UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOPATOLÓGICO

INFORME DE PRÁCTICA

TEMA:
EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS.

ASIGNATURA:
BIOLOGÍA MOLECULAR Y GENÉTICA

ELABORADO POR:

Daniela Montero
Viviana Segura
Katherin Vargas

OCTAVO SEMESTRE

DOCENTE:

DRA. MORELLA GUILLÉN FERRARO

OCTUBRE 2017 – MARZO 2018

RIOBAMBA-ECUADOR
 INFORME DE PRÁCTICA Nº1

TEMA: Extracción de ADN

1. OBJETIVOS
1.1.OBJETIVO GENERAL

Extraer ADN de diferentes muestras por métodos fisicoquímicos.

1.2.OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 Conocer la metodología básica para la extracción de ADN
 Adquirir destreza en la manipulación de diversas muestras biológicas para la
extracción de ADN.

2. FUNDAMENTO TEÓRICO

ADN

Las instrucciones que determinan todas las características y funciones de un

organismo se encuentran en su material genético: el ADN (ácido
desoxirribonucleico).
El conocimiento del ADN, su estructura y función, fue determinante para el
desarrollo de la biotecnología moderna.
La estructura de doble hélice del ADN, que los investigadores James Watson y
Francis Crick propusieran en el año 1953 proporcionó respuestas a muchas preguntas
que se tenían sobre la herencia. Predijo la autorreplicación del material genético y la
idea de que la información genética estaba contenida en la secuencia de las bases que
conforman el ADN. Más aún, con el correr de los años y de las investigaciones, se
pudo determinar que todos los seres vivos contienen un ADN similar, formado a
partir de las mismas unidades: los nucleótidos. Este código genético mediante el cual
se “escriben” las instrucciones celulares es común a todos los organismos. Es decir
que el ADN de un ser humano puede ser “leído” dentro de una bacteria, y una planta
puede interpretar la información genética de otra planta diferente. A esta propiedad
de la información genética se la conoce como “universalidad del código genético”.
El código genético universal es uno de los conceptos básicos para comprender los
procesos de la biotecnología moderna. Por ejemplo, la posibilidad de generar
organismos transgénicos, y que las instrucciones del ADN de un organismo puedan
determinar nuevas características en organismos totalmente diferentes.

LA FUNCIÓN DEL ADN

El ADN tiene la función de “guardar información”. Es decir, contiene las
instrucciones que determinan la forma y características de un organismo y sus
funciones. Además, a través del ADN se transmiten esas características a los
descendientes durante la reproducción, tanto sexual como asexual. Todas las células,
procariotas y eucariotas, contienen ADN en sus células. En las células eucariotas el
ADN está contenido dentro del núcleo celular, mientras que en las células
procariotas, que no tienen un núcleo definido, el material genético está disperso en el
citoplasma celular.

LA ESTRUCTURA DEL ADN

El ADN está organizado en cromosomas. En las células eucariotas los cromosomas
son lineales, mientras que los organismos procariotas, como las bacterias, presentan
cromosomas circulares. Para cada especie, el número de cromosomas es fijo. Por
ejemplo, los seres humanos tienen 46 cromosomas en cada célula somática (no
sexual), agrupados en 23 pares, de los cuales 22 son autosomas y un par es sexual.
Una mujer tendrá un par de cromosomas sexuales XX y un varón tendrá un par XY.
Cada cromosoma tiene dos brazos, ubicados por arriba y por debajo del centrómero.
Cuando los cromosomas se duplican, previo a la división celular, cada cromosoma
está formado por dos moléculas de ADN unidas por el centrómero, conocidas como
cromátidas hermanas.
El ADN se compone de dos cadenas, cada una formada por nucleótidos. Cada
nucleótido, a su vez, está compuesto por un azúcar (desoxirribosa), un grupo fosfato
y una base nitrogenada. Las bases nitrogenadas son cuatro: adenina (A), timina (T),
citosina (C), y guanina (G), y siempre una A se enfrenta a una T y una C se enfrenta
a una G en la doble cadena. Las bases enfrentadas se dice que son complementarias.
El ADN adopta una forma de doble hélice, como una escalera caracol donde los
lados son cadenas de azúcares y fosfatos conectadas por “escalones”, que son las
bases nitrogenadas. La molécula de ADN se asocia a proteínas, llamadas histonas, y
se encuentra muy enrollada y compactada para formar el cromosoma.

