AISLAMIENTO, CULTIVO DE BACTERIAS

Para aislar e identificar una especie bacteriana del medio y de otra especie que pueda
confundirse morfológicamente es necesario usar medios de cultivos, ya que nos permiten
diferenciar las características del crecimiento de las bacterias y establecer su identidad según
el medio de cultivo que se use.
Los microorganismos se encuentran en muchos ambientes naturales como el agua, el suelo,
aire, el hombre y otros seres vivos, alimentos, entre otros. Haciendo parte de los diferentes
ecosistemas. Por esto se deben usar los medios de cultivo adecuados que se asemejen al
ambiente si queremos posibilitar el crecimiento de la bacteria.
CULTIVO
En microbiología, un cultivo es un método para la multiplicación de células o
microorganismos, o para el crecimiento de tejidos en el que se prepara un medio óptimo para
favorecer el proceso deseado; es empleado como un método fundamental para el estudio de
las bacterias.
Esto se lleva a cabo al cultivarlas en un medio sólido de agar. Los medios de cultivo contienen
distintos nutrientes que van, desde azúcares simples hasta extracto de caldo de carne.
Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos
tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo sólido donde las células que se
multiplican no cambian de localización; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria
individual genera por escisión binaria una colonia macroscópica compuesta por decenas de
millones de células similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en
un nuevo medio crecerá como cultivo puro de un solo tipo de bacteria.
Si hablamos de cómo se cultivan las bacterias tenemos que hacerlo también de unas
condiciones generales que deben darse:
Nutrientes adecuados disponibles. Un cultivo de bacterias adecuado para investigar ha de
contener como mínimo carbono, nitrógeno, azufre, fósforos y sales inorgánicas.
Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar
peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de nitrógeno y carbón. A
menudo se añaden al medio de cultivo ciertos colorantes.
Consistencia del medio. Partiendo de un medio liquido podemos modificar su consistencia
añadiendo productos como la albúmina, gelatina o agar.
Luz ambiental. La mayoría de los microorganismos de un cultivo de bacterias crecen mucho
mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar.
Temperatura. En líneas generales los patógenos humanos crecen en rangos de temperatura
mucho más cortos, alrededor de 37ºC.
Humedad y pH. Un mínimo de humedad en medio y atmosfera es necesario para el
desarrollo, así como un pH neutro.
Esterilidad. Fundamental recordar que todos los medios de cultivo han de estar
perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida que puedan alterar,
enmascara o impedir el crecimiento.

AISLAMIENTO BACTERIANO
Es la separación de un determinado microorganismo del resto que le acompañan usando
técnicas usadas en el laboratorio de microbiología para la transferencia de un
microorganismo de un ambiente a otro con la finalidad de inducir su crecimiento para su
identificación.
TECNICAS DE AISLAMIENTO
 Siembra por estriado en placa de petri
 Vaciado en placa
 Cultivo por dilucion y agitacion
 Aislamiento con varilla angular de vidrio
 Aislamiento con apicadores de algodón
 Siembra por picadura
por estría en placa
Es el método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos. Para ello, con un asa
de siembra se toma una muestra de la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre
la superficie de un medio sólidopreparado en una placa Petri (a las placas Petri también se
les denomina simplemente placas).
Conforme se van haciendo estrías en zigzag con el asa, cada vez se van depositando en la
superficie del medio menosmicroorganismos.
A continuación, se flamea el asa, se toca en la región donde se han realizado las últimas
estrías y se continúa la siembra con la misma técnica, en la superficie de medio sin sembrar
aún. Repitiendo esteproceso varias veces se logra separar células individuales.
A continuación, las placas se incuban en un lugar adecuado, permitiendo que las células
aisladas experimenten un número suficiente de divisiones para formar colonias visibles.
Aunque cada colonia posiblemente representa un clon derivado de una sola célula, no
podemos asegurarlo. Quizás, dos células quedaron depositadas tan juntas que han originado
una única colonia mixta. Por tanto, para asegurarnos de que hemos obtenido un cultivo
axénico, conviene repetir el procedimiento a partir deuna colonia bien aislada en la primera
placa. Las colonias que se desarrollen la segunda vez, serán, casi con todaseguridad, cultivos
axénicos.
TIPIFICACIÓN BACTERIANA
La tipificación de las bacterias se basa en el estudio de sus características mediante técnicas
que oscilan entre las más sencillas tinciones y los más complejos estudios moleculares. Una
técnica útil y de bajo costo consiste en la tinción de Gram y posterior observación de la
muestra mediante el microscopio de luz para estudiar las bacterias, su forma, tipo de
agrupación y color: grampositivas o gramnegativas. La mayor parte de las bacterias puede
ser ubicada en uno de estos dos grupos o en un tercero, de acuerdo a la ácido-alcohol
resistencia que presenten (Ziehl-Neelsen).
Algunas propiedades genéticas y fisiológicas constituyen herramientas utilizadas para definir
algunas características de las cepas, como los serotipos y biotipos, determinación de especies
en algunos grupos de bacterias, producción de toxinas. Los métodos más sensibles se basan
en el análisis del material genético. Cabe mencionar que éstos han diversificado sus
objetivos; se emplean en la identificación de subgrupos de genes esenciales para el
crecimiento, colonización, adhesión e invasión bacterianos.