UNIVERSIDAD NACIONAL “PEDRO RUIZ GALLO”

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

LAMBAYEQUE

INFORME DE PRÁCTICA Nº 06

“OBSERVACIÓN DE CÉLULAS PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS”

 ASIGNATURA:
 BIOLOGIA CELULAR

 DOCENTE:
 MONGE MOYANO ANIBAL

 NOMBRE:
 ELISEO FLORES NAQUICHE

 CICLO:

 2013 – I

Lambayeque - JULIO - 2013

 INTRODUCCION

Todos los organismos vivos están formados por células. Algunos de ellos, como las bacterias y
protozoos, son células únicas, mientras que los animales y plantas son organismos pluricelulares
que están formados por un gran número de células, organizadas en tejidos y órganos.

Aunque la diferencia entre los tipos de organismos mencionados puede ser grandes a simple vista,
realmente estos son muy similares, pues su constitución interna está conformada por células, ellas
presentan características morfológicas y químicas idénticas , en base a esto diremos entonces que
los organismos por mucha diferencia que presenten a nivel macroscópico no son tan diferentes
como podríamos observar, sino que presentan características muy parecidas en un campo muy
interesante, lleno de cosas nuevas que descubrir día tras día y fuente inagotable de diferentes
estudios de investigación, nos estamos refiriendo al nivel celular, que va ser tema en el presente
informe y en general en nuestra vida en el campo médico.

La gran variedad de células que existen, manifiestan diferentes niveles de complejidad. Pero
todas poseen una masa coloidal llamada citoplasma, rodeada de una que las aísla del entorno y a
través de la cual se vinculan con el exterior: la membrana citoplasmática. En base a su estructura es
posible distinguir dos categorías: procariotas y eucariotas. La célula es la imagen misma de la unidad
la multiplicidad. En efecto a pesar de la diversidad infinita de los seres vivos, sabemos desde el
nacimiento de la teoría celular (Schleiden y Schwann, 1837), que todos están constituidos por una o
múltiples células. Además, la observación de la célula o las células que componen los organismos
unicelulares y pluricelulares muestra que, a pesar de las grandes diferencias de forma y de
organización asociadas a su especialización, todas estas células poseen elementos fundamentales,
denominados orgánulos, que no presentan ninguna huella de diversificación estructural.

OBJETIVOS

 Reconocer los distintos tipo de bacterias según se tiñan o no con la tinción de Gran.
 Observa y caracterizar células eucariotas de tipo vegetal (epidermis de cebolla y mucosa
bucal)
 Observar y caracterizar celular eucariotas de tipo animal (epitelio bucal, tejido adiposo y
sangre)
FUNDAMENTO TEORICO

CELULA PROCARIOTA

La principal característica de la celula procariota es que carece de nucleo celular. Las bacterias, los
organismos procariotes mas representativos, comprenden por una parte, especies de importancia
medica puesto que producen una serie de infecciones y padecimientos en el hombre y en los
animales pero, por otra parte, una gran mayoría representa beneficios para la agricultura, la
industria y la salud humana y animal.

Para observar este tipo de células se utiliza la Tincion de Gram, técnica diseñada por el medico
danés Hans Christian Gram. Esta consiste en poner en contacto las células bacterianas con
colorantes básicos como violeta de genciana, utilizando la solucion de lugol como mordiente. Esto
forma un compuesto yodado que se fija fuertemente en determinadas bacterias. Según la
coloración que adquieran, las bacterias se clasifican en:

 GRAM POSITIVA: se tiñen fuertemente con violeta de genciana y adquieren una coloración
violeta.
 GRAM NEGATIVA: se tiñen muy superficialmente por lo que fácilmente se decoloran con
solventes organicos. Se utiliza adicionalmente la safranina o fucsina, que se emplea como
colorante de contraste, adquiriendo una coloración rosada.

La diferente tinción de bacterias se debe a la composición diferencial de sus paredes bacterianas.

Las bacterias Gram Positivas poseen una pared con mureina y acido teitoico. En cambio, las Gram
negativas tienen una pared mucho mas compleja que contiene, además de peptidoglucano, una
asociación de proteínas lípidos y lipopolisacaridos.

Además de la coloración esta técnica nos permite distinguir en las bacterias:

a) Morfologia: cocos, bacilos, espirilos, cocobacilos, vibrios,etc,

b) Agrupacion: pares, cadenas tétradas, racimos, sarcina.

