de uno de los estándares, se considera
que su concentración es la misma que la de ese estándar.
4. Cuando se encuentra que el color cae entre los colores de dos soluciones estándar, se puede
preparar una nueva serie de estándares cuyo color se acerque más al del problema, o bien se
puede estimar la concentración del problema.
 Colorímetro de Duboscq.
Pone en forma paralela la luz transmitida por dos soluciones, de manera que ambas puedan ser
observadas por un solo ojo. De esta manera, se puede observar que cualquier diferencia en
matiz o intensidad produce una línea de separación entre las dos mitades de un círculo.
El colorímetro proporciona un procedimiento cómodo de comparar colores y de medir con
exactitud la profundidad de ambas soluciones, la conocida y el problema. Se supone que dos

soluciones cuyo haz de luz transmitida tiene el mismo color, contienen cantidades iguales del
componente buscado. En estas condiciones se tiene:
Cs es la concentración de la solución estándar,
Cu es la concentración de la solución problema,
Ds es la profundidad de la solución estándar, y
Du es la profundidad de la solución problema.
Cu Du = Cs Ds  Cu = Cs Ds / Du
 Espectrofotometría.
La espectrofotometría difiere de la colorimetría en que la absorbancia de una solución o sustancia
se determina con únicamente una longitud de onda de luz transmitida y medida. En la práctica
más que una sola longitud de onda se utiliza una luz con una intervalo definido de longitudes de
onda. Con un espectrofotómetro, los pasos básicos de un análisis son siempre los mismos.
Pequeñas variaciones en cada uno y, a veces, la operatoria de instrumentos diferentes, pueden
alterar ligeramente los detalles del procedimiento.
Curva de calibración:
1. Prepar una serie de soluciones del analito a partir de una droga de calidad garantizada. La
concentración debe ser tal que el valor de la absorbancia a la longitud de onda en la cual la
absortividad es máxima, caiga entre 0,3 y 0,7 unidades de A.
2. Utilizando la solución preparada en 1, efectuar el trazado de la curva espectral o espectro de
absorción para lo cual se realiza una serie de medidas de absorbancia a distintas longitudes
de onda y concentración constante.
Fig. 5. Espectro de absorción
3. Trabajando sobre la curva espectral seleccionar la longitud de onda de trabajo que

corresponda a un máximo de la curva y en zona de meseta, si fuera posible. Como se observa
en la figura 5, este valor correspondería, en este caso, a 500 nm.
4. Preparar una serie de soluciones patrones de concentraciones crecientes y perfectamente
conocidas, del analito a determinar, cuyas absorbancias estén comprendidas entre 0,1 y 0,7
unidades.
5. Se realizan las lecturas de absorbancia o % de transmitancia de los patrones a la longitud de
onda seleccionada ( constante). Graficar Absorbancia vs. Concentración. Esta gráfica
denominada curva de calibración o gráfica de linealidad, permitirá verificar el cumplimiento
de la ley de Beer y calcular el valor de absortividad.
Lectura de la muestra problema

1. Preparar un blanco testigo, colocando en la cubeta un solvente (generalmente agua
destilada).
2. Colocar la cubeta en el equipo.
3. Ajustar el equipo de manera de leer 100 % de transmitancia o cero de absorbancia.
4. Retirar la cubeta y colocar otra que contenga la muestra problema.
5. Leer el porcentaje de transmitancia o absorbancia.
Determinación de la concentración de la muestra problema

Según la lectura realizada, llevar al gráfico correspondiente (curva de calibración) y determinar la
concentración de la muestra.

INSTRUMENTACIÓN
Todos los fotómetros y espectrofotómetros constan esencialmente de:
- fuente estable de energía radiante: Esta por lo general es una lámpara de luz a la cual llega una
corriente cuidadosamente controlada.
- un monocromador. Esta parte del instrumento puede ser cualquiera de las siguientes:
a) Un filtro o juego de filtros que elimine todas las longitudes de onda de luz, excepto las de
una angosta banda.
b) Un dispositivo de abertura y prisma para que por aquélla pase hacia el prisma una cierta
cantidad de luz y que de éste salga la luz como, una angosta banda de los cuales puede
ser seleccionada por una segunda abertura (muy estrecha).
c ) Una rejilla de difracción con aberturas, la cual funciona como el dispositivo del
prisma.rendija de entrada y salida
- selector de longitud de onda
- cubeta destinada a contener la muestra
- detector de energía radiante
- presentación de datos
Tipos de aparatos
En base al sistema selector de longitud de onda, los aparatos se clasifican en dos tipos:
- Fotómetros: emplean filtros, obteniendo luz monocromática a longitudes de onda discretas.
- Espectrofotómetros: emplean monocromadores, del tipo de prismas o redes de difracción,
obteniendo luz monocromática en un intervalo contínuo de longitudes de onda.
Según la disposición de los componentes fotométricos, se pueden clasificar en espectrofotómetros de
haz simple o de doble haz.
Constan esquemáticamente de los componentes antes mencionados: la luz emitida pasa a través de
un monocromador que seleccionará la longitud de onda deseada; unas rendijas de entrada y salida
consiguen que el haz de luz sea estrecho, y evitan la luz difusa; la luz pasa a través de la cubeta,
donde se produce el proceso de absorción; la luz no absorbida es transmitida al detector, que
convierte la energía radiante en energía eléctrica, que es registrada en un lector.
Al trabajar con estos aparatos, es necesario un ajuste inicial a 0 por 100 de transmitancia, que se
consigue sustituyendo la cubeta por un sistema que no deje pasar la luz hasta el detector. A
continuación se hace un blanco, colocando una cubeta con todos los componentes de la solución de
trabajo exceptuando el cromógeno y haciendo un ajuste a 100 por 100 de transmitancia. Se hacen
lecturas de estándares (soluciones de concentración conocida) y a continuación las de las soluciones
problemas por comparación con los estándares.
Espectrofómetro de doble haz

