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Aglutinación en lámina: Las cepas serotipo que causó aglutinación visible en un espacio de
específicas se sembraron en cuñas de agar BHI tiempo de 1 min.
con incubación de 18-24 h a 37 oC y se
realizaron suspensiones de las mismas con 2 mL Clasificación serológica: Cada una de las cepas
de solución salina. clínicas se clasificó desde el punto de vista
serológico con los antisueros obtenidos en este
En una lámina portaobjetos se mezclaron 20 µL trabajo, según los procedimientos anteriormente
de cada suspensión celular con 20 µL de cada explicados.
uno de los antisueros.
Identificación de variantes mucoides: La
Absorción de los antisueros: Los antisueros que determinación de colonias con fenotipo mucoide
mostraron reacción cruzada con cepas de se realizó mediante la técnica de tinción con rojo
serotipo heterólogo se absorbieron con las congo (5). A partir de un cultivo de 18-24 h en
mismas según el siguiente protocolo: se BHI se hicieron diluciones seriadas, y se
sembraron las cepas heterólogas en placas de BHI sembraron 100 µL de cada una de estas
a 37 oC, 24 h, se recogió el crecimiento con 5 mL diluciones en placas de agar LB que cotenía rojo
salina estéril y se inactivó 1 h a 100 oC. Luego se congo al 0,01%, las cuales se incubaron durante
48 h a 37 ºC. Se contó el número total de
centrifugó la suspensión a 10 000 r.p.m. durante
colonias y se determinó la relación entre el
30 min, el sedimento se resuspendió en igual
porcentaje de colonias rojas y blancas. En esta
volumen de suero y se incubó 1 h a 50 oC. Se
técnica las células bacterianas tienen la habilidad
centrifugó nuevamente 30 min a 10 000 r.p.m. de unirse al pigmento, mientras que el
Por último, el suero recuperado se filtró y se le exopolisacárido mucoide no y por lo tanto las
añadió azida sódica (0,1%) como preservo. La cepas productoras de este material no se tiñen
comprobación de la absorción se realizó mediante (6).
aglutinación en lámina (4).
Titulación de los antisueros: Cada uno de los Resultados y Discusión
antisueros fueron diluidos seriadamente desde Pruebas microbiológicas
1:20 hasta 1:320 y se mezcló con una
La coloración de Gram de cada una de las cepas
suspensión de la cepa homologa repitiendo el
en estudió reveló la presencia de un cultivo puro
procedimiento de la aglutinación en lámina. El
de bacilos alargados gramnegativos, propios de la
título se definió como la mayor dilución del suero especie P. Aeruginosa.
A B
Foto 4: Reacción oxidación-fermentación en medio Hugh-Leifson. Acidificación oxidativa de la glucosa
en aerobiosis (5a). Ausencia de crecimiento en anaerobiosis (5b).
Con el primero, se observó un color amarillo en la cepas produjeron halos de color verdoso, propios
superficie del tubo incubado en condiciones de de una hemolisis parcial (β hemolisis) (Foto 5).
aerobiosis (5a), debido a la acidificación oxidativa
de la glucosa, que al variar el pH del medio, torna
al indicador de pH (azul de bromotimol) de color
verde a amarillo. En los tubos incubados en
anaerobiosis, no hubo crecimiento ya que P.
aeruginosa es un germen estrictamente aerobio.
En el caso del medio con lactosa, incubado con
aereación, la bacteria se ve incapacitada de
metabolizar la lactosa por no tener las enzimas
necesarias para ello, por lo que degrada las
peptonas rindiendo aminas fuertemente alcalinas
lo que hace que el indicador se vuelva azul más
intenso.
En el medio agar hierro de Kligler (KIA) todos los Foto 5. P. aeruginosa produjo halos de
aislamientos clínicos mostraron una imagen con color verdoso en agar sangre
superficie y fondo alcalino por la producción de
aminas a partir de las peptonas que componen el
La hemolisina de esta bacteria se considera un
medio, característico de organismos no
importante factor de virulencia pues contribuye a
fermentadores, no produjo gas, ni sulfuro de
hidrógeno. limpiar el mucus de las superficies dejando
expuestos nuevos sitios para la adherencia y
Una de las características de P. aeruginosa es la multiplicación de las células.
producción de hemolisina, enzima que le permite
la degradación de la hemoglobina presente en el Una de las pruebas de mayor validez es el
agar sangre de carnero. En este medio todas las crecimiento a 42 oC, pues a esta temperatura son
80
bacteria tiene la capacidad de
producir esta matriz que es la
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que interactúa con el medio
externo y a diferencia de las
proteínas, los exopolisacáridos
0
bacterianos son moléculas muy
sencillas, que no tienen
capacidad de inducir respuesta
Cepas de anticuerpos, además las
células de los mamíferos están
recubiertas de polisacáridos
Identificación de variantes mucoides antigénicamente similares. En el
De las 18 cepas evaluadas para su capacidad de producir caso específico de P. Aerugi-
exopolisacárido, el 72,2% produjo colonias blancas en más del nosa, las colonias que producen
50% del número total de colonias, por lo que se puede considerar grandes cantidades del exopoli-
que estas cepas son productoras de alginato (Figura 2) e indica sacárido no absorben el coloran-
diferencias en la superficie celular de las diferentes cepas. La poca te por lo que no se tiñen de
absorción del colorante pudiera ser debida, según la literatura, a rojo.