Catálogo de Enfermedades Producidas Por Hongos en Fríjol

Proyecto "Apoyo a la Producción de Semillas de Granos Básicos para la Seguridad Alimentaria de Nicaragua"
PAPSSAN DCI-FOOD/2009/021-586
Catálogo de hongos en semillas de

frijol (Phaseolus vulgaris l.)
en Nicaragua
Enero, 2013
catálogo de hongos EN SEMILLAS DE FRIJOL

(Phaseolus vulgaris L.) EN NICARAGUA
Una Publicación del Gobierno de Reconciliación y Unidad Nacional

a través del Instituto Nicaragüense de Tecnología Agropecuaria (INTA)
Fuente de financiamiento: UNIÓN EUROPEA, PROYECTO PAPSSAN

«La presente publicación ha sido elaborada con la asistencia de la
Unión Europea. El contenido de la misma es responsabilidad exclusiva
del Instituto Nicaragüense de Tecnología Agropecuaria (INTA) y en
ningún caso debe considerarse que refleja los puntos de vista de la
Unión Europea».
Fuente de Informacion: Universidad de Helsinki e INTA (PROGRAMA NIFAPRO)
Contenido técnico: MSc. Delfia Marcenaro Rodríguez
Fotografías: MSc. Delfia Marcenaro Rodríguez
Todos los derechos reservados © Universidad de Helsinki e INTA
Tiraje: 800 ejemplares
Managua - Nicaragua, Enero de 2013

Contenido
I. AGRADECIMIENTOS 1
Ii. ABREVIATURAS 2
III. RESUMEN 3
IV. INTRODUCCIÓN 4
Hongos 4
Daños que producen los patógenos de semillas 4
V. OBJETIVO DEL CATÁLOGO 5
VI. METODOLOGÍA 6
Muestreo de semillas en este estudio 6
Análisis 6
Incubación de las semillas 7
Aislamiento de hongos 10
Visualización fenotípica y microscópica 10
Pruebas de emergencia/germinación usando sustrato estéril (arena) 10
Pruebas de patogenicidad 14
Pruebas basadas en técnicas de la reacción en cadena de Polimerasa (PCR) 15
Secuenciación de ADN y análisis de secuencias 15
Catálogo de hongos en semillas de frijol (Phaseolus vulgaris L.) en Nicaragua

VII. RESULTADOS 17
HONGOS PATOGÉNICOS TRANSMITIDOS POR SEMILLAS 17
Lasiodiplodia theobromae (Pat) teleomorfo (Botryosphaeria rhodina) 17
Collectotrichum gloesporiodes (Penz) teleomorfo (Glomerella cingulata) 20
Collectotrichum capsici (Syd) E.J. Butler & Bisby 22
Diaporthe spp (Nitschke 1980), Anamorfo (Phomopsis)

(Sutton, 1980) (Webster & Weber, 2007) 24
Corynespora cassiicola (Berk. & M.A. Curtis) C.T. Wei, (1950) 27
Complejo de Fusarium spp (F. incarnatum (R.) Sacc, equiseti (Corda)

Sacc. Sensu Gordon y Chlamydosporum (Wollenv) 30
Macrophomina phaseolina (Tassi) Goid (Syn o

anamorfo Rhizoctonia bataticola (Taub) 32
Hongos de almacenamiento 35
Penicillium citrinum (Link) y Aspergillus flavus (Link) 35
Aspergillus niger (Link) 38
VIII. RECOMENDACIONES 41
IX. CONCLUSIONES 42
X. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 45
Catálogo de hongos en semillas de frijol (Phaseolus vulgaris L.) en Nicaragua

I. AGRADECIMIENTOS
Gracias al Instituto Nicaragüense de Tecnología Agropecuaria (INTA), el Laboratorio de
Biotecnología en el CNIA y al Proyecto Apoyo a la Producción de Semillas de granos básicos
para la Seguridad Alimentaria de Nicaragua (PAPSSAN) auspiciado con fondos de la Unión
Europea por la publicación de este primer Catálogo de hongos en semillas de frijol en Nicaragua,
dirigido a profesionales y estudiantes de agricultura. Especial agradecimiento a la Universidad
de Helsinki, Finlandia (Programa NIFAPRO) ya que parte de esta investigación fue realizada
en sus instalaciones. De manera especial muchas gracias a todas las personas que de una u
otra manera aportaron con sus sugerencias, comentarios, corrección y realización del mismo.
1 Catálogo de hongos en semillas de frijol (Phaseolus vulgaris L.) en Nicaragua

Ii. ABREVIATURAS
BLAST Herramienta de Búsqueda de Alineamiento Local Básico
CNIA Centro Nacional de Investigación Agropecuaria y Biotecnología
CTAB Bromuro de hexadeciltrimetilamonio
INTA Instituto Nicaragüense de Tecnología Agropecuaria
NBCI Centro Nacional de Información de Biotecnología
PCR Reacción en cadena de polimerasa
Proyecto de Apoyo a la Producción de Semillas de granos básicos para la

PAPSSAN
Seguridad Alimentaria de Nicaragua
PDA Papa Dextrosa Agar
Catálogo de hongos en semillas de frijol (Phaseolus vulgaris L.) en Nicaragua 2

III. RESUMEN
Los hongos transmitidos por semillas son una gran limitación para la producción de frijol en
Nicaragua y causa grandes pérdidas en el rendimiento. Sin embargo, la identificación de
hongos trasmitidos por semillas ha ganado poca atención. Una de las prioridades del INTA es
identificar aquellos transmitidos por semillas en el cultivo del frijol en Nicaragua. Diferentes
pruebas de análisis para la identificación de hongos fueron llevadas a cabo en treinta siete
lotes de semillas de frijol en un periodo comprendido entre el 2008 y 2011 procedente de
Boaco, Carazo, Estelí, Jinotega, Matagalpa, Nueva Guinea y El Rama. Estos análisis
incluyeron pruebas de incubación, siembra de semillas en medio agar, uso de papel secante
estéril; Aislamiento de hongos en medio PDA, caracterización morfológica (pruebas visuales:
fenotípicas y microscópicas), pruebas de geminación/emergencia usando sustrato estéril,
pruebas patogénicas y pruebas moleculares (extracción de ADN, PCR, secuenciación). Los
hongos patogénicos fueron clasificados en seis grupos fenotípicamente distinguibles basados
en las características de los aislados y de identificaciones a través de análisis de secuencias
de espacios internamente transcritos (ITS1 e ITS 4) de genes ribosomales. Para el efecto
fueron usados marcadores moleculares universales capaces de amplificar regiones de ITS
de un largo rango de diferentes grupos de hongos los que son usados en reacciones de
cadenas de polimerasas (conocido como PCR por sus siglas en inglés). Las secuencias de
los aislados de hongos de Nicaragua fueron comparadas con aquellas disponibles en la base
de datos del Centro Nacional de Información de Biotecnología (NBCI) usando el programa de
herramienta de búsqueda de alineamiento básico local (Blast) el cual encuentra las regiones
de similitud local entre las secuencias. Los hongos identificados mediante secuencias de
espacios internamente transcritos fueron: Complejo de Fusarium (F. chlamydosporum,
F. equiseti y F. incarnatum); Macrophomina phaseolina (anamorfo o sinónimo Rhizoctonia
bataticola); Lasiodiplodia theobromae (teleomorfo Botrysphaeria rhodina) Corynespora
cassiicola; Collectotrichum gloesporiodes (teleomorfo Glomerella cingulata); Colletotrichum
capsici; Diaporthe sp/Phomopsis. Mediante identificación de prueba de incubación y prueba
de germinación en sustrato esteril fue detectado la presencia de Rhizoctonia solani Kühn
(teleomorfo Thanatephorus cucumeris (Frank) Donk. Hongos de almacenamiento de semillas
también fueron identificados como: Penicillium citrinum, Aspergillus flavus y A. niger. Estos
resultados podrían revelar que diferentes grupos de hongos trasmitidos por semillas están
infectando el cultivo de frijol. Esto ha permitido identificar marcadores moleculares para la
identificación de cuatros grupos de hongos, considerados los de mayor importancia en este
estudio. Estos marcadores específicos pueden ser utilizados en inspecciones de semillas y
en estudios de epidemiologia, ecología y control de patógenos de hongos en el cultivo del
frijol en el campo.

