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LABORATORIO DE ECOTOXICOLOGÍA
PRACTICA Nº 1
Realizado por:
Enríquez Jorge
Valenzuela Fabricio
Conclusiones /2.0
Recomendaciones /1.5
Consulta /2.0
Presentación /0.5
Bibliografía /0.5
Total /10
2. Objetivos:
● Evaluar los efectos fitotóxicos de compuestos puros o de mezclas complejas
en el proceso de germinación de las semillas y en el desarrollo de las
plántulas durante los primeros días de crecimiento.
3. Teoría (Resumen)
Los ensayos de toxicidad son procedimientos en los cuales las respuestas de ciertos
organismos son utilizadas para detectar el efecto producido por la presencia de sustancias
nocivas o tóxicas. Se consideran una herramienta importante de control ambiental, puesto
que permiten evaluar de una manera rápida y confiable los impactos de contaminantes
tóxicos sobre los ecosistemas, así como evaluar riesgos potenciales de salud. (Murillo y
Díaz, s.f.).
Normalmente se utilizaban las pruebas de toxicidad agudas para determinar una
concentración letal que matará al 50 % de la población de la prueba durante un tiempo
dado. La dosis respuesta es la relación existente entre la dosis y proporción de la población
con evidencia de efectos definidos.9 La dosis letal media es la estimación estadística que
relaciona la dosis que ocasiona el 50 % de las muertes cuando se realiza una
administración única, la cual se encuentra expresada en peso de la sustancia por peso
corporal y se expresa miligramos por kilogramos. (Arencibia Arrebola, Rosario Fernández, &
López Feria, 2003)
El bioensayo de toxicidad con semillas de lechuga (Lactuca sativa) es una prueba estática
de toxicidad aguda (120 horas de exposición) en el que se pueden evaluar los efectos
fitotóxicos de compuestos puros o de mezclas complejas en el proceso de germinación de
las semillas y en el desarrollo de las plántulas durante los primeros días de crecimiento.
Como puntos finales para la evaluación de los efectos fitotóxicos, se determina la inhibición
en la germinación y la inhibición en la elongación de la radícula y del hipocotilo (figura 1).
Es importante destacar que durante el período de germinación y los primeros días de
desarrollo de la plántula ocurren numerosos procesos fisiológicos en los que la presencia de
una sustancia tóxica puede interferir alterando la supervivencia y el desarrollo normal de la
planta, siendo por lo tanto una etapa de gran sensibilidad frente a factores externos
adversos. La evaluación del desarrollo de la radícula y del hipocotilo constituyen indicadores
representativos para determinar la capacidad de establecimiento y desarrollo de la planta.
(Sobrero & Ronco, s.f.).
4. Procedimiento
1. Preparar cinco diluciones de la muestra o compuesto a estudiar, de manera
que se obtengan valores de toxicidad entre 100 y 0%.
2. Colocar en cada cápsula de Petri un disco de papel de filtro.
3. Marcar correctamente cada caja con la dilución correspondiente, así como la
fecha y hora de inicio y término del bioensayo.
4. Saturar el papel de filtro con 4 o 5 mL de la dilución evitando que se formen
bolsas de aire.
5. Con la ayuda de una pinza, colocar cuidadosamente veinte semillas, dejando
espacio suficiente entre ellas para permitir la elongación de las raíces.
6. Tapar las cápsulas y colocarlas en bolsas plásticas para evitar la pérdida de
humedad. Cubrir de la luz.
7. Incubar durante 120 h (cinco días) a una temperatura de 22± 2 °C. Realizar
repeticiones para cada dilución ensayada.
8. Cuantificar el efecto en la germinación y en la elongación de la radícula y del
hipocotilo.
9. Registrar el número de semillas que germinaron normalmente, considerando
como criterio de germinación la aparición visible de la radícula.
10. Medir cuidadosamente la longitud de la radícula y del hipocotilo de cada una
de las plántulas correspondientes a cada concentración de tóxico o dilución
de muestra y a los controles.
