UNIVERSIDAD TECNICA DEL NORTE

FACULTAD DE INGENIERÍA EN CIENCIAS AGROPECUARIAS Y AMBIENTALES

CARRERA DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
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INTEGRANTES: Cholca Diego

Gody Josue
CURSO: Tercero
ASIGNATURA: Microbiología General
DOCENTE: Doc. Yépez Lucia
FECHA: 04 de julio de 2018
INFORME
TEMA: Siembra – Recuento – Resiembra Y Coloración De
Microorganismos
OBJETIVOS:
 En esta primera parte el alumno se familiarizará con las técnicas básicas de la
ciencia de la Microbiología. Se verá la importancia de las técnicas de aislamiento
y del cultivo puro y cuál es el procedimiento para identificar bacterias. El objetivo
concreto de esta primera práctica es aislar e identificar los microorganismos
contenidos en una mezcla. Este proceso contará básicamente de dos partes
 Separar colonias individuales a partir de una mezcla de microorganismos,
utilizando técnicas de aislamiento

 Conocer el mecanismo básico y ventajas de una tinción.

INTRODUCCIÓN
Un cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones físicas,
químicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada. En
general, podemos distinguir cultivos líquidos y sólidos en función de las características
del medio y cultivos discontinuos y continuos en función de la disponibilidad de
nutrientes en el medio.
El aislamiento y obtención de cultivos puros posiblemente hayan sido las bases más
importantes en el desarrollo de la Microbiología. Los primeros trabajos en Microbiología
se hicieron en unas condiciones experimentales que no permitían tener la certeza de que
se hubieran obtenido cultivos puros. Por ejemplo, en los clásicos trabajos de Pasteur lo
importante era distinguir una actividad biológica y una actividad química. Más adelante,
los microbiólogos observaron que, aparentemente, los microorganismos tenían una gran
capacidad de variación en cuanto a su aspecto morfológico y características fisiológicas,
dando lugar a la teoría del pleomorfismo. Contrariamente apareció la teoría de que los
microorganismos presentan una constancia en su morfología y metabolismo; el
monomorfismo. La teoría del pleomorfismo fue un obstáculo para el desarrollo de la
microbiología y no fue hasta 1870 que no se extendió la idea de que para estudiar la forma
y función de los microorganismos era necesario obtener cultivos puros. Robert Koch a
partir de sus estudios en Microbiología médica y de las ideas de su profesor Edwin Klebs,
concluyó que un organismo específico tiene unos efectos específicos, estableciendo las
pases para que la Microbiología se desarrollara como una ciencia independiente. Un
cultivo puro es aquel que contiene una sola clase de microorganismo. En la práctica los
cultivos puros son útiles por diferentes razones: mantienen los organismos viables,
permiten hacer subcultivos para someterlos a diferentes análisis e intercambiarlos con
otros laboratorios. Para obtenerlo es necesario recurrir a las técnicas de aislamiento. Las
técnicas para obtener cultivos puros fueron inicialmente desarrolladas por De Bary y
Brefeld para el estudio de hongos y consiguieron aislar células y cultivar hongos sobre
medios sólidos. Pero estas técnicas no eran adecuadas para el cultivo de bacterias. El
proceso de aislamiento consiste en disponer de la descendencia de un individuo (célula)
inmovilizada sobre la superficie de un medio sólido y separada del resto de individuos
presentes en el cultivo mixto. Esta célula, en las condiciones de crecimiento adecuadas
dará lugar a una descendencia (clon) que resultará macroscópicamente visible y que se
llama colonia. Cada colonia contiene millones o miles de millones de células idénticas y
con el mismo origen y propiedades. Se puede demostrar que prácticamente cada colonia
procede de una sola célula o de un grupo de células del mismo tipo si el microorganismo
forma agregados. Por ello lo más correcto es hablar de unidades formadoras de colonias
(UFC) al referirnos al origen de una colonia. El cultivo descendiente de una misma
colonia es un cultivo puro.
En los primeros tiempos de la Microbiología se utilizaban como sustratos sólidos para
inmovilizar los microorganismos patatas o pan, con el inconveniente de la opacidad de
estos sustratos. En el laboratorio de Robert Koch se desarrollaron técnicas para solidificar
un medio líquido con composición conocida añadiendo una sustancia sin opacidad y con
la posibilidad de modificar la composición del medio líquido según los requerimientos
nutricionales del microorganismo a aislar.
La gelatina fue el primer agente solidificante utilizado por Koch, sin embargo, presentaba
el inconveniente de que algunos microorganismos son capaces de utilizarla para su
crecimiento.
Entonces la gelatina fue sustituida por el agar; introducido por Fanny Eilshemius (1881).
El agar es un polisacárido que se obtiene de algunas algas rojas y para pasar de sólido a
líquido se debe calentar por encima de los 100°C y una vez fundido es mantiene líquido
hasta enfriarse a 44°C.
MARCO TEÓRICO:
SIEMBRA DE MICROORGANISMOS