IV. INTRODUCCIÓN
El uso de métodos útiles y confiables para la determinación de calidad de semillas es esencial
para minimizar los riesgos productivos que implica el uso de semillas. La calidad de semillas
se evalúa por su pureza, germinación, vigor y características fitosanitarias. Esta última
característica es una de las de mayor relevancia.
El presente catálogo presenta los hongos identificados en semillas recolectadas en diferente

zonas de Nicaragua, incluyendo patógenos que antes no habían sido reportados en el país.
También incorpora detalles sobre metodologías empleadas en el proceso de identificación.
Hongos
Los hongos son considerados como organismos Eucariotas (Carlile & Watkinson, 1994).
Muchos hongos son filamentosos y su reproducción es por esporas. Ellos tienen paredes
celulares y en su mayoría contienen quitina y glucanos. Sin embargo, muchos miembros de
un grupo de hongos (Imperfectos) son Deuteromycetes, que no forman esporas. Estos hongos
se multiplican por el crecimiento de fragmento de hifas. Los hongos pueden clasificarse como
parásitos obligados (biotrofos) y no obligados (necrotrofos y hemibiotrofos) o pueden ser
saprofitos facultativos o parásitos facultativos. Hay más de 100 000 especies de hongos que
son saprofitos pero solo 10 000 de ellos son conocidos como causar enfermedades en las
plantas (Agrios, 1997).
Los síntomas de enfermedades causadas por hongos en las plantas incluyen necrosis en
los tejidos de las plantas, reducción del crecimiento de órganos de la planta o un crecimiento
excesivo y anormal en algunas partes. Síntomas necróticos consisten en manchas foliares,
tizones pudrición de raíces, úlceras, ahogamiento (conocido en inglés como damping-
off), pudrición de tallo suave y antracnosis. Otros síntomas como marchitez también son
observadas en plantas (Agrios, 1997).
Daños que producen los patógenos de semillas

Enfermedades trasmitidas por semillas causadas por virus, hongos y bacterias son
frecuentemente perjudiciales en la producción de frijol y otros cultivos en Nicaragua. Los
patógenos en semillas se transmiten como contaminantes adheridos a la cubierta de la
semilla o internamente que se considera como el principal mecanismo de transmisión por
semilla (Waller et al., 2002).

En las últimas décadas, los rendimientos se han reducido por cambios climáticos pero sobre
todo el principal factor limitante han sido las enfermedades trasmitidas por semillas.
Más del 50% de las enfermedades más importantes son aquellas trasmitidas por semillas.
Las enfermedades fúngicas han provocado grandes pérdidas en la producción de frijol (Hall
1991; Agrios, 1997; PROMESA 2000).
Muchos patógenos son causantes de fallas en la germinación y producción de plántulas

enfermas que con el tiempo mueren o no prosperan en el campo.
Una cantidad de hongos se encuentran presentes en las semillas de frijol, promoviendo a las
simientes del frijol, en vehículos de inóculo que permiten la introducción de los hongos a otros
lotes de producción. De esta forma, muchos hongos causantes de enfermedades de cultivo
en algunas regiones del país son diseminados a otras regiones a través de las semillas,
dispersando de esta manera las enfermedades por las regiones de mayor producción de frijol
del país.
La siembra de semillas infectadas con determinados hongos no solo reduce el número inicial
de plántulas durante la emergencia del cultivo, sino que es una forma de incrementar la
cantidad del inóculo del hongo en el suelo y rastrojos, aumentando de esta manera la presencia
de este en los lotes de producción de semillas y granos. Además, es importante mencionar
que a los problemas que pueden ocasionar los patógenos presentes en las semillas de frijol,
tanto en la germinación y/o emergencia en campo, se suman los hongos que se encuentran
en el almacenamiento de semillas y que producen micotoxinas las cuales son dañinas para
la salud humana y animal. Dentro de este grupo de hongos se encuentran aquellos como:
Aspergillus sp y Penicillium sp lo que tienen además la facilidad de deteriorar las semillas y
reducir la capacidad de germinación durante el periodo que dura la postcosecha.
V. OBJETIVO DEL CATÁLOGO

Este catálogo informativo esta dirigido principalmente a profesionales y estudiantes del sector
agrícola. Describe hongos encontrados en semillas de frijol en Nicaragua y la metodología
usada para su identificación. Algunos de ellos son patogénicos bajo condiciones controladas
de laboratorio y reportados por primera vez en Nicaragua.

VI. METODOLOGÍA
Muestreo de semillas
Las semillas de frijol se obtuvieron de pequeños y medianos productores de frijol en diferentes
regiones, periodos de cosecha y años. Durante el año 2008 se colectaron semillas de frijol
de la cosecha de primera con procedencia de Boaco, Carazo, Estelí y Matagalpa.
Durante el periodo 2010 se colectaron semillas de frijol de cosecha de primera procedente de

Carazo (Masatepe), Chinandega, Jinotega y Nueva Guinea. En 2011 se obtuvieron semillas
de frijol de la cosecha de postrera 2010 y apante 2011 procedente de Carazo, Jinotega,
Nueva Guinea y El Rama.
El muestreo de semillas fue realizado como se describe en ISTA, 1996 & AOSA, 1997.
Básicamente, cada muestra elemental o primaria fue tomada aleatoriamente en cada lote y en
las zonas antes mencionadas se mezclo para obtener una muestra compuesta homogenizada
y de un peso mínimo y se envió al laboratorio (muestra sometida). El tamaño de la muestra
sometida se mezcló nuevamente y se dividió para asegurar una muestra homogenizada que
es como se le conoce como muestra de trabajo (400 semillas por lote).
Durante el muestreo, la muestra de semillas representan la composición del lote de semilla

como un conjunto y que independientemente de la precisión de los análisis, los resultados
en este estudio representan solo la calidad de la muestra sometida a análisis (AOSA, 1997).
Posterior al muestreo, los análisis de detección e identificación de patógeno del lote de
semillas solo representara el nivel de infección del lote siempre y cuando la muestra de
semillas sea representativa del lote.
Análisis
Análisis de patología usando métodos convencionales y moleculares fueron realizados en
muestras de semillas colectadas de la cosecha de primera 2008. Mientras que las semillas
de frijol colectadas del 2010 fueron realizados análisis de patología usando métodos
convencionales y pruebas PCR, con el uso de marcadores específicos solo para cuatro tipos
de hongos (Fusarium spp; M. phaseolina; Colletrotrichum spp y L. theobromae).
El análisis de semillas colectados en el 2008 se llevó a cabo en el Laboratorio de Biotecnología,

del Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias y Biotecnología (CNIA) del Instituto
Nicaragüense de Tecnología Agropecuaria (INTA) en Managua, Nicaragua y en el en el
Laboratorio de Biología aplicada, del Departamento de Agricultura y Forestal, Universidad de
Helsinki (Finlandia) como parte de estudios de maestría (Marcenaro et al., 2009).

No obstante, los análisis de las semillas obtenidas durante el 2010 y 2011 se realizaron
en el Laboratorio de Biotecnología, del Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias y
Biotecnología (CNIA) del Instituto Nicaragüense de Tecnología Agropecuaria (INTA).
Estos análisis incluyeron pruebas de incubación en los medios de agar agua, papel secante
estéril, aislamiento de hongos en medio de cultivo PDA, pruebas de germinación usando
sustrato estéril (arena), pruebas visuales/microscópicas para todas las muestras de semillas
colectadas durante el periodo del 2008 al 2011.
Pruebas de patogenicidad y pruebas de reacción en cadenas de polimerasas (PCR) y

Secuenciación fueron realizadas para todas las muestras de semillas colectadas en el 2008.
Incubación de las semillas

Las pruebas de incubación son necesarias para detectar la presencia de microrganismos
causantes de enfermedades en las semillas. Materiales contaminantes o adheridos a las
semillas fueron removidos para todas las muestras colectadas desde del 2008 al 2011
usando etanol e hipoclorito y enjuagados con agua purificada. Seguidamente las semillas
fueron dejadas en papel filtro para su secado y posterior uso en pruebas de incubación en
papel secante (Figura 1 y 2) y agar agua. Se sembraron 400 semillas en agar agua a una
proporción de 8 semillas por plato Petri (Figura 3). Luego de la siembra, se colocaron en una
incubadora a una temperatura de 30 °C o bien en un cuarto a temperatura ambiente (25° C).
Aspergillus Flavus
Aspergillus Flavus
Exudado
A B Bacteriano
Fig. 1. Semillas de frijol variedad INTA-Cárdenas con conidióforos de Aspergillus flavus (A y B). Exudado
bacteriano (B).

Macrophomina phaseolina Fusarium spp
B C
Fig. 2. Semillas de frijol (INTA Rojo) con Macrophomina phaseolina y Fusarium spp (A). Semillas
de frijol totalmente infectadas con diferentes grupos de hongos como: Lasiodiplodia theobromae,
Diaporthe/Phomopsis spp, Macrophomina phaseolina y Fusarium spp en pruebas de papel secante
estéril procedentes de Boaco, 2010 (B y C).

A B
A B
C D
Fig. 3. Semillas de frijol cv INTA Rojo procedente de Boaco infectadas con micelio de hongos algodonoso
Fusarium spp (A). Semillas de frijol cv INTA Rojo procedente de Matagalpa infectadas con micelio de
hongo algodonoso Fusarium spp y Penicillium spp (C). Semillas de frijol cv INTA Rojo procedente de
Matagalpa infectadas con esclerotio de Macrophomina phaseolina (B). Semillas de frijol cv INTA Rojo
procedente de Matagalpa infectadas con conidioforos de Aspergillus flavus.