La doble hélice de ADN con las bases nitrogenadas complementarias que se ubican
hacia dentro y establecen uniones no covalentes (o fuerzas de atracción) entre sí que
mantienen la estructura de la molécula. Las desoxirribosas (azúcares) y los grupos
fosfato constituyen las columnas de la molécula.
Cuando la célula se divide, cada nueva célula que se forma debe portar toda la
información genética, que determine sus características y funciones. Para eso, antes
de dividirse, el ADN debe replicarse, es decir generar una copia de sí mismo.
Durante la replicación, la molécula de ADN se desenrolla, separando sus cadenas.
Cada una de éstas servirá como molde para la síntesis de nuevas hebras de ADN.
Para eso, la enzima ADN-polimerasa coloca nucleótidos siguiendo la regla de
apareamiento A-T y C-G. El proceso de replicación del ADN es semiconservativo,
ya que al finalizar la duplicación, cada nueva molécula de ADN estará conformada
por una hebra “vieja” (original) y una nueva.

La aplicación de técnicas moleculares inicia con la extracción de ADN y la

obtención exitosa de datos confiables y reproducibles depende, en gran medida, de
la extracción de ADN íntegro y puro.
La extracción consiste en el aislamiento y purificación de moléculas de ADN y se
basa en las características fisicoquímicas de la molécula.
El ADN está constituido por dos cadenas de nucleótidos unidas entre sí formando
una doble hélice. Los nucleótidos están integrados por un azúcar (desoxirribosa), un
grupo fosfato y una base nitrogenada (adenina, guanina, timina o citosina). La unión
de los nucleótidos ocurre entre el grupo fosfato y el azúcar, mediante enlaces
fosfodiéster, dando lugar al esqueleto de la molécula. Las bases de cadenas opuestas
se unen mediante puentes de hidrógeno y mantienen estable la estructura helicoidal
(Figura 1).

Figura 1. Estructura del ADN. En la estructura helicoidal del ADN, las

cadenas se unen por puentes de hidrógeno dos entre adenina y timina,
tres entre guanina y citosina. El enlace fosfodiéster que une a cada
nucleótido, se forma entre el fosfato (H3PO4) que se encuentra en el
carbono 5 y el grupo hidroxilo (–OH) del carbono 3 de la desoxirribosa.
Los grupos fosfato son la parte hidrofílica del ADN y tienen carga
negativa.

Los grupos fosfato están cargados negativamente y son polares, lo que le confiere al
ADN una carga neta negativa y lo hace altamente polar, características que son
aprovechadas para su extracción. Los grupos fosfato tienen una fuerte tendencia a
repelerse, debido a su carga negativa, lo que permite disolver al ADN en soluciones
acuosas y formar una capa hidratante alrededor de la molécula. Pero, en presencia
de etanol, se rompe la capa hidratante y quedan expuestos los grupos fosfato. Bajo
estas condiciones se favorece la unión con cationes como Na+ que reducen las
fuerzas repulsivas entre las cadenas de nucleótidos y permiten que el ADN precipite.
Por otro lado, la carga neta negativa del ADN le permite unirse a moléculas y
matrices inorgánicas cargadas positivamente.

