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MANUAL DE LABORATORIO DE
ANALISIS BIOQUÍMICO CLINICOS I
AUTORES:
Q.F.B. MARTHA PATRICIA CAMPOS PEON
Q.F.B. RENE DAMIAN SANTOS
M en C GLORIA LETICIA ARELLANO MARTNEZ
Q.F.B. MA. DE LOURDES GALVAN RUIZ
Q.F.B. BEATRIZ LUCIA GONZALEZ MALDONADO
M en C OMAR ASAF RUIZ CAZARES
AGOSTO DE 2008
ÍNDICE
Pág
Presentación 2
Reglamento de Laboratorio 3
Practica No. 1. Toma de muestra de sangre venosa 5
Practica No. 2. Citometría hemática 14
Practica No. 3. Grupos sanguíneos y pruebas cruzadas 25
Practica No. 4. Pruebas de coagulación 33
Practica No. 5. Química sanguínea I y glucosa posprandial 43
Practica No. 6. Química sanguínea II 51
Practica No. 7. Urianálisis 59
Referencias 70
2
PRESENTACION
En este manual se presenta la información necesaria para realizar adecuadamente las
prácticas de la asignatura de Análisis Bioquímico Clínicos I, además de formar parte
del material de consulta para los estudiantes y aplicar a los estudiantes que se
encuentren cursando la asignatura de Análisis Bioquímico Clínico I y a los profesores
que participen en esta asignatura. El manual fue elaborado por los profesores que
participan en la asignatura.
El manual consta de 7 prácticas, que están organizadas en 10 puntos, que a
continuación se resumen, para mejor comprensión del manual.
1. Marco teórico. En el se da un panorama de la importancia del estudio e incluye una
sección denominada información complementaria, que comprende una serie de
preguntas o temas que el alumno debe responder previo a la realización de la
práctica.
2. Objetivo u objetivos de la práctica.
3. Materiales. Este punto incluye un listado del material requerido por equipo de
trabajo y por grupo, los reactivos necesarios para la práctica, así como la muestra
biológica requerida para la misma.
4. Métodos. En este apartado se desglosan las determinaciones que se realizarán
durante la sesión experimental. Cada determinación incluye su fundamento, el
significado clínico y el procedimiento a seguir.
5. Disposición de residuos. Se índica la forma de desechar los residuos generados
durante la práctica.
6. Diagrama de flujo. Consiste de una hoja en blanco en la que el alumno plasmara
en forma de diagrama la secuencia a seguir en la sesión experimental.
7. Resultados. En algunas prácticas este punto viene desglosado por cálculos
aritméticos y una tabla de resultados, en la cual se deben incluir el valor de
referencia y la interpretación de los resultados.
8. Discusión. Este apartado se incluyo con el fin de que alumno plasme en el mismo
manual su análisis y discusión de resultados, evitando el manejo de otras libretas.
9. Conclusiones. Tiene la misma intención del punto 8.
10. Referencias consultadas. Es un punto en el cual el alumno deberá anotar las
referencias que empleo para realizar su discusión y elaborar sus conclusiones.
Se ha incluido también en el manual, el reglamento del laboratorio, que se ha ubicado
al inicio del manual, con la finalidad de que el alumno lo tenga siempre a la mano y
recuerde cuales son los lineamientos que debe seguir en el laboratorio, para un mejor
desarrollo de las prácticas.
Los Profesores de la Asignatura
3
UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
CODIGO: DOC-CB-FESC-
REGLAMENTO GENERAL DEX-01-00
PARA LOS LABORATORIOS
No de REVISIÓN:
2) Para todo trabajo realizado en el laboratorio deberá utilizarse bata blanca con
manga larga.
4) Por seguridad, no deben cerrarse las puertas del laboratorio con llave durante
las prácticas.
4
7) Los residuos peligrosos deben depositarse en los contenedores destinados
para tal fin, entendiendo por residuo peligroso: elementos, sustancias,
compuestos, desechos o mezclas de ellos que en cualquier estado físico
representan un riesgo para el ambiente, la salud o los recursos naturales, por
sus características corrosivas, reactivas, explosivas, tóxicas, inflamables o
biológico-infecciosas (Art. 3º de la Ley General del Equilibrio y Protección del
Ambiente).
