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2017
Introducción
En esta práctica realizaran diferentes estudios en los espermatozoides de cuy, como la
tolerancia osmótica y cambio de forma celular en situaciones de estrés; en este primer
estudio de la tolerancia osmótica nos indicara como una célula especializada haploide
(espermatozoide de cuy) influirá en su capacidad de interactuar con el entorno ante una
solución distinta a su punto isosmótico lo cual le conferirá la capacidad de sobrevivir
experimentando cambios en su volumen celular. Y en el segundo estudio de los cambios
de forma del espermatozoide serán evaluados con el Test Hipostático (HOST), que
evalúa la vitalidad del espermatozoide en una solución hiposmótica.
Procedimiento
1. Se realiza la disección de los testículos de cuy y se hizo la extracción del
epidídimo (el que se visualizaba más grande).
2. En una placa Petri se colocó el epidídimo y se empezó a triturar con ayuda de
una tijera de punta fina.
3. De empezó aislar el líquido seminal de cualquier resto de carne o sólido, para
extraer solo el líquido y homogeneizarlo con medio de HAM F10.
4. Separaremos una gota del homogeneizado en una lámina para observar la
movilidad de espermatozoides. Cubrir con una cubreobjeto la muestra,
colocando pequeñas bolitas de pastilina en las esquinas del cubreobjeto que
servirá para no dañar la muestra y los espermatozoides puedan moverse.
5. Lo que quedó de muestra se tomó como stock y se puso a incubar para evitar
que se mueran los espermatozoides.
6. Se tomó una alícuota del stock con ayuda de una micropipeta y se colocó en
una lámina. Se colocó eosina Y (reactivo-colorante) para observar la vitalidad
espermática.
7. Se extrajo otra alícuota para el Test Hiposmótico (HOST) para evaluar el
hinchamiento producido ante la solución hiposmótico y la utilizamos como
prueba alternativa para determinar la vitalidad del espermatozoide. Se
visualizará de 30-45 minutos después de su preparación.
8. Finalmente, se determinó la tolerancia osmótica de los espermatozoides a
diferentes concentraciones de solución salina: 150, 300 y 600 mOsm/L. Se llevó
a visualizar al microscopio para analizar la movilidad, el cambio de forma, la
reacción del acrosoma y se contrastarán los resultados con las diferentes
soluciones de NaCl.
9. Con el análisis, se determinará la concentración de cloruro sódico en la cual
espermatozoides presentan las mejores características fisiológicas, semejante
al control y se entregará la solución próxima a la del medio HAM F10
Resultados
1. Movilidad espermática
2. Vitalidad espermática
3. HOST (Vitalidad)
HOST %
Cambio de A 6%
forma B 80%
C 6%
D 2%
E 2%
F 1%
G 3%
*Motilidad no progresiva (NP): todos los otros patrones de motilidad con ausencia de
progresión. Nadando en pequeños círculos, la fuerza flagelar apenas desplazando la cabeza, o
cuando sólo se puede observar un latido flagelar.
Los resultados obtenidos fueron 90.09 % PR, 7.21% NP y 2.70% IM. Se consideran los valores
de Motilidad total 97.30% (PR+NP) y Motilidad progresiva 90.09% (PR) para compararlos
con los estándares establecidos por la OMS. La Motilidad total obtenida es mucho mayor al
límite establecido inferior de 40%, de igual manera, el porcentaje de Motilidad progresiva es
mayor a 32%. Esto significa que la calidad de la muestra es muy buena en cuanto a motilidad.
Vitalidad espermática:
La vitalidad de los espermatozoides utilizados en práctica se comprobó mediante 2 métodos
tinción con eosina y test hipo osmótico. Ambos métodos aplicados tienen en cuenta el estado
de la membrana plasmática. En el caso de la tinción la eosina la membrana solo es permeable
si esta está dañada. Esto significa que, las células vivas no estarán teñidas. De manera similar,
el cambio morfológico que sufren las células al se expuestas a un medio hipo osmótico,
hinchamiento y enrollamiento de la cola, demuestra que el correcto funcionamiento de la
membrana.
Los resultados obtenidos por la tinción con eosina fue 91.53% espermatozoides vivos y 8.47%
de muertos (teñidos).
Los resultados obtenidos por el test hipo osmótico fueron óptimos y similares obtenidos por la
tinción con eosina Y. Los valores fueron 94% (presentan cambios morfológicos) vivos y 6%
muertos.
Los resultados de motilidad en 300 mOsm/L presentan un porcentaje alto de motilidad total
(87%) siendo estos los más cercanos al porcentaje obtenido en la muestra control (97.3%). Por
otra parte en el caso de 150 y 600 mOsm/L la motilidad total fue 9% y 5%, respectivamente.
Los resultados respecto a la reacción del acrosoma a 150 mOsm/L se observó que hubo un
10% de reacción acrosomal, lo cual indica que las condiciones anisosmóticas promueven que
se manifieste esta reacción. Conforme se va aumentando las concentraciones se reduce la
reacción acrosomal porque estas se encontraran más cercano al rango de concentración
isosmótica el cual se determina con la concentración de 300 mOsm/L que solo tiene un 4% de
reacción acrosomal. Se aumenta la concentración a 600 mOsm/L y se manifestará una reacción
acrosomal del 75%, y esto se debe a que se aleja mucho del rango de las condiciones
isosmóticas dando como resultado estos datos.
Si bien existen muchas técnicas modernas, como el análisis seminal asistido por
computadora (ASAC) que permiten medir objetivamente y con medios
computadorizados las características del movimiento de los espermatozoides, éstos
no están disponibles en muchos centros por ser costosos, es por eso que la OMS
recomienda un sistema simple de medir la movilidad espermática sin necesidad de
equipos complejos, como por ejemplo un espermatograma, para esto la movilidad se
divide en 4 categorías: