Medios de Cultivo

2.1.
Medios de Cultivo
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de
microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias
artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen
los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de
cultivo diferentes (CASASO, et al 2012).
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de
cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura,
grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto
de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante. La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes
complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano.
Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de
carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes. (CASASO, et al 2012).
2.1.1. Agar Manitol Salado
A. Uso
Usado para el aislamiento de estafilococos patógenos,
especialmente Staphylococcus aureus, considerado un patógeno bacteriano
serio desde que desarrolló resistencia a la penicilina en 1950. El agar manitol
salado ha sido empleado también en estudios de resistencia a antibióticos, en

los cuales ha demostrado una especificidad de 98,1 %y una sensibilidad de 95,1
% con cepas de Staphylococcus oxacillina resistentes (Durand, et al 2004).
B. Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de carne, la peptona de la carne y
la tripteina, constituyen la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales
que promueven el desarrollo microbiano. El cloruro de sodio (que se encuentra
en alta concentración) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora
acompañante (BRITANIA, 2015). Incluye en su composición el indicador de pH:
rojo fenol, este indicador es de color rojo a pH 8,2 y cambia a amarillo a pH por
debajo de 6,8. Cuando se desarrollan las colonias de Staphylococcus aureus
fermentadoras de manitol, se produce ácido en el medio, el cual reacciona con
el indicador y forma las áreas de color amarillo alrededor de las colonias,
reacción característica de los estafilococos patógenos (Durand, et al 2004).
Se trata de un medio altamente selectivo por la alta concentracion
salina y diferencial debido a la capacidas de fermentacion del manitol por los
microorganismos. Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracion
de sal y fermentan el manitol, producen acidos, con lo que modifica el pH del
medio y vira el indicador de pH del color rojo a amarillo (BRITANIA, 2015).
Los estafilococos crecen en altas cocentraciones de sal, y pueden o
no fermentar el manitol. Los estafilococos coagulasa positiva fermental el manitol
y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de una zona del mismo color.
Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas,
rodeadas de una zona del mismo color o purpura (BRITANIA, 2015).

C. Composición
Cuadro 1. Composición del Agar manitol salado en g / L
Ingrediente Cantidad
Extracto de carne 1g
Peptona de carne 5g
Tripteina 5g
Manitol 10 g
Cloruro de sodio 75 g
Rojo de fenol 0.025 g
Agar 15 g
Agua purificada 1000 ml
pH FINAL 7.4 ± 0.2
D. Interpretación de resultados
 Microorganismos fermentadores de manitol: colonias de color amarillo
rodeadas o no de un halo amarillo.
 Microorganismos no fermentadores de manitol: colonias del color del
medio, rojas rodeadas o no de halo rojizo – purpura
Cuadro 2. Control de calidad
Color de colonias y aspecto del