10) El uso del laboratorio para trabajo extraordinario, deberá programarse con el
responsable del laboratorio en un horario que no interfiera con aquel destinado
para el desarrollo de las prácticas. para solicitar material y equipo, es requisito
indispensable que el alumno llene debidamente el vale de material (FPE-CB-
DEX-01-09/CSH-a) y lo entregue a la persona responsable, dejando como
depósito la credencial vigente de la UNAM.
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PRACTICA No. 1
6
Las venas más comúnmente utilizadas son las del área ante cubital (vena basílica,
cefálica y cubital media), debido a su accesibilidad, fácil manejo y comodidad para el
paciente. La venopunción es la más utilizada en el laboratorio clínico ya que es un
método sencillo para la obtención de sangre, esta suele hacerse en la vena media
cefálica que corre por el interior del brazo y es visible en el pliegue del codo. En casos
en los cuales resulta difícil localizar la vena, puede hacerse resaltar diciendo al
paciente que cierre y abra la mano, mediante el masaje o por combinación de ambos
procedimientos. Se puede realizar de una manera accesible en la mayoría de los
pacientes ambulatorios o de consulta externa y en algunos pacientes hospitalizados.
La aplicación del torniquete es recomendada para el caso de venas profundas, poco
visibles y poco palpables. Debe sujetarse con medio nudo para que pueda quitarse
jalando el extremo libre. Para su colocación, es necesario considerar que se ubique 10
cm. por encima del lugar de punción; si se coloca más alto no hay presión, mientras
que si está cerca de la zona de punción hay posibilidad de generar un hematoma;
además no debe estar más de un minuto en lugar de punción. Se ha demostrado que
la utilización del torniquete durante un tiempo mayor a 1 minuto, provoca aumento de
un 15% de desviación en valores de coagulación y de un 10% en el hematocrito.
Los anticoagulantes son sustancias que impiden la coagulación sanguínea, ya sea por
sustracción del calcio del plasma o por neutralización de la trombina. Cuando la
sangre se obtiene agregando algún anticoagulante, se inhibe la cascada de la
coagulación obteniendo, después de la centrifugación, elementos formes separados
del sobrenadante que se conoce como plasma. En cambio, si se permite que la
muestra coagule, se obtendrá coágulo y el sobrenadante se llama suero.
La sangre desfibrinada es aquella desprovista de factores de la coagulación.
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1.2 OBJETIVOS
- El alumno adquirirá los conocimientos necesarios a para poder realizar una
venopunción
- El alumno desarrollara la habilidad práctica por medio de la técnica de la
venopunción para poder obtener una muestra de sangre venosa con calidad e
integridad.
- El alumno conocerá la importancia e influencia de la buena toma de muestra
sanguínea a través de los conocimientos y practica adquiridos para poder llevar a
cabo un correcto diagnóstico y una toma de decisiones terapéuticas adecuada.
1.3 MATERIAL
1.3.1 Muestra Biológica
Se utilizarán tres muestras de sangre venosa: 3 ml y 10 ml obtenidos con jeringa, 7 ml
obtenidos con tubo al vacío.
8
1.4 METODOS
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f) Perforar la piel a lo largo de la cara lateral de la vena, avanzar la aguja y perforar la
pared de la vena.
g) Al subir espontáneamente la sangre (se observa una ligera gota en la cubeta de la
aguja) jalar ligeramente el émbolo con movimiento constante.
h) Cuando se tiene suficiente cantidad de sangre, se quita el torniquete, se retira la
aguja rápidamente y se aplica una torunda por último un apósito adhesivo elástico.