Blanco
Tabla No 1. Longitudes de la radícula e hipocotilo de las semillas germinadas sometidas a
una concentración al 0% de Dicromato de potasio (K2Cr2O7).
Concentración 100%
Tabla No 2. Longitudes de la radícula e hipocotilo de las semillas germinadas sometidas a
una concentración 1 g/L de Dicromato de potasio (K2Cr2O7).
hipocotilo
Id_semilla radícula (mm) (mm) Observaciones
manchas negras
1 1 2 (necrosis)
manchas negras
2 NPI NPI (necrosis)
manchas negras
3 NPI NPI (necrosis)
manchas negras
4 NPI NPI (necrosis)
manchas negras
5 NPI NPI (necrosis)
manchas negras
6 NPI NPI (necrosis)
manchas negras
7 NPI NPI (necrosis)
8 0 0 No germinó
manchas negras
9 NPI NPI (necrosis)
manchas negras
10 NPI NPI (necrosis)
manchas negras
11 NPI NPI (necrosis)
manchas negras
12 NPI NPI (necrosis)
manchas negras
13 NPI NPI (necrosis)
manchas negras
14 NPI NPI (necrosis)
manchas negras
15 NPI NPI (necrosis)
manchas negras
16 NPI NPI (necrosis)
manchas negras
17 NPI NPI (necrosis)
manchas negras
18 NPI NPI (necrosis)
manchas negras
19 NPI NPI (necrosis)
manchas negras
20 NPI NPI (necrosis)
Concentración 10%
Tabla No 3. Longitudes de la radícula e hipocotilo de las semillas germinadas sometidas a
una concentración 0,1 g/L de Dicromato de potasio (K2Cr2O7).
Concentración 1%
Tabla No 4. Longitudes de la radícula e hipocotilo de las semillas germinadas sometidas a
una concentración 0,01 g/L de Dicromato de potasio (K2Cr2O7).
hipocotilo(mm
Id_semilla radicula(mm) ) observaciones
1 4,1 18,9 Mancha en cotiledón
2 4,1 18 Mancha en cotiledón
3 4,6 14,8 Mancha en cotiledón
4 5,9 17 Sin manchas, hipocotilo muy debil
5 4 19 Sin manchas
6 5,1 15 Mancha en cotiledón
7 3,4 0 manchas y no presenta desarrollo de hipocotilo
8 4,2 18 Mancha en cotiledón
9 3 5,6 sin desarrollo de cotiledon
10 9,1 15,5 sin manchas
11 4,9 13,7 Fragilidad, manchas
12 5,3 16 manchas negras
13 0 0 No germinó
14 0 0 No germinó
manchas negras, sin desarrollo hipocotilo
15 3,3 0
16 2,3 9,9 manchas negras, sin desarrollo cotiledón
17 2,3 0 Sin desarrollo hipocotilo
18 3,5 7,8 manchas negras
19 2,9 5,3 manchas negras
20 3,9 7,1 manchas negras
Concentración 0,1%
Tabla No 5. Longitudes de la radícula e hipocotilo de las semillas germinadas sometidas a
una concentración 0,001 g/L de Dicromato de potasio (K2Cr2O7).
1 5 24 sin manchas
2 4 21 sin manchas
3 4 20 sin manchas
4 4 22 sin manchas
5 4 19 sin manchas
6 5 23 sin manchas
7 5 21 sin manchas
8 5 23 sin manchas
9 4 16 sin manchas
10 4 19 sin manchas
11 5 16 sin manchas
12 5 21 sin manchas
13 4 20 sin manchas
14 4 21 sin manchas
15 4 19 sin manchas
16 4 20 sin manchas
17 5 22 Sin manchas
18 4 18 Sin manchas
19 2 10 Sin manchas
20 5 22 Sin manchas
Concentración 0,01%
Tabla No 6. Longitudes de la radícula e hipocotilo de las semillas germinadas sometidas a
una concentración 0,0001 g/L de Dicromato de potasio (K2Cr2O7).
