N

ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE

CHIMBORAZO
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

INFORME DE PRÁCTICA DE
LABORATORIO N° 02

TEMA: TINCIÓN GRAM

NOMBRES: CÓDIGOS:

 BRYAN ARELLANO 0050

 LADY PALADINES 118
 ESTEFANIA MASABANDA 139

CURSO:
 Segundo “A”

FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:

8/06/2018 17/06/2018

1
1. OBJETIVOS.

1.1 OBJETIVO GENERAL.

o Caracterizar una colonia de bacteriana utilizando la técnica de tinción Gram.

1.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS.

o Comprender el fundamento de la Tinción Gram.
o Distinguir a las bacterias Gram positivas y a las Gram negativas.
o Conocer en qué medio las bacterias son más abundantes.

2. MARCO TEÓRICO.

TINCIÓN DE GRAM
Es definida como una tinción diferencial, ya que utiliza dos colorantes y clasifica a las bacterias en dos
grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas. Fue desarrollada por el científico
danés Hans Christian Gram en 1884; hoy en día, sigue siendo una de las tinciones más utilizadas
universalmente debido a lo económico, sencillo y eficaz que resulta.
Los principios de la tinción de Gram están basados en las características de la pared celular de las
bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a cada microorganismo. (López L. et al,2014)
Bacterias Gram +
Las bacterias Gram positivas poseen una pared celular gruesa constituida por peptidoglicano, pero no
cuentan con membrana celular externa. Las bacterias G+ retienen el cristal-violeta después de la
decoloración y aparecen de color azul intenso (purpura).
Bacterias Gram –
La pared celular de las bacterias Gram negativas está constituida por una capa fina de peptidoglicano
y una membrana celular externa, cuyo componente estructural único son los lipopolisacáridos. Las
bacterias G- no son capaces de retener el cristal-violeta después de la decoloración y son teñidas de
rojo con safranina. (Revista Portales Médicos, 2013)

FIGURA 1(Mediagrafic, 2007)

 TAMAÑO
El tamaño de las bacterias oscila entre las 0.5 y 3 µm, pudiendo llegar en algunos tipos a 10 µm. Solo
son visibles entonces, al microscopio óptico o microscopio electrónico. Para observarlas con el
microscopio óptico se usa el objetivo de inmersión (100X), sumergiendo esta lente en una gota de
aceite (aceite de inmersión) en el preparado a observar. Su tamaño pequeño determina una relación
entre la superficie y el volumen elevado, con alta tasa metabólica.( M. Pírez, M. Mota,2004)
MORFOLOGIA BACTERIANA
Formas básicas en que se puede visualizar la morfología bacteriana en una tinción GRAM:
Cocos
Son en forma de esfera.
Micrococos, aparecen aislados y dispersos tras la división celular.
Diplococos, aparecen por pares.
Estreptococos, tienden a unirse formando cadenas.
Estafilococos, aparecen en grupos irregulares, a veces de gran tamaño.
Bacilos
Formas de varas alargadas
Diplobacilos, dos bacilos juntos.
Estreptobacilos, cadenas de bacilos.
Empalizadas, Bacilos lado con lado o en figuras en X, V o Y.
Espirales
Forma espiral rígida se llama Espirilo
Si la espiral es flexible y ondulada se llama Espiroqueta. (M. Pírez, M. Mota, 2004)
3. MATERIALES, EQUIPOS Y PROCEDIMIENTO

3.1 MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES:
• Placas porta y cubre objetos.
• Asa de cultivo.
• Lámpara de alcohol.
• Piseta.
• Toallas de papel absorbente.
• Gasas
• Fósforos
 REACTIVOS:
 Aceite de inmersión
 Cristal violeta
 Lugol
 Decolorante: Alcohol- Acetona
 Safranina
 Agua destilada
 Etanol 96%

EQUIPOS:
 Microscopio compuesto

3.2 PROCEDIMIENTO.

1. . Llevar el asa a la llama de la lámpara de alcohol hasta que se torne al rojo vivo. Esperar durante unos
segundos cerca de la llama hasta que ésta se enfríe.
2. Con ayuda del asa ya estéril, tomar una muestra del cultivo bacteriano y extenderla en un portaobjetos.
Realizar el mismo procedimiento para diferentes tipos de cultivos bacterianos.
3. Fijar la muestra haciendo pasar la placa 3 veces por la llama (de modo que la placa corte la llama).
4. Cubrir la muestra con cristal violeta por 45 segundos.
5. Lavar con agua.
6. Colocar lugol por 1 minuto.
7. Lavar la placa con agua.
8. Añadir alcohol-acetona por 30 segundos.
9. Lavar con agua.
10. Cubrir con safranina durante 1 minuto.
11. Lavar con agua y dejar secar sobre papel absorbente.
12. Colocar 1 gota de aceite de inmersión en la muestra.
13. Colocar la placa en el microscopio sujetándola con la pinza de la platina.
14. Observar con el lente objetivos de 100 X.
15. Dibujar lo observado a través del lente e identificar si son bacterias Gram positivas o Gram
negativas.