i) Para el manejo de la muestra obtenida con jeringa se retira la aguja de la jeringa y
la sangre se vacía lentamente por la pared de los diferentes tubos a usar con y/o sin
anticoagulante. Mientras se llenan los tubos sucesivamente, invertir con suavidad los
tubos con aditivos que ya se han llenado
10
La muestra de sangre venosa obtenida con jeringa se vacía en un tubo con tapón de
rosca que contenga al menos el mismo número de perlas de vidrio que mililitros de
sangre se vaya a desfibrinar. A continuación se aplica un movimiento de inversión
suave del tubo constante. Al cabo de 2-3 minutos se observará que el ruido que las
perlas hacían al chocar contra las paredes del tubo, deja de oírse, eso se debe a que
la fibrina que se va formando en el proceso de la coagulación, se deposita sobre ellas,
atrapándolas. A partir de ese momento se prosigue el movimiento rotatorio durante 10
minutos. Posteriormente se separan con mucho cuidado la sangre líquida en un tubo
de ensaye que se lleva a centrifugar y las perlas de vidrio en la tapa o base de una
caja Petri las cuales se lavan con agua destilada separando la fibrina que se adhirió a
ellas. La sangre líquida se centrifuga a 2.500 rpm/5 - 10 min.
11
12
1.6 DIAGRAMA DE FLUJO
13
1.7 RESULTADOS
1.7.1 Cálculos
14
1.8 DISCUSIÓN
1.9 CONCLUSIONES
15
PRÁCTICA No. 2
CITOMETRÍA HEMÁTICA
16
2.1.1 Información complementaria.
- ¿Cuáles son las instrucciones que se dan a un paciente a quien se le realizará una
citometria hemática?
- Justificar matemáticamente y señalar c/u de los factores a considerar en la obtención
del factor 36,8 utilizado para calcular la concentración de hemoglobina y sus unidades.
2.2 OBJETIVOS
El alumno aplicará los conocimientos adquiridos en la parte teórica, para realizar una
citometria hemática.
El alumno interpretará los resultados obtenidos en el laboratorio a fin de establecer la
presencia o no de anemia.
El alumno aprenderá a identificar la morfología de las diferentes células sanguíneas
con fines diagnósticos.
2.3 MATERIALES
2.3.1 Muestra biológica.
Sangre venosa completa obtenida por sistema de vacío con EDTA.
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2.3.4 Reactivos
Reactivo de Drabkin (Hemoglobina) Benzal
Etanol 70% Hipoclorito de sodio
Líquido de Turck Reactivo de Wright
Reactivo de Hayem Buffer de fosfatos para tinción de Wright
Cloruro de sodio 0,9% (SSF) Azul de cresilo brillante
2.4 MÉTODOS
2.4.1 Hemoglobina: Método de la cianometahemoglobina
Fundamento. Para la determinación de hemoglobina se utiliza el reactivo de Drabkin,
el cual contiene un detergente que permite la lisis de los eritrocitos y, por lo tanto la
liberación de la hemoglobina. Posteriormente, el ferricianuro de potasio la reduce a
metahemoglobina, que se estabiliza por la unión con los iones CN- (cedidos por el
KCN) formando cianometahemoglobina que tiene una absorbancia máxima a 540 nm.
Significado clínico. El valor de referencia de la hemoglobina para mujeres es de 12 a
16 g/dl y para hombres de 14 a 18 g/dl. La disminución de hemoglobina indica anemia,
que puede deberse a deficiencia en las sustancias que intervienen en su formación,
alteraciones en los órganos que la sintetizan y disminución en la producción o
destrucción excesiva de los eritrocitos.
Procedimiento.
- Colocar 5 ml de reactivo de Drabkin en un tubo 13x100
- Llenar la pipeta de Sahli hasta la marca de 20 con ayuda una boquilla.
- Secar el exceso de sangre con una gasa limpia.
- Sin dejar caer alguna gota de sangre, depositar la muestra en el tubo con el
reactivo de Drabkin, enjuagando la pipeta con un poco del reactivo.
- Tapar el tubo con papel parafilm. Homogenizar la preparación en un vórtex.
- Incubar 3 minutos a temperatura ambiente.
- Leer a 540 nm antes de 5 minutos. Multiplicar la absorbancia obtenida por 36.8
para obtener la concentración de hemoglobina en g/dl.