Microorganismos Crecimiento
medio
Sthaphylococcus aureus Colonias amarillas rodeadas de un
Satisfactorio
ATCC 25923 halo amarillo
Sthaphylococcus aureus Colonias amarillas rodeadas de un
Satisfactorio
ATCC 6538 halo amarillo
Sthaphylococcus epidermis Bueno Colonias rojas sin cambio de color
ATCC 14990 Satisfactorio del medio
Escherichia coli ATCC 8739 Inhibido ---------
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido ---------
Klebsiella pneumoniae ATCC
Inhibido ---------
700603
2.1.2. Agar Mac Conkey
A. Uso
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativas
de facil desarrollo, aerobio y anaerobios facultativos a partir de muestras clínicas,
aguas residuales y alimentos. Todas las especies de la familia
Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo (VALTEK, 2015).
B. Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes
necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono
fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes
selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva. Por
fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce
un viraje del color indicador de pH, la absorción en las colonias, y la precipitación
de las sales biliares (VALTEK, 2015).
Los aislados de bacterias coliformes presentan una coloración rosa-
rojo típica, que puede incluir halos de precipitación de sales biliares como
resultado de la acidificación por la fermentación de la lactosa en la zona que
rodea las colonias. Las colonias de bacterias no fermentadoras de lactosa
permanecen incoloras y no producen halos de precipitación, aún en cercanía de
colonias de coliformes (VALTEK, 2015).
C. Composición
Cuadro 3 Composición del Agar Mac Conkey en g / L
Ingredientes Cantidad
Peptona 20
Laptosa 10
Cloruro de sodio 5
Sales Biliares nº 3 1.5
Rojo neutro 0.03
Cristal violeta 0.001
Agar Bacteriologica 15
pH FINAL 7.1 ± 0.2
 Microorganismos fermentadores de lactosa: colonias rosadas- rojizas.
Puede observarse halo de precipitación biliar.
 Microorganismos no fermentadores de lactosa: colonias del color del
medio, incoloras.
Cuadro 4 Control de calidad
Precipitacion
Microorganismos Crecimiento Color
Biliar
Escherichia coli ATCC Rosado -
Satisfactorio +
25922 rojizo
Escherichia coli ATCC Rosado -
Satisfactorio +
8739 rojizo
Klebsiella pneumoniae Rosado -
Satisfactorio +
ATCC 700603 rojizo
S.Typhimurium ATCC
Satisfactorio Incoloro -
14028
Shigella flexneri ATCC
Satisfactorio Incoloro -
12022
Proteus mirabilis ATCC
Satisfactorio Incoloro
43071 -
Enterococcus faecalis
Inhibido --------- ---------
ATCC 29212
2.1.3. Agar Sabouraud glucosado

A. Uso
Medio utilizado para el aislamiento, identificación y conservación de
hongos patógenos y saprofitos. También es útil para el cultivo de levaduras
(BRIZUELA, 2015).
B. Fundamento
Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de
hongos, particularmente los asociados con infecciones cutáneas (piel, pelo)
(BRIZUELA, 2015).
En el medio de cultivo, la peptona, la tripetina y la glucosa son los
nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El alto contenido de glucosa,
la presencia de cloranfenicol y el pH acido, inhiben el desarrollo bacteriano y
favoren el crecimiento de hongos y levaduras. El agar es agente solidificante
(BRIZUELA, 2015).
C. Composición
Cuadro 5 Composición del Sabouraud glucosado en g / L
Peptona 5
Tripteina 5
Glucosa 40
Cloranfenicol 0.05
Agar 15
pH FINAL 5.6 ± 0.2
Cuadro 6 Control de calidad
Microorganismos Crecimiento
Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 Satisfactorio
Candida albicans ATCC 10231 Satisfactorio
Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 Satisfactorio
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763 Satisfactorio
2.1.4. Agar Medio 77
Este tipo de medio de cultivo sirve para desarrollar Rhizobium que
son del genero de bacterias Gram negativas, y para su desarrollo se usa toda la
fórmula del agar, así como las Azotobacter que también son Gram negativas y
para su desarrollo se le quita a la formula la peptona y el extracto de levadura (
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA,2018).
Cuadro 7. Composición del medio 77
Peptona 5g
K2HPO4 0.5g
MgSO4.7H2O 0.2 g
NaCl 0.2 g
MnSO4 Trazas
FeCl3.6H20 Trazas
Manitol 15 g
Extracto levadura 5g
Agar 25 g
Agua destilada 1000 ml
Referencias
BRITANIA. 2015. Manitol Salado Agar. Laboratorios Britania S.A. Caba,
Argentina. [En línea]: BRITANIALAB,
(http://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a2e
d6c53aed1.pdf , documento, 19 de Junio 2018).
DURAN A., ZHURBENKO R., VIERA D. 2004. Propuesta de una modificación en
la formulación del medio agar manitol salado utilizado en el
aislamiento de estafilococos de importancia clínica. Centro nacional
de biopreparados (BIOCEN).Bejucal, CUBA. REV CUBANA MED
TROP 2004;56(3):172-7
CASADO C., TORRICO G., MEDINA M. 2012. Medios de cultivo en un
laboratorio de microbiología. [En línea]: LIBROS LABORATORIO,
(https://libroslaboratorio.files.wordpress.com/2012/09/medios-de-
cultivo-en-un-laboratorio-de-microbiologc3ada.pdf, documento, 19
de Junio 2018).
VALTEK. 2015. Agar MacConkey. Santiago, Chile. . [En línea]: ANDINA
MEDICA, (http://andinamedica.com.pe/wp-
content/uploads/2016/08/Agar-MacConkey.pdf , documento, 19 de
Junio 2018).
BRIZUELA M. 2015. Sabouraud Glucosado Agar con Antibiótico. Manual de
Instruccion. Laboratorios W. Brizuela S.A. Cordova, Argentina. [En
línea]: BRIZUELA LAB, (http://www.brizuela-

