RESUMEN

La investigación fitoquímica de Muehlenbeckia tamnifolia, recolectada en Loja-Ecuador,

condujo al aislamiento de nueve compuestos conocidos identificados como: acetato de
lupeol (1); ácido cis-p-cumárico (2); lupeol (3); β-sitosterol (4) ácido trans-p-cumárico (5);
ácido linoleico (6) (+) - catequina (7); afzelina (8) y quercitrina (9). Las estructuras de los
compuestos aislados se determinaron en base al análisis de los datos de RMN y EM, así
como a la comparación con la literatura. La actividad hipoglucémica de extractos crudos y
compuestos aislados se evaluó mediante la capacidad de inhibir las enzimas α-amilasa y α-
glucosidasa. El extracto de hexano mostró una actividad inhibidora débil sobre la α-
amilasa, con un valor IC50 de 625 μg · mL-1, mientras que los otros extractos y
compuestos aislados fueron inactivos a la dosis máxima probada. Los resultados en α-
glucosidasa mostraron efectos más favorables; los extractos hexánico y metanólico
exhibieron una fuerte actividad inhibidora con valores IC50 de 48.22 μg · mL-1 y 19.22 μg ·
mL-1, respectivamente. Cuatro de los nueve compuestos aislados exhibieron una fuerte
actividad inhibidora con valores de CI50 por debajo de 8 μM, mucho más altos que la
acarbosa (377 μM). El ácido linoleico fue el compuesto más potente (CI50 = 0,42 μM)
seguido de afzelina, (+) - catequina y quercitrina.

1. Introducción

La diabetes se define como un trastorno metabólico complejo que afecta el metabolismo de las
proteínas, los carbohidratos y las grasas, todo debido a la insuficiencia de insulina o la disfunción
de la insulina. Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), esta enfermedad afecta a más de
382 millones de personas en todo el mundo [1]. Los factores de hiperglucemia y dislipidemia,
aumentados en la diabetes, están involucrados en las fallas cardiovasculares que con frecuencia
afectan a los pacientes. La diabetes se considera un problema de salud pública, que afecta a
personas tanto en países desarrollados como en vías de desarrollo, sin diferencias de raza. Según
los perfiles de país de la diabetes, la diabetes mellitus representa el 4% de las muertes totales en
Ecuador, y ocupa el sexto lugar en las causas de muerte de la población, seguido de las
enfermedades respiratorias [2]. Por esta razón, es un tema prioritario para la salud pública que
necesita la atención tanto del gobierno como de la academia. La medicina popular está bien
reconocida en Ecuador, donde casi el 80% de la población utiliza las plantas como fuente principal
de tratamiento médico. Varias plantas se utilizan con éxito como antidiabéticos en la medicina
tradicional, y la OMS ha recomendado la evaluación de estas plantas y sus derivados de productos
para su uso potencial como terapia oral [3]. Es necesaria una validación científica de las plantas
medicinales para demostrar eficacia, potencia y seguridad. Aunque muchas plantas tienen efectos
beneficiosos, también pueden ser tóxicas, especialmente en tratamientos largos como los
requeridos en terapias antidiabéticas. Uno de los enfoques terapéuticos utilizados para tratar la
diabetes consiste en la inhibición de las enzimas, que pueden hidrolizar los polisacáridos y
convertirlos en azúcares simples. Este tipo de enzima, como la alfa-amilasa, cataliza la hidrólisis del
enlace α-1-4-d-glicosídico de los polímeros de glucosa tales como el almidón. La alfa-glucosidasa
actúa hidrolizando los disacáridos a la glucosa. Los inhibidores de estas enzimas pueden
interrumpir la absorción de glucosa en el tracto digestivo, prolongando el tiempo de digestión de
los carbohidratos y disminuyendo la tasa de absorción de glucosa. Como consecuencia, el nivel de
glucosa en sangre posprandial se reduce [3]. Por este motivo, tanto los ensayos inhibidores de la
alfa-amilasa como de la alfa-glucosidasa se han usado ampliamente para probar medicamentos y
extractos de plantas.