Se clasifican como tales en el espacio y en el tiempo.
a) Espectrofotómetros de doble haz en el espacio: Todos los componentes están duplicados
menos la lámpara. Dos haces de luz pasan al mismo tiempo a través de los diferentes componentes
separados en el espacio. Esta disposición compensa las variaciones de intensidad de la fuente de
energía radiante y también las variaciones de absorbancia a medida que se varía la longitud de onda
de lectura en una operación de barrido (Figura 19.7).
b) Espectrofotómetros de doble haz en el tiempo: Normalmente utilizan los mismos componentes

que un instrumento de haz simple. Dos haces de luz pasan a través de los mismos componentes,
pero no en el tiempo. Emplean un “chopper”, consistente en un interruptor rotativo del haz luminoso
(es una rueda giratoria con secciones plateadas y rendijas alternas) colocado a continuación de la
rendija de salida. Un sistema de espejos dirige la porción de luz reflejada por el chopper a través de
una cubeta de referencia y de ahí al detector común. El detector ve alternativamente el haz de luz
procedente de la muestra y el de referencia. Esta disposición compensa la variación de la fuente de
energía radiante, así como las variaciones de sensibilidad del detector (Figura 19.7).

Componentes
 Fuente de energía radiante
La misión de la fuente de energía es proporcionar energía radiante en forma de luz visible o no
visible.
Existen distintas lámparas que emiten en distintas zonas del espectro visible y UV.
 Lámparas de filamento de tungsteno: Se utilizan habitualmente como fuentes de radiación
para longitudes de onda del espectro visible y UV próximo; son fuente de un espectro
continuo de energía radiante entre 360 y 950 nm.
 Lámparas de filamentos de haluros de tungsteno: Son de mayor duración, producen más
luz a longitudes de onda cortas, y emiten energía radiante de mayor intensidad que las de
filamento de tungsteno. Se emplean frecuentemente las de yoduro de tungsteno.
 Lámparas de hidrógeno y deuterio: Producen un espectro continuo en la región UV (220 a
360 nm). Se emplean para medidas en este región del espectro, siendo más usada la de
deuterio, de mayor intensidad que la de hidrógeno.
 Lámparas de vapores de mercurio: Emiten un espectro discontinuo o “espectro de líneas”
(313, 365, 405, 436 y 546 nm). Son muy útiles para propósitos de calibración de longitudes
de onda, pero no son utilizadas en muchos espectrofotómetros. Se emplean en
espectrofotómetros para cromatografía HPLC.
Fuentes de radiación para la región Infrarrojo

Consisten en un sólido inerte que se calienta eléctricamente a una temperatura comprendida
entre 1500 y 2200 K. Como resultado se obtiene una radiación continua.
 Emisores de Nernst: Constituido por oxido de tierras raras, tiene forma cilíndrica con un
diámetro de 1 a 2 mm y una longitud de unos 20 mm. Los extremos del cilindro están unidos a
unos conductores de platino que permiten el paso de la electricidad alcanzando temperaturas de
1200 y 2200K.
 Fuente globar: Es una varilla de carburo de silicio que por lo general tiene unos 50 mm de
longitud y 5 mm de diámetro. Se calienta también eléctricamente (1300 a 1500 K).
 Fuente de filamento incandescente: Una fuente de intensidad algo menor, con vida útil más
prolongada en comparación con un Globar o un emisor de Nernst, es un espiral muy apretado
de alambre de nicromo, que se calienta por el paso de una corriente eléctrica. Alambres de rodio,
introducidos en el interior de cilindros de cerámica.
 El arco de mercurio: Para el infrarrojo lejano (  50 m) ninguna de las fuentes antes descriptas,
proporcionan suficiente energía para una detección adecuada. En este caso se utiliza un arco
de mercurio de alta presión. Es un tubo de cuarzo que contiene vapor de mercurio a una presión
mayor que una atmósfera.
 Lámpara de filamento de tungsteno: Esta es una fuente adecuada para la región del infrarrojo
cercano 4000 a 12800 cm-1.
Consideración práctica: Es importante tener en cuenta que la cantidad de luz emitida por una
lámpara no es constante en un intervalo continuo de longitudes de onda, presentando máximos
y mínimos, propiedad que varía en los diferentes tipos de lámparas, e incluso con los diferentes
fabricante; esto nos llevará a buscar siempre el tipo de lámpara que resulte más adecuado en la
práctica para los análisis que queremos realizar.
Conviene tener también en cuenta que las lámparas sufren con las subidas y bajadas bruscas de
tensión, que se traducen en cambios en las lecturas de absorbancias, y que la lámpara tiene una
vida limitada, haciéndose necesaria su vigilancia para el buen funcionamiento del instrumento.
 Rendijas
La función de las rendijas de entrada es reducir al máximo la luz difusa y evitar que la luz dispersa
entre en el sistema de selección de longitud de onda.
Las rendijas de salida tienen como función impedir que la luz difusa atraviese la cubeta, lo que
generaría desviaciones a la Ley de Beer.

 Selector de longitud de onda
Su finalidad es seleccionar la longitud de onda o intervalos de longitud de onda deseados para el
análisis. Se clasifican en filtros y monocromadores.
 Filtros
Es un mecanismo sencillo compuesto por un material que transmite selectivamente una
longitud de onda y absorbe todas las demás. Existen dos tipos:
Filtros de vidrio y filtros Wratten. Basados en la transmisión selectiva de la luz. Los filtros
Wratten consisten en una capa de gelatina coloreada entre dos láminas de vidrio
transparente. Los filtros de vidrio están compuestos por una o más capas de vidrios
coloreados. Ambos tipos transmiten más energía radiante en una parte del espectro que en
otras. Son preferibles los filtros de vidrio por ser más duraderos, y menos susceptibles de
daño por el calor y la luz solar.
Filtros de interferencia. Basados en el principio de interferencia. Cuando la luz choca con
una fina película, una parte es reflejada en la superficie frontal de la película mientras que
la que penetra en ella es reflejada por la cara inferior. Este último rayo de luz ha viajado
más que el primero, y la diferencia de recorrido viene dada por el espesor de la película. Si
ambos rayos reflejados (en la cara frontal y en la cara interior de la película) están en fase,
su intensidad queda duplicada, mientras que si están fuera de fase se anulan entre sí. De
esta forma, cuando la luz blanca incide sobre una película de este tipo, algunas de sus
longitudes de onda quedan aumentadas, mientras que otras se anulan. Los filtros de
interferencia separan intervalos más estrechos de longitud de onda que los de vidrio.
 Monocromadores
Los monocromadores son capaces de dar bandas espectrales mucho más estrechas que
los filtros, y tienen la ventaja adicional de poderse ajustar fácilmente dentro de una amplia
zona del espectro.
El elemento dispersante de la luz puede ser un prisma o un red de difracción.
Prismas. Son fragmentos con forma de cuña, de vidrio, cuarzo, cloruro sódico o cualquier
otro material que permita la transmisión de la luz. Debido a la variación del índice de
refracción en función de la longitud de onda, la luz que penetra en el prisma se dispersa en
mayor o menor medida según la longitud de onda de la luz. La dispersión de la luz no es
lineal, es decir, se hace cada vez menor a medida que se acortan las longitudes de onda.
Cuando se pretende trabajar en la zona visible del espectro y en la UV próxima, se pueden
utilizar primas de vidrio, pero para trabajar en el UV lejano, han de ser de cuarzo.
Redes de difracción. Consisten en un gran número de líneas (hendiduras) paralelas,
situadas a distancias iguales entre sí, trazadas sobre un vidrio o una superficie metálica.
Cuando incide la luz blanca sobre ella, cada hendidura se comporta como un pequeño
prisma: la luz se refleja o atraviesa la red de manera que la luz blanca se descompone en
varios colores.
Parámetros de los sistemas de selección de longitud de onda
Con excepción de los mecanismos ópticos láser, la luz obtenida con cualquier sistema selector de
longitud de onda no es verdaderamente monocromática, sino que comprende un intervalo de
longitudes de onda.
Es un sistema selector de longitudes de onda con una anchura igual para las rendijas de entrada y
salida; la luz que emerja de la rendija de salida se representa por un triángulo isósceles y se definen
varios parámetros (Figura 19.9):
Ancho de banda. Es el intervalo de longitudes de onda que pasan a través de la rendija de salida de
un mecanismo selector de longitudes de onda.
Longitud de onda nominal de una haz de luz. Es la longitud de onda en la que se halla el máximo de
intensidad de luz. Se emplea para definir los filtros.
Ancho de banda nominal. Corresponde a aquellas longitudes de onda centradas sobre la longitud de
onda máxima, que transmite el 75 por 100 del total de luz presente en el haz emergente. Describe el
grado de monocromaticidad de un monocromador.