Aislamiento de hongos
Parte del micelio (1 tip de hifa) fue transferido en platos Petri con PDA (agar de dextrosa de
papa) conteniendo estreptomicina Lethonen et al. (2008). Cuando no se obtuvo un cultivo
puro, fue necesario transferir micelio a nuevos platos hasta obtener cultivos puros. Los platos
se mantuvieron boca abajo para evitar acumulación de agua sobre el micelio del hongo y
fueron almacenados a 4 o 5°C.
Visualización fenotípica y microscópica

Los aislados de hongos fueron clasificados de acuerdo a sus características de crecimiento en
el medio de cultivo tales como: color, textura, uniformidad y observación microscópica. Para
la visualización de las estructuras de hongos e identificación se emplearon los colorantes
azul de lactofenol y azul algodón acético.
Pruebas de emergencia/germinación usando sustrato estéril (arena)

Para cada uno de los lotes se sembraron 400 semillas en ocho bandejas plásticas conteniendo
arena esterilizada (50 semillas por bandeja), por periodo de incubación de 10 a 14 días sin
que la semilla haya recibido pretratamiento (Figura 4, 5 y 6).
Un diseño completamente al azar (DCA) fue realizado para análisis de los lotes de las semillas.
Variables tales como: germinación, emergencia, síntomas en las plántulas y crecimiento
anormal fueron evaluadas.
Análisis de varianza (ANDEVA) con un factor y comparación de medias basados en la prueba

de Tukey (α =0.05) fue llevado a cabo.

B
A C
Fig 4. Plántulas de frijol cv INTA Rojo en pruebas de emergencia/germinación usando sustrato estéril
con daños severos causados por un complejo de hongos : Pudrición de raíces, Lesiones en el tallo de
color café-marrón, Necrosis (A y C), Anormal crecimiento (B).

A B
C
Fig 5. Plántulas de frijol (INTA Rojo) procedente de Boaco 2010 en pruebas de emergencia/germinación
usando sustrato estéril a los 13 días de la siembra. Pobre germinación, crecimiento anormal y pudrición
de semillas causados por hongos (A, B y C).

A B
C D
E F
G H
Fig 6. Plántulas de frijol INTA Rojo en pruebas de emergencia/germinación usando sustrato estéril a los
13 días de la siembra. Conidioforos de Aspergillus flavus (A). Semillas no germinadas con pudrición y
con presencia de micelio de hongo algodonoso sobre la semilla Fusarium spp (B). Anormal crecimiento
(C y D). Síntomas de tejido necrótico y pudrición de la plántula y raíz (E y F). Hojas con síntomas
cloróticas (G y H).

Pruebas de patogenicidad
Pruebas de patogenicidad (Lehtonen et al., 2008), de diferentes aislados de hongos
obtenidoos de las muestras colectadas del 2008 fueron llevadas a cabo dos veces de manera
independiente (dos tratamientos por separado, con cinco repeticiones por cada aislado
incluyendo su control negativo).
Semillas certificadas de frijol blanco (Navy bean) libres de patógenos procedente del Ministerio
de Agricultura y Forestal de Finlandia (MTT), fueron esterilizadas y puestas a germinar
sobre papel filtro estéril. Semillas germinadas, fueron depositadas en tubos Falcón de 50 ml
conteniendo aproximadamente 10 ml de arena estéril húmeda. En cada tubo se coloco una
semilla. Luego, las semillas fueron cubiertas por otros 10 ml de arena estéril. Encima de esta
capa de arena se depositó una pieza de PDA conteniendo hifas de los hongos aislados. Luego
el tubo fue llenado casi completamente con arena y cerrado con una tapa (Figura 7). Cuatro
tubos como repeticiones fueron inoculados con cada hongo aislado. Tubos con semillas de
frijol esterilizadas, sanas y germinadas sin inoculante fueron usados como control.
Los tubos fueron incubados en un cuarto de crecimiento a 20°C con luz tenue. Las observaciones
de síntomas fueron realizadas a los 20 días después de la inoculación. Postulados de Koch
fueron aplicados para corroborar los resultados.
A B
Arena estéril
Inóculo (Hongo en PDA)
Arena estéril
Semilla de frijol germinada
Arena estéril
Fig. 7. Pruebas de patogenicidad de diferentes cepas de hongos aislados de semillas de frijol (A).
Sintomas después de 20 días de inoculación. Lesiones y manchas de color oscuro marrón sobre el
tallo de la plántula, hongo Macrophomina phaseolina (B).

Pruebas basadas en técnicas de la reacción en cadena de Polimerasa
(PCR)
El Acido Dexorribonucleico (ADN) de los aislados de hongos fue extraído usando el método
Bromuro de Hexadeciltrimetilamonio o Bromuro de Cetiltrimetilamonio (CTAB) descrito por
Ausubel et al. (1995) y modificado por Marcenaro (2009). El buffer de CTAB fue preparado
a una concentración final de 2% w/v CTAB, 20 mM NaEDTA, 100 mM Tris-HCl, pH 8.0, y 1.4
M NaCl).
El ADN fue extraído de micelio fresco, que es cultivo puro de 1-3 semanas de crecimiento
sobre medio de cultivo PDA.
Marcadores moleculares de Espacios Internos Transcritos (ITS) ITS1 e ITS4 fueron usados
para amplificar regiones de genes de ribosomas (ITS1-ITS2), Lethonen et al., (2008).
Estos marcadores moleculares son capaces de amplificar un amplio rango de hongos. Los
productos de la reacción PCR fueron analizados mediante electroforesis usando gel de
agarosa al 1%.
El tamaño esperado del fragmento amplificado por los marcadores moleculares ITS 1 e ITS 4
fue de aproximadamente de 600 pares de bases (White et al., 1990).
Secuenciación de ADN y análisis de secuencias

Los productos PCR positivos (Figura. 8), fueron purificados usando un kit de extracción de
gel (E.Z.N.A, manual 09/2008, Omega Bio-Tek) y enzimas como exonucleasa I, (EXO I)
fosfatasa alcalina de intestino de ternero (CIAP), o fosfatasa alcalina de camarón (SAP).
Secuenciación directa de los productos PCR purificados fue llevado a cabo en laboratorio
de secuenciación del Instituto Haartman, Universidad de Helsinki. Las secuencias de ocho
grupos de aislado de hongos obtenidos de semillas de frijol se compararon con las secuencias
obtenidas de la base de datos del Centro Nacional de Información de Biotecnología (NBCI),
mediante la herramienta de Búsqueda de Alineamiento Local Básico (Blast). Las secuencias
fueron alineadas utilizando el programa CLUSTAL X. Análisis filogenéticos fueron realizados
utilizando valores de arranque (bootstrap) de 1,000 réplicas y método Kimura two parameters
basado en alineamiento CLUSTALW usando la versión de MEGA5 (Tamura et al. 2007).

+ + + + + + + +
650 pb
- - - - + + + + +
650 pb
Fig. 8. Productos PCR positivos (+) con muestras de hongos aislados de semillas de frijol en Nicaragua
(A y B) amplificados con marcadores moleculares universales (ITS1 e ITS4). Tamaño del fragmento
650 pb (pares de bases). Marcador (ruler) ADN de 1000 pares de base.

VII. RESULTADOS
De las semillas colectadas en el 2008 en total se identificaron ocho grupo diferentes hongos
(Cuadro 1 y 1a, Páginas 38 y 39), identificados mediante pruebas PCR y microscópicas,
cuatro de ellos reportados por primera vez infectando semillas de frijol en Nicaragua. De
acuerdo a pruebas de patogenicidad son considerados además como hongos patogénicos.
Además los análisis estadísticos de pruebas de germinación/emergencia usando sustrato

estéril mostró que el análisis de varianza con un factor para los seis lotes de semilla colectados
en el 2008, cosecha de primera para evaluar variables como: germinación/emergencia,
síntomas de las plántulas y la porción de semillas que dio lugar a plantas cualificadas o
sanas, indicó que hay diferencias entre los lotes de semillas con respecto a la germinación/
emergencia (p = 0.00006) y la porción o cantidad de semillas que dió lugar a plantas vigorosas
y de aspecto saludable (p = 0.00006).
Sin embargo, no se observaron diferencias significativas en la porción o cantidad de plántulas

que dieron origen a síntomas de enfermedades (p = 0.12974).
Los resultados mostraron que hay diferencias estadísticamente significativas entre los seis
lotes de semillas estudiados en relación a la variable de germinación.
Los dos lotes procedente de Carazo mostraron diferencias entre si, pues el lote dos mostro una
alta germinación, mientras que el otro lote (lote 3) fue uno de los más pobres en germinación.
El lote uno procedente de Boaco también mostro una pobre germinación en relación al
resto de lotes de semillas. Los resultados también indicaron que los lotes de semillas que
exhibieron mejor germinación dieron surgimiento a una mayor cantidad de plántulas sanas y
de buen crecimiento. En contraste, la aparición de una pobre germinación fue asociada con
una porción/cantidad de plántulas que germinaron pero con un crecimiento anormal y pobre
afectado aparentemente con síntomas de enfermedades causadas por hongos.
HONGOS PATOGÉNICOS TRANSMITIDOS POR SEMILLAS
Lasiodiplodia theobromae (Pat) teleomorfo (Botryosphaeria rhodina)

Taxonomía: Reino Fungi; Phylum Ascomycota; Clase Dothideomycetes; Orden
Botryosphaeriales; Familia Botryophaeriaceae; Género Lasiodiplodia.
Descripción: Las colonias en medio de cultivo PDA son de color sepia grisáceo a gris,
suave y esponjoso con abundante micelio aéreo (Figura 9). Se observaron Conidios maduros
bicelular de color marrón oscuro con estrías típicas de L. theobromae (Figura 10).