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Significado clínico. El valor de referencia para hombres es de 4,0 – 6,2 x 106 células /
mm3, el de mujeres es de 4,0 – 6,2 x 106 células / mm3. El aumento de eritrocitos se
observa en la hemoconcentración, en afecciones del bazo. Su disminución se
manifiesta en las anemias, cuyo origen puede ser la pérdida excesiva de sangre,
destrucción acelerada o producción inadecuada de eritrocitos.
Procedimiento.
- Llenar la pipeta de Thoma para eritrocitos (roja) con sangre hasta la marca de
0.5 con ayuda una boquilla.
- Secar el exceso de sangre con una gasa limpia.
- Sin dejar caer alguna gota de sangre, llenar con el líquido diluyente de Hayem
hasta la marca de 101 sin pasar de la marca.
- Tapar los extremos de la pipeta con papel parafilm.
- Mezclar el contenido en el agitador para pipetas de Thoma durante 1 min.
- Desechar las primeras 3 gotas y se llena el hematocitómetro.
- Contar las células con el objetivo 40X en las cinco cuadrículas secundarias con
la ayuda de un contador mecánico.
- Calcular el número de eritrocitos/mm3 multiplicando el valor obtenido por
10000.
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2.4.4 Índices de Wintrobe: VCM, HCM, CHCM
Fundamento. Se trata de indicadores obtenidos mediante cálculos aritméticos, que
involucran los valores de hemoglobina, número de eritrocitos/mm3 y hematocrito, y que
permiten la clasificación morfológica de las anemias.
Significado clínico. Los valores de referencia son:
- VCM = 80 – 100 fl; un valor < 80 fl indica anemia microcítica; mientras que por
arriba de 100 fl indica anemia macrocítica. Esta relacionada con la anisocitosis.
- HCM = 26 a 34 pg y CHCM = 32 – 36 g/dl; valores menores al de referencia
indican anemia hipocrómica; mientras que valores por arriba del límite de
referencia indican anemia hipercrómica.
Procedimiento.
Para obtener los índices de Wintrobe es necesario tener los valores de hemoglobina,
número de eritrocitos/mm3 y hematocrito, utilizando las siguientes fórmulas.
Volumen Corpuscular Medio (VCM) = Hto / No. eritrocitos X 10 = [fl] (femtolitros)
Hemoglobina Corpuscular media (HCM) = Hb / No eritrocitos. X 10 = [pg] (picogramos)
Concentración de HCM (CHCM) = Hb / Hto X 100 = [g/dl]
20
- Repetir el conteo en al menos en tres campos distintos. Expresar el número de
reticulocitos observados por cada mil eritrocitos o en tanto por ciento.
21
leucocitarias, además de observar la morfología y características de tinción de los
eritrocitos y plaquetas.
Significado clínico. El valor de referencia relativo y las alteraciones comunes de las
células leucocitarias son las siguientes:
- Neutrófilos segmentados = 45 a 60%; la neutrofilia se observa durante
procesos inflamatorios agudos e infecciosos; la neutropenia se presenta en la
depresión de la médula ósea, inmunodeficiencia o inmunosupresión.
- Linfocitos = 20 a 40%; la linfocitosis se manifiesta en alteraciones virales y en
respuesta a procesos infecciosos; la linfopenia se observa en procesos
similares a la neutropenia.
- Monocitos = 0 a 7%; la monocitosis
- Neutrófilos en banda = 0 a 5 %; su número se observa incrementado cuando
los neutrófilos segmentados disminuyen por reaccionar ante el agente
infeccioso.
- Eosinófilos = 0 a 4%; la eosinofilia se presenta principalmente en respuesta a
cuadros alérgicos y durante las parasitosis.
- Basófilos = 0 a 1%; la basofilia se manifiesta cuando los eosinófilos aumentan,
pues se trata de células que controlan la respuesta alérgica.
Como se mencionó, en el frotis sanguíneo también se observan las plaquetas (forma y
tamaño) y los eritrocitos, cuyas observaciones deben relacionarse a lo determinado
por los índices de Wintrobe, de acuerdo a lo siguiente:
− Anisocitosis: diferentes tamaños del eritrocito; siendo un microcito si su
tamaño es menor 7 µ m; normocito si va de 7 a 8 µ m y macrocito si es mayor
a 8 µ m. Esta característica se relaciona con el VCM.