El grado de monocromaticidad de un monocromador puede variar. En los monocromadores, la rendija
de entrada enfoca la luz sobre el prisma o red de difracción, sobre el cual será dispersada. La rendija
de salida determina el ancho de banda de la luz que será seleccionada del espectro de dispersión.
Aumentando el ancho de la rendija de salida, el ancho de banda de la luz emergente se hace más
amplio, con lo cual aumenta la intensidad de la energía, pero disminuye la pureza espectral.
En los monocromadores de red de difracción, la rendija de salida puede ser fija, lo que resulta en un
paso de banda constante. Por el contrario, en los monocromadores de prisma, la rendija de salida es
variable.
 Cubetas
Es el recipiente donde se coloca la muestra para la medición espectrofotométrica.
 Formas. Pueden ser redondas, cuadradas, o rectangulares, y de tamaño menor o mayor.
Habitualmente tienen 1 cm de paso de luz. Se obtienen mejores resultados trabajando con
las cubetas de lados paralelos, a ser posible fundidas en lugar de cementadas. Las de
forma redonda se deben marcar e introducir en el aparato siempre en la misma posición.
 Materiales. La mayoría están fabricadas en vidrio, lo cual permite trabajar
satisfactoriamente entre longitudes de onda que van de 320 a 950 nm. También existen
cubetas de plástico. Para medidas por debajo de 320 nm Ultravioleta Visible es necesario
emplear cubetas de cuarzo, que también se podrían emplear para mediciones a longitudes
de onda superiores, pero su costo lo desaconseja.
La sustancia mas comúnmente empleada para las ventanas de las celdas para la región
infrarroja es el cloruro de sodio cristalino, también pueden usarse con este fin los demás
materiales transparentes al infrarrojo.
 Sistemas de detección
Existen dos tipos de detectores empleados tanto en las regiones del visible como del UV: células
fotovoltaicas y fototubos. La elección de uno u otro sistema depende fundamentalmente de la
energía radiante de que se disponga. Si se han empleado como selectores filtros o
monocromadores de baja dispersión, éstos proporcionarán un haz de luz de suficiente energía
como para emplear células fotovoltaicas. Si se emplean monocromadores de elevado poder
resolutivo, hay que recurrir a fotomultiplicadores para la detección.
1) Células fotovoltaicas, en las que la energía radiante genera una corriente en la
interfase entre una capa semiconductora y un metal.
2) Fototubos, en los que la radiación causa la emisión de electrones a partir de una
superficie sólida fotosensible.
3) Tubos fotomultiplicadores, que contienen una superficie fotoemisora así como varias
superficies adicionales, las cuales emiten una cascada de electrones cuando son
alcanzadas por los electrones procedentes del área fotosensible.
4) Detectores de fotoconductividad, en los que la absorción de la radiación por un
Semiconducto produce electrones y agujeros , dando lugar, así a un aumento de
conductividad.
5) Fotodiodos de silicio, el los que los fotones aumentan la conductancia.
Detectores de calor utilizados para medir la radiación infrarroja.

1) Detectores térmicos.
2) Termopares
3) Detectores piroeléctricos
 Sistemas de presentación de datos

La energía eléctrica del detector se refleja en sistemas de lectura y presentación de datos. Estos
pueden ser sistemas de lectura directa, que suelen ir aplicados a aparatos con detectores del tipo
fotocélulas, o bien pueden introducir amplificadores de señal, como ocurre en los aparatos con
fototubos.
Hoy en día todos los aparatos incorporan ya la lectura digital, la cual, unida también a la
introducción de microprocesadores, permite cálculos directos de concentración con arreglo a
factores de calibración prefijados, y lectura contra estándares, o curvas de calibración en memoria.
A esta presentación digital de resultados se une también la posibilidad de conexión de
registradores, de gran utilidad en el estudio de reacciones cinéticas, y en la realización de barridos
a través de intervalos de longitudes de onda del espectro.
Técnicas para la manipulación de la muestra

En espectroscopia ultravioleta y visible los espectros se obtienen a partir de soluciones diluidas del
analito. En espectroscopia de infrarrojo, podemos analizar muestras líquidas, sólidas y gaseosas.

Líquidos puros
Cuando la cantidad de muestra es pequeña o cuando no se dispone del disolvente apropiado, es
habitual obtener los espectros del líquido puro. En este caso solo una película muy delgada tiene un
camino óptico suficientemente corto como para producir espectros satisfactorios. Una gota del líquido
puro se comprime entre dos placas de sal de roca para obtener una placa con un grosor de 0,01 mm
o menos. Las dos placas se mantienen unidas por capilaridad y se colocan entonces en la trayectoria
del haz.
Sólidos
Estas técnicas requieren que el tamaño de partícula del sólido suspendido sea menor que la longitud
de onda del haz infrarrojo. Se tritura de 2 a 5 mg de una muestra finamente pulverizada (tamaño de
partícula  2m) en presencia de unas gotas de un aceite pesado de un hidrocarburo (Nujol).
Otra técnica consiste en partir de un miligramo o menos de muestra finamente triturada que se
mezcla íntimamente con unos 100mg de polvo de bromuro de potasio desecado. La mezcla se puede
efectuar con un mortero y mejor aun en un pequeño molino de bolas. La mezcla se comprime luego
en un troquel especial a una presión de 700 a 1000 Kg/cm2 obteniendo un disco transparente,
mejores resultados si el disco se forma al vacío eliminando el aire ocluido. Luego el disco se coloca
en el haz del instrumento para su análisis espectroscópico.
Gases:
El espectro de un líquido de bajo punto de ebullición o de un gas se puede obtener permitiendo a la
muestra que se expanda en una cubeta en la que se ha hecho el vacío. Existen una variedad de
cubetas para este objeto, con longitudes de camino óptico que varían desde unos pocos centímetros
a varios metros.
EXPERIENCIAS A REALIZAR
OBJETIVOS:
 Adquirir destreza en el empleo del Método de la Serie Estándar y en el uso del Espectrofotómetro.
 Estimar las cantidades de distintos componentes por medio de la medición del grado de absorción
por sustancias coloreadas.
 Trazar curvas de calibración y aplicarlas en la búsqueda de concentraciones incógnitas.
Determinación de Color en Vinos Tintos
Técnica aprobada por el INV (Instituto Nacional de Vitivinicultura), en base a ella se determina
el índice de color en vinos tintos, factor fundamental al momento de fijar precio en vinos de traslado.
Metodología:
Preparación de la muestra:
Para la determinación del índice de color, los vinos deberán estar completamente limpios,
considerándose como tales, aquellos que transmiten uniformemente la luz de una lámpara y permiten
observar nítidamente el filamento.
Instrumental:
La observación se hará con un espectrofotómetro UV-Visible empleando cubetas de un