Polygonaceae es una familia caracterizada por la producción de una gran variedad de metabolitos
secundarios, muchos de los cuales exhiben actividad farmacológica potencial, como
antraquinonas, naftalenos, estilbenoides, esteroides, flavonoides glicosilados, leucoanthocyanidins
y ácidos fenólicos, entre otros [4]. Se ha informado que algunas especies tienen un potencial
antidiabético, como Muehlenbeckia sagittifolia [5], Coccoloba uvifera [6], Rumex spp. [4] y Rheum
spp. [7,8,9]. En Ecuador, esta familia representa nueve géneros y 42 especies [10]. El género
Muehlenbeckia está restringido a Sudamérica, Australia y Nueva Zelanda e incluye especies
ornamentales y medicinales. Estas especies se utilizan con frecuencia para tratar las úlceras
gástricas y se utilizan como hojas maceradas para tratar afecciones renales y como infusiones para
aliviar el dolor de la artritis [11].

Se han reportado estudios fitoquímicos para especies pertenecientes a este género. Los
flavonoides glucosilados como la catequina y la quercitrina, aislados de M. platyclada, han
mostrado actividades antinociceptivas y antiinflamatorias. Una serie de antraquinonas tales como
emodina, fisioterapia y emodin-8-β-d-idopiranósido, aisladas de las hojas de M. hastulata,
mostraron actividad antioxidante prometedora medida por el método DPPH [12,13].
Muehlenbeckia tamnifolia (Kunth) Meisn, conocido como Anku yuyu lutu yuyu, es utilizado por
comunidades indígenas en Ecuador para tratar enfermedades renales, en baños para aliviar el
dolor de huesos, como enjuague bucal para el dolor de muelas y, en combinación con otras
plantas, para tratar bultos e inflamación . También se aplica como desinfectante y para tratar
heridas cutáneas purulentas [14]. Los estudios químicos previos sobre las raíces de M. tamnifolia
mostraron la presencia de antraquinonas como el ácido crisofánico y la emodina [15]. El objetivo
de este trabajo fue evaluar las actividades inhibitorias de diferentes extractos y compuestos
aislados de M. tamnifolia sobre α-amilasa y α-glucosidasa.

2. Resultados y discusión

El estudio fitoquímico de M. tamnifolia condujo al aislamiento e identificación de nueve

compuestos, cuyas estructuras se muestran en la Figura 1. Las propiedades espectrales de estos
compuestos conocidos, incluyendo los datos de 1H-RMN y 13C-RMN, fueron idénticos a los
descritos previamente en la literatura. Entre las especies de este género, (+) - catequina (7) y
quercitrina (9) se han reportado solo en M. platyclada [16]. Se reportan acetato de lupeol (1),
ácido cis-p-cumárico (2), lupeol (3), β-sitosterol (4), ácido trans-p-cumárico (5), ácido linoleico (6) y
afzelina (8) aquí por primera vez en este género.
Figura 1. Estructura de los compuestos (1-9) aislados de Muehlenbeckia tamnifolia.

El espectro 1H-RMN del compuesto 1 muestra la presencia de un grupo acetilo como singlete a
2,05 ppm, típico del metilo unido a un grupo carboxilo. El 13C-RMN muestra una señal a 173.8
ppm, consistente con el átomo de carbono de un grupo éster, y una señal a 21.4 ppm
correspondiente al grupo metilo de un derivado de acetilo. Las señales de 1H y 13C-NMR
restantes son similares a las obtenidas para el compuesto 3 [17].

El espectro 1H-RMN del compuesto 2 (Figura 1) mostró dos dobletes, uno a 7.63 (2H, d, J = 8.8 Hz)
y 6.79 (2H, d, J = 8.8 Hz) ppm, típico de un 1,4- anillo aromático sustituido. Dos dobletes a 6.83
(1H, J = 12.5 Hz) y 5.82 (1H, J = 12.5 Hz) ppm revelaron la presencia de un acoplamiento de cis
olefina, que corresponde a H-7 y H-8 en la estructura propuesta. Las características espectrales
anteriores están en acuerdo con las observadas para el ácido cis-p-coumaric [18].
El espectro 1H-NMR del compuesto 3 muestra seis singletes, correspondientes a grupos metilo
terciarios, entre 0,75 y 1,02 ppm y un singlete a 1,25 ppm, típico de un grupo metilo en un sistema
isopropenilo. Dos protones olefínicos a 4.68 y 4.56 ppm son consistentes con el grupo metileno del
mismo sistema propilénico. Los datos 13C-NMR muestran las señales características de C-3 a 79.2
ppm, C-20 a 151.1 ppm y C-29 a 109.5 ppm [17].

El espectro 1H-NMR del compuesto 4 muestra dos señales, dos grupos metino a 3.51 y otro a 5.35
ppm, consistentes con H-3 y H-6 de un núcleo de esteroides. El espectro de 13C-NMR mostró 29
átomos de carbono incluyendo una señal de oximetrina de carbono a 72.0 ppm, dos carbonos
olefínicos a 140.9 y 121.9 ppm y dos señales de carbono de metileno a 34.1 y 26.2 ppm, que
corresponden a C-23 y C-22 [19].

El espectro de 1H-RMN adquirido para el compuesto 5 (Figura 1) era casi idéntico al del ácido cis-
p-cumárico (2), lo que sugiere una estrecha similitud estructural entre estos dos compuestos. La
diferencia se encuentra en dos dobletes (J = 16.0 Hz) centrados en 7.64 y 6.29 ppm que sugieren la
derivada trans del compuesto 2 [20].

El compuesto 6 se caracterizó usando GC-MS. La identificación máxima se llevó a cabo

comparando los espectros de masas registrados con los presentes en la biblioteca de instrumentos
(WILEY 7n.l).

El espectro 1H-NMR del compuesto 7 muestra tres señales correspondientes a protones

aromáticos a 6.72, 6.76 y 6.83, que corresponden a un anillo 1,3,4-trisustituido. El espectro
también muestra las señales de dos señales de protones aromáticos a 5,85 y 5,93 ppm, típico de
un anillo 1,2,3,5-tetrasustituido. Dos señales de protones de metino oxigenado se encuentran a
3.97 y 4.56 ppm, consistentes con H-3 y H-2 en la estructura de catequina, respectivamente.
Además, se pueden observar dos señales de protones diastereotopic metilénicos a 2.55 y 2.87
ppm, lo que es consistente con la posición 4 de la catequina. El espectro 13C-NMR y el
experimento DEPT muestran cinco señales aromáticas cuaternarias oxigenadas a 157.8, 157.6,
156.9, 146.2 y 146.2 ppm, dos señales aromáticas cuaternarias no oxigenadas a 132.2 y 100.8
ppm, y cinco señales aromáticas CH a 120.0, 116.1, 115.2 , 96.3 y 95.5 ppm. También están
presentes dos señales de carbonatos de metino oxigenadas a 82.8 y 68.8 ppm y una señal de
carbono de metileno a 28.5 ppm. El metabolito ha sido identificado como el enantiómero
dextrógiro por polarimetría [21].

El espectro 1H-NMR del compuesto 8 muestra las señales de protones de un anillo de benceno
para-disustituido a 7.77 y 6.93 ppm, las de un anillo de benceno 1,2,3,5-tetrasustituido a 6.38 y
6.20 ppm, el de un anomérico típico doblete de protones a 5,38 ppm y las señales de un resto de
azúcar entre 4,20 y 2,00 ppm. Además, el doblete característico del grupo ramnosa metilo está
presente a 0,92 ppm. El espectro 13C-NMR mostró 21 señales, incluida la de una cetona α, β-
insaturada a 179.6 ppm. Seis señales de átomos de carbono oxigenados aromáticos y olefínicos
cuaternarios están presentes a 165.9, 163.2, 161.6, 159.3, 158.6 y 136.1 ppm, mientras que dos
átomos no oxigenados aromáticos cuaternarios corresponden a señales a 122.6 y 105.73 ppm.
Otros átomos de carbono aromáticos de CH están representados por señales en 131.9 (posiciones
2 'y 6'), 116.5 (posiciones 3 'y 5'), 100.1 y 94.9 ppm. El átomo de carbono anomérico del resto de
ramnosa corresponde a la señal a 103,5 ppm [22,23].

El espectro de 1H-RMN del compuesto 9 muestra las señales de protones de un anillo de benceno
1,3,4-trisustituido a 7,33, 7,31 y 6,91 ppm, y las señales restantes están en completo acuerdo con
las informadas previamente para el compuesto 8 [22].

Actividad de inhibición de α-amilasa y α-glucosidasa

En el ensayo de α-amilasa, solo el extracto hexánico estaba activo a la dosis máxima probada (625
μg / ml con una solución de muestra de 10 mg / ml). Los otros extractos y compuestos mostraron
porcentajes de inhibición menores del 35% en las condiciones evaluadas y no se incluyeron en este
informe. Para el ensayo de α-glucosidasa, tanto los extractos hexanicos como metanólicos
exhibieron una fuerte actividad inhibidora y solo cuatro compuestos fueron activos. Tres de ellos
pertenecientes a la familia de los flavonoides y uno perteneciente al grupo de los ácidos grasos
esenciales mostraron una fuerte actividad inhibidora, con valores de IC50 por debajo de 8 μM
(Tabla 1). Sus actividades inhibidoras fueron incluso de 48.5 a 754 veces mayores que el fármaco
comercial Acarbose (IC50 = 377 μM). Los cinco compuestos restantes no mostraron actividad
inhibidora sobre la α-glucosidasa a la dosis máxima probada (menos del 1% de inhibición
enzimática) y solo el ácido trans-p-cumárico exhibió el 27% de la inhibición enzimática. La
actividad de Afzelin (Kaempferol 3-O-rhamnoside) fue 20 veces mayor en comparación con la
actividad informada por Ajish et al. [24], que obtuvo un valor IC50 de 81.16 μM. El método
descrito anteriormente en la metodología mide el pNP liberado durante 60 minutos, lo que nos
permite obtener datos más confiables al medir catálisis enzimática durante un largo período de
tiempo en lugar de períodos cortos o incluso mediciones de puntos finales. Además, el uso de una
gran cantidad de enzima puede afectar en gran medida el valor IC50 obtenido.
Tabla 1. Actividad in vitro anti-amilasa y α-glucosidasa (como valores IC50) de extractos y
compuestos aislados de Muehlenbeckia tamnifolia.

Tabla 1. Actividad in vitro anti-amilasa y α-glucosidasa (como valores IC50) de extractos y

compuestos aislados de Muehlenbeckia tamnifolia.

Además, los flavonoides han demostrado ser inhibidores moderados a fuertes de la α-glucosidasa,
con valores de IC50 por debajo de 100 μM [24,25,26,27,28]. Se demostró que el ácido linoleico es
el compuesto más potente, seguido de la afzelina, (+) - catequina y quercitrina. Se ha demostrado
que los AGPI (ácidos grasos poliinsaturados) son buenos inhibidores de la glucosidasa, exhibiendo
diferentes tipos de inhibición y potencia, como lo demuestran Liu et al. [29], donde los ácidos
grasos insaturados C18 eran más activos en comparación con las cadenas de ácidos grasos más
largas con más dobles enlaces (o incluso sin dobles enlaces). Se ha demostrado que los inhibidores
de la α-glucosidasa que actúan sobre las enzimas en el intestino retrasan eficazmente el nivel de
glucosa en sangre, disminuyendo la absorción de glucosa.

3. Materiales y métodos

3.1. Información general

Los datos de RMN se recogieron usando un Varian Agilent (Walnut Creek, CA, EE.UU., 400 MHz
para 1H y 100 MHz para 13C) en CDCl3 y CD3OD. Los desplazamientos químicos se informaron en
unidades (ppm) relativas a la señal de Tetrametilsilano (TMS) y las constantes de acoplamiento (J)
en Hz.
Los análisis GC-MS se realizaron en un cromatógrafo de gases 6890N de Agilent Technologies
(Wilmington, DE, EE. UU.) Acoplado a un detector de espectrómetro de masas Agilent
Technologies 5973N. El instrumento estaba equipado con una columna DB5-MS Agilent 122-5532
(longitud 30 m, diámetro interno 0,25 mm de espesor de la fase estacionaria: 0,25 μm). El gas
portador fue helio (1 ml / min) y el inyector se hizo funcionar en modo dividido (relación 1: 1) a
una temperatura de 250 ° C. El horno se programó con una temperatura inicial de 50 ° C durante 1
minuto, luego se aumentó a 270 ° C a 10 ° / min y se mantuvo a 270 ° durante 25 minutos.
El gel de sílice 60 (Merck KGaA, Darmstadt, Alemania, de 0,063 a 0,200 mm) y RP-18 (Merck 40-63
μm) se usaron como fases estacionarias para la cromatografía en columna. Todos los solventes
orgánicos se compraron en Brenntag (Brengtan, Guayaquil, Ecuador) y luego se destilaron. Las
rotaciones ópticas se midieron usando un polarímetro automático (Jinan Hanon Instruments Co.
Ltd. Jinan, China). Se usó MRC P810 con Hanon.
Los ensayos de α-amilasa y α-glucosidasa se evaluaron utilizando α-amilasa de páncreas porcino
(Tipo IV-B, Sigma A3176, St. Louis, MO, EE. UU.) Y α-glucosidasa de Saccharomyces cerevisiae (Tipe
I, Sigma G5003, St Louis, MO, USA). Se usó almidón como sustrato para α-amilasa y p-Nitrofenil-α-
d-glucopiranósido (p-NPG-Sigma, N1377) como sustrato para α-glucosidasa. Para ambos ensayos
enzimáticos, se usó un lector de microplacas (EPOCH 2, Biotek Instruments Inc. Winoosky, VT, EE.
UU.).
3.2. Material vegetal
Las hojas de M. tamnifolia se recolectaron en la etapa de floración en la localidad de "Cerro Gañil",
provincia de Loja, Ecuador, en febrero de 2015, a 2987 m.a.s.l. (Metros sobre el nivel del mar,
coordenadas 686617 N; 9602180 E). El material vegetal fue identificado por Nixon Cumbicus y las
muestras de cupones (PPN-PL-006) se depositan en el Herbario HUTPL de la Universidad Técnica
Particular de Loja.