− Anisocromía: diferentes características de tinción; es hipocrómico si se
tiñó débilmente; normocrómico si tiene una coloración normal e hipercrómico si
su tinción es intensa. Esta característica se relaciona con el HCM y CHCM.
− Poiquilocitosis: cambios permanentes en la forma del eritrocito. No
mantiene relación con los índices de Wintrobe.
Procedimiento.
- Colocar una gota de sangre perfectamente homogenizada en un portaobjetos.
- Hacer la extensión de sangre con un movimiento suave y firme con la ayuda de
otro portaobjetos.
- Secar al aire.
- Cubrir el frotis completamente con colorante de Wright durante 7 minutos
(cuidar que no se seque el colorante).
22
- Sin tirar el colorante agregar el buffer de fosfatos durante 15 minutos.
- Decantar y enjuagar con agua destilada.
- Contar al microscopio en el objetivo de 100X, 100 células leucocitarias con
ayuda de un contador mecánico. Al mismo tiempo que se recorre el frotis
observar la morfología de eritrocitos y plaquetas.
23
2.6 DIAGRAMA DE FLUJO
24
2.7 RESULTADOS
2.7.1 Cálculos
2.7.1 Tabla
Datos del Paciente
Nombre______________________________________ Edad______ Sexo____
25
2.8 DISCUSIÓN
2.9 CONCLUSIONES
2.10 REFERENCIAS
26
PRÁCTICA No. 3
Omar Ruiz C.
27
reacción de aglutinación es utilizada también en la determinación de los grupos
sanguíneos.
3.2 OBJETIVOS
- El alumno conocerá la importancia de los grupos sanguíneos en el banco de
sangre através del estudio de incompatibilidades.
- El alumno determinará los grupos sanguíneos ABO y Rh de una muestra de
sangre a través de reacciones de aglutinación.
- El alumno analizará la compatibilidad de dos muestras para una transfusión a
través de las pruebas cruzadas.
- El alumno conocerá la utilidad del suero de Coombs con diferentes pruebas.
3.3 MATERIALES
3.3.1 Muestra biológica
Sangre venosa completa obtenida por sistema al vacío con EDTA
Suspensión de eritrocitos A al 5%
Suspensión de eritrocitos B al 5%
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termómetro Jeringa
Algodón
3.3.4 Reactivos
Suero hemotipificador Anti-A Solución salina fisiológica (SSF)
Suero hemotipificador Anti-B Albúmina al 22%
Suero hemotipificador Anti-D Alcohol etílico al 70%
Suero de Coombs
3.4 MÉTODOS
3.4.1 Tipificación Clásica
Fundamento. La tipificación clásica utiliza la reacción de aglutinación para observar si
existen los antígenos A y/o B en los eritrocitos. Si existe alguno de ellos, reaccionarán
específicamente con anticuerpos anti-A o anti-B que harán que aglutinar produciendo
una prueba positiva.
Significado clínico. Una aglutinación positiva indica la presencia del antígeno, ya sea
“A”, “B”, ambos (“AB”) o no aglutinación (“O”); así mismo, el antígeno indica el grupo
sanguíneo a la que pertenece la muestra.
Procedimiento.
- Colocar una gota de suero anti-A en un extremo de la placa.
- Colocar una gota de suero anti-B en otro extremo de la placa.
- Agregar una gota de sangre completa próximo a cada gota de suero.
- Mezclar bien con un aplicador de madera y rotar la placa por 2 minutos
- Observar si existe o no aglutinación en menos de 2 minutos (se debe observar
29
- Observar si existe o no aglutinación moviendo un poco el fondo del tubo.
30
sanguíneos diferentes al ABO y Rh que pudieran reaccionar al momento de la
transfusión.
Significado clínico. Después de agregar el suero de Coombs y no observar
aglutinación en ambos tubos hay compatibilidad del 100%. Si sólo existe aglutinación
en el tubo de la Prueba Mayor, existe un 75% de incompatibilidad; por otro lado si sólo
aglutina el tubo de la Prueba Menor, hay un 25% de incompatibilidad. La aglutinación
en ambos tubos indica 100% de incompatibilidad.