Fig. 9. Crecimiento de Lasiodiplodia theobromae (teleomorfo Botryosphaeria rhodina) en PDA. Las colonias en
medio de cultivo son de color sepia grisáceo a gris, suave y esponjoso con abundante micelio aéreo (A).
Conidios
Conidios
A B
Fig. 10. Conidios maduros bicelular de color marrón oscuro con estrías típicas de L. theobromae (A y B).

Huéspedes: Especies de Botryophaeriaceae son cosmopolita y ocurren en una variedad
de plantas hospederas. L. theobromae ha sido asociado con aproximadamente 500 plantas
hospederas incluyendo cultivos de importancia como uva (Vitis vinífera), cítricos, cacao
(Theobroma cacao L) Torrealba, C., Gonzalez, H., Milla, D & Sanabria, M. E (2009).
Además, afecta el mango (Mangifera indica L), aguacate (Persea americana), maíz (Zea
mays), Pino (Pinus sp), coco (Cocos nucifera), etc Alves et al. (2008).
Sintomatología: L. theobromae es un patógeno que causa enfermedades como pudriciones

en plantas, chancros/lesiones y muerte regresiva en al menos 500 especies de plantas en
las que destacan: mango, aguacate, cítricos, algodón, cacao (Punithalingan 1976, 1980).
Esta enfermedad se manifiesta en ramas, tallos, raíces y frutos. En frutos puede ocasionar
lesiones y pudriciones blandas las que empiezan con una mancha de color parda.
En las ramas y brotes causan necrosis empezando con un amarillamiento en las hojas más
jóvenes, hasta que adquiere una coloración marrón-pardo, o rojizo y que con el tiempo se
puede tornar de un color gris oscuro. Es un hongo fitopatógeno causando enfermedades de
muerte regresiva y gangrenosa (Von Arx & Muller, 1954; Barr, 1897).
En estudio de pruebas de patogenicidad realizado por Khanzada, M.A et al. (2004) en el

cultivo del mango en Pakistán reportó L. theobromae como un hongo patogénico causando
síntomas de muerte regresiva.
En pruebas de patogenicidad síntomas de daños fueron observados en plántulas de frijol

como las descritas en las figuras (Figura 11).
A B C
Fig. 11. Pruebas de patogenicidad del hongo L. theobromae. Síntomas: Lesiones/chancros de color
pardo y pudriciones blandas sobre plántulas de frijol (A, B y C). Crecimiento de micelio del hongo de
color gris en el tejido infectado (C).

Trasmisión: El hongo puede ser diseminado por la lluvia y el viento y penetrar a través
de heridas en tejido de las plantas. Condiciones favorables como: altas precipitaciones,
temperaturas (arriba de 23 º C) y humedad promueven la incidencia y desarrollo de la
enfermedad (Arauz & Umaña, 1986).
Distribución geográfica: L. theobromae geográficamente se encuentra disperso

especialmente en países tropicales y subtropicales (Punithalingam, 1980). Fue encontrado
en lotes de semillas procedentes de Boaco y Carazo.
Método de identificación: Morfológica y molecular. Basados en análisis de secuencias

ITS, aislados de este grupo de hongos fueron 99-100% idéntico a Lasiodiplodia theobromae
(teleomorfo Botryosphaeria rhodina). Analisis morfologicos indican que las estructuras
microscopicas son conidias del hongo L. theobromae.
Reporte: Es un hongo patogénico reportado por primera vez en Nicaragua en semillas de

frijol. No fueron encontradas referencias previas de este hongo en frijol común.
Collectotrichum gloesporiodes (Penz) teleomorfo (Glomerella cingulata)

Taxonomía: Reino Fungi: Phylum Ascomycota; Clase Sordariomycetes; Orden Incartae
sedis; Familia: Glomellaceae; Genero: Glomerella.
Descripción: Las colonias en PDA de C. gloesporiodes presentan micelio de color gris

(Figura 12). Sin embargo, pueden ser de color blanco grisáceo al inicio de su crecimiento en
PDA y que con el tiempo se puede tornar de color oscuro. Se observaron conidios ovoides u
ovalados (Figura 13). En su mayoría presentan en el extremo redondeado y en el otro agudo.
A B
Fig. 12. Crecimiento de Collectotrichum gloesporiodes (Penz) (teleomorfo Glomerella cingulata) en medio de
cultivo PDA aislado de semillas de frijol. Colonias del hongo en PDA micelio de color gris. Parte superior del
cultivo puro del hongo en medio de cultivo PDA (A). Parte inferior del cultivo puro del hongo en medio PDA (B).

A
Conidias
Fig. 13. Conidias de Collectotrichum gloesporiodes (Penz) (teleomorfo Glomerella cingulata).
Huéspedes: Cítricos, mangos, papaya, guayaba, banano, aguacate, tomate entre otros.
Sintomatología: Antracnosis causada por especies de Collectotrichum es una enfermedad

que afecta a las hojas, ramas, vainas, tallos, las venas y los frutos y que presentan manchas
de color oscuro o lesiones hundidas con anillo leve levantado. Puede afectar toda la planta.
En cultivos tropicales, las ramas se marchitan lentamente y aparece una mancha gomosa
entre la zona sana y enferma. Seguidamente las ramas mueren gradualmente y lentamente.
En las hojas aparecen manchas circulares dispersas, sobre todo por los bordes. De acuerdo
a pruebas de patogenicidad se comprueba que C. gloesporiodes es patogénico ya que al
momento de la inoculación es capaz de enfermar semillas y plántulas.

Trasmisión: Colletrotrichum gloesporiodes, pueden sobrevivir dentro y fuera de la semilla

(Pernezny et. al 2003) y es considerado un hongo trasmitido por semillas. Altas temperaturas
favorecen la infección y propagación del hongo. Semillas y desechos de los cultivos son
consideradas como fuentes primarias de infección por Colletotrichum spp (Manandhar &
Hartman, 1999).
Distribución geográfica: En regiones subtropicales y tropicales. Fue encontrado en Boaco.
Método de identificación: Basados en análisis de secuencias ITS, aislados de este grupo

de hongos fueron 100 % idéntico a C. gloesporiodes. Analisis morfológico indicaron que las
estructuras microscópicas son conidias pertenecientes a C. capsici.
Reporte: Con este trabajo de investigación se reporta por primera vez en el cultivo del frijol
en Nicaragua (no existen reportes previos de este hongo infectando el frijol) y reportado como
un hongo patogénico. Fue encontrado en la región Boaco.
Collectotrichum capsici (Syd) E.J. Butler & Bisby

Taxonomía: Reino Fungi: Phylum Ascomycota; Clase Sordariomycetes; Ordern Phyllacharales;
Familia Phyllachoraceae (Von 1957). Género: Collectotrichum.
Descripción: Las colonias en PDA de C. capsici son de color café grisáceo (Figura 14). La
observación microscópica muestra formación de conidias de forma alargadas (Figura 15).
Huéspedes: Chiltoma (Capsicu annuum, L), Chile.
A B
Fig. 14. Crecimiento de Collectotrichum capsici en medio de cultivo PDA aislado de semillas de frijol.
Colonias dan un color café grisáceo. Parte superior del cultivo puro del hongo en medio de cultivo PDA (A).
Parte inferior del cultivo puro del hongo en medio PDA (B).

A B
Conidias
Conidias
Fig. 15. Conidias de Collectotrichum capsici (A y B).
Sintomatología: Antracnosis causada por especies de Collectotrichum es una enfermedad,

que afecta a las hojas, ramas, vainas, tallos, venas y frutos que presentan manchas de
color oscuro o lesiones hundidas con anillo leve levantado. Puede afectar toda la planta. En
cultivos tropicales, las ramas se marchitan lentamente y aparece una mancha gomosa entre
la zona sana y enferma. Posteriormente las ramas mueren gradual y lentamente. En las hojas
aparecen manchas circulares dispersas, sobre todo por los bordes. De acuerdo a pruebas de
patogenicidad (Figura 16), se comprueba que C. capsici es patogénico ya que al momento
de la inoculación es capaz de enfermar semillas y plántulas.
Trasmisión: Ha sido considerado uno de los patógenos más devastadores en el cultivo,

persiste en el suelo, cultivos infectados y malezas (Saxena et al, 1982). Puede sobrevivir dentro
y fuera de la semilla (Pernezny et. al 2003) y es considerado un hongo trasmitido por semillas.
Altas temperaturas favorecen la infección y propagación del hongo. Semillas y desechos de
los cultivos son consideradas como fuentes primarias de infección por Colletotrichum spp
(Manandhar & Hartman, 1999).