3.3. Extracción y aislamiento de compuestos

Las hojas secas de M. tamnifolia (500 g) se maceraron durante 1 h en una serie de
disolventes de acuerdo con una regla de polaridad creciente: hexano (Hex), acetato de etilo
(EtOAc) y metanol (MeOH), cada disolvente 6 L tres veces. Las soluciones obtenidas se
filtraron y se concentraron a presión reducida, para obtener tres extractos totales: 6,25 g
(Hex) 6,35 g (EtOAc) y 63,34 g (MeOH).
El extracto de hexano (3 g) se sometió a cromatografía en columna de sílice, con una
relación de extracto / sílice de 1:55. La columna se eluyó de acuerdo con un gradiente de
polaridad creciente, de hexano-acetato de etilo 90:10 a 100% de acetato de etilo,
obteniéndose un total de 16 fracciones (MM01-5 / MM16-5).
La fracción MM01-5 se purificó por cromatografía en columna, con un sistema isocrático
de Hex-CH2Cl2 80:20 para obtener el compuesto 1 (70 mg).
La fracción MM03-5 se purificó por cromatografía en columna, con un sistema isocrático
de Hex-CH2Cl2 90:10 para obtener el compuesto 2 (10 mg).
La fracción MM04-5, eluida en condiciones isocráticas con Hex-EtOAc 80:20, proporcionó
el compuesto 3 (45 mg).
La fracción MM06-5, eluida en condiciones isocráticas con Hex-EtOAc 70:30, proporcionó
el compuesto 4 (20 mg).
El extracto de acetato de etilo (3 g) se fraccionó por cromatografía en columna de gel de
sílice, con una relación de extracto / sílice de 1:50 y un gradiente de polaridad creciente de
Hex-EtOAc de 95: 5 a 100% de acetato de etilo. Finalmente, la columna se extrajo con
acetona al 100%, obteniéndose un total de 20 fracciones (MM01-12-MM20-12).
La fracción MM06-12 se purificó por cromatografía en columna, con un sistema isocrático
de Hex-EtOAc 90:10, para obtener el compuesto 5 (16 mg).
La fracción MM09-12 se eluyó con un sistema isocrático de Hex-EtOAc 70:30 para obtener
el compuesto 6 (34 mg).
El extracto de metanol (5 g) se sometió a una partición con una mezcla de MeOH-H2O 95:
5 y, n-Hexano (relación de volumen 1: 1), obteniéndose un extracto polar de 3,68 g. El
extracto polar se fraccionó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con una
polaridad creciente de CH2Cl2-MeOH 95: 5 a CH2Cl2-MeOH 70:30, obteniéndose un total
de cinco fracciones (MM01-40 a MM05-40).
La fracción MM02-40, se purificó mediante cromatografía en columna de fase directa,
eluyendo con gradiente de polaridad creciente de EtOAc-Hex 80:20 a 100% de EtOAc,
para obtener el compuesto 7 (13 mg) y el compuesto 8 (13 mg).
La fracción MM04-40 se purificó en cromatografía en columna de fase inversa, con un
sistema isocrático de MeOH-H2O 90:10, para obtener el compuesto 9 (15 mg).
3.4. Medición de la actividad inhibidora de a-amilasa
La actividad inhibidora se mide de acuerdo con el método informado por Xiao et al. [30]
con ligeras modificaciones. La acarbosa se usó como control positivo. La solución de
almidón se preparó disolviendo 1 g en 50 ml de NaOH 0,4 M y calentando durante 5
minutos a 100 ° C. Después de enfriar en agua helada, el pH de la solución se ajustó a 7 con
HCl 2 M y se añadió H2O para completar 100 ml. Las soluciones de muestra se prepararon
disolviendo 10 mg en 1 ml de MeOH: H2O (50:50). Se realizaron varias diluciones en PBS
(SIGMA-P4417) en caso de obtener inhibición enzimática completa. La solución de PBS
(35 μL), el sustrato (35 μL) y las soluciones de muestra (5 μL) se mezclaron en una placa
de microtitulación de 96 pocillos, y la mezcla se preincubó a 37 ° C durante 1 min. Luego,
se añadieron 20 μL de una solución de α-amilasa 50 μg / mL a cada pocillo. La placa se
incubó durante 15 min. La reacción se terminó mediante la adición de 50 μL de HCl 0,1 M
y luego se añadieron 150 μL de solución de yodo 0,5 mM (I2 0,5 mM y KI 0,5 mM). La
absorbancia se midió en un lector de microplacas (EPOCH 2, Biotek Instruments Inc.
Winoosky, VT, EE. UU.) A 580 nm. La actividad inhibidora (%) se calculó de acuerdo con
la fórmula descrita por Kusano et al. [31] de la siguiente manera:

Inhibición (%) = [(Ao-As) / Ao] × 100

Donde A0 es la absorbancia registrada para la actividad enzimática sin inhibidor (control), y As es

la absorbancia registrada para la actividad enzimática en presencia del inhibidor (muestra). El valor
IC50 se calculó mediante el ajuste de la curva de los datos (GraphPad Prism 5.0). La acarbosa se
usó como control positivo. Principio del formulario

