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UNIVERSIDAD CATOLICA SANTA MARIA

PROGRAMA DE INGENIERIA AMBIENTAL


CURSO: MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

PRACTICA N° 12

TOMA DE MUESTRAS DE MEDIO AMBIENTE CON EL USO DE EQUIPO SAS


(SURFACE AIR SYSTEM METHOD)

OBJETIVOS
1. Completar la practica anterior:
a. Identifique las características del crecimiento bacteriano en los medios de cultivo
para bacterias que biodegraden el petróleo. Lectura de características y coloración de
Gram.
b. Lectura de pruebas bioquímicas de las bacterias inoculadas (identificación por
Prueba IMVIC) y otras bioquímicas para descartar, tipos de bacterias e identificar
específicamente cada una.

2. Que el alumno aprenda a conocer las formas para determinar la cantidad de microorganismos
(bacterias y hongos) que pueden estar presentes en el ambiente (aire) de un lugar determinado
y aplicar los métodos aprendidos para la identificación de los microorganismos aislados.
a. Específicamente conocer el método SAS, (Surface Air System Method), para su
aplicación en el recuento de los microorganismos encontrados en el aire de medio
ambiente, pueden ser aulas laboratorios, centros de comercialización, salas de
operaciones, etc.

INTRODUCCION
El aire contiene en suspensión diferentes tipos de microorganismos, especialmente bacterias y hongos. La
presencia de uno ú otro tipo depende del origen, de la dirección e intensidad de las corrientes de aire y de
la supervivencia de microorganismos. Los virus son las formas de vida mas simples , que se transmiten
principalmente a través del aire.
La bacterias son organismos más complejos que los virus y a diferencia de ellos son capaces de vivir en
un medio adecuado, sin la necesidad de un huésped para completar su desarrollo. Algunas bacterias
presentan esporas que son resistentes a condiciones adversas, éstas pueden resistir años en diferentes
temperaturas, sequedad, falta de nutrientes , recuperando su estado normal y capacidad infectiva al entrar
en contacto con un medio adecuado para su desarrollo.
Los hongos son formas complejas de vida que presentan una estructura vegetativa denominada Micelio
formado por hifas . La que surge de de la germinación de sus células reproductoras ó esporas .
Las enfermedades transmitidas por el aire, producidas por bacterias, virus y hongos, son las respiratorias
(neumonía, tosferina, tuberculosis, legionelosis, resfriado, gripe), sistémicas (meningitis, sarampión,
varicela, micosis) y alérgicas.
Un bioaerosol es aquello que se encuentra en suspensión en el aire que está o estaba vivo, o es producto de
algo vivo. Ejemplos de bioaerosoles son:
- Virus
- Bacterias
- Esporas de Hongos
- Algas
- Protozoos
- Polen
- Ácaros del polvo
- Escamas de piel / pelo (animales o humanos)

NECESIDAD DEL ANALISIS MICROBIOLOGICO DEL AIRE.


El aire es un vehículo que puede transportar esporas de hongos y también bacterias adheridas a partículas
de polvo o contenidas en gotitas microscópicas de líquido (aerosoles). Son los denominados bioaerosoles.
Estos microorganismos pueden alcanzar los alimentos que están siendo procesados yalterarlos, por lo que
es necesario conocer cuál es el nivel de riesgo que se está corriendo para aplicar medidas correctoras si esto
fuese necesario.
ANALISIS MICROBIOLOGICO DEL AIRE.

El análisis microbiológico del aire puede consistir en un recuento en placa de microorganismos aerobios
mesófilos (número de ufc por metro cúbico de aire) que puede complementarse con una investigación de
lapresencia de determinados microorganismos patógenos.
Son dos las peculiaridades destacables del análisis microbiológico del aire sobre los análisis de otros
tipos de muestras:

a) Las bacterias viables presentes en el aire suelen estar lesionadas debido a una
deshidratación notable. Por lo tanto, no es conveniente recoger las muestras de aire sobre
medios selectivos, sino sobre medios que permitan la revivificación de estos
microorganismos
b) Las técnicas de toma de muestra son totalmente distintas.

PERMANENCIA
El tiempo que permanecen los microorganismos en el aire depende de la forma, tamaño y
peso del microorganismo y de la existencia y potencia de las corrientes aéreas que los
sostengan y los eleven.