Distribución geográfica: En regiones subtropicales y tropicales. Encontrado en Boaco y

Matagalpa.
Método de identificación: Basados en análisis de secuencias ITS, y análisis morfológico

aislados de este grupo de hongos fueron 100% idéntico a C. capsici.
Reporte: No existen reportes previos de este hongo infectando el cultivo del frijol en Nicaragua.
A B C
Fig. 16. Prueba de patogenicidad del aislado del hongo C. capsici. Síntomas: Lesiones pequeñas y
decoloración de color marrón-café en el tallo y raíces causada después de 20 días de inoculación (A, B y C).
Diaporthe spp (Nitschke 1980), Anamorfo (Phomopsis)

(Sutton, 1980) (Webster & Weber, 2007)
Taxonomía: Reino Fungi; Phylum Ascomycota; Clase Sordariomycetes; Orden Diapothales;
Familia: Diaporthaceae. Género: Diaporthe/Phomopsis.
Descripción: Colonias de Diaporthe sp (Anmorfo Phomopsis) en PDA, crecen en forma

flocosa, micelio denso y blanco a los 14 días. Picnidios formados de color negro en la parte
superior del cultivo son observados (Figura 17A). Parte inferior del cultivo puro del hongo en
medio PDA es de color bronceado marrón oscuro y con propagación de estromas o estomas
de color negro pulvinado ((Figura 17B).

Diaporthe sp (Anamorfo Phomopsis). Ascas y Arcosporas de Diaporthe sp son observados
(Figura 18A) y conidias de Phomopsis sp también fueron observados (Figura 18B).
A B
Fig. 17. Crecimiento de Diaporthe sp (Anmorfo Phomopsis) en medio de cultivo PDA aislado de semillas
de frijol. Colonias del hongo en PDA de forma flocosa, micelio denso y blanco a los 14 días. Picnidios
formados de color negro en la parte superior del cultivo (A). Parte inferior del cultivo puro del hongo en
medio PDA es de color bronceado marrón oscuro y con propagación de estromas o estomas de color
negro pulvinado (B).
A B
Ascas y arcosporas
Conidias
Fig. 18. Ascas y Arcosporas de Diaporthe sp (A) y Conidia de Phomopsis sp (B).

Huéspedes: Han sido reportados especialmente en el cultivo de la soya, uvas, girasol y

cítricos (Agrios, 2005), causando grandes pérdidas en los rendimientos.
Sintomatología: Son considerados endófitos y patógenos afectando un amplio rango

de hospederos y responsables de muchas enfermedades, algunas de las cuales son de
importancia económicas. El complejo de Diaporthe sp (Anamorfo Phomopsis sp),es un grupo
importante de enfermedades de hongos trasmitidas por semillas y por rastrojos infectados
de cultivos previos por ejemplo: la soya (Glycine max). Son considerados en este estudio
como hongos patogénicos ya que causan úlceras en plántulas, suavidez del tallo y lesiones
oscuras de color café/marrón o rojizo en los cotiledones, etc. (Figura 19). Causan tizón del
tallo y vainas, pudrición en las semillas; presentan síntomas como moho y crecimiento de
micelio del hongo de color blanco, semillas agrietadas, aspecto arrugado y de apariencia
blanca. Especies de Diapothe/Phomopsis se encuentra en la soya causando tizón del tallo y
vaina así como en otros cultivos de leguminosas (Webster & Weber 2007).
Ocasionan úlceras/chancros en las ramas y hojas y provocan disminución en la geminación y

calidad de la semillas. Además, pueden ocasionar la muerte de las plántulas.
Las especies de Diaporthe spp, causan pudrición final de las raíces y tallo.
A B C D
Fig. 19. Prueba de patogenicidad del aislado del hongo Diaporthe sp (Anamorfo Phomopsis). Síntomas:
crecimiento del hongo en el cotiledón de color blanco y hundimiento del tallo (A). Úlceras/chancro en
el cotiledón, tallo, hundimiento del tallo (B). Hundimiento/suavidez del tallo y raíces de color marrón-
oscuras después de 20 días de inoculación (C y D).

Trasmisión: Se considera que el complejo Diaporthe/Phomopsis se trasmite por semillas.
Condiciones favorable que ayudan a enfermedades causadas por el complejo Diaporthe sp
(Anamorfo Phomopsis), incluyen altas temperaturas y humedad relativa.
Distribución geográfica: Fue encontrado en lotes de semillas procedente de Boaco y Estelí.
Método de identificación: Basados en análisis de secuencias ITS, y análisis morfológico,

aislado de este grupo de hongos fueron 99 % idéntico a Diaporthe (anamorfo Phomopsis).
Reporte: Diaporthe sp/Phomopsis sp de acuerdo a resultados de este estudio es un hongo

patogénico en semillas de frijol. Su presencia como patógeno es informada por primera vez
en Nicaragua (no se encontraron reportes oficiales previos). Hongos patogénicos.
Corynespora cassiicola (Berk. & M.A. Curtis) C.T. Wei, (1950)

Taxonomía: Reino Fungi, Phylum Ascomycota; Clase Dothideomycetes; Orden Pleosporales;
Familia Corynesporascaceae; Género Corynespora.
Descripción: Colonias del hongo en PDA emiten un color de color grisáceo o café- marrón
y aterciopelado y finamente velloso (Figura 20A). En la parte inferior el cultivo del hongo
muestra un color rojizo marrón en medio (Figura 20B). Presentan conidias y conidióforos de
(Figura 21A) y las conidias se encuentran formando cadenas acropetal (Figura 21B).
A B
Fig. 20. Crecimiento de Corynespora cassiicola en medio de cultivo PDA aislado de semillas de frijol.
Colonias del hongo en PDA emiten un color de color grisáceo o café- marrón y aterciopelado y finamente
velloso. Parte superior del cultivo puro del hongo en medio de cultivo PDA (A). Parte inferior del cultivo
puro del hongo de color rojizo marrón en medio PDA (B).

A B
Conidias y conidiósforos Conidias formanto

cadenas acropetal
Fig. 21. Conidias y conidióforos de C. cassiicola (A). Conidias formando cadenas acropetal (B).
Huéspedes: Patógeno de plantas que es capaz de causar enfermedades en una amplia

gama de especies como: papaya (Carica papaya), Tomate (Lycorpesicum esculetum Mill),
Soya (Glycine max L.), melón (Cucumis melo), pepino (Cucumis sativus) y Vigna sinensis. no
afecta gramineas.
Sintomatología: Los nombres de las enfermedades causada por este patógeno son conocidas
como: la mancha anillada, tizón foliar y mancha de la hoja; son consideradas enfermedades
de importancia económica ya que provocan perdidas en los rendimientos de los cultivos de
150-200 kg/ha como en el caso del cultivo de la soya (Fundacruz 2006).
Causa daños en hojas, tallos, vainas y raíces y se trasmite por semillas (Fundacruz, 2006).
Los síntomas son lesiones en las hojas de color rojizas marrones, hojas cloróticas, lesiones
necróticas y manchas pequeñas de color marrón con halos. Los daños se producen sobre
todo en la fase reproductiva.
Pruebas de patogenicidad dieron como resultado lesiones/úlceras de color café-marrón sobre

plántulas de frijol después de 20 días de inoculación (Figura 22A , 22B y 22C).

A B C
Fig. 22. Prueba de patogenicidad del aislado hongo identificado como Corynespora cassiicola. Síntomas:
Lesiones/úlceras de color café-marrón sobre plántulas de frijol después de 20 días de inoculación (A, B y C).
Trasmisión: Sobrevive en suelos no cultivados por periodos largos de hasta dos años y
sobrevive en el suelo con o sin rastrojos. La presencia de la enfermedad es favorecida por
humedad relativa encima del 80% y temperaturas entre 15-20 º C. En época seca este hongo
no es capaz de infectar y colonizar hojas y raíces (Brooks 2004). El ciclo de la enfermedad se
completa en 7-10 días.
Los mecanismos de difusión lluvia y viento constituyen un gran problema para el control de
este hongo. Los conidios pueden afectar las hojas y el tallo.
Distribución geográfica: Encontrado en Carazo.

de hongos fueron 100 % idéntico a Corynespora cassiicola (Berk. & M.A. Curtis) C.T. Wei,
(1950). Analisis morfologico y microsocopico indicaron que los aislados de este grupo de
hongos efectivamente pertenecen a C. cassiicola.
Reporte: No existen reportes previos de este hongo infectando frijol común en Nicaragua.
Hongo patogénico.

Complejo de Fusarium spp (F. incarnatum (R.) Sacc,

equiseti (Corda) Sacc. Sensu Gordon y Chlamydosporum (Wollenv)
Taxonomía: Reino Fungi: Phylum Ascomycota; Clase Sordariomycetes; Orden Hypocreales;
Familia Nectriaceae (Agrios 2005).
Descripción: Las colonias del complejo Fusarium en medio de cultivo PDA son de color:
blanco, rosado, amarillo, amarillo anaranjado y son de forma algodonosa (Figura 23A y
Figura 23C). Durante análisis microscópico fueron observados clamidosporas (Figura 23B) y
esporas (Figura 23D), las que son típicas características de Fusarium spp.
A B
Clamidosporas
C D
Esporas
Fig. 23. Crecimiento de hongo Fusarium spp en medio PDA. Grupo de hongos asociados a un complejo
de especies (A-D) de Fusarium spp (F. incarnatum, equiseti y chlamydosporum). Las colonias en medio de
cultivo PDA son de color blanco amarillo y de forma algodonosa (A y C). Aislado 78 (A) Clamidosporas
de Fusarium spp (B). Aislado 64 (C) esporas de Fusarium spp (D).

