ESPECTROFOTOMETRÍA UV-VISIBLE

1. Propiedades de la luz

2. Absorción de luz
2.1. Fenómeno de la absorción
2.2. Espectros de absorción molecular
2.3. Tipos de transiciones electrónicas

3. Ley de Lambert-Beer

4. Instrumentación

4.1. Fuente de radiación

4.2. Selector de longitud de onda
4.3. Recipientes para muestra
4.4. Detector
 1. Propiedades de la luz

longitud de onda (λ)

λ ν = c
Onda
Longitud de onda x Frecuencia = velocidad de la luz
 1. Propiedades de la luz

ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO

Energía Longitud de onda

Luz visible

Longitud de onda (nm)

2.1. Fenómeno de absorción de radiación
2. Absorción de luz

Estados
excitados

ABSORCIÓN EMISIÓN

Energía
DE RADIACIÓN (hν) DE RADIACIÓN (hν)

Estado
fundamental

- Cuando una molécula absorbe luz aumenta su energía

- Cuando una molécula emite luz disminuye su energía

 2. Absorción de luz

ESPECTRO DE ABSORCIÓN

0.8 Paracetamol

0.6

0.4
Propifenazona

0.2

Ác. acetilsalicílico

Cafeína
0.0
200 250 300 350
Longitud de onda (nm)
 2. Absorción de luz

AZUL DE BROMOFENOL (λmax = 614 nm)

Luz blanca Luz azul

 2. Absorción de luz

Espectro de absorción de la clorofila

en la región visible. Obsérvese que
absorbe en las regiones del rojo y del
azul.
 3. Ley de Lambert-Beer

Muestra I ≤ Io
Selector de longitud Io I
Fuente Detector
de luz de onda de luz

Instrumentación para medir absorción de luz

I0 (intensidad radiante) I (intensidad transmitida)

 3. Ley de Lambert-Beer

c
Io I

- Transmitancia → T = I / Io
→(fracción de la luz incidente que sale de la muestra)
→ varía entre 0 y 1

- Absorbancia → A = - log T = log (Io / I)

Ley de Lambert-Beer → A = ε b c
ε : coeficiente de absortividad molar (l mol-1 cm-1)
b : espesor de la célula (cm)
c : concentración (moles/l)
 4. Instrumentación
Espectrofotómetro

Muestra

Fuente Selector de longitud Io I

Detector
de luz de onda de luz

Instrumento para medir intensidad de radiación

 Fuente de radiación

 Sistema de selección de longitud de onda

 Recipiente para la muestra

 Detector
 4. Instrumentación
MONOCROMADOR

rendija entrada

fuente
espejos
red o prisma
detector

rendija salida
4.3. Recipientes de muestra 4. Instrumentación

UV : cuarzo
Material
Visible: cuarzo o vidrio
 4. Instrumentación

Macro-células Células semi-micro

UV Vis UV Vis
 4. Instrumentación

Esquema de un espectrofotómetro de haz simple

 4. Instrumentación
ESPECTROFOTÓMETROS, FOTÓMETROS, COLORÍMETROS

Espectrofotómetro de doble haz

Espectrofotómetros portátiles