Tabla N 7
Concentración 0%
0.001 1 24.15 0 - -3
Blanco 1 19 5
1 1 19 5
0.1 0 20 0
0.01 2 18 10
0.001 0 20 0
0.0001 0 20 0
7. Conclusiones
● Las pruebas de toxicidad utilizando Cloruro de Cobalto permitieron establecer los
efectos fitotóxicos del contaminante a evaluar, demostrando que a mayor
concentración de la sustancia tóxica aumenta el porcentaje de inhibición en la
elongación de la radícula e hipocotilo, con lo que se puede concluir una relación
directamente proporcional entre la concentración del contaminante y el % de efecto
o respuesta de la población, mismos que representan un indicador de riesgo
ambiental y permiten establecer normas para el control de descargas de efluentes en
cuerpos de agua.
5 una extra
8. Recomendaciones
● Se debería realizar el ensayo con varias repeticiones para una misma concentración,
esto para contar con más datos e información y que las desviaciones sean menores,
además que permite establecer si es experimento se está desarrollando de buena
manera porque podemos comparar resultados para cada repetición, lo que reduce
errores sistemáticos y más confiabilidad al momento de procesar los datos.
● Para que los datos sean más exactos y evitar la especulación del observador, se
debería utilizar como instrumento principal un calibre pie de rey; con ello se lograría
uniformidad en las medidas.
9. Bibliografía
● Arencibia Arrebola, D. F., Rosario Fernández, L. A., & López Feria, Y. (2003).
RETEL. Recuperado el 4 de Noviembre de 2017, de
http://www.sertox.com.ar/img/item_full/22001.pdf
● González Pérez, Y., & Aportela Gilling, P. (2001). Centro de Toxicología y
Biomedicina. Recuperado el 4 de Noviembre de 2017, de
http://bvs.sld.cu/revistas/anu/vol1_1_01/anu1701.pdf
● Murillo , N., & Diaz, M. C. (s.f.). Universidad Nacional de Colombia. Recuperado el 4
de Noviembre de 2017, de
https://revistas.unal.edu.co/index.php/ingeinv/article/viewFile/20947/21848
● Shuttleworth, M. (2008). Explorable. Recuperado el 4 de Noviembre de 2017, de
https://explorable.com/es/grupo-de-control-cientifico
● Sobrero, M. C., & Ronco, A. (s.f.). INECC. Recuperado el 4 de Noviembre de 2017,
de http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/573/cap4.pdf
● Toscana, L., Moretto, N., & Villarreal, F. (s.f.). Universidad Nacional del Sur.
Recuperado el 4 de Noviembre de 2017, de
http://www.matematica.uns.edu.ar/XCongresoMonteiro/Comunicaciones/moretto.pdf
10. Anexos
10.1. Cuestionario/ consulta
7
● LD50
● CE50
● MÉTODO PROBIT
● Carta control
Las cartas de control se utilizan para chequear la estabilidad de un proceso. En este
contexto el proceso se dice que está bajo control estadístico si el o los parámetros de la
distribución de probabilidad de una característica de calidad bajo estudio, permanecen
invariables en el tiempo. Si un cambio se produce en alguno de ellos el proceso se dice que
está fuera de control.
Cuando se evalúa cuan efectiva es una carta de control para detectar cambios en los
parámetros de un proceso se pretende que los mismos sean detectados inmediatamente
después de que ocurra, que la tasa de falsa alarma sea baja y que la tasa de muestreo sea
razonable.
Una medida para la tasa promedio de muestreo se obtiene usando el número promedio de
observaciones hasta que se produce una señal. El número de observaciones requeridas
hasta una señal se denomina usualmente Longitud de Corrida de la carta de control. El
número promedio de observaciones que deben graficarse antes de que una de ellas indique
una condición fuera de control es la Longitud de Corrida Promedio (LCP).Cuando el proceso
está bajo control o cuando se produce un cambio, la LCP puede evaluarse mediante
cálculos probabilísticas. (Toscana, Moretto, & Villarreal, s.f.)
10.2. Ejemplos de cálculo (si son cálculos distintos colocar un ejemplo de cada
uno)