Huéspedes: Son hongos que se encuentran en el suelo y en asociación con plantas. La
mayoría de las especies de Fusarium son saprofitos y afectan un amplio rango de huéspedes
como plantas, animales y humanos. Afecta un amplio rango de leguminosas como Vicia faba,
Pisum sativum, Lens culinaris y Vigna unguiculata.
Sintomatología: Enfermedades en las plantas causadas por especies del género Fusarium
son causa de grandes pérdidas económicas en la agricultura. Entre los síntomas más
comunes en las plantas son: pudriciones de raíces, tallo, semillas, manchas en las hojas,
tizón y marchitez (Agrios 2005). En Vigna unguiculata F. equiseti causa necrosis en la parte
alta de la planta; la enfermedad progresa en el resto de la planta que incluye pudricion en el
tallo y muerte de la planta con el tiempo (Rodrigues & Menezes 2005).
De acuerdo a pruebas de patogenicidad durante la investigación se considera que este

complejo de especies de Fusarium son considerados hongos patogénicos ya que tienen la
capacidad de infectar semillas y plantas. Dentro de los síntomas están: pudrición/lesiones en
el tallo y raíces; además crecimiento del micelio del hongo en el cotiledón (Figura 24).
A B C D
Fig. 24. Pruebas de patogenicidad de aislados del grupo de hongos complejo Fusarium spp
(F. incarnatum, equiseti y chlamydosporum). Síntomas: Pudrición/lesiones en el tallo y raíces.
Crecimiento del micelio del hongo en el cotiledón (A y B).

Trasmisión: Altas temperaturas, humedad relativa y rastrojos favorecen la dispersión del

hongo en el campo y pueden ser trasmitidos por semillas.
Distribución geográfica: Este complejo de especies de Fusarium fue detectado en lotes de

semillas procedentes de Boaco, Carazo, Estelí y Matagalpa.

de hongos mostraron 99-100 % de identidad a un complejo de especies de Fusarium (F.
chlamydosporum, equiseti e incarnatum). F. chlamydosporum (Wollenv), F. equiseti (Corda)
Sacc. Sensu Gordon and F. incarnatum (R.) Sacc. Analisis morfologico indicaron por
estructuras microscopicas que este grupo de hongos pertencen a Fusarium.
Reporte: No existen reportes previos de este complejo de Fusarium sp, afectando al frijol
común en Nicaragua. Hongo patogénico.
Macrophomina phaseolina (Tassi) Goid (Syn o anamorfo Rhizoctonia

bataticola (Taub)
Taxonomía: Reino Fungi: Phylum Ascomycota; clase Dothideomycetes; subclase Incertae
sedis; Orden Botryosphaeriales; Familia Botryosphaeriacea; Género Macrophomina.
Descripción: En medio de cultivo PDA, las colonias del hongo son de color negro y homogéneo
porque los microesclerosios están formados por todas partes (Figura 25). Los picnidios son
negros y globosos (Figura 26).
A B
Fig. 25. Crecimiento de Macrophomina phaseolina en medio de cultivo PDA aislado de semillas de frijol.
Colonias del hongo en PDA son de color negro y homogéneo porque los microesclerosios están
formados por todas partes. Los picnidios son negros y globosos. Parte superior del cultivo puro del
hongo en medio de cultivo PDA (A). Parte inferior del cultivo puro del hongo de color negro (B).

A B
Proliferación y
agregación de Picnidio y
hifas esclerotio
Fig. 26. Proliferación y agregación de muchas hifas (A). Picnidio y esclerotio de M. phaseolina (B).
Huéspedes: Wyllie (1988), reportó que este hongo se encuentra infectando al menos 500
especies de plantas que incluyen: Phaseolus vulgaris L. (frijol), Brassica oleracea (repollo);
Capsicum annuum (chiltoma); Cucumis spp. (pepino, melon); Glycine max (soya); Ipomea
batatas (camote); Sesamum indicum (ajonjoli); Zea mays (maiz) y Sorghum bicolor (Sorgo).
Sintomatología: M. phaseolina infecta las semillas las cuales no germinan o producen

plántulas débiles que mueren una vez que emergen, ataca plantas jóvenes y adultas
produciendo lesiones negras y grises y además causan pudrición de raíces. Las plantas
afectadas retardan su crecimiento y maduran prematuramente.
De acuerdo a resultados de las pruebas de patogenicidad fue considerado un hongo patogénico

capaz de infectar semillas y plántulas (Figura 27). La enfermedad causada por este hongo es
conocida como pudrición carbonosa o pudrición gris del tallo y raíces.
Es considerado como uno de los patógenos de mayor importancia económica por causar
grandes pérdidas en los rendimientos en países tropicales (Jiménez et al, 1983).

A B C
Fig. 27. Prueba de patogenicidad de aislado de M. phaseolina. Síntomas: Pudrición carbonosa sobre
plántulas de frijol (A). Lesiones en el tallo de color café-marrón (quemadura) después de 20 días de
inoculación (B y C).
Trasmisión: Es un hongo que persiste en el suelo como esclerocios que son producidos en
tejidos de las plantas infectadas. Los esclerocios pueden vivir en el suelo por periodos largos
hasta de 3 años (Dhingra et al. 1977) y puede trasmitirse por semilla, siendo el principal
mecanismo de trasmisión (Abawi & Corrales, 1990).
La temperatura y altos contenidos de humedad en el suelo favorecen la propagación de la

enfermedad.
Distribución geográfica: Encontrado en regiones de Boaco, Carazo y Matagalpa.
Método de identificación: Basados en análisis de secuencias ITS, aislados de este grupo de

hongos fueron 99-100 % idéntico a Macrophomina phaseolina (Tassi) Goid., 1947 (anamorfo/
sinonimo Rhizoctonia bataticola). Análisis morfologico y microscopico mostraron que este
grupo de muestras de hongos pertenecen a M. phaseolina.
Reporte: En este estudio es encontrado como un hongo patogénico. Esta enfermedad se

conoce como pudrición carbonosa. Reportado previamente por MAGFOR (2004) en el cultivo
del frijol.
Hongos de almacenamiento
Penicillium citrinum (Link) y Aspergillus flavus (Link)

Taxonomía: Reino Fungi; Phylum Ascomycota; Clase Eurotiomycetes; Orden Eurotiales;
Famila Trichocomaceae; Género Penicillium y Aspergillus.
Descripción: La colonia del hongo Penicillum citrinum, es de color verde debido a la presencia
de conidios (Figura 28A y 28B)). Mientras que el crecimiento de Aspergillus flavus en PDA
es de color amarillo-verde (Figura 28C). La observación microscópica de A. flavus muestra
conidióforo en el extremo con una vesícula globosa donde se desprenden conidias de color
verde (Figura 28D).
A Conidias B
Conidiófero en el extremo con una

vesícula globosa
C D
Fig. 28. Crecimiento de Penicillium citrinum en medio de cultivo PDA. La colonia del hongo es de color
verde debido a la presencia de conidios (A). Conidias de Penicillium citrinum (B). Crecimiento de Aspergillus
flavus en PDA aislado de semillas de frijol Colonia de A. flavus crece en PDA de color amarillo-verde (C).
Identificación morfológica. Conidióforo en el extremo con una vesícula globosa donde se desprenden
conidias de color verde (D).

Huéspedes: Frutas, verduras, cereales, granos, semillas y legumbres.
Sintomatología: Penicillium y Aspergillus son principalmente considerados como agentes

de enfermedades de almacenamiento de productos vegetales y legumbres. Algunas de
las enfermedades de almacenamiento de frutas, verduras, cereales y legumbres son el
resultado de infecciones causadas por patógenos en el campo, que permanecen latentes
hasta el almacenamiento. Las especies de Penicillium se encuentran comúnmente causando
podredumbres y son considerados como uno de los hongos más destructivo en enfermedades
de almacenamiento. Especies de Aspergillus que atacan granos en el campo generalmente
invaden los embriones de las semillas y causan disminución en la germinación de la misma
infectada para la siembra (Tseng et al. 1995). Es un género de hongo que se encuentra
causando moho de granos y legumbres (Agrios 2005). En granos y legumbres la producción
de sustancias tóxicas conocidas como micotoxinas es causada por algunos microorganismos,
que incluyen hongos como Aspergillus flavus y Penicillium spp. (Agrios 2005). Aspergillus
flavus tiene la capacidad de producir aflatoxinas que producen la sustancia cancerígena más
potente de origen biológico. El daño se relaciona con aspectos agrícolas y médicos (Gravesen
et al. 1994). Los patógenos son capaces de producir toxinas en las semillas almacenadas. Es
importante proporcionar semillas sanas de legumbres y granos para reducir la producción de
cualquier micotoxina.
Los resultados sugieren que el manejo de cultivos inapropiados en las prácticas de campo
y almacenamiento debe ser responsable de la aparición bastante común de Penicillium y
Aspergillus que son patógenas en frijol.
Se hicieron pruebas de patogenicidad con aislados de hongos de P. citrinum y A. flavus y

aunque causaron ciertas síntomas en semillas sanas no fueron considerados patogénicos de
importancia como los mencionados anteriormente (Figura 29).
Trasmisión: A nivel de campo y almacenamiento.
Distribución geográfica: Penicillium citrinum y Aspergillus flavus se encontraron en lotes

procedentes de Boaco, Carazo, Estelí, Matagalpa y Nueva Guinea.
Método de identificación: Basados en análisis de secuencias ITS, aislados de este grupo de

hongos fueron 99-100% idénticos a Penicillium citrinum. Mientras que aislados del grupo de
hongos Aspergillus fueron 100% idénticos a Aspergillus flavus (Link). Los análisis morfologicos
y microscópicos corresponden con los mismos resultados mediante el análisis de secuencias.
Reporte: Ya han sido reportados previamente en frijol común.