La sedimentación de los microorganismos por gravedad sólo es importante en el aire en


calma.
El impacto que sufren las partículas del aire cuando encuentran un obstáculo,es mayor
cuando partículas grandes inciden a altas velocidades hacia objetos pequeños.

El lavado del aire por la lluvia termina rápidamente con el proceso de dispersión,siendo diez veces más
eficiente que la sedimentación y la impactación.
Algunos microorganismos, incluidos bacterias, virus y hongos, son capaces de viajar grandes distancias sin
perder viabilidad.
Vía de DISPERSIÓN muy importante para los microorganismos.
En el EXTERIOR los organismos predominantes son de origen edáfico. - En el INTERIOR hay mas
organismos en el ambiente y provienen mayoritariamente del tracto respiratorio humano.
Adaptaciones especiales que favorecen la supervivencia y la dispersión: - ESPORAS (Xenosporas):
MODOS DE DISPERSION

- Corrientes de aire, Vientos Fuertes y húmedos


- En aerosols y sprays
- POr collision de gotas de lluviasAgua pilverizada
- Toses y estornudos

MODOS DE DISPERSION ACTIVA:

- Philobus
- Esphaerobolus

AIRE en el interior de las construcciones:

- Sta´hylococcus, STREPTOCOCCUS, Penicillium , Alternaria


RECUENTO DE BACTERIAS PARA CONTROL DE CALIDAD DE AMBIENTES.

Con el uso de SAS (Surface Air System Method), es posible hacer un muestreo del medio ambiente
para poder analizar y ver la cantidad y el tipo de microorganismos presente en un ambiente
determinado.

El principio de SAS es que el aire es aspirado a una velocidad fija a través de una cubierta con hoyos,
(que es la característica del equipo), que cubre las placas con el medio de cultivo.

El flujo de aire que se crea es laminar y el diseño de la cabeza del equipo SAS es tal que los
microorganismos en el aire son impulsados por la velocidad y son depositados sobre una superficie
de agar de una placa de contacto.

Cada muestra puede ser ajustada para aspirar volúmenes variables de aire para permitir un muestreo
del medio ambiente con un amplio rango de microorganismos concentrados.
MUESTREO

1. METODO DE ´PLACAS:
Usar medios:
a. Agar Nutritivo para el recuento y aislamiento de bacterias aerobios en general:
b. Agar saboraud: para el recuento y aislamiento de hongos.
Procedimiento:

- Ubicar ambas placas abiertas y expuestas al medio, en un lugar determinado por 10


minutos.
- Tapar y sellar ambas placas
- Llevar al laboratorio y dejas en incubación:
o Las placas de Agar nutritivo en incubación a 37°C por 48 hras
o Las placs de Agar saboraud dejar incubando a medio ambiente por 48 horas
- Paraa el Recuente pasadas las 48 hpras contar cada una de las UFC (Unidades Formadoras
de Colonias) que handesarrollado en cada una de las placas.
- Para la identifivcación dejar las placas de bacterias en refrigeración y las de hongos en medio
ambiene. E identificar

2. METODO SAS:
Antes de empezar a tomar la muestra con el equipo "SAS " ha de esterilizarse la cubierta del
aparato. Ésta puede llevarse a cabo por medio del autoclave. También se puede efectuar
limpiando la cubierta del aparato con una solución desinfectante.
A continuación se coloca la placa Petri en el lugar indicado del aparato de muestreo. Para
manejar las placas Petri (conteniendo ya el medio de cultivo ) y el muestreador se recomienda
hacerlo con guantes estériles desechables. Después de cada bloque de toma de muestras,
limpiar la cubierta del muestreador con una solución desinfectante, teniendo la precaución de
que se haya secado totalmente antes de tomar una nueva muestra.

a. Medios de cultivo
Agar Nutritivo
Se utiliza este medio de cultivo para efectuar el contaje de bacterias. Una vez tomada la muestra, se
trasladan las placas Petri al laboratorio, dejándolas en la estufa de cultivo a 37ºC durante 48 horas.
Agar-Sabouraud
Se utiliza este medio de cultivo para efectuar el contaje de hongos. Una vez tomada la muestra, se
trasladan las placas Petri al laboratorio dejándolas en la estufa de cultivo a 25ºC durante 5 días.