Procedimiento 1 (medio salino)
- Colocar 2 gotas de suero o plasma del receptor y 2 gotas de suspensión de
eritrocitos del donador (Prueba Mayor).
- Colocar 2 gotas de suero o plasma del donador y 2 gotas de suspensión de
eritrocitos del receptor (Prueba Menor).
- Mezclar y centrifugar a 1.000 rpm por 1 minuto.
- Observar si existe aglutinación, de lo contrario incubar 15 min. a 37°C.
- Centrifugar a 1.000 rpm por 1 minuto. Observar si hay aglutinación.
- Si no hay aglutinación o es dudosa, lavar 4 veces con SSF.
- Decantar, mezclar y agregar 2 gotas de suero de Coombs.
- Mezclar y centrifugar a 1.000 rpm, 1 min. Observar aglutinación.
Procedimiento 2 (medio proteico).
- Colocar 2 gotas de suero o plasma del receptor y 2 gotas de suspensión de
eritrocito del donador (Prueba Mayor).
- Colocar 2 gotas de suero o plasma del donador y 2 gotas de suspensión de
eritrocitos del receptor (Prueba Menor).
- Agregar 2 gotas de albúmina y seguir los pasos del 3 al 8 del procedimiento de
medio salino.
NOTA: los tubos en medio salino y medio proteico pueden realizarse
simultáneamente
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Torundas, servitoallas, guantes, envolturas y demás material no contaminado se
desechan en el contenedor de basura municipal
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3.7 RESULTADOS
3.7.1 Tablas
Aglutinación
Antígeno presente (A, B ó ninguno -O-)
(+) Aglutinó
(-) No aglutinó
Tipificación Inversa
Suspensión de eritrocitos Eritrocitos A Eritrocitos B
Aglutinación
Isoaglutinina presente (anti-A, anti-B)
(+) Aglutinó
(-) No aglutinó
Grupo sanguíneo
Factor Rh
Pruebas Cruzadas
Proceso Centrifugación Incubación a 37°C Lavado con SSF y suero
1000 rpm/ 1 min y centrifugación de Coombs
Medio PM
salino Pm
Medio PM
proteico Pm
(+) Aglutinó PM. Prueba Mayor Pm. Prueba Menor
(-) No aglutinó
33
3.8 DISCUSIÓN
3.9 CONCLUSIONES
3.10 REFERENCIAS
34
PRÁCTICA No. 4
PRUEBAS DE COAGULACIÓN
Lourdes Galván R.
35
4.1.1 Información complementaria
- Esquematiza la cascada de coagulación completa.
- Define petequia, hematoma y púrpura.
- Señala los cuidados que se deben tener al realizar pruebas de coagulación.
4.2 OBJETIVO
El alumno conocerá y seleccionará la muestra útil para realizar cada una de las
pruebas de coagulación indicadas para esta práctica y, mediante el conocimiento de
los fundamentos de cada método, aplicará la técnica adecuada para obtener
resultados confiables que reflejen el estado de salud o enfermedad del paciente
respecto a la hemostasia.
4.3 MATERIALES
4. 3.1 Muestras biológicas
− Sangre venosa anticoagulada con EDTA obtenida con jeringa
− Sangre venosa anticoagulada con citrato trisódico obtenida con jeringa
− Plasma rico en plaquetas (PRP) obtenido de la muestra citratada
− Plasma pobre en plaquetas (PPP) obtenido de la muestra citratada
36
4.3.4 Reactivos
Solución de EDTA al 5% Etanol al 70%
Citrato trisódico al 3,8 % Determinaciones de TTPA
Cloruro cálcico (0,025M) Determinaciones de TP
Oxalato de amonio al 1%
4.4 MÉTODOS
Recomendaciones
-Identificar perfectamente el material y los reactivos a utilizar.
-Rotular en forma clara cada uno de los tubos de ensaye y revisar la jeringa a
emplear.
-Dosificar en un tubo 13x100 la cantidad necesaria de citrato trisódico al 3,8 % para
6ml de sangre.