A B C
Fig. 29. Prueba de patogenicidad de aislado de Penicillium citrinum. Síntomas: Suavidez y lesiones sobre
el tallo (A, B y C) después de 20 días de inoculación (B y C).

Aspergillus niger (Link)

Taxonomía: Reino Fungi; Phylum Ascomycota; Clase Eurotiomycetes; Orden Eurotiales;
Famila Trichocomaceae; Género y Aspergillus.
Descripción: Aspergillus niger se presenta en forma de colonias aterciopeladas de color

negro (Figura 30) en medio PDA. Las cabezas conidiales son de tonos negros. Es un hongo
que elabora esporas negra produciendo moho negro.
Fig. 30. Aspergillus niger en medio de cultivo PDA aislado de semillas de frijol. Colonia aterciopelada de
color negro.
Huéspedes: Maíz, cacahuates, cereales, semillas y granos.
Trasmisión: Patógeno de postcosecha.
Distribución geográfica: Carazo, Chinandega, Jinotega y Nueva Guinea.
Método de identificación: Método convencional (medio de cultivo).

Cuadro 1. Hongos identificados e infectando el frijol común en Nicaragua (Periodo y cosecha de primera
2008)
Nombre
Hongos trasmitidos Método de Variedades Lotes de
común de la Observaciones
por semillas identificación analizadas procedencia
enfermedad
Primera vez reportado en

Muerte
Lasiodiplodia theobromae Morfológico y Boaco y Carazo Nicaragua.
regresiva y INTA Rojo
(Teleomorfo: B. rhodina) molecular (segundo lote) Hongo patogénico
gangrenosa
(Marcenaro, 2009)
Boaco, Carazo Reportado por (MAGFOR,

Macrophomina
Pudrición Morfológico y (segundo lote), 2004).
phaseolina (Rhizoctonia INTA Rojo
carbonosa molecular Matagalpa (primer Hongo patogénico por
bataticola)
lote) (Marcenaro, 2009)
Boaco, Carazo
Pudrición de Primera vez reportado en
Complejo de Fusarium (segundo lote), Estelí
raíz y tallo y Morfológico y Nicaragua.
(equiseti, incarnatum y INTA Rojo (ambos lotes) y
pudrición seca o molecular Hongos patogénicos
Chlamydosporum) Matagalpa
marchitez (Marcenaro, 2009)
(primer lote)
Primera vez reportado en

Morfológico y Boaco y Matagalpa Nicaragua.
Colletotrichum capsici Antracnosis INTA Rojo
molecular (primer lote) Hongo patogénico
(Marcenaro, 2009)
Colletotrichum Primera vez reportado en

gloesporiodes Morfológico y Nicaragua.
Antracnosis INTA Rojo Boaco
(Teleomorfo Glomerella molecular Hongo patogénico
cingulata) (Marcenaro, 2009)
Mancha Primera vez reportado en

anillada, tizón Morfológico y Nicaragua.
Corynespora cassiicola INTA Rojo Carazo (primer lote)
foliar y mancha molecular Hongo patogénico
de la hoja (Marcenaro, 2009)
Tizón del tallo Primera vez reportado en

Diaporthe/ y de la vaina y Morfológico y Boaco y Estelí Nicaragua.
INTA Rojo
Phomopsis spp Podredumbre molecular (segundo lote) Hongo patogénico
de la semilla (Marcenaro, 2009)

Cuadro 1a. Hongos de almacenamiento identificados e infectando el frijol común en Nicaragua (Periodo
y cosecha de primera 2008)
Hongos Nombre Lotes

Método de Variedades
trasmitidos por común de la de Observaciones
identificación analizadas
semillas enfermedad procedencia
Podredumbre
Boaco, Carazo (ambos Hongo patogénico (menos
de postcosecha
lotes) agresivo que los descritos en
Morfológico y
Penicillum citrinum INTA Rojo Estelí (ambos lotes) el cuadro 1.
Moho azul de molecular
y Matagalpa (primer (Marcenaro, 2009)
las raíces y
lote)
frutos
Podredumbre
de postcosecha Hongo patogénico (menos
y moho de agresivo que los descritos en
Estelí (segundo lote
granos y Morfológico y el cuadro 1.
Aspergillus flavus INTA Rojo y Matagalpa (primer
leguminosas molecular (Marcenaro, 2009)
lote)
Pudrición de
semillas

VIII. RECOMENDACIONES
• Uso de semillas libres de patógenos con alta calidad genética.
• Destacar la importancia que tienen las semillas y granos durante su transporte y

almacenamiento (temperaturas e infraestructuras óptimas de almacenamiento) ya que
algunas especies de hongos por su producción de micotoxinas causan problemas de
salud humana y animal.
• El uso o la búsqueda de variedades tolerantes a hongos patogénicos mencionados

previamente en esta investigación podría ser un importante componente en el control de
enfermedades y del incremento de la producción.
• Curado o tratamiento de las semillas con fungicidas podrían ayudar a reducir la presencia
de patógenos (protege las semillas durante la etapa de germinación y emergencia en el
campo).
• Uso de tratamientos biológicos como Trichoderma spp.
• Buenas prácticas culturales o manejo agronómico antes, durante y después de la siembra

como preparación del terreno, rotación de cultivos, barreras vivas, remover plantas
enfermas y rastrojos.
• Se requiere de mayor investigación en patología de semillas relacionada con el uso de

pruebas estandarizadas para la detección e identificación de patógenos asociados a las
semillas.
• Son necesarios mas estudios sobre la epidemiologia de las enfermedades trasmitidas por
semillas incluyendo los potenciales patógenos que fueron reportados en este estudio.
• El uso de marcadores moleculares específicos pueden ser usados en reacciones de

cadenas de polimerasas (PCR) para ser utilizados en inspecciones de semillas y en
estudios de epidemiología, ecología y control de patógenos de hongos en el cultivo del
frijol en el campo.
• Análisis sanitarios que incluyen métodos convencionales y técnicas moleculares son

necesarios implementarlos de manera rutinaria para la identificación y diagnósticos de
enfermedades y patógenos presente en semillas y plantas en diferentes regiones del país.

IX. CONCLUSIONES
El crecimiento y desarrollo de la agricultura exige continuamente que los productores produzcan
semillas de óptima calidad genética y patológica. Las pruebas de sanidad en semillas, es un
componente de relevancia para el manejo de enfermedades y para la certificación fitosanitaria
de lotes de semillas.
Una gran cantidad de hongos están presentes en las semillas de frijol, pero solamente algunos
de ellos son económicamente importantes porque reducen claramente la germinación,
afectando el rendimiento del cultivo. En este documento, resultado de diferentes análisis para
la detección e identificación de hongos trasmitidos por semillas en frijol común, fue realizado
mediante el uso de pruebas de incubación, pruebas de germinación usando sustrato estéril,
pruebas de patogenicidad y pruebas PCR para dar a conocer que hongos están presente en
las muestras y determinar e identificar la presencia de cada patógeno (incidencia).
Un amplio rango de aislados de hongos aislados de semillas de frijol se detectó y se identificaron

en diferentes lotes de semillas procedentes de regiones de Nicaragua como Boaco, Carazo,
Estelí, Chinandega, Jinotega, Matagalpa, Nueva Guinea y El Rama. Se analizaron un total de
37 lotes de semillas de frijol durante el periodo comprendido del 2008 al 2011.
Once grupos de hongos fueron detectados e identificados y de los cuales seis de ellos fueron
reportados en este estudio como primera vez afectando e infectando el cultivo del frijol y
que de acuerdo a pruebas de patogenicidad son considerados patogénicos y que algunos
aislados de hongos mostraron variación en virulencia (grado de severidad en los daños).
En la primera colecta de semillas 2008 ocho grupos de hongos fueron identificados. M.

phaseolina fue detectado en Boaco, Carazo y Matagalpa. Reportado por el MAGFOR (2004)
encontrado a través de pruebas de patogenicidad como un hongo patogénico. Ocasiona
pudrición de aspecto carbonosa tanto en planta como en semillas. L. theobromae fue encontrado
en Boaco y Carazo, reportado como hongo patogénico y como primera vez infectando el
cultivo del frijol en Nicaragua. Este patógeno causa muerte regresiva y gangregonisidad de
plantas. Complejo de Fusarium spp (equiseti, incarnatum y clamyosporum) fue descubierto
en lotes procedentes de Boaco, Carazo, Estelí y Matagalpa. No existen reportes previos de
estas especies presente en frijol en Nicaragua, por lo que igualmente pueden ser reportados
como primera vez, es importante recalcar que son considerados hongos patogénicos. Estas
especies de Fusarium presentes en las semillas de frijol reducen la germinación, afectan la
elongación del hipocótilo, produciendo plantas anormales y que una vez en campo estas
no crecen con vigor. Además provocan pudriciones de raíces, tallos y semillas al igual que
marchitez.