lab.com.ar/manuales/Sabouraud%20glucosado%20agar%20con%2
0Antibiotico.pdf documento, 19 de Junio 2018).

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2.1.

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de

microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias

artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen

los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los

microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de

cultivo diferentes (CASASO, et al 2012).

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de

grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto

de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y

factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo

contaminante. La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes

complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano.

Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de

carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes. (CASASO, et al 2012).

2.1.1. Agar Manitol Salado

Usado para el aislamiento de estafilococos patógenos,

especialmente Staphylococcus aureus, considerado un patógeno bacteriano

serio desde que desarrolló resistencia a la penicilina en 1950. El agar manitol

salado ha sido empleado también en estudios de resistencia a antibióticos, en

% con cepas de Staphylococcus oxacillina resistentes (Durand, et al 2004).

En el medio de cultivo, el extracto de carne, la peptona de la carne y

la tripteina, constituyen la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales

que promueven el desarrollo microbiano. El cloruro de sodio (que se encuentra

en alta concentración) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompañante (BRITANIA, 2015). Incluye en su composición el indicador de pH:

debajo de 6,8. Cuando se desarrollan las colonias de Staphylococcus aureus

fermentadoras de manitol, se produce ácido en el medio, el cual reacciona con

el indicador y forma las áreas de color amarillo alrededor de las colonias,

reacción característica de los estafilococos patógenos (Durand, et al 2004).

Se trata de un medio altamente selectivo por la alta concentracion

salina y diferencial debido a la capacidas de fermentacion del manitol por los

microorganismos. Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracion

de sal y fermentan el manitol, producen acidos, con lo que modifica el pH del

medio y vira el indicador de pH del color rojo a amarillo (BRITANIA, 2015).

Los estafilococos crecen en altas cocentraciones de sal, y pueden o

no fermentar el manitol. Los estafilococos coagulasa positiva fermental el manitol

Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas,

rodeadas de una zona del mismo color o purpura (BRITANIA, 2015).

Cuadro 1. Composición del Agar manitol salado en g / L

 Microorganismos fermentadores de manitol: colonias de color amarillo

rodeadas o no de un halo amarillo.

 Microorganismos no fermentadores de manitol: colonias del color del

medio, rojas rodeadas o no de halo rojizo – purpura

Cuadro 2. Control de calidad

Color de colonias y aspecto del

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativas

de facil desarrollo, aerobio y anaerobios facultativos a partir de muestras clínicas,

aguas residuales y alimentos. Todas las especies de la familia

Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo (VALTEK, 2015).

En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes

necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono

fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes

fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce

un viraje del color indicador de pH, la absorción en las colonias, y la precipitación

de las sales biliares (VALTEK, 2015).

Los aislados de bacterias coliformes presentan una coloración rosa-

resultado de la acidificación por la fermentación de la lactosa en la zona que

rodea las colonias. Las colonias de bacterias no fermentadoras de lactosa

permanecen incoloras y no producen halos de precipitación, aún en cercanía de

colonias de coliformes (VALTEK, 2015).

 Microorganismos fermentadores de lactosa: colonias rosadas- rojizas.

Puede observarse halo de precipitación biliar.