3.6. Datos físicos y espectrales de compuestos aislados

Acetato de lupeol (1). Cristales de C32H52O2 (70 mg) 1H-RMN (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm); 4,68
(1H, s, H-29b), 4,56 (1H, s, H-29a), 4,47 (1H, dd, J = 5,2, 10,8 Hz, H-3), 2,05 (3H, s, H-2) , 1,68 (3H, s,
H-30), 1,02 (3H, s, H-25), 0,94 (3H, s, H-28), 0,87 (3H, s, H-23), 0,85 (3H, s , H-24), 0,83 (3H, s, H-
26), 0,78 (3H, s, H-27). 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz)? (Ppm); 38.5 (C-1), 21.1 (C-2), 80.7 (C-3), 38.2
(C-4), 55.5 (C-5), 18.4 (C-6), 34.4 (C-7), 40.9 (C-8), 50.5 (C-9), 37.2 (C-10), 21.1 (C-11), 23.9 (C-12),
36.3 (C-13), 42.9 (C-14) 25.3 (C -15), 35.7 (C-16), 43.1 (C-17), 48.4 (C-18), 48.2 (C-19), 151.1 (C-20),
29.9 (C-21), 40.1 (C- 22), 27.6 (C-23), 16.7 (C-24), 16.3 (C-25), 16.1 (C-26), 14.7 (C-27), 18.1 (C-28),
109.5 (C-29 ), 19,4 (C-30), 173,8 (C-1 '), 28,1 (C-2').
Cis-p-coumaric acid (2). Polvo amorfo blanco de C9H8O3 (10 mg) RMN de 1H (CDCl3, 400 MHz): δ
(ppm); 7.63 (d, J = 8.8 Hz, H-2, 6), 6.83 (d, J = 12.5 Hz, H-7), 6.79 (d, J = 8.8, H-3, 5), 5.82 (d, J = 12.5
Hz, H-8). 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz)? (Ppm); 127.6 (C-1), 132.5 (C-2, 6), 115.1 (C-3, 5), 156.9 (C-4),
143.4 (C-7), 117.4 (C-8), 166.9 (C- 9).
Lupeol (3). Cristales de C30H50O (45 mg) 1H-RMN (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm); 4.68, 4.56 (2H, s, H-
29a, 29b), 3.18 (1H, dd, J = 4.76 Hz, 11.2 Hz, H-3), 0.75, 0.78, 0.82, 0.94, 0.96, 1.02, 1.25 (cada 3H ,
s, CH3 x 7). 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz)? (Ppm); 38.2 (C-1), 25.3 (C-2), 79.2 (C-3), 38.7 (C-4), 55.4
(C-5), 18.5 (C-6), 34.4 (C-7), 40.9 (C-8), 50.6 (C-9), 37.3 (C-10), 21.1 (C-11), 27.6 (C-12), 39.0 (C-13),
42.9 (C-14) 27.6 (C -15), 35.7 (C-16), 42.9 (C-17), 48.5 (C-18), 48.1 (C-19), 151.1 (C-20), 29.9 (C-21),
40.2 (C- 22), 28.1 (C-23), 15.5 (C-24), 16.3 (C-25), 16.2 (C-26), 14.7 (C-27), 18.5 (C-28), 109.5 (C-29
), 19.5 (C-30).
β-Sitosterol (4). Cristales de C29H50O (20 mg) 1H-RMN (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm); 3,52 (1H, m),
5,34 (1H, d), 0,92 (3H, d), 0,84 (3H, t), 0,82 (3H, d), 0,80 (3H, s), 0,67 (3H, s), 1,00 (3H, s). 13C-NMR
(CDCl3, 100 MHz)? (Ppm); 37.4 (C-1), 31.8 (C-2), 71.9 (C-3), 42.5 (C-4), 140.9 (C-5), 121.9 (C-6), 32.1
(C-7), 32.1 (C-8), 50.3 (C-9), 36.7 (C-10), 21.2 (C-11), 39.9 (C-12), 42.5 (C-13), 56.9 (C-14) 26.2 (C -
15), 28.4 (C-16), 56.2 (C-17), 36.3 (C-18), 19.2 (C-19), 34.1 (C-20), 26.2 (C-21), 45.9 (C- 22), 23.2 (C-
23), 12.1 (C-24), 29.3 (C-25), 19.9 (C-26), 19.5 (C-27), 18.9 (C-28), 12.0 (C-29 )

