UNIVERSIDAD DEL CAUCA

FACULTAD DE INGENIERIA CIVIL

DEPARTAMENTO DE INGENIERIA AMBIENTAL Y SANITARIA
Programa Académico de Ingeniería Ambiental
Laboratorio de Química Ambiental
Docente : Julio César Gil Solano Msc.
Práctica No 6. Introducción al Análisis Espectrofotométrico

OBJETIVOS.

 Realizar el montaje de un ensayo instrumental utilizando la técnica de

espectrofotometría de absorción en el rango visible.
 Conocer el funcionamiento y manejo de un espectrofotómetro.
 Realizar la determinación de la longitud de onda óptima para la
determinación de un analito en una muestra.
 Construir la curva de calibración para relacionar la absorbancia de una
solución en función de su concentración y aplicarla en una determinación.

Consulta: Para esta práctica se debe incluir la siguiente información:

 Principios generales de la espectrofotometría de absorción.

 Leyes que se aplican en el análisis espectrofotométrico.
 Componentes básicos de un espectrofotómetro.
 ¿Por qué se selecciona como longitud de onda óptimo para una
determinación aquella que corresponde a un máximo de
absorbancia?
 Consulte aplicaciones de esta técnica de análisis.
 ¿En qué consisten la colorimetría, turbidimetría y nefelometría?

NOTA: Para la práctica deben traer 2 hojas de papel milimetrado, regla y

curvígrafo.

FUNDAMENTO TEÓRICO.

Una gran cantidad de iones inorgánicos en disolución acuosa absorbe suficiente

energía radiante en la región visible del espectro (y no solamente en esta región),
esto permite su determinación espectrofotométrica directa, incluso en muy bajas
concentraciones. La metodología para implementar la determinación de un analito
mediante esta técnica consta de tres etapas:

1
1. Se determina la longitud de onda del espectro para la cual el compuesto
presenta la absorbancia máxima.

2. Se construye la curva de calibración absorbancia vs. concentración del analito,

a la longitud de onda determinada.

3. Se mide la absorbancia de la muestra desconocida y se determina su

concentración mediante la curva de calibración obtenida.

MATERIALES.

Permanganato de potasio y/o azul de metileno.

1 balón aforado de 100 mL
20 balones aforados de 50 mL
2 Pipetas de precisión de volumen variable
2 vidrios de reloj
2 espátulas.
Balanza analítica
Espectrofotómetro
Frasco lavador
PROCEDIMIENTO.

0.- Preparación de soluciones para la práctica.

0.1. Para esta parte debe contarse con 100 mL de solución de azul de metileno y/o
de permanganato de potasio de concentración exactamente conocida, por ejemplo
10 mg/L .

0.2. Partiendo de las soluciones anteriores prepare por dilución 10 soluciones de

50 mL en concentración de 0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; 7,0; 8,0 y 9,0 mg/L.
Lleve listos los cálculos necesarios.

1.- Determinación de la longitud de onda óptima para la determinación.

1.1. Seleccione una de las 10 diluciones preparadas por usted. A continuación

tome dos celdas del espectrofotómetro, llene una de ellas con agua destilada y la
otra con la solución escogida.

1.2. Ajuste la longitud de onda al valor inferior del rango y realice la calibración del
equipo utilizando el tubo con agua destilada (el blanco) en la forma indicada.

2
1.3. Mida la absorbancia de la solución realizando un barrido de la longitud de
onda, desde 400 nm hasta 600 nm para el permanganato y de 550 hasta 750 para
el azul.

Importante: Es necesario calibrar el equipo cada vez que se cambia la longitud

de onda.

1.4. Construya la gráfica de absorbancia vs. longitud de onda y determine cuál es

la longitud de onda a la que se presenta la absorbancia máxima.

2. Obtención de los datos para la construcción de la curva de calibración

2.1. Ajuste el espectrofotómetro a la longitud de onda determinada en la sección

anterior y calíbrelo nuevamente con la celda que contiene agua destilada.

2.2. Realice la medición de la absorbancia para cada una de las soluciones

preparadas en 0.

2.3. Construya la curva de calibración graficando los datos de concentración vs.

absorbancia.

2.4. Encuentre la ecuación que describe la curva de calibración.

3. Determinación de la concentración de una muestra desconocida

3.1. Determine la absorbancia de la muestra problema asignada y por medio de la

curva de calibración y también por medio de la ecuación de la curva establezca la
concentración.

3.2. Analice los resultados y establezca sus conclusiones.

Bibliografía

Análisis Químico Cuantitativo.

Harris Daniel. Editorial Reverté

Análisis Químico Cuantitativo.

Ayres, Gilbert H. Editorial Harla.

Química Analítica.
Skoog, West D, Holler F. Editorial Mc Graw Hill

Análisis Instrumental.
Rubinson Kenneth, Rubinson Judith. Editorial prentice Hall.