milimetro (1 mm).
Procedimiento:
Realizar la lectura de absorbancia a cuatrocientos veinte nanometros (420 nm) y quinientos

veinte nanometros (520 nm).
Cálculos:
Intensidad, por la suma de las absorbencias a 420 nm y 520 nm (I = A 420 nm + A 520 nm)
Tonalidad: por la relación entre las absorbencias a 420 nm y 520 nm (T = A 420 nm / A 520
nm).

Índice de color: estará dado por el valor de la relación entre la intensidad y la tonalidad
multiplicado por 1000:
IC = (I/T) x 1000
Interpretación:
Según lo resuelto por el INV, a partir de la liberación de los productos de la Elaboración 2009,
los vinos tintos nacionales que se liberen al mercado interno, solo se los podrá identificar como tales
en sus marbetes, cuando tengan un índice de color igual o superior a quinientos (500), con una
tolerancia en su circulación de hasta un diez por ciento (10%) en menos. Resolución (INV) C. 9/08.
Del 30/5/2008. B.O.: 6/6/2008
Determinación de color en cerveza – Método de referencia estándar.
A fines del siglo XIX (1883) cuando Joseph Williams, hijo de John Locke Lovibond, destacado
cervecero de Greenwich, Inglaterra, se decidió a encontrar una manera de asegurar una alta calidad
para sus cervezas. En 1883 desarrolló el primer colorímetro práctico del mundo que consistía en una
serie de filminas coloreadas y graduadas que al ser comparadas con el color de la cerveza
determinaban un valor aproximado.
Nace así la escala de colores medida en grados Lovibond (ºL) que se uso por mucho tiempo
hasta que fue reemplazada por sistemas mas modernos. Hoy día, casi no se usa en cervecerías, pero
el término “grados Lovibond” es empleado a menudo por los fabricantes de maltas para describir el
color que sus granos aportan al mosto.
La variación natural en la percepción de los colores de una persona a otra, puso en evidencia
las limitaciones del sistema Lovibond y a mediados del siglo XX fue reemplazado por el uso del
espectrofotómetro de luz y la American Society of Brewing Chemists (ASBC) establece como
estándar el sistema de color Standard Reference Method (SRM). En Europa se había desarrollado
otro sistema, el llamado European Brewing Convention (EBC) que era usado originariamente como
forma de comparación visual, pero la tecnología hizo que 25 años después adoptara el uso del
espectrofotómetro de manera similar al SRM.
Standard Reference Method (SRM )
Es el sistema adoptado en 1958 por la American Society of Brewing Chemists (ASBC) para medir el
color de una cerveza.
En un laboratorio el SRM es determinado midiendo la reducción de intensidad que sufre un haz de luz
monocromática de longitud de onda de 430nm (azul), al atravesar ½ pulgada de cerveza. Podemos
definir al SRM como la absorbancia (logaritmo de la perdida de luz) multiplicada por 10. Métodos y
tecnologías modernas emplean 1cm de cerveza y multiplican la absorbancia por 12.7 aplicando la ley
de Lambert–Bouguer-Beer.
SRM = 12.7 x A430

A430 es la absorbancia a 430 nm en 1 cm
Cuando el valor SRM de la cerveza es mayor a 30 las mediciones en cubetas de 1 cm son

aproximadas. En esos casos hay que diluir la muestra a medir con agua desionizada y multiplicar el
valor obtenido por el factor de dilución (“D”) que será igual a 2 si la dilución es 1:1.
SRM = 12.7 x D x A430
Los valores medidos en SRM y los grados Lovibond son aproximadamente iguales y en la
práctica se pueden usar alternativamente para evaluar la intensidad del color de una cerveza.