-Dosificar en un tubo 12x75 la cantidad necesaria de EDTA al 5% para 1ml de sangre.
37
*Disminución en la concentración de las plaquetas, por debajo de 130.000/mm3,
causas:
i) Disminución de la trombopoyesis: pancitopenia, anemia mielocítica
ii) Trombopoyesis ineficaz: Trombopenias hereditaria, Hemoglobinuria paroxistica
nocturna,
Déficit de ácido fólico o de vitamina B 12
iii) Aumento de la destrucción de las plaquetas: Púrpura trombcitopénica idiopática,
Púrpura trombótica trombocitopénica, Hiperesplenismo, Sepsis bacteriana,
Coagulación intravascular diseminada.
b) Trombocitosis:
*Aumento en la concentración de plaquetas, por encima de 450.000/mm3, causas:
i) Primarias: Trombocitemia esencial u otros síndromes mieloproliferativos.
ii) Secundarios: esplenectomía, infecciones que cursan con una formación de
depósitos purulentos, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, neoplasias malignas.
Procedimiento:
-En un tubo (12x75) que contiene 1,98 ml de oxalato de amonio al 1 % frío, agregar
0,02 ml de sangre con pipeta de Sahli.
-Tapar el tubo con papel parafilm y mezclar.
-Refrigerar 15 min.
-Llenar cámara de Neubauer y colocarla dentro de la cámara húmeda durante 5 min.
-Limpiar la base de la cámara.
-Observar al microscopio (10x), buscar la cuadrícula central.
-Cambiar el objetivo a (40x) con baja intensidad de luz contar las plaquetas
observadas.
38
heparina. Debido a esto último la prueba se utiliza en el control de tratamientos
heparínicos.
Procedimiento
-Rotular previamente 3 tubos de ensaye 13x100: del 1 al 3
-Vaciar en cada tubo 1ml de la sangre extraída, comenzando por el tubo 1, momento
en el que se activa el cronómetro; cuidar que los tubos tengan el mismo volumen para
que la prueba sea válida.
-Incubarlos a 37° C en posición vertical.
-A los 4 min. sacar el tubo 1 y revisarlo inclinando suavemente, regresarlo a incubar,
seguir revisando cada 30seg y conforme transcurre el tiempo disminuirlo a 15seg
manteniéndolo el menor tiempo fuera de incubación hasta detectar la coagulación.
-Ahora se revisará el tubo 2 de la misma forma y una vez coagulado éste revisar el
tubo 3.
-Finalmente se reporta el tiempo del tubo 3 que es el menos manipulado.
39
4.4.5 Tiempo de tromboplastina parcial activada (TTPA).
Fundamento. Es el tiempo que tarda en coagular un PPP en presencia de un sustituto
del f3p que consiste en una suspensión de fosfolípidos, obtenidos a partir de cerebro
de conejo y se conoce como cefalina, pero además contiene una sustancia activadora
de los factores de contacto que puede ser: caolín, polvo de vidrio, celite o ácido
elágico. Esta prueba sirve para explorar la vía intrínseca y la vía común.
Significado clínico. Valores de referencia: 30-42 seg.
Tiempos prolongados se presentan ante déficit de factores de la vía intrínseca y para
el control de tratamientos con anticoagulantes, en concreto, de las terapias con
heparina.
Procedimiento
-Marcar tres tubos de ensaye 12x75 y depositar en cada tubo:
-0,1 ml de PPP e incubar a 37 ° C por 2 min.
-Trabajar cada uno de los tubos de la siguiente manera:
-Agregar 0,1ml de reactivo de TTPa, mezclar e incubar 2 min. a 37° C.
- Agregar 0,1 ml de CaCl2 (0,025M) a 37° C, mezclar, cronometrar, incubar y leer
aprox. a los 25 seg. Continuar ***
40
pequeña herida estandarizada (3 mm de profundidad) y midiendo el tiempo que tarda
en cesar el sangrado.
Significado clínico. Valor de referencia: 1 - 3 min.
