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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
DEBER #1
Aun bacterias fuertemente relacionadas pueden separarse en dos especies diferentes con
base a pruebas bioquímicas.
Por ejemplo, las bacterias entéricas gram negativas, forman un grupo muy grande y
heterogéneo cuyo hábitat natural es el tracto gastrointestinal de humanos y otros animales.
Esta familia, Enterobacteriaceae, incluye a varios patógenos que causan síndromes
diarreicos.
Pruebas bioquímicas:
• Citrato
• Ureasa
• Voges-Proskauer
• Rojo de metilo
Hidrólisis de la Leche:
Después de inocular el microorganismo Bacilo Cereus y Escherichia Coli, lo incuban a 37
ºC, aquí se empleó una placa de agar con leche y se dividió en dos, uno con
microorganismo gram positivo(B. Cereus) y otro con gram negativo (E. Coli)
Después de pasadas las 24 horas, se observó una transparencia alrededor del
microorganismos (Bacilo Cereus) o de la colonia que hidrolizan la caseína.
Una vez hidrolizada, la caseína se convierte en sus aminoácidos componentes, los cuales
transmiten la luz en vez de reflejarla como la caseína coloidal, este último es caso del
microorganismo negativo E. Coli que no hubo reacción de desclarificación con la proteína.
El cambio que se observó en la caja de agar leche es la clarificación del agua alrededor de
las colonias que producen caseinosa.
La hidrólisis de la caseína no difiere de la de cualquier proteína típica, la molécula proteica
se desarrolla en etapas produciendo una sucesión de moléculas de tamaño decreciente
llamadas proteosas, peptonas, péptidos, hasta terminar en aminoácidos. libre, las cuales
por su tamaño son ya cristaloides.
Reacción de Nitratos:
En este tipo de análisis químicos, consta de 2 pruebas, donde la segunda dependía de la 1ª,
es decir, si la 1ª prueba daba negativa no se realizaba el 2º, por no presencia de nitrito.
En estos tres tubos con caldo nutritivo, inoculamos tres microorganismos con dos azadas
para cada uno, estos microorganismos fueron: Escherichia Coli, Bacilo Cereus y
Salmonella.
Se dejó incubado a 37 ºC por 24 horas y después por una semana a temperatura ambiente.
Sandy Zambrano Bravo Grupo: B-2
Para algunos, el crecimiento es la capacidad para multiplicarse que tienen las células
individuales, esto es iniciar y completar una división celular. De esta forma, se considera a
los microorganismos como partículas discretas y el crecimiento es entendido como un
aumento en el número total de partículas bacterianas. Existen dos formas para determinar
el número total de microorganismos en una muestra:
Recuento de colonias
Método del número más probable
Para los fisiólogos bacterianos, bioquímicos y biólogos moleculares una medida del
crecimiento es el incremento de biomasa. Para ellos, la síntesis macromolecular y un
incremento en la capacidad para la síntesis de los componentes celulares es una medida
del crecimiento. Para este grupo la división celular es un proceso esencial pero menor que
rara vez limita el crecimiento, ya que lo que limita el crecimiento es la capacidad del
sistema enzimático para utilizar los recursos del medio y formar biomasa.
Un último grupo entiende al crecimiento sobre la base de la influencia que ejercen los
microorganismos en los cambios químicos de su entorno como consecuencia del
incremento de la biomasa.
RECUENTO DIRECTO
Las cámaras más utilizadas son las de Hawksley y la de Petroff-Hausser. La primera tiene
la ventaja que puede ser utilizada con objetivos de inmersión, aunque la mayoría de los
recuentos se realizan con objetivos secos. Una de las mayores ventajas del recuento
microscópico es brindar información adicional sobre el tamaño y la morfología de los
objetos contados.
Sandy Zambrano Bravo Grupo: B-2
Este tipo de recuento presenta algunos inconvenientes. Ciertas bacterias muy pequeñas
producen cambios en la resistencia que son comparables al "ruido" generado por la
turbulencia que se desarrolla al pasar el fluido por el orificio. No pueden medirse células
que formen filamentos o agregados o soluciones muy concentradas de microorganismos,
debido a que el pasaje de más de una célula en un breve período de tiempo va a ser
tomado como una célula más grande. Es común la obstrucción del orificio por
microorganismos muy grandes.
Dependiendo de las características del medio utilizado (medio rico, medio limitado en
nutrientes para medida de la flora no láctica de alimentos fermentados) y de las
condiciones de incubación (mesófilos, psicrófilos) los microorganismos analizados serán
miembros de poblaciones diferentes. En general se investiga la presencia de
microorganismos aerobios o aerotolerantes (anaerobios facultativos); aunque, en ciertas
situaciones (alimentos envasados al vacío), puede ser de interés hacer recuentos de
anaerobios totales.
1.- Contaje de Placa: Consiste en el plaqueo de una muestra de volumen conocido del
alimento que se analiza. El resultado es función de una serie de factores como son el
método de muestreo, el tipo de microorganismo, el tipo de alimento y las características
Sandy Zambrano Bravo Grupo: B-2
del medio de cultivo. Los cultivos pueden hacerse tanto en masa como en superficie,
aunque hay que considerar que los cultivos en masa son letales para la flora psicotrofa.
Cada bacteria viable formará una colonia, el plaqueo puede hacerse en una placa normal o
por medio de un plaqueador en espiral que va depositando concentraciones
progresivamente más diluídas de la muestra.
2.- Filtros de membrana: utilizados cuando el número de bacterias es bajo. Son filtros con
un poro de 0,45 mm que retienen las bacterias. Se filtra un volumen dado y se coloca el
filtro sobre una placa del medio de cultivo apropiado. La muestra puede haber sido
procesada para epifluorescencia previamente, lo que facilita el recuento (la
epifluorescencia se puede provocar con naranja de acridina que tiñe específicamente los
ácidos nucleicos).
6.- Films secos (Petrifilm): Son películas deshidratadas de medios de cultivos generales o
selectivos en las que se deposita 1 ml de la muestra que rehidrata el medio. Tras la
incubación se hace el recuento.
7.- Método del número más probable: Basado en series de diluciones y cálculo estadístico
del número de bacterias presentes en las diluciones más altas. Se puede hacer con 3 ó 5
tubos. El método es popular aunque poco exácto.
9.- Tubos rodantes: son tubos herméticamente cerrados en los que haciéndolos girar se
forma una fina capa de agua. Utiles para recuento de anaerobios.