European Brewing Convention (EBC)
En un principio se usaban, en Europa, diferentes sistemas para la medición del color de maltas y
cervezas. Cuando los métodos de comparación visual quedaron obsoletos, tanto el British Institute of
Brewing (IOB) como la European Brewing Convention (EBC) se decidieron por el uso de
espectómetro al igual que la American Society of Brewing Chemists (ASBC). Ambas instituciones
tenían métodos diferentes basados en la medición de la absorbancia pero, en este caso, de un haz
de luz de 530 nm de longitud de onda (Verde). Al no existir una relación lineal con el sistema SRM por
lo general se usaban las siguientes fórmulas para la conversión:
EBC = 2.65 SRM – 1.2

SRM = 0.377 EBC + 0.45
En 1991 el sistema del British Institute of Brewing (IOB) queda formalmente retirado aunque
se sigue usando ocasionalmente dentro del Reino Unido. A partir de ese año el método de la
European Brewing Convention (EBC) pasa a ser el estándar y se modifica adoptando, para sus
mediciones, la longitud de onda de 430 nm y una cubeta de 1 cm.
De esta manera el sistema EBC se vuelve muy similar al SRM diferenciándose sólo en la unidad de
color que, en el EBC, es 25 veces la absorbancia a 430nm (A430) en vez de las 12.7 veces del SRM.
EBC = 25 x A430
Con esta modificación, la conversión entre ambos sistemas se simplificó quedando las
fórmulas siguientes:
EBC = SRM x 1.97
SRM = EBC / 1.97
Preparación de la muestra:
Tener en cuenta, como para todo método espectrofotométrico que las muestras debe ser
totalmente límpidas, en caso de trabajar con cervezas no filtradas o artesanales con toma de espuma
en botella, se debe centrifugar previamente.
La presencia de burbujas es otro limitante por lo que deben descarbonatarse por trasvasados
sucesivos hasta eliminación total de las mismas.
Instrumental:
Espectrofotómetro visible. Cubetas de vidrio o plástico.

Procedimiento:
Realizar la lectura de absorbancia a 420 nm, tener en cuenta la longitud de paso de la cubeta
utilizada.
Cálculos:
SRM = 12.7 x A430 (si A430 es tomada con cubetas de 1 cm )
SRM = 10 x A430 (si A430 es tomada con cubetas de ½ pulgada)
Conversión de Unidades:
EBC = SRM x 1.97
Interpretación:
El Capítulo VIII del CAA (Código alimentario Argentino) legisla sobre bebidas Alcohólicas, en
el art 1080, define cerveza y la clasifica según color entre otros parámetros. Define cerveza clara,
blanca, rubia o Cerveza , como aquella cuyo color es inferior a 20 unidades E.B.C. (European
Brewery Convention) y Cerveza oscura o Cerveza negra a la cerveza cuyo color es igual o superior a
20 unidades E.B.C..
DETERMINACIÓN DE HIERRO
Por Espectrofotometría con ortofenantrolina.
Fundamento:
La ortofenantrolina forma con el hierro ferroso un complejo de coloración anaranjado-rojizo en medio

medianamente ácido (pH entre 1,5 y4)
La determinación se realiza previo ajuste del pH y reducción del Fe+3 a Fe+2.
Reactivos:
Solución de ClH 1:20

Solución patrón de Fe de 500 ppm :
Disolver 0,351 de sal de Mohr (Fe(NH4)2(SO4)2.6H2O en agua destilada, agregar 2 ml de ClH
1:20 y llevar a 100 con agua destilada.
Solución de Fe 20 ppm:
Tomar 4 ml de la solución anterior (Fe=500 ppm), agregar 2ml de ClH 1:20 y llevar a 100 ml
con agua destilada.
Solución reductora de Hidroxilamina
Solución alcohólica de ortofenantrolina al 1%
Disolver 1 gr de ortofenantrolina en 100 ml de alcohol de 96º
Técnica:
- Preparar una curva patrón de Fe con soluciones de 0,1,2,3 y 4 ppm empleando : 0 - 2,5- 5 -7,5 y
10 ml de solución patrón de Fe de 20 ppm en matraces aforados de 50 ml a los que se agrega
0,1 g de hidroxilamina y 1 ml de solución de ortofenantrolina, enrasado finalmente a volumen.
- Realizar en un matraz volumétrico de 50 ml una solución patrón intermedio para que entre en
escala (realizar las diluciones correspondientes)
- Medir absorbancia de la serie de diluciones patrón para trazar la curva de calibración usando 490
nm de longitud de onda.
- Medir la absorbancia de la muestra y referir el dato obtenido a ppm de hierro, mediante los valores
de la curva patrón.
Resultados:

Bibliografía recomendada:
Técnicas Enológicas oficiales del INV. Consulta mayo 2014.

https://www.google.com.ar/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=4&ved=0CEMQFjAD&
url=http%3A%2F%2Flugardelvino.com%2Fcategory%2F7-vinos.html%3Fdownload%3D24&ei=iTqHU-
-
CD8m3sATJwIHIBA&usg=AFQjCNEvr8dt0WAYIJwqWlIXxwTE5sxLOA&sig2=XnYWqrIQPU_uDlJTQ
DQvog
Código Alimentario Argentino

https://www.google.com.ar/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=1&ved=0CCsQFjAA&url=http
%3A%2F%2Fwww.anmat.gov.ar%2F&ei=CkCHU9-
ZAuXfsATR7oCoDg&usg=AFQjCNGads8uq5W97kP5dzIaXEu1w5G4Jg&sig2=F5rK__UMTkx7A5W_
FjeCHQ
Resolución (INV) C. 9/08. Del 30/5/2008. B.O.: 6/6/2008.