CÉLULAS EUCARIOTAS

En 1939, en base a observaciones realizadas por los científicos alemanes Schleiden y Schwan, se
plasmo la teoría celular, la cual produjo un cambio radical en las ciencias biológicas. Esta teoría postula
que los “cuerpos de todos los animales y vegetales están formados de células y que solo pueden
aparecer nuevas células por división de las células preexistentes”. De ahí que los organismos por muy
sencillos que sean están constituidos por unidades vivas denominadas células.

La célula eucariota es más compleja que la célula procariota y contiene, a diferencia de esta última,
núcleo celular. Los organismos más simples (protozoarios) están constituidos de una sola célula
eucariota mientras que los más complejos o multicelulares están formados por un gran número de
células eucariotas que se hallan organizados en tejidos, órganos y sistemas.
 DIFERENCIAS ENTRE CÉLULAS PROCARIOTA Y EUCARIOTA

CARACTERÍSTICA PROCARIOTA EUCARIOTA

Núcleo Ausente Presente
Cromosoma Único, circular Varios lineales
Cromatina Ausente Presente
Citoesqueleto Ausente Presente
Sistema de endomembrana Ausente Presente
Ribosomas citoplasmáticos 70s 80s
Organelas membranosas Ausentes Presentes
Pared celular Con peptidoglucano Si está presente, carece de
peptidoglucano
Cadena respiratoria En la membrana celular En las membranas mitocondriales

En este informe analizaremos el comportamiento de una celula eucariota como lo es el eritrocito en

soluciones con distintas concentración, estas adopatan un nombre cuando se compara dichas
concentraciones con la concentración del citoplasma del eritrocito.Asi tenemos :

Solución hipotónica: es aquella que tiene menor concentración de soluto en el medio externo en
relación al medio citoplasmático de la célula. Una célula sumergida en una solución con una
concentración más baja de materiales disueltos, está en un ambiente hipotónico; la concentración
de agua es más alta (a causa de tener tan pocos materiales disueltos) fuera de la célula que dentro.
Bajo estas condiciones, el agua se difunde a la célula, es decir, se produce ósmosis de líquido hacia
el interior de la célula.
Una célula en ambiente hipotónico se hincha con el agua y puede explotar; cuando se da este caso
en los glóbulos rojos de la sangre, se denomina hemólisis. Las células animales sufren el fenómeno
de citólisis, que lleva a la destrucción de la célula, debido al paso del agua al interior de ella. Por otro
lado, en las células vegetales ocurre el fenómeno de presión de turgencia: cuando entra agua, la
célula se hincha pero no se destruye debido a la gran resistencia de la pared celular.

Solución será isotónica: es cuando una célula, sumergida en ella, no cambie su volumen. Eso se
debe a que no ha habido un flujo neto de agua desde adentro hacia afuera o desde afuera hacia
adentro de la célula. Esto quiere decir que la presión osmótica efectiva es la misma adentro que
afuera. De allí el nombre de isotónica: de igual presión.

Solución hipertónica: es aquella que tiene mayor concentración de soluto en el medio externo en
relación al medio citoplasmático de la célula. Si una célula se encuentra en un medio hipertónico,
sale agua de la célula hacia el exterior, con lo que esta se contrae y la célula puede llegar a morir por
deshidratación carbónica.
En una solución hipertónica, la concentración molar total de todas las partículas de soluto disuelto,
es más grande que el de la otra solución, o más grande que la concentración de la célula.
Si las concentraciones de solutos disueltos son mayores a las de fuera de la célula, la concentración
de agua es correspondientemente menor. Como resultado, el agua dentro de la célula sale para
alcanzar el equilibrio, produciendo un encogimiento de la célula. Al perder agua la célula también
pierden su habilidad para funcionar o dividirse.
La plasmólisis es el fenómeno mediante el cual la célula se contrae en un medio hipertónico.

Los eritrocitos, glóbulos rojos o hematíes, son los elementos más numerosos de la sangre. La
hemoglobina es uno de sus principales componentes y su objetivo es transportar el oxígeno hacia
los diferentes tejidos del cuerpo.
Los eritrocitos tienen una forma oval, aplanada, con una depresión en el centro. Este diseño está
optimizado para el intercambio de oxígeno con el medio que lo rodea lo que les otorga flexibilidad
para poder atravesar los capilares, donde liberan la carga de oxígeno. El diámetro de un eritrocito
típico es de 6-8 µm. Los glóbulos rojos contienen hemoglobina, que se encarga del transporte de
oxigeno y del dióxido de carbono. Asimismo es el pigmente que le da el color rojo a la sangre.

 TINCIÓN DE WRIGHT:
Es un tipo de tinción usada en histología para facilitar la diferenciación de los tipos de células de la
sangre. Se usa principalmente para teñir frotis de sangre y punciones medulares, para ser
examinadas al microscopio. En citogenética se usa para teñir cromosomas, para facilitar el
diagnóstico de síndromes y enfermedades.
Lleva el nombre de James Homer Wright, su descubridor, que la obtuvo modificando la tinción de
Romanowsky, en 1902.
Debido a que ayuda a distinguir fácilmente las células de la sangre se convirtió en una técnica muy
usada para el conteo de los glóbulos blancos, una técnica rutinaria usada cuando hay sospecha de
infecciones.
La tinción de Wright es una tinción de tipo Romanowsky.
Una tinción de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidación, así como
eosina Y o eosina B.
La acción combinada de estos colorantes produce el efecto Romanowsky que da una coloración
púrpura a los núcleos de los leucocitos y a los gránulos neutrofílicos y da color rosado a los
eritrocitos. Los componentes de este efecto son el azul B y la eosina Y.
Las propiedades de tinción de Romanowsky dependen del enlace de los colorantes a las estructuras
químicas y de las interacciones del azul B y la eosina Y. Los agrupamientos de ácidos nucleicos, las
proteínas de los núcleos celulares y el citoplasma inmaduro reactivo, fijan el azul B, colorante
básico.
La eosina Y, colorante ácido, se fija a los agrupamientos básicos de las moléculas de hemoglobina y
a las proteínas básicas.
MATERIALES

 Microscopio óptico
 Alcohol acetona
 Soluciones para la tinción:
 Fucsina o safranina
 Violeta de genciana
 Aceite de inmersión
 Lugol
 Mechero de alcohol
 Lamina portaobjetos y cubreobjetos
 Mondadientes
 Gotero
 Muestras bacterianas de origen natural: yogur, vinagre, sarro dental
 Cubeta de tinción
 Frasco lavador
 Alcohol absoluto
 Lanceta esteril
 Hematoxilina
 Formol
 Sudan III
 Cebolla
 Hisopos
 Tocino
 Agua estancada en frasco oscuro
 Materiales de diseccion: tijera, pinza, estilete
 Bisturí u hoja de afeitar
 Levadura de pan
PROCEDIMIENTO: “PROCARIOTAS”

La tinción GRAM se realizara sobre las muestras de yogur, sarro dentario y vinagre que los
alumnos traerán.

Bacterias de yogur

El yogur es u producto lácteo producido por la fermentación natural de la leche. A escala

industrial se realiza la fermentación añadiendo a la leche dosis de 3-4% de una asociación de
dos cepas bacterianas: el Streptococcus termophilus, poco productor de acido, pero muy
aromático, y el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En esta preparación se podrán, por
tanto observar dos morfologías bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupación
(estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Además, el tamaño del lactobacilo (unos
30um de longitud) facilita la observación aunque no se tenga mucha práctica con el enfoque
del microscopio.

Bacteria del Vinagre

El vinagre es una solución acuosa rica en acido acético resultante de la fermentación

espontanea del vino o de bebidas alcoholicas de baja graduación. La acetificación del vino es
producida por bacterias aerobicas del acido acético, principalmente Acetobacter aceti, aunque
tambien Gluconobacter. Se trata de bacilos rectos con flagelos polares.

Realizar los siguientes pasos para la tinción de GRAM de cada una de las 3 muestras indicadas.

1. Realizar un extensión de la muestra de cultivo bacteriano sobre un portaobjetos

2. Secar ante un mechero
3. Cubrir el preparado con violeta de genciana por 1 minuto
4. Enjuagar la lamina con agua destilada
5. Lavar con agua destilada y decolorar con alcohol acetona
6. Añadir fucsina o safranina y dejar que actue por 1 minuto
7. Lavar con agua corriente, secar
8. Coloque una gota de aceite de inmersión encima de la lamina cubreobjeto y observar
al microscopio con el objetivo de inmersión
 Bacterias del yogur

Bacterias del vinagre

Bacteria Observación
Se visualiza cocos y bacilos, además se
Yogurt evidencia por la coloración según Gram que son
bacterias Gran postivas
Se visualiza cocos, por la coloración violeta que
Vinagre adopta tras haberle puesto violeta genciana,
inferimos que es una bacteria Gram positiva.

PROCEDIMIENTO: “EUCARIOTAS”

Observación de células vegetales (células epiteliales de Allium cepa)

Las células de la epidermis de las hojas internas del bulbo de la cebolla, son de forma alargada y
bastante grande. La pared celular se destaca muy clara teñida por el colorante. Los nucleos son
grandes y muy visibles. En el citoplasma se distinguen algunas vacuolas grandes débilmente
coloreadas.
 1. Separe una de las capas del bulbo de la cebolla. Con ayuda de una pinza desprenda la
membrana epidérmica que cubre la parte interna de la cebolla y extiéndala en el
portaobjetos.

