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ZUR PHYSIOLOGIE DER ORGANISCHEN SAUREN IN

GRUNEN PFLANZEN.
(Aus dem Botan. Institut, Leipzig.)
I. WECHSELBEZIEHUNGEN IM STICKSTOFF- UND SAURESTOFF-
WECHSEL VON BEGONIA SEMPERFLORENS.
Von
W. RUHLA~D und K. WETZEL.
(Eingegangen am 10. Dezember 1925.)

Die enorme Aciditat der Zellsafte in Begonienbl/~ttern, die ihrem


hohen Gehalt an freien organischen Sauren entsprieht., gab uns den
Anstol~, st.offwechselphysiologische Versuche fiber die Ent.st.ehung und
das welt.ere Sehicksal dieser S/~uren anzustellen, da hierfiber ffir grfine
Pflanzen bekannt.lich bistier noch so gut. wie nichts bekannt, ist.. Nach.
stehend sollen in drei ,,kurzen Mitt.eilungen" einige bemerkenswerte
bisher erzielte Ergebnisse unserer Versuche sehon jet.zt mitgeteilt wet-
den, w~hrend fiir die ausffihrliche Darstellung noeh andersartige Ver-
suehe, aueh mit. weiteren Pflanzen, anzustellen sein werden. Wir wollen
uns dabei zun~chst, auf die in grfSeren Mengen auftretenden S~uren
besehr~nken und vor ahem aueh yon den als intermediate Spaltungs-
produkte bei der Glykolyse zutage tretenden Dreikohlenstoff-Sauren
(Milch- und Brenztraubens~ure) absehen, da sie sowohl hinsiehflieh
Entst.ehung wie Bedeumng yon den fibrigen seharf zu trennen sind.

A. Ammoniak- und Oxalsiturebildung.


1. Eine yon uns ausgebildete Methode ermSglicht eine sehr be-
friedigende Bestimmung des Atmungsquot.ienten (mitt.1. F e h l e r -
0,8 vii. des Quot.ient.en). Die B1/~tter zeig~n bei fund 30 ~ C einen durch-
CO~
schnittlichen anf/~ngl~ehen Wert. yon ~ ----- 1.1, der bei fortdauernder
Verdunkelung in 2,--8 Tagen auf 1,47--1,85 anstieg, um nach weiteren
4--5 Tagen et.wa auf den anf~nglichen Weft abzusinken. Wie weitere
ehemisehe Untersuehungen bekraftigten, beruht, dies auf anf~nglieh
vorwiegender Verbrennung yon Kohlenhydraten, naeh deren ann~hern-
dem Verbraueh sodann auf einem Cberwiegen organiseher S~uren, und
bei der sehlieBlichen Senkung auf einem neben diesen immer stiirker
hervort.ret.enden Abbau yon EiweiBstoffen und deren Spalt.produkt.en,
der in s~urearmen Vergleiehspflanzen den Atm.-Quot.ienten in diesem
Stadium weit. unt~r 1 herabdriiekt.e.
W. Ruhland und K. Wetzel : Zur Physiologieder organischen8iiuren usw. 559

2. Um das stoffwechselphysiologische Schicksal der organischen


Sauren (normal in den Blattern durchschnittlich bezogen auf das
Trockengewicht 20 vH. Oxal-, 0,5 vH. ~pfel-, [Naehweis: Fumarsaure
und Ag-Salz], 0,3 vii. Bernsteinsaure und 0,5 vH. andere Sauren;
darunter sieher Milchsaure; fliichti'ge Sauren nieht gefunden) verfolgen
zu kSnnen, wurden die vorhandenen quantitativen Bestimmungs.
methoden kritisch gepriift, die groBenteils durehaus unzureiehend be-
funden wurden. Mit ihrer Unzuverlassigkeit hangt offenbar der erwahnte
tiefe Stand unserer physiologisehen Kenntnisse zusammen. Unser neuer
analytiseher Untersuchungsgang gab sehr befriedigende Ergebnisse, ins-
besondere lieBen sieh Oxal- und ~pfelsaure seharf voneinander trennen
und warden mit einem mittleren Fehler yon etwa 3 vH. bestimmt.
Aueh war es mSglich, bei den Sauren die freien und an Basen gebundenen
Mengenanteile in der Pflanze zu veffolgen. Damit war auch die l~I6gllch-
keit gegeben, tagesperiodische Schwankungen im Auftreten der einzelnen
S~uren, ihr Verhalten bei verschiedener Temperatur und Ernahrung,
Zu- und Ableitungen in den Organen usw. festzustellen. Insbesondere
sollte abet die bei Schimmelpflzen aufgetauchte Streitfrage, ob und
inwieweit die einzelnen organischen Sauren im Kohlenhydrat- (BUTK~.-
W~TSCH U.a.) oder EiweiB- (MAze, KOSTYTSCHEW) Stoffwechsel ent-
stehen, fiir h6here Pflanzen ihrer LSsung n~her gebracht werden.
3. Die Begonien enthalten morgens in ihren Blattern normal und
regelmaBig auf den Gesamt-N bezogen das 5--10faehe an praformiertem
NHa als gew5hnliehe Vergleiehspflanzen, die keinen bedeutenden Gehalt
an organischen Sauren aufweisen.
4. Dieser NHa-Gehalt steigt bis zum Abend noeh welter auf etwa
das 3faehe des Morgenbetrages an.
5. Dem NH a gegeniiber tritt der sogenannte ,,Rest-N" (Aminos~uren
und organisehe Basen), vergliehen mit gewShnliehen Pflanzen, auffallend
Rest-N
zuriick. ])as Verhaltnis ~ betragt bei diesen etwa 50,0, bei Begonia
NHa -N
dagegen nur etwa 2---3. Sehr auffallig ist ferner, dal~ in ihr Amide
normalerweise so gut wie v61lig ~ehlen.
6. Bei relchlieher N-Ernahrung in Wasserkulturen treten die Amino-
sauren noch starker hinter NH3 zuriiek. ])ieser hauR sieh besonders
naeh heil3en Tagen und zumal in jungen Blattern an und kann dann
75 vii. desjenigen der Aminosauren und der organischen Basen betragen!
7. Eine weitere, ganz enorme Steigerung des NHa-Gehaltes kann
man aber im Versuch herbeifiihren, wenn man gleichzeitig dutch an-
dauernde Verdunkelung fiir einen (analytiseh veffolgte~) weitgehenden
Abbau der Kohlenhydrate sorgt und dureh hohe Temperaturen (28 bis
35 ~ C) den Eiweil~abbau forciert. Niia nimmt dann, vergll'chen mit den
ebenfaUs stark vermehrten, aber offenbar sofor~ weiter abgebauten
560 W. Ruhland und K. Wetzel:

Aminos~uren derart rapid zu, dab er sie schon nach 11 Stunden iiber-
trifft und sein N-Gehalt nach 48 Stunden den exorbitanten Betrag
yon z . B . 171 vH. des ihrigen, d. i. das zehnfache des normalen und
nach i. g. 106 Stunden nahezu 30 vH. des gesamten N ausmaeht, wi~hrend
die S~ureamide hierbei wieder vSllig zurficktreten. Aueh sie seheinen
sehr raseh zu NH3 abgebaut zu werden.
8. Dieses Verhalten erinnert au//aUend an dasjenige yon Aspergillus
niger in Peptonkulturen, der naeh BVTX~WITSC~ 57,8 vH. des Pepton-N
in NH3-N fiberffihrte, falls die Versuehsbedingungen die gleiehzeitige
Bildung freier (zur Neutralisation des NHa verwendeter) Oxals/~ure ge-
statteten. Diese Rolle der S~uro wird dadureh offenbar, dab der Pilz
bei CaCOa-Gegenwart nur wenig NH3 und viel Aminos~uren bildet, sich
dann also wie andere zu ausgiebiger Bildung freier S~ure unfiihige
Pilze (Penieillium, Mucor) verh~lt.
9. So mui~ offenbar auch die exorbitante NHz-Anhau/ung in Begonien
mit deren auflerordentlicher F5higkeit zur Bildung /reier Sdiuren (PH = 1,6
big 1,3) im Zusammenhang stehen. I n der T a t sinkt mit experimenteller
Herabminderung derselben aueh die NHa-Produktion. Wenn z. B.
durch andauernde Verdunkelung und hohe Temperatur der Gehalt an
freier S~ure (teils infolge Neutralisationswirkung des gebildeten NH3,
tells dureh totale Oxydation), nahezu gleieh Null geworden ist, so wird
die NH3-Produktion zugunsten der Aminos~uren sehr stark abgebremst,
eine Umstimmung, welche mit derjenigen des Aspergillus infolge CaCO3-
Zusatzes augenf~lligst fibereinstimmt. Die H'-Konzentration dfirfte
somit bei der Desaminierung der Aminos~uren ein begrenzender Faktor
sein, obwohl die Menge sauren Oxalats auch dann. noeh ausreieht, um
die seit BUTKEWISCH bekannte, bei gewShnliehen Pflanzen eintretende
NHs-Vergiftung zu verhindern.
10. I m Tierk6rper und - - nach N. N. I w x ~ o w - in gewissen Pilzen
f/~llf, die Rolle der NH3-Entgiftung dem Harnstoff, bei gewShnliehen
griinen Pflanzen - - wie zuerst BOUSSINGAULT vermutete, SCHL~LZ~ und
namentlich PI~A~XSCHNIXOW bewiesen - - den Amiden (Asparagin, Glut-
amin), bei Begonia und zum Teil bei Aspergillus den organischen Sauren
zu. Die F/~higkeit der Begonia, NH3 in noeh grSf3erer Menge als oben er-
w~hnt, zu entgiften, laBt sich dureh Versuehe mit reiehlicher N-Er-
n~hrung (NH4-Salze oder Nitrate) dartun. Wir kSnnen demnach wohl
die physiologisehen Tylgen ,,Amid"- und ,,Ammonium"- (oder ,,Saure"-)
Pflanzen unterseheiden.
11. Nitratkulturen sowie alte Begonienbl~tter, denen ein geringer
Gehalt an freier S/~ure eigen ist, weisen, im Gegensatz zu normalen
jiingeren B1/~ttern sowie yon Pflanzen aus NH4-Kulturen mit ihrem
entspreehend hohen Gehalt an freier S~ure, grSflere Amidmengen auf.
Zur Physiologie der organischen Siiuren in griinen Pflanzen. 561

12. Die unter 9 behandelt~ Parallelit~t yon Hemmung der S~ure-


bildung einerseits und Anh~ufung yon Aminos~uren anderseits bei
lange andauernder Verdunkelung seh~int darauf hinzudeuten, dal~ in
friiheren Stadien der Verdunkelung sowohl als unter norma]en Ver-
h~ltnissen bei der Desaminierung yon Aminos~uren Oxy- bzw. a-Keto-
s~uren entstehen, welche Vorstufen der Oxals~ure sind. Die Kohlen.
hydrate sind dureh die Verdunkelung sehon ffiihzeitig praktisch ver-
sehwunden.
13. Zu einer weitergehenden Kl~rung des Ursprunges der organischen
S~uren hoffen wir dureh Ern~hrungsversuehe mit Salzen derselben, mit
Aminos~uren usw., und dureh Untersuehung des natfirllchen Stoff-
weehsels weiterer geeigneter Pflanzen, auch bei ana~rober Atmung,
bald beitragen zu kSnnen.

B. Der Einflut~ N-haltiger und N-freier N~thrl@sungen auf den


0xals~turegehalt.
In Nitratkulturen (ToTTINGHAMseheN/~hrl6sung) weisen die Pflanzen
den hSchsten Gehalt an Gesamtoxals~ure (21,3 vH. vom Troeken-
gewieht) und die geringste Menge freier Oxals~ure (1,1 v.H vom Trocken-
gewicht) auf. Dabei blieb die Ersetzung yon Ca(NO~)~ dureh KNOB
ohne Einflu$ auf SKurebildung und S~urebindung. In (NH~)~SOr
Kulturen (in der TOTTI~OHAMschenN~hrlSsung wurde das Nitrat durch
dem N-Gehalt entspreehende Mengen yon (NHa)~S04 ersetzt) betr~gt der
Gehalt an Gesamtoxals~ure 18,64 vH., darunter jedoch 4,6 vii. freie
Oxals/~ure. Vielleieht riihrt diese (~berlegenheit der Nitratpflanzen an
Oxals~ure fiber die Ammonpflanzen von einer oxydativen Wirkung yon
N03' her. Dagegen kann yon einer Art ,,Abfangwirkung" des Ca"
bzw. K" keine Rede sein, denn einmal wird gebundene Oxals/~ure leicht
abgebaut (ST.~HELIN)und andererseits hat auch die auBerordentliche
Kleinheit des LSsliehkeitsproduktes [Ca"] [Oxalat"] die Abbaureaktion
nicht verzSgert, wie der Vergleieh mit den K-Pflanzen zeigt. Offenbar
sind hierffir geniigende YIengen yon Oxalatanionen, gleichgiiltig,
ob aus freier oder gebundener Oxalsaure, in LSsung. Die einfachen
Folgen des Massenwirkungsgesetzes sind yon manchen friiheren Au-
toren, welche die Oxalatanhaufung in der Pflanze studierten, nicht
beachtet worden.
Dem versehiedenen Gehalt der Nitrat- und HH~-Pflanzen an freier
Oxalsaure entsprieht aueh eine versehiedene H'-Konzentration (Nitrat:
PH = 1,86; (NH4)2SO~ : p ~ = 1,56) des Zellsaftes der Blatter. Die
Interpretation frfiherer Autoren, wonach der H'-Konzentration die Rolle
des die Saurebildung begrenzenden Faktors zugesehrieben wurde, kann
in dieser allgemeinen Form nieht einmal ffir die S/~ureanhaufung noch
weniger fiir die Saurebildung best~itigt werden. Vielmehr zelgte sich
562 W. Ruhland und K. Wetzel:

ein innererl), enger Zusammenhang der Oxalsa'urebildung mit d~m N-


Sto//wechsel der Pflanzen. Ammoniumkulturen und in N-freier N~hr-
15sung gezogene Pflanzen besitzen etw~ denselben PH (1,56 bzw. 1,54)
und denselben Gehal~ an freier S~ure bezogen auf das Troekengewicht.
Die physiologisehe Ans~uerung der Ammoniumkulturen wird hinsieht-
lich der pflanzlichen H'-Konzentration durch eine st~rkere Pufferung des
Zellsaftes (15sliehe Oxalate) ausgegliehen. Trotz der gleichen H'-Kon-
zentration des Ze]]safts bleibt der Gehalt an Gesamtoxals~ure der in
~I-freier LSsung gezogenen Pflanzen mit 14,2 vH. wesentlieh hinter
dem der Ammoniumkulturen zuriiek (18,6 vH. yore Trockengewicht). In
noch ~lteren N-arm gezogenen Kulturen (71 Tage) f i e l d e r Gebalt an
Gesamtoxals~ure unter Anstieg der gebundenen S~ure bis auf 7,0 vH.
vom Trockengewieht. Der besonders starke Rfickgang an freier Oxal-
s~ure ohne Vermehrung des Gesamtoxals~uregehaltes weist auf eine
entspreehend starke Hemmung in der Oxals~urebfldung bin.
Die N-Analysen der drei versehiedenen Kulturen zeigten, dal~ das
pr~formlerte NH.~ in den Nitrat- und Ammoniumkulturen bis zum
15.fachen Betrag normaler Pflanzen anstieg, wiihrend in n-arm ge-
zogenen Kulturen kaum fiberhaupt noeh NH8 gefunden wurde.
Um so bemerkenswerter war der hohe Gehalt an Aminos~uren
in diesen Kulturen, der - - bezogen auf den To~al-N - - den der
beiden anderen Kulturen um 70 vii. iibertraf. Die Desaminierung der
Aminos~uren erfolgt in diesen Pflanzen also trotz des erheblichen
Eiweil~mangels sehr langsam; fibereinstimmend damit ist die Eiweif~-
synthese wenig ergiebig und der Eiweil~gehalt geht infolgedessen auf
1/3--1/a normaler Pflanzen herab. Der Gehalt an 15slichem • im Ver-
h~ltnis zum Gesamt-N ist wesentlich geringer als bei den anderen
Kulturen (Fehlen yon Ammoniak). Das infolge der geringen Des-
aminierungsf~higkeit dieser Pflanzen im Minimum auftretende NHz
wirkt hier als begrenzender Faktor ffir die Eiweifisynthese, der eine
ebenso geringe Produktion an Oxals~ure entspricht. Dagegen sprieht
die Tatsaehe, dal3 in n-arm gezogenen Pflanzen trotz ihres Reichtums
an Kohlehydraten (das Doppelte der NOz-Kulturen) und der damit
in Zusammenhang stehenden experimentell ermittelten Steigerung der
Atmungsintensit~t der Gehalt an Oxals~ure fortlaufend f~llt, gegen
eine Entstehung der Oxals~ure im normalen Kohlehydrat-Stoffweehsel.
Aueh das vSllige Fehlen fliiehtiger S~uren bzw. der als Oxals~ure-
vorstufe in Frage kommenden Essigsgure sprieht gegen eine Ent-
stehung der Oxals~ure aus Kohlehydraten, da ~ wie bekannt ~ deren
Abbau fiber Acetaldehyd geht und dieser der CAN~izzA~osehen Reaktion
1) Also nieht etwa nur die ehemisch selbstverst~ndliehe, ~ul~erlicheTatsache,
dab in Ca(NOs)~-Kul~uren das NOa' dem Eiweil]aufbau dient und das Ca" sieh
an Oxals~ure gebunden wiederfindet.
Zur Physiologie der organischen S/~uren in griinen Pflanzen. 563

entspreehend unter teflweiser Reduktion zu Xthylalkohol stufenweise


zu Essigs~ure oxydier$ wird. Als Hinweis dafiir, dab der geringe Oxal-
s~uregehalt N-arm gezogener Pflanzen nicht dureh einen stirkeren Ab-
bau der Oxalsiure bedingt wird, sondern auf einer Hemmung der
Bildung dieser SKure beruht, m6ge die geringe Desaminierungsfi~hig-
keit sowie die Tatsaehe dienen, da$ in diesen Kul$uren die ~pfelsiure
zugunsten der Bernsteins~ure versehwindet, was alles gegen eine kr/~f-
tigere Oxyda$ionst~$igkeit in diesen Pflanzen sprieht.
Eine ErhShung des Oxals~uregehalts liBt sieh in diesen Pflanzen
ers$ wieder durch ~berfiihrung in eine Nitrat- oder Ammoniumsalz-
15sung erzielen, wodureh ihnen die Einbeziehung der Kohlehydrate in
den N-Stoffweehsel ermSglieht wird. Die rasch wachsenden Pflanzen
(4---Sfaehes Erntegewieht) steigern dann ihren Oxals~uregehalt schon
nach 8 Tagen um 33 vH. und naeh 4 Wochen auf 240 vH. ihres an-
f/~ngliehen Gehalts.
In diesem Zusammenhang verdient aueh erw/ihnt zu werden, dab
Knollenbegonien in der ruhenden ]{nolle (p~ -- 4,52) einen versehwin-
dend geringen Gehal~ an freier Oxals~ure zeigten, der sehon bei leichter
Ankeimung (p~ = 3,60) auf das Vierfache stieg und bei etwas lgngerem
Antreiben im Dunkeln in den Pflanzen (pTr ---- 1,44) den 3000fachen
ursprfingliehen Betrag erreichte. Wir betonen jedoeh, dab wir die Frage
der Siurebfldung bei der NHa-Koppelung mit Kohtenhydraten in der
EiweiBsynthese an anderen Pflanzen noeh exakter prtifen zu miissen
glauben. Aus den hydrolytiseh entstandenen Aminosiuren scheint sich
aueh in jungen Blg~tern ohne Kohlenhydratzufuhr EiweiB nieht mehr
bflden zu kSnnen, vielmehr dfirfte dazu ein, wenigstens f~ilweiser Abbau
der Aminosguren zu NHa notwendig sein. Dami~ wiirde eine weif~re
M6glichkeit, die yon uns beobach~ete Siurezunahme aueh bei der EiweiB-
synthese dureh voraufgegangene Desaminierung und Oxydation des C-
Skelettes zu erkl~ren, gegeben sein. Auch dies ist erst durehweitere Ver-
suehe zu beweisen. Immerhin kSnnenwir schon jetzt feststellen, dab eine
Reihe yon Versuchen durehaus gegen eine Oxals/~urebfldung im Kohlen-
hydratstoffwechsel spricht, w/ihrend andererseits alle Versuehsergebnisse
mit einer solehen im Eiweil~stoffwechsel in Einklang zu bringen sind.

C. Tagesschwankungen im N- und SJturestotfwechsel.


Allgemein wurde eine Vermehrung der freien Oxalsiure in den Bl/i~-
tern yon Begonia semperflorens vom Abend zum Morgen konstatiert.
Die Gr61~e der Sgurezunahme war abhingig yon der Temperatur und
dem BlaStalter, und zwar derart, daB niedere Temperaturen einen
grSBeren S~ureanstieg zulieBen als hohe Temperaturen (infolge geringeren
S/~ureabbaues) und junge Blitter eine stirkere Vermehrung der freien
564 W. Ruhland und K. Wetzel: Zur Physiologie des organischen S~uren usw.

Oxals~ure (~- 80 vii. vom Abendwert) als alte BlOtter (~- 7 vH. vom
Abendwert) aufwiesen. Dagegen ver~nderte sich in allen F~llen der
Gehalt an gebundener Oxals~ure nut wenig.
Gleichzeitig angestellte Stickstoffuntersuehungen haben ergeben, dab
i n jungen Bl~ttern nachts eine kr~ftige Desamlnlerung von Aminos~uren
stattfindet, so dab deren Gehalt in jungen Bl~ttern morgens (bei Ver-
hinderung der Zuleitung aus anderen Organen) um etwa 50 vH. fallt,
w~hrend er bei ErmSglichung der Zuleitung um 37 vH. ansteigt. - -
In alten Bl~ttern fiberwiegen nachts die hydrolytischen Spaltungs:
prozesse des Eiweil~es in hohem MaBe, woh~ngegen eine erhebliehe
Desaminierung im Gegensatz zu den jungen Bl~ttern nicht stattfindet.
Es konnte gezeigt werden, dab in alten Bl~ttern bei Verhinderung der
Ableitung die Aminos~uren fiber Nacht um mehr als 200 vH. ansteigen,
w~hrend sie bei offenen Ableitungswegen um 33 vH. fielen. Diese Be-
funde hinsichtlieh des n~chtlichen N-Stoffweehsel an alten und jungen
Bl~ttern ffihren notwendig zu dem Schlusse, dab w~hrend der Nacht
gr5~ere Mengen yon Aminos~uren aus den alten Bl~ttern auswandern
und nach den jungen Blgttern geleitet werden. Der NtIs-Gehalt sinkt
naehts in alten und jungen Bl~ttern. W~hrend das NH8 jedoch in
jungen Bl~ttern zur Eiweil~synthese verwendet wird, wandert es aus
alten Bl~ttern zum groBen Tell aus oder wird - - falls die Ableitung
verhindert wird - - in Amid fibergeffihrt. In jungen Bl~ttern finder
somit bei niederen Temperaburen nach~s eine kr~f~ige Desaminierung
der eigenen und zugeleiteten Aminos~uren und erhebliche EiweiB-
synthese start (vgl. aueh die ausffihrliche Arbeit yon K. MOTHES,
S. 472, Bd. I dieser Zeitschr.), in alien Blgttern fiberwiegen nachts reine
Spaltungsvorg~nge des EiweiBes, deren Produkte zum groBen Tell in
junge BlOtter abgeleitet und dort verarbeitet werden. Demzufolge steigt
bei Verhinderung der Ableitung der Gehalt an wasserlSslichem N auf
das 21/2fache des Abendwertes, w~hrend er in jungen Bl~ttern unter
denselben Bedingungen um etwa 30 vH. f~llt.
Der Grad der Desaminierung der Aminos~uren und der Eiweifl-
bildung einerseits und die Zunahme an freier Oxalsgure anderseits
laufen also in alten und jungen Bl~ttern durchaus parallel. Dieselben
Zusammenh~nge ergeben sich auch aus der Betrachtung der bereits
erw~hnten versehieden grol~en t~glichen Oxalsgureschwankung in alten
wasserlSslieher N.
und jungen Bl~ttern und der Ver~nderung des Wertes
Eiwei[t N.