https://www.google.com.ar/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=1&cad=rja&uact=8&ved=0CC
sQFjAA&url=http%3A%2F%2Fwww.inv.gov.ar%2F&ei=4keHU_a8JpSysASbvIC4Bg&usg=AFQjCNEX
HAaw-pLQnUpe-yhqV_nO4lz8mQ&sig2=Hmc0bnQvN91Emme6ysIfnw

EJERCITACIÓN
ESPECTROSCOPÍA MOLECULAR
Equivalencias: Ley de Beer Referencias

-6 -9
µL = 10 g nL = 10 L A= abc a =Absortividad específica.
-6 -9
µg = 10 g ng = 10 g
b = espesor de celda en cm.
c = concentración en gr por litro.
A = εb C ε = Absortividad molar.
b = El espesor en centímetros.
C = concentración en moles por litro.
Absorbancia: A A =log ( 1/T ) => A = log 100 % T Referencias:

Transmitancia: T T =P / Po => T % =P / Po x 100 P: potencia radiante transmitido.
P0 : potencia radiante incidente .
Método de adición esándar
Ax = Absorbancia de la muestra
AT = Absorbancia Total
Cx = Cs Ax . Vs Cx = concentración de la muestra.
(AT - Ax ) Vx Cs = concentración del estándar.
Vs = volúmen del estándar.
Vx = volúmen de la muestra.
EJERCICIOS A RESOLVER
1- Calcular:
a) ¿Qué porcentaje de la luz incidente a una longitud de onda dada se trasmite por un medio que, a esa
longitud de onda, tiene absorbancia de 1,033? R= 9,26
b) ¿Cuál es la absorbancia de una solución que absorbe 3/5 de la luz incidente? R= 0,398
2- La transmitancia de una muestra es 35%, ¿Cuál es su absorbancia? R= 0,456
3- Una muestra exhibe una absorbancia de 0,70 por 100 mL de un soluto absorbente de la luz. ¿Cuál es la
transmitancia en valor absoluto y en porcentaje? R= 0,199 y 19,9%
4- Una solución que contiene 5 mg de una sustancia absorbente en 250 mL arroja un valor de 50% T cuando se
mide en una celda de 3 cm de paso óptico. ¿Cuál será el % T de una solución que contenga 1 mg de la
sustancia en exactamente 1 Litro, medida en una celda de 10 cm?
R= 89%
5- Con referencia a la siguiente figura, supóngase que dos cubetas contienen soluciones de distintas
absorbancias:
a) Calcular la absorbancia en la cubeta 1 y en la cubeta 2. R= 0,3979 y 0,3979
b) Calcular la absorbancia total. R= 0,7958
c) Calcular la transmitancia en la cubeta 1 y en la 2. R= 0,4 y 0,4
d) Calcular la transmitancia total. R= 0,16
P0 P1 P2
40% P0 40% P1
140 56 22,4

6- Calcular el rango de concentración molar que puede usarse para trabajar con cromato de potasio que a 370
3
nm de longitud de onda tiene un coeficiente de absortividad molar =4,79 x 10 y será usado entre 20 a 80%
de T.
4 -5
R= 1,45 x 10- M a 2,023 x 10 M
7- Una solución que contiene 15 g de soluto (mM= 243,8) absorbente de luz en 200 mL, exhibe 32% de T en una
celda de 3 cm de paso óptico. Calcular:
a) la absorbancia de la solución R= 0,494
-3
b) La absortividad R=2,19 x 10
c) La absortividad molar del soluto. R= 0,531
8- Se desea determinar hierro mediante espectroscopía de absorción para lo cual se necesita preparar una
escala patrón de hierro con soluciones de 0, 2, 4, 6, y 8 ppm para realizar la calibración. En el laboratorio se
cuenta con una solución patrón de hierro de 40 ppm y matraces de 50 mL para preparar las soluciones que se
necesitan. Calcular cuántos mL de la solución patrón deben utilizarse para hacer cada dilución.
R= No adiciona b) 2,5 mL c) 5 mL d) 7,5 mL e) 10 mL
9- Se toman de la disolución original 3 (tres) alícuotas de 10 mL. A la primera alícuota no se le añade nada, a la
segunda se añade 15 L y a la tercera 30 L de la solución de Cloruro de cobre estándar de 200 ppm.
Lo enunciado se resume en la siguiente tabla:
Alícuota de 10 mL Volumen de 200 ppm Respuesta Instrumento Concentración final de

Cu+2 añadido (L) Cu+2 ( ppm)
1 0 0,47
2 15 0,72
3 30 0,97
a) Expresar las concentraciones finales de cobre añadido en ppm en la alícuota 2 y 3.