2. Utilizando una hoja de afeitar obtenga una porción de medio centímetro cuadrado,
cúbrala con una gota de lugol, coloque cuidadosamente y observa en el microscopio.

3. Reconozca las partes de la celula vegetal

Observación de organismos unicelulares

1. Coloque una gota de agua estancada sobre un portaobjeto y cubran con una laminilla.
2. Observe con el objetivo de menor aumento
3. Ajuste el difragma para incrementar el contraste
4. Observe la forma, tamaño y movimiento de los organismos unicelulares
Observaciones de levaduras de pan

1. Diluya un trocito de levadura de pan (Saccaharomyces cervisiae) con agua destilada, en un

tubo de ensayo
2. Observe con el obejtivo de mayor aumento
3. Ajuste el diafragma para incrementar el contraste
4. Observe la forma y tamaño de estos organismos

Observación de células animales (epitelio bucal)

El azul de metileno tiñe intensamente el nucleo y con menos color el citoplasma de las celular.
Este suele ser algo granuloso

1. Con un hisopo limpio extraiga suavemente la mucosidad de la cavidad bucal

2. Deposite la mucosidad extraida en el centro de una lamina portaobjetos y extiéndalo con
un frotis
3. Agregue unas gotas de AZUL de metileno y espere 3 minutos
4. Elimine el exceso de colorante utilizando agua y coloque un cubreobjetos.
5. Observe la muestra a menor aumento y localice: células asociadas y dobladas.
6. Luego visualice a mayor aumento y reconozca los componentes celulares
Observación de células animales(tejido adiposo)

El sudan III es un compuesto que tiñe lípidos de color rojo intenso. En el tejido adiposo, que
contiene gran cantidad de grasas, se observaran los adipocitos teñidos por el sudan III.

1. Con ayuda de un bisturí, cortar una fina capa de grasa de tocino

2. Colocarla en un portaobjetos y cubrirla con unas gotas de formol. Dejar actuar 4 minutos.
 3. Lavar la muestra con agua y cubrirla con unas gotas de sudan III. Dejar actual unos
5minutos.
4. Voler a lavar la preparación con agua, cubrirla con un cubreobjetos
5. Observar al microscopio

Observación de células animales (sangre) en diferentes medios de solución

1. Tomar una muestra de sangre de 0.5ml en una jeringa milimetrada.

2. Colocar en 3 tubos de ensayo 0.1ml de sangre en cada uno.

3. Colocar 5ml de solución de NaCl al 9 por mil (isotónica) en uno de los tubos de ensayos,
en otro 5ml de una solución de NaCl al 2,1 por mil (hipotónica) y en el restante 5ml de
una solución de NaCl al 34 por mil (hipertónica)
4. Tomar una muestra de cada tubo de ensayo con el gotero y colocar en una lamina
portaobjetos cada una y cubrirle con una laminilla
5. llevarle a observa al microscopio y observar que sucede con la forma del eritrocito.

Eritrocitos en solución isotónica

Eritrocitos en solución hipotónica

 Eritrocitos en solución hipertónica

CUADRO COMPARATIVO

Solución Cantidad de sangre Cantidad de solucion Observación

Sangre +Isotónica
Sangre +Hipotónica
Sangre +Hipertónica
Eritrocios mantienen su
forma ya que no hay
0.1ml 5ml
difusión de agua en
ningún sentido
Eritrocitos sufren
hemolisis ya que hay
0.1ml 5ml
difusión de agua hacia
adentro del mismo.
Eritrocitos sufren
crenacion ya que hay
0.1ml 5ml
difusión hacia fuera de
la celula.

CONCLUSIONES
 Todos los organismos vivos están formados por células, y en general se acepta que
ningún organismo es un ser vivo si no consta al menos de una célula.
 Se evidencio de manera clara algunas diferencias entre la estructura de la celula animal y
vegetal como por ejemplo la pared celular presente en la celula vegetal.
 Se logro precisar experimentalmente la tinción de Gram, visualizando bacterias Gram
postivas. Además de notar las diferentes formas de bacterias: cocos ,bacilos, etc.
BIBLIOGRAFIA
 De Robertis Eduardo M. F (h) –Hib-Ponzio; Biología Celular y Molecular;
duodécima edición–segunda reimpresión; edit. El ateneo; 1997 Buenos Aires–
Argentina; pag.45 - 57.

LINKOGRAFIA
 http://www.buenastareas.com/ensayos/Soluciones-Isotonicas-Hipertonicas-e-
Hipotonicas/24733.html