4. OBSERVACIONES.

 La muestra de medio solido es la que más tonalidad morada tomó, bajo el microscopio se observó
colonias y otros únicamente como manchas.
 La muestra de medio líquido no contenían muchas bacterias ya que algunas se perdieron en el proceso
de preparación de la muestra quedando solo el colorante y encontramos pequeñas cantidades de cocos.
 5. CONCLUSIONES.

 Se relaciona mediante la observación que en la pared gruesa de las gram positivas está constituida
principalmente por peptidoglicano, el cual es capaz de retener la coloración violeta.
 Se estima que en las Gram negativas, tienen en su pared celular una delgada capa de peptidoglucano
ligada a una membrana externa por moléculas de lipopolisacáridos. Esta membrana externa es dañada
en la decoloración, permitiendo que el primer colorante acomplejado con iodo escape y sea
reemplazado por el contra colorante.
 Se determina que el medio solido es el que tiene más bacterias que en medio líquido.

6. RECOMENDACIONES.

 Regular el flujo en el que se usan los materiales a emplear en las muestras (agua destilada, colorantes,
bacteria) que se encuentren en una medida adecuada para la observación.
 Verificar que la muestra se encuentre bien pegada, en caso de no estarlo completamente esperar unos
minutos fuera del mechero para calentar un poco más.
 Usar cronómetro para precisar el tiempo necesario de cada tinción aplicada, mejorando el resultado
obtenido para la observación.

7. CUESTIONARIO.

Cite todas las características que presentan las células procariotas

Las células procariotas tienen las siguientes características:

1. El material genético (ADN) se localiza en la región llamada nucleoide, el cual no tiene una membrana
que lo rodee.
2. ADN de cadena doble cerrado.
3. La célula contiene gran número de ribosomas 70s, que llevan a cabo la síntesis de proteínas.
4. Alrededor de la célula hay una membrana plasmática. En algunos procariontes, la membrana se pliega
en estructuras llamadas mesosomas, cuya función no se conoce claramente.
5. Fuera de la membrana plasmática de la mayoría de los procariontes, tienen una relativamente rígida
pared celular, que da a los organismos su forma.
6. La pared celular está formada por peptoglicanos. A veces tienen una cápsula externa.
7. Algunas bacterias tienen flagelos, los cuales son usado para la locomoción o pilosidades, las cuales
sirven para mantener en contacto a dos células y facilitar la transferencia de material genético.(Galeón,
s.f)
¿Cuáles son las diferencias estructurales entre bacterias Gram positivas y Gram negativas?

Las bacterias gram positiva poseen una pared celular interna y una pared de peptidoglucano, no tienen
membrana externa no tienen espacio peri plasmático, no contienen LPS y conservan el complejo yodo colorante.
Mientras que las bacterias gram negativas poseen una bicapa lipídica externa, tienen una membrana externa,
tienen espacio peri plasmático, contienen LPS y pierden el complejo yodo colorante. (La guía, 2010)
¿Cuál es el fundamento de la tinción Gram?

Las bacterias Gram negativas pierden un colorante (el cristal violeta) con mayor facilidad que las Gram
positivas. La razón es la menor cantidad de mucopéptido de las paredes de las bacterias Gram negativas.

¿Cuál es la función de la capa LPS?

Antígeno O, antígeno somático bacteriano

Determinante antigénico.
Producción de anticuerpos.
Diagnostico serológico bacterias gran negativos.
Lípido A ò Endotoxina.
Responsable de la sepsis por Gran. (-). Ocurren 3 fenómenos:
Liberación sustancias vasos activos (citoquinas: IL1, IL6, IL8; factor necrosis; prostaglandinas; leucotrienos.
Activación del complemento
Activación cascada de la coagulación.(Uba, 1998)

8. BIBLIOGRAFÍA

López L et al, (2014).Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. Obtenido de

http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf

Revista Portales Médicos (2013). Artículo de revisión. La coloración de gram y su importancia en el

diagnóstico microbiológico. Obtenido de http://www.revista-portalesmedicos.com/revista-
medica/coloracion-gram-diagnostico-microbiologico/

Figura 1. Esquema de las diferencias estructurales entre bacterias Gram negativas y Gram positivas. Obtenida
de Imagen en color en: www.medigraphic.com/rid
Revistas Cefa (2008). Morfología y Estructura Bacteriana. Obtenido de
http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/MorfologiayEstructuraBacteriana.pdf

(Galeón, s.f). Características de las células Procariotas. Obtenido de

http://www.maph49.galeon.com/celula/features.html

La guía, (2010).Características de las células procariotas. Obtenido de

https://biologia.laguia2000.com/microbiologia/caracteristicas-de-las-celulas-procariotas
 Uba,(1998) Estructuras de la células bacterianas. Obtenido por
http://www.botanica.cnba.uba.ar/Pakete/Dibulgeneral/Lacelula/ULTRAESTRUCDEENVOLTURA
SBACTERIANAS.htm

9. ANEXOS.

Medio bacteriano Medio bacteriano Toma de muestra Cubrimiento de

solido liquido cristal violeta

Cubrimiento de lugol Aplicación de Aplicación de la Muestras listas

decolorante safranina.

Observación de la Observación de la
muestra de medio muestra de medio
liquido solido