Ácido trans-p-coumaric (5). Polvo amorfo blanco de C9H8O3 (10 mg) RMN de 1H
(CDCl3, 400 MHz): δ (ppm); 7,64 (d, J = 16 Hz, H-7), 7,42 (d, J = 8,8 Hz, H-2,6), 6,84 (d,
J = 8,8 Hz, H-3,5), 6,29 (d, J = 16 Hz, H-8) 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz)? (Ppm); 167.8
(C-9), 115.9 (C-8), 144.4 (C-7), 130.1 (C-2, 6), 116.0 (C-3, 5), 157.8 (C-4), 127.4 (C- 1).
Ácido linoleico (6). C18H30O2 Aceite amarillo (34 mg) EIMS m / z 280 [M] + (17), 262
(2), 237 (1), 209 (2), 182 (3), 166 (1), 150 (7), 136 (10), 123 (15), 109 (34), 95 (70), 81
(93), 67 (100), 55 (2), 45 (5).
(+) - Catechin (7). C15H14O6 en polvo amorfo (13 mg) 1H-RMN (CDCl3, 400 MHz): δ
(ppm): 2.52 (dd, J = 8 Hz), 2.87 (dd, J = 5.6 Hz), 3.97 (m), 4.56 ( d, J = 7.2 Hz), 5.85 (d, J =
2.4 Hz), 5.93 (d, J = 2.4 Hz), 6.72 (dd, J = 8.4 Hz, J = 2 Hz), 6.76 (d, J = 8.4 Hz), 6,83 (d, J
= 2 Hz); 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz)? (Ppm); 132,2 (C-1 '), 82,9 (C-2), 115,3 (C-2'),
68,8 (C-3), 146,2 (C-3'-4 '), 28,5 (C-4), 157,6 ( C-5), 116.1 (C-5 '), 96.3 (C-6), 120.0 (C-6'),
157.8 (C-7), 95.5 (C-8), 156.9 (C-9), 100.8 (C-10). [α] 27D
= +3.6 (c 0.3, MeOH).
Afzelin (8). Polvo C21H20O10 (13 mg) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm): 7,77 (d, J
= 8,8 Hz), 6,93 (d, J = 8,8 Hz), 6,38 (d, J = 2,4 Hz) , 6,20 (d, J = 2 Hz), 5,38 (d, J = 1,6 Hz),
4,22 (J = 1,6 Hz), 3,71 (m), 3,59 (s), 3,34 (m), 0,92 (d); 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz)?
(Ppm); 122,6 (C-1 '), 103,5 (C-1 "), 158,6 (C-2), 131,9 (C-2', 6 '), 72,1 (C-2'), 136,2 (C-3),
116,5 (C-3 ', 5'), 72,0 (C-3 ''), 179,6 (C-4), 161,6 (C-4 '), 73,2 (C-4' '), 163,2 (C-5), 71,9 (
C-5 "), 99.8 (C-6), 17.7 (C-6"), 165.9 (C-7), 94.8 (C-8), 159.3 (C-9), 105.9 (C-10).

Quercitrina (9). Polvo amarillo amorfo C21H20O11 (15 mg) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm):
7,33 (d, J = 2 Hz), 7,31 (dd, J = 2, 8 Hz), 6,91 (d, J = 8.4 Hz), 6.37 (d, J = 2.4 Hz), 6.20 (d, J = 1.6 Hz),
5.35 (d, J = 1.6 Hz), 4.22 (dd, J = 2, 3.6 Hz), 3.75 (dd , J = 3.6, 9.2 Hz), 3.42 (m), 3.35, 0.94 (d, J = 6
Hz); 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz)? (Ppm); 122,9 (C-1 '), 103,6 (C-1 "), 158,5 (C-2), 116,4 (C-2'), 72,0
(C-2 '), 136,2 (C-3), 146,4 (C- 3 '), 72,1 (C-3 "), 179,7 (C-4), 149,8 (C-4'), 73,3 (C-4"), 163,2 (C-5),
116,9 (C-5 '), 71.9 (C-5 "), 99.8 (C-6), 122.9 (C-6 '), 165.9 (C-7), 94.7 (C-8), 159.3 (C-9), 105.9 (C-10) .