C. gloesporiodes fue encontrado en un lote procedente de Boaco. Catalogado de acuerdo
a este estudio como primer reporte en frijol y como patógeno ya que es capaz de infectar
y causar daños en plantas sanas (pruebas de patogenicidad); C. capsici fue encontrado en
lotes procedente de Boaco y Matagalpa y aunque es un patógeno de importancia económica
en cultivos de chiles y chiltomas aun no ha sido reportado en Nicaragua causando antracnosis
en frijol; Diaporthe/phomopsis spp detectado en lotes de Boaco y Estelí. Causan tizón del
tallo, de la vaina y podredumbre de la semilla. En este estudio son reportados por primera vez
en Nicaragua presente en el cultivo del frijol. Son considerados hongos patogénicos.
Igualmente hongos de almacenamiento como Penicillium citrinum fueron detectados de lotes

de semilla procedente de Boaco, Carazo, Estelí y Matagalpa.
Aspergillus flavus fue encontrado en lotes de semillas de Estelí y Matagalpa. Ambos hongos se
les conoce como podredumbre de postcosecha de granos, leguminosas, frutos y vegetales.
Son capaces de deteriorar las semillas y reducir la capacidad de germinación. Producen
micotoxinas que son dañinas para la salud humana y animal.
La colecta y análisis de semillas del 2010 muestran los mismos hongos encontrados e
identificados previamente por Marcenaro (2009) a excepción de Aspergillus niger (Cuadro
6). Los análisis de lotes de semillas del 2011 mostraron poca incidencia de hongos en
comparación con los del 2008 y 2010 ya que solo fueron detectados M. phaseolina, Fusarium
spp, Penicillium sp, Aspergillus flavus y A. niger.
Sintomatología en pruebas de patogenicidad y germinación usando sustrato estéril variaron

en grados de severidad. Incluyen lesiones necróticas, pudriciones, manchas y muerte
de plántulas y semillas. Estos resultados muestran la prevalencia de estos hongos en el
tiempo capaz de causar infección y enfermedad. Esto fue soportado mediante pruebas de
patogenicidad ya que cuando se inocularon semillas germinadas con estos aislados fueron
capaces de causar infección y síntomas en las plántulas no así en el control sin inocular. Esto
fue comprobado además aplicando los postulados de Koch y en las pruebas de germinación
usando sustrato estéril pues cuando las semillas no germinaron y presentaban pudrición
y crecimiento de hongos al igual que las plántulas, muestras de semillas no germinadas y
tejido de plantas enfermas fueron tomadas, esterilizadas y analizadas encontrándose que
mucho de los patógenos fueron los mismos descritos tanto morfológica y molecularmente por
Marcenaro (2009).
Se puede concluir que los hongos detectados e identificados incluyendo los de almacenamiento
en los 37 lotes de semillas disminuyen el crecimiento de las plántulas y la emergencia o
germinación de las semillas, causando problemas en la calidad de las mismas así como en
su producción.

Al analizar los resultados en este estudio, se considera que más investigaciones necesitan a
ser llevadas a cabo para entender la ocurrencia, presencia e infección de hongos trasmitidos
por semillas así como el rol que ellos tienen en la epidemiologia y evolución de enfermedades
trasmitidas por semillas.
La identificación y el diagnóstico de enfermedades y sus agentes causales (patógenos) en

plantas, representan uno de los mecanismos de mayor importancia para los análisis de sanidad
en lotes de semillas. El uso de herramientas biotecnológicas juega un papel importante para
lograr una óptima producción de semillas y reducir de esta manera los riesgos de introducir
nuevas razas de patógenos a lotes de producción de semilla. Finalmente, mencionar que este
estudio provee información elemental acerca de cómo nuevos hongos de semillas podrían
estar afectando e infectando el cultivo del frijol en Nicaragua.

X. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
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Una Publicación del

Instituto Nicaragüense
de Tecnología Agropecuaria
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www.inta.gob.ni
Financiado por:

Catálogo de Enfermedades Producidas Por Hongos en Fríjol

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Catálogo de Enfermedades Producidas Por Hongos en Fríjol

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Proyecto "Apoyo a la Producción de Semillas de Granos Básicos para la Seguridad Alimentaria de Nicaragua"

Catálogo de hongos en semillas de

catálogo de hongos EN SEMILLAS DE FRIJOL

Una Publicación del Gobierno de Reconciliación y Unidad Nacional

Fuente de financiamiento: UNIÓN EUROPEA, PROYECTO PAPSSAN

Fuente de Informacion: Universidad de Helsinki e INTA (PROGRAMA NIFAPRO)

Contenido técnico: MSc. Delfia Marcenaro Rodríguez

Fotografías: MSc. Delfia Marcenaro Rodríguez

Todos los derechos reservados © Universidad de Helsinki e INTA

Tiraje: 800 ejemplares

Managua - Nicaragua, Enero de 2013

Daños que producen los patógenos de semillas 4

V. OBJETIVO DEL CATÁLOGO 5

Muestreo de semillas en este estudio 6

Incubación de las semillas 7

Visualización fenotípica y microscópica 10

Pruebas de emergencia/germinación usando sustrato estéril (arena) 10

Pruebas basadas en técnicas de la reacción en cadena de Polimerasa (PCR) 15

Secuenciación de ADN y análisis de secuencias 15

Catálogo de hongos en semillas de frijol (Phaseolus vulgaris L.) en Nicaragua

HONGOS PATOGÉNICOS TRANSMITIDOS POR SEMILLAS 17

Lasiodiplodia theobromae (Pat) teleomorfo (Botryosphaeria rhodina) 17

Collectotrichum gloesporiodes (Penz) teleomorfo (Glomerella cingulata) 20

Collectotrichum capsici (Syd) E.J. Butler & Bisby 22

Diaporthe spp (Nitschke 1980), Anamorfo (Phomopsis)

Corynespora cassiicola (Berk. & M.A. Curtis) C.T. Wei, (1950) 27

Complejo de Fusarium spp (F. incarnatum (R.) Sacc, equiseti (Corda)

Macrophomina phaseolina (Tassi) Goid (Syn o

Penicillium citrinum (Link) y Aspergillus flavus (Link) 35

Aspergillus niger (Link) 38

Catálogo de hongos en semillas de frijol (Phaseolus vulgaris L.) en Nicaragua

1 Catálogo de hongos en semillas de frijol (Phaseolus vulgaris L.) en Nicaragua

BLAST Herramienta de Búsqueda de Alineamiento Local Básico

CNIA Centro Nacional de Investigación Agropecuaria y Biotecnología

CTAB Bromuro de hexadeciltrimetilamonio

INTA Instituto Nicaragüense de Tecnología Agropecuaria

NBCI Centro Nacional de Información de Biotecnología

PCR Reacción en cadena de polimerasa

Proyecto de Apoyo a la Producción de Semillas de granos básicos para la

PDA Papa Dextrosa Agar

Catálogo de hongos en semillas de frijol (Phaseolus vulgaris L.) en Nicaragua 2

3 Catálogo de hongos en semillas de frijol (Phaseolus vulgaris L.) en Nicaragua

El presente catálogo presenta los hongos identificados en semillas recolectadas en diferente

Daños que producen los patógenos de semillas

Catálogo de hongos en semillas de frijol (Phaseolus vulgaris L.) en Nicaragua 4

Muchos patógenos son causantes de fallas en la germinación y producción de plántulas

V. OBJETIVO DEL CATÁLOGO

5 Catálogo de hongos en semillas de frijol (Phaseolus vulgaris L.) en Nicaragua

Durante el periodo 2010 se colectaron semillas de frijol de cosecha de primera procedente de

Durante el muestreo, la muestra de semillas representan la composición del lote de semilla

El análisis de semillas colectados en el 2008 se llevó a cabo en el Laboratorio de Biotecnología,

Catálogo de hongos en semillas de frijol (Phaseolus vulgaris L.) en Nicaragua 6

Pruebas de patogenicidad y pruebas de reacción en cadenas de polimerasas (PCR) y

Incubación de las semillas

7 Catálogo de hongos en semillas de frijol (Phaseolus vulgaris L.) en Nicaragua

Macrophomina phaseolina Fusarium spp

Catálogo de hongos en semillas de frijol (Phaseolus vulgaris L.) en Nicaragua 8

9 Catálogo de hongos en semillas de frijol (Phaseolus vulgaris L.) en Nicaragua

Visualización fenotípica y microscópica

Pruebas de emergencia/germinación usando sustrato estéril (arena)

Análisis de varianza (ANDEVA) con un factor y comparación de medias basados en la prueba

Catálogo de hongos en semillas de frijol (Phaseolus vulgaris L.) en Nicaragua 10

11 Catálogo de hongos en semillas de frijol (Phaseolus vulgaris L.) en Nicaragua