UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE INGENIERIA PESQUERA

DPTO ACADEMICO DE INGENIERIA PESQUERA
AREA: ALIMENTOS MARINOS

CURSO: ANALISIS DE ALIMENTOS

Responsable: Ing. Augusto Asanza Huancas

PRACTICA DE LABORATORIO Nº 04

DETERMINACION DE PROTEINAS
(Metodo KJELDAHL)

I. Objetivos
Determinar el contenido de Proteína bruta que constituyen los diversos
alimentos de origen animal y vegetal por el método Semi – micro Kjeldahl
.
II. Fundamento
Las proteínas están formadas por cadenas de aminoácidos de cuya
composición el nitrógeno es fácilmente valorable.
Los compuestos nitrogenados son descompuestos por acción del Acido
sulfúrico en caliente, ocurriendo al mismo tiempo una oxidación y una
reducción con la ayuda de sustancias catalizadoras.
El método Kjeldahl consta de 3 etapas:
a) Digestion
Se produce la siguiente reacción:
Materia Organica + H2SO4 ----------- SO$(NH4)2 + CO2 + H2O
Sulfato de Amonio

b) Distilacion
El Nitrógeno que esta en forma de Sulfato de Amonio, es
descompuesto por el Hidróxido de Sodio (NaOH) y el calor
desprendido Amonio (NH4)
El vapor de Agua arrastra al Amonio como Hidrato de Amonio, el cual
es recibido en una solución de Ácido Bórico al 3% usando como
indicador rojo de metilo enmascarado.

c) Titulacion
Consiste en titular con HCl 0.1 N la base de Borato de Amonio,
determinándose asi la cantidad de Amonio en forma indirecta:
La reacción es:
NH4H2BO3 + HCL ---------- H3BO3 + H3BO2 + NH4CL
III. Materiales y Métodos:
3.1 Materiales y Equipos.
- Digestor, balones Kjeldahl de 100 ml.
- Equipo destilador Kjeldahl
- Balanza analítica
- Erlenmeyer, buretas, pipetas, fiolas de 100 y 1250 ml.
- Probetas de 10 ml y 100 ml.
Reactivos
- Ácido Sulfúrico Concentrado.
- Ácido Bórico al3%
- Catalizador: Mezcla de K2SO4 + CuSO4 5 H2O en la
proporción de 9:1
- Hidróxido de Sodio al 30 %
- Ácido Clorhídrico HCl 0.1 N (Valorado)

3.2 Metodo: Metodo Semi – micro Kjeldahl

PROCEDIMIENTO
a) Digestion
- Colocar en un balón Kjeldahl de 100 ml. 0.1 g de muestra
seca y deshidratada.
- Agregar 1g de catalizador
- Anadir 10 ml de Acido Sulfurico concentrado y agite
suavemente
- Colocar el balón a calentamiento en el digestor.
La digestión dura aproximadamente 3 horas y se considera
terminada cuando el contenido del balón es de color
ligeramente verdoso o amarillento.
- Se recomienda que con las muestras deben llevarse a cabo
un blanco (se colocan todos los reactivos menos la muestra
y deben analizarse por duploicado).

b) Destilacion
- Terminada la digestión agregar agua destilada al balón
Kjeldahl hasta la mitad en pequeñas proporciones enfriando
externamente en agua hasta que este completamente frio.
- Transferir el contenido del balón Kjeldahl por destilación.
- Cnectar el equipo de destilación de modo que el extremo
inferior del refrigerante este inmerso en el Erlenmeyer y
que contenga 25 ml de Acido Borico al 3 % y 2 gotas del
indicador rojo de metilo enmascarado.
- Hacer circular el agua por el sistema refrigerante.
- Agregue lentamente 5 ml de NAOH al 30 %.
- El tiempo de destilación es de 30 min aproximadamente.
- Verificar el termino de la destilación colocando papel de
tornasol ewn el extremo inferior del r4efrigerante. Si al
recibir el destilado en el papel no se colorea, esto indica el
termino de la destilación.
- Retirar luego el Erlenmeyer con el destilado y apague el
mechero.
c) Titulacion
- Valorar el destilado del Erlenmeyer con una solución de
Acido Clorhidrico 0.1 N hasta el viraje del indicador
- Anotar el gasto.
- Proceder de igual forma con el blanco.

CALCULOS: % N = (A-B) x f x d x 0.0014 X 100

M

A = Gasto de la muestra
B = Gasto del blanco
f = Factor de HCL 0.1 N
d = Proporcion de las muestras diluidas (En este
caso 100/10
m = Peso de la muestra en g
0.0014 = g de Nitrogeno por cada ml de gasto de
HCL 0.1 N.

% PROTEINA BRUTA = % Nitrógeno x 6.25

Talara, Agosto de 2016