La selección del método de extracción es un paso fundamental en las técnicas

moleculares y depende del organismo bajo estudio, el tejido disponible y su estado
de conservación, la técnica que se aplicará posteriormente, así como la
 infraestructura de los laboratorios, los recursos económicos y tiempo para obtener
resultados. Independientemente del método seleccionado es recomendable encontrar
un equilibrio entre pureza y rendimiento de acuerdo con la aplicación posterior.

3. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

 Muestras: Material vegetal fresco: semillas de habas, arvejas, hojas de espinacas.
 Agua destilada estéril.
 Etanol 95 %.
 Detergente líquido sin aroma.
 NaCl.
 Proteasa (Bromelina): ablandador de carne.
 Gasa o tull.
 Tubos de vidrio con tapa, estériles. (8 por grupo)
 Recipientes de vidrio estériles. (250 mL)
 Pipetas de vidrio estériles 5 y 10 mL. (3 de cada tipo) o micropipetas y puntas
estériles, amarillas y azules.

 Tubos de plástico cónicos estériles. (8 por grupo).

4. PROCEDIMIENTO
Coloque el etanol a -20°C.
1.- Tome 50 gr de habas, pélelas, adicione 1gr de NaCl y proceda a homogeneizarlas en
una licuadora con el mínimo volumen de agua.
2.- Filtre el homogeneizado, mida el volumen y si es necesario centrifúguelo (2500 A
3000 revoluciones/ min) por 10 min, separe el sobrenadante y agregue 2 ml del
detergente por cada 10 mL, agite suavemente y deje reposar 10 minutos.
3.- Coloque la mezcla en uno o varios recipientes (tubos de vidrio), cuidando de llenar
solo un 50 % del recipiente y añada 2 mg de proteasa por cada 10 ml de extracto, agite
suavemente deje reposar 5 minutos y adicione 1 Vol. de Etanol frio.
- 4.- Observe la formación de una interface y en ella la aparición de una sustancia
viscosa. Para ello se procede de la siguiente manera:
5.- Con una varilla de vidrio o un hisopo, trate de enrollar esa sustancia (ADN) y
transfiérala a otro tubo, lávela con alcohol frio y centrifugue (2500 A 3000
revoluciones/ min) por 10 min, deseche el sobrenadante, el pelt será el ADN.
6.- Guarde el ADN en el congelador a -20°C.

5. CONCLUSIONES
 La metodología utilizada fue la físicoquímicas donde se realiza la extracción y
esto consiste en el aislamiento y purificación de moléculas de ADN.
 Mediante la práctica realizada se pudo observar y manipular con mayor destreza
las diversas muestras biológicas y extracción de ADN.

6. RECOMENDACIONES
 Es indispensable las normas de bioseguridad ya que se trabaja con muestras
biológicas y reactivos que pueden afectar al personal de laboratorio.
 Es muy importante seguir todos los pasos con orden del procedimiento ya que si
se evita alguno el resultado puede salirnos erróneo.

7. CUESTIONARIO

¿Explique para que se realiza la homogenización de la muestra con el NaCl?

Porque la homogenización facilita la disgregación de las membranas celulares.

¿Para qué se añade el detergente líquido y la proteasa?

Facilita la disgregación de las membranas celulares lisa las células y extrae el material
genético.

¿Para qué se añade el etanol?

Limpia el ADN de otras biomoléculas por un proceso llamado "precipitación". En este
proceso, el etanol hace que el ADN se deshidrate, es decir, pierda contacto con las
moléculas de agua que lo rodean, y lo aísla de la solución acuosa para dejarlo libre de
impurezas. (Campos, 2011)
8. ANEXOS

Ilustración 1 - Filtración de homogenizado

 Ilustración 2 - Filtrado de vegetales para añadir proteasa, detergente y etanol.

Ilustración 3 - Extracción de ADN

BIBLIOGRAFÍA

Campos, L. D. (2011). Libros Laboratorio. Obtenido de

https://libroslaboratorio.files.wordpress.com/2011/09/analisis_orina_en_lab.pdf