El proceso de colocar las bacterias u otros microorganismos cultivables en medios de

cultivo, recibe el nombre de “siembra”, esta operación la podemos realizar a partir de
muestras biológicas (orina, pus, secreciones, etc.), de análisis de control de calidad
(alimentos, aguas, cosméticos, medicamentos, etc.), procedentes de muestras ambientales
(agua, suelo, aire, etc.) o de un cultivo microbiano a otro. Por otro lado, si la realizamos
de uncultivo a otro se denomina “subcultivo” o “repique” (Rojas, 2011)

En Microbiología se entiende como siembra el proceso mediante el cual se lleva una

porción de una población de microorganismos, denominada entonces inóculo, de un
cultivo crecido a un medio nutritivo para su crecimiento. Todo este proceso hay que
llevarlo a cabo con instrumentos y medios previamente esterilizados y siguiendo las
instrucciones de los monitores de prácticas. La principal advertencia consiste en trabajar
siempre próximos a la llama del mechero que, debido a las corrientes de convección
verticales que genera, es capaz de crear un ambiente estéril en la zona inmediatamente
alrededor y debajo de la llama.
Como instrumento portainóculos más frecuente se utiliza el asa de siembra, con
el que se puede tomar inóculo a partir de colonias o de medio líquido, debido a que
mantiene un pequeño volumen de agua por tensión superficial. Para depositar el inóculo
en líquido basta con introducir el extremo en el medio y agitar ligeramente. A veces se
utilizan pipetas para transportar volúmenes grandes de inóculos como en la práctica de
crecimiento bacteriano.
RECUENTO DE MICRORGANISMOS
El recuento de microorganismos, en este caso, se basa en que cada uno desarrollará una
colonia visible. Pero debido a que una muestra no es totalmente homogénea con respecto
a su composición microbiológica, es posible que una colonia se origine de un
microorganismo o de cientos de ellos, dando en este último caso un recuento menor del
real.
Se determina el número de microorganismos en una muestra en relación a las colonias
que forman, las UFC (Unidades Formadoras de Colonias). Se emplean soluciones
diluidas o diluciones de una muestra concentrada para que cada colonia formada provenga
de un solo microorganismo aunque algunas agrupaciones no pueden ser separadas por las
diluciones. Se utilizan principalmente para la cuantificación de bacterias, levaduras y
hongos filamentosos
EI número de microorganismos en una muestra (agua, suelo, aire, alimento entre otros),
es un parámetro importante porque permite evaluar la calidad microbiana de esta. Los
métodos más empleados son: Numero Más Probable (N.M.P.), Recuento en Placa,
turbidimetria, Conteo Directo al microscopio, que tiene la desventaja que incluye células
muertas y vivas a no ser que se utilice una tinción especial.

RESIEMBRA DE MICROORGANISMOS
Los microorganismos se deben de mantener de forma adecuada en el laboratorio para
poder utilizarlos cuando se requiera. Los microorganismos se pueden conservar en
diversos medios de cultivo contenidos en tubos o placas; sin embargo, es necesario
realizar cada cierto tiempo su resiembra en medio nuevo. En esta práctica se va a llevar a
cabo la resiembra de dos microorganismos por taquilla (Escherichia coli y
Staphylococcus aureus); cada uno se inoculará en un tubo con medio agar nutritivo nuevo

En todos los ambientes naturales habitan múltiples microorganismos de diversos tipos y

actividad fisiológica. Para efectuar el estudio de un organismo particular es necesario
separarlo de la población mixta en la que se encuentra. Para tal fin se emplean técnicas
de aislamiento que conduzcan a la obtención de un cultivo puro.

COLORACIÓN DE MICROORGANISMOS

Es el proceso por el cual las moléculas de un colorante se adsorben a una superficie. El

uso de colorantes permite cambiar el color de las células de los microorganismos y poder
realizar la observación en microscopio óptico. Dado que las bacterias son casi incoloras,
no presentan contraste con el medio en el cual se encuentran suspendidas y no pueden
observarse claramente sin algún tratamiento previo. De acuerdo a la reacción que ocurre,
existen diferentes tipos de tinción:
Tinción simple: El colorante utilizado sirve solo para denotar la morfología celular.
b) Tinción diferencial: El colorante utilizado pone de manifiesto diferencias entre
células bacterianas o entre partes de una misma célula. Estas técnicas utilizan mas de un
colorante o bien ciertos reactivos complementarios para la tinción. Ejemplos: Tinción de
Gram, Tinción de Ziehl-Neelsen, etc.
Colorantes:
Los colorantes más utilizados: azul de metileno, cristal violeta, safranina, son catiónicos
y se combinan fuertemente con componentes celulares cargados negativamente, como los
ácidos nucleicos y los polisacaridos ácidos (las envueltas externas de los
microorganismos están por lo general cargadas negativamente).

DIAGRAMA DE PROCESO
CÁLCULOS
RESULTADOS
CONCLUSIONES
RECOMENDACIONES
CONSULTA
CUESTIONARIO

https://es.scribd.com/doc/236377861/Informe-N%C2%BA7-
Cultivo-de-Bacterias-Imprimir
http://bdigital.unal.edu.co/12440/1/olgainesmontoyacampuzano.2014.pdf
http://bdigital.unal.edu.co/4999/1/albertorojastrivino.2011.pdf
http://www.uib.cat/depart/dba/microbiologia/micro2/practicas.pdf