Recuento de colonias
Pasado el tiempo de incubación, se observa el crecimiento de las colonias y se procede al recuento
de las mismas mediante un contador de colonias que proporciona el número de colonias formadas
por placa.

Este recuento es usado para calcular el número de microorganismos por metro cúbico de aire.
Promedio de flujo de aire (que capta el equipo SAS es de : 180 litros por minuto
Unidades de aspiración:
- Una unidad es igual a 20 segundos con un flujo de 60 litros de aire.

Cálculos

- Una vez determinado el número de colonias, y sabiendo el flujo de aire y el tiempo de


muestreo que se ha aplicado, se puede calcular el número de unidades formadoras de
colonias por metro cúbico de aire, aplicando la fórmula siguiente:
siendo:

- NC: número de colonias por placa


- NU: número de unidades de tiempo empleadas en el muestreo
- Las cápsulas de Petri una vez llevado a cabo el recuento se retiran del laboratorio
empleando un contenedor de residuos biológicos.
-Cuando el nº de ufc/m3 hallado sea superior a 500 se recomienda efectuar la identificación
de los gérmenes existentes en el aire muestreado.
- En ambientes considerados estériles el nº de ufc/m3 debe ser 0.
AISLAMIENTO DE HONGOS DE FUENTES NATURALES. -
Los hongos son microorganismos que se encuentran normalmente en una variedad de hábitats (suelo,
agua, aire, plantas, animales, hombre o sobre cualquier sustancia orgánica en descomposición) de
acuerdo a las exigencias nutricionales muchos de ellos, es fácil que se adapten a la vida parasitaria
causando enfermedades en las plantas, animales y en el ser humano.
Existen hongos que tiene hábitats específicos: acuáticos, fitofilicos, antropofilicos.
METODOS
Prepara los siguientes medios de cultivo.
1. AGAR SABOURAUD GLUCOSADO
 Peptona 10 g  Agar-agar 8 –20 g
 Glucosa 40 g  Agua destilada 1000 mL
Preparación.- Disolver el agar en agua por ebullición luego agregar los demás ingredientes;
ajustar el pH 5.6-6.5. Repartir en recipientes adecuados y esterilizar a 121°C por 15 minutos..
Para mejorar el medio se puede agregar 3 a 5 gr. de extracto de levadura para (1000 ml de
agua).
2. AGAR PAPA DEXTROXA (PDA)
 Papa 300 g  Agar-agar 20 g
 Glucosa 20 g  Agua destilada 1000 mL
Preparación.- Las papas se cortan en cuadraditos se hierven en 1 litro de agua hasta su
reblandecimiento y desprendimiento de almidón, luego se filtra a través de varias capas de
gasa. Al filtrado añadir agar y dextrosa, hervir para disolver el agar, enfriar y ajustar el pH
entre 5.6 y 6.5. Esterilizar a 121°C por 15 minutos.
3. AGAR ALMIDON DE ARROZ (AAA)
 Arroz 40 g  Agua destilada 1000 mL
 Agar-agar 18 – 20 g
Preparación.- Hervir el arroz 45 a 60 minutos luego filtrar en un tamiz de algodón o gasa.
Al filtrado agregar el agar, hervir y completar el volumen. A ajustar el pH entre 5.6 y 6.5.
Esterilizar a 121°C por 15 minutos.
4. AGAR PAPA ZANAHORIA
 Papa 150 g  Agua destilada 1000 mL
 Zanahoria 150 g  Agar-agar 20 g
 Glucosa 20 g

CUESTIONARIO
1. Indicar cual es el número aceptable de bacterias y hongos en ambientes cerrados como hospitales,
aulas, y laboratorios.
2. Explique sobre otros métodos que se usa , para el control de calidad de Aire.
3. Haga una lista de bacterias y hongos presentes en diferentes tipos de ambiente: Aulas, laboratorios,
mercados, hospitales, oficinas y otros y el número aceptable de cada uno de ellos.
UNIVERSIDAD CATÓLICA DE SANTA
MARIA
Facultad de Arquitectura, Ingeniería Civil y del Ambiente
Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental

Alumna:
Maria Fernanda Lizarraga Rosas
Curso:
Microbiología Ambiental
Docente:
Adilmi Milagros Teran Dianderas
Tema:
Práctica N°13

Arequipa- 2018

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