b) Realizar la gráfica correspondiente sabiendo la respuesta del instrumento.
c) Obtener el contenido de cobre aplicando el método de adición estándar.
R = a) 0,3 y 0,6 ppm b) 0,5 ppm c) 0,56 ppm

10- Una alícuota de 25 mL de agua de pozo se trató con un exceso de KSCN y se diluyó hasta 100
mL. Calcular los g/ mL de Fe (II) en la muestra, sabiendo que la solución diluida tiene una
absorbancia de 0,720 a 750 nm, que se midió en una cubeta de 2 cm. La absortividad molar
3
es de 8 x 10 .
R = 12,56 ppm Fe

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FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

Asignatura: ANALISIS INSTRUMENTAL

NATURALEZA DE LA RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA

Propiedades de onda: parámetros de interés.

Capítulo III Introducción a la Espectroscopia y Espectroscopia UV- Vis- IR 2|

m = micrómetro = 10-6 metros = 10-4 centímetros

i  i (ciclo/s . m/ciclo= m/s) (1)

En cierto sentido, la frecuencia es más fundamental que la longitud de onda. La frecuencia

c =  = 3,00 x 108 m/s (2)

El número de onda  , es otra forma de describir la radiación electromagnética. Se define como

  k donde la constante de proporcionalidad k depende del medio y es igual a la

Propiedades de partícula: los fotones

INTERACCIONES DE LA RADIACIÓN Y LA MATERIA

Capítulo III Introducción a la Espectroscopia y Espectroscopia UV- Vis- IR 3|

MÉTODO RMN ESR Microondas IR UV / V Rayos X Rayos 

Capítulo III Introducción a la Espectroscopia y Espectroscopia UV- Vis- IR 4|

Tabla 1. Modelos espectroscópicos generales basados en la radiación electromagnética.

INTERVALO HABITUAL INTERVALO HABITUAL

Absorción de microondas 0,75 -3,75 mm 13 a 27 Rotación de moléculas

Resonancia de espín Espín de los electrones

En la espectroscopía se utilizan estas interacciones entre la luz y la materia a fin de obtener

a) Proceso de absorción: cuando una partícula, que se encuentra en “estado de reposo” o

Aº = absorbente en estado fundamental

Capítulo III Introducción a la Espectroscopia y Espectroscopia UV- Vis- IR 5|

Fig. 4. Espectro de absorción

 Absorción Atómica: el paso de radiación policromática ultravioleta o visible a través

 Absorción Molecular: los espectros de absorción de las moléculas poliatómicas, y en

Aº = absorbente en estado fundamental

Esta sección se enfocará en la espectroscopía de absorción en la región UV/Visible del espectro, ya

LA LEY DE LAMBERT Y BEER O LEY DE LA ABSORCIÓN

Fig. 5. Atenuación de un haz de radiación por una solución absorbente.

Capítulo III Introducción a la Espectroscopia y Espectroscopia UV- Vis- IR 7|

Estos tres parámetros definen la expresión matemática de la ley de Lambert - Beer:

De esto podemos deducir el enunciado de la ley de absorción:

La absorbancia de una solución es directamente proporcional a la concentración de la

Limitaciones propias de la ley de Beer

 Limitaciones reales: la ley de Beer sólo describe bien el comportamiento de la

 Desviaciones químicas Se producen desviaciones de la ley de Beer cuando un

1- COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS ÓPTICOS:

Fuente de lámpara Selector de Sistema de

Cubeta de Selector de Sistema de

Fuente y cubeta con Selector de Sistema de

Capítulo III Introducción a la Espectroscopia y Espectroscopia UV- Vis- IR 9|

Fuentes de radiación para la región Ultravioleta:

- Lámpara de filamento de tungsteno: Es la más común de radiación visible y del

Fuentes de radiación para la región Infrarrojo

Capítulo III Introducción a la Espectroscopia y Espectroscopia UV- Vis- IR 10 |

Selectores de longitud de onda

Capítulo III Introducción a la Espectroscopia y Espectroscopia UV- Vis- IR 11 |

El grosor de la capa dieléctrica se controla con cuidado y

Capítulo III Introducción a la Espectroscopia y Espectroscopia UV- Vis- IR 12 |

Características de funcionamiento de los monocromadores: La calidad de un monocromador

Recipientes para muestras : cubetas ó celdas

Todos los estudios espectroscópicos, con excepción de la

Capítulo III Introducción a la Espectroscopia y Espectroscopia UV- Vis- IR 13 |

Técnicas para la manipulación de la muestra

Capítulo III Introducción a la Espectroscopia y Espectroscopia UV- Vis- IR 14 |

El espectro de un líquido de bajo punto de ebullición o de un gas se puede obtener permitiendo a la

Esto es: S = k P S= respuesta eléctrica en términos de corriente , voltaje o resistencia

- Detectores de fotones: (también llamados detectores fotoeléctricos o cuánticos) tienen una

 Fototubos multiplicadores. Es un tubo que contiene en su interior un cátodo consistente en

- Detectores piroeléctricos: Se construyen con laminas cristalinas de materiales

Procesadores de señales y dispositivos de lectura