El tiempo de sangrado está alargado en las púrpuras vasculares, en las
trombocitopenias, en las trombopatías congénitas, en la enfermedad de von
Willebrand y en los sujetos que han tomado acetilsalicílico.
Procedimiento.
- El lóbulo de la oreja debe estar caliente ya sea frotándolo o aplicando compresa de
agua caliente.
-Limpiar con una torunda con alcohol (70 %). Dejar secar.
-Hacer una incisión o herida de aprox. 3 mm de profundidad con una lanceta estéril.
-Al aparecer la primera gota de sangre cronometrar, dejarla que caiga sobre el papel
filtro o absorberla con éste, “sin tocar la piel” cada 15 ó 30 segundos.
-La muestra deja de tomarse cuando cesa la hemorragia.
-Detener el cronómetro. Registrar el tiempo.
41
4.6 DIAGRAMA DE FLUJO
42
4.7 RESULTADOS
4.7.1 Cálculos
Tiempo de sangrado
Tiempo de coagulación
TCP
TP
TTPa
Conteo plaquetario
4.8 DISCUSIÓN
43
4.9 CONCLUSIONES
44
PRÁCTICA No. 5.
QUÍMICA SANGUÍNEA I Y GLUCOSA POSPRANDIAL
Beatriz González M.
45
5.1.1 Información complementaria
- Explique la utilidad de la ley de Lambert-Beer en la realización de la práctica.
- Indique las longitudes de onda que conforman el rango UV-Visible en el espectro
electromagnético.
- Defina cada uno de los siguientes conceptos: Solución patrón, Solución blanco,
Solución control
- ¿Qué factores además del ayuno pueden afectar a las determinaciones?
5.2 OBJETIVOS
- El alumno conocerá la importancia del rango UV-Visible del espectro
electromagnético en las determinaciones de Química Clínica.
- El alumno conocerá el fundamento y la técnica de las determinaciones, a través de
la realización de las mismas, para que con base a sus resultados valore el estado
clínico del paciente.
5.3 MATERIALES
5.3.1 Muestra biológica
Suero obtenido en tubo al vacío de tapón rojo.
Plasma obtenido con tubo al vacío de tapón lavanda.
Nota: El desayuno que el paciente tomará inmediatamente después de la primera toma
de muestra es el siguiente: 250mL de jugo de naranja natural, un plato con cereal
azucarado en leche y un plátano, una rebanada de pan tostado con mermelada.
46
5.3.4 Reactivos
Alcohol para las torundas Kit para determinación de:
Agua destilada - glucosa
Hipoclorito de sodio - creatinina
- urea
- ácido úrico
5.4 MÉTODOS
5.4.1 Glucosa: método enzimático colorimétrico
Fundamento
GOD
D-glucosa + O2 + H2O2 Ácido glucónico + H2O2
POD
H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol 4-(p-benzoquinona-iminofenazona) + 2H2O
quinonimina roja (λ = 505 nm)
GOD: glucosa oxidasa; POD Peroxidasa
que indica el uso de soluciones blanco, patrón y muestra, que son tratados bajo las
misma condiciones de incubación y lectura de longitud de onda. Para la descripción de
47
las técnicas es necesario consultar el manual de uso (inserto) de los reactivos a
utilizar, verificando su vigencia.
5.4.3 Urea
Fundamento: método colorimétrico
Ureasa
Urea + H2O CO2 + 2NH4+
NH4+ + salicilatos + hipoclorito indofenol (570 nm)
48
Significado clínico. El valor de referencia es de 2,5 a 7,5 mg/dl. La hiperuricemia
primaria se observan cuando hay defectos enzimáticos hereditarios; la hiperuricemia
secundaria se presenta en insuficiencia renal; en gota, litiasis renal, insuficiencia renal,
síndrome de Lesh Nyhan y preeclamsia. La hipouricemia se manifiesta cuando hay
dieta baja en purinas, tratamiento excesivo con alopurinol, síndrome de Fanconi
(defectos de la resorción tubular), enfermedad hepática.
49
5.6 DIAGRAMA DE FLUJO
50
5.7 RESULTADOS
5.7.1 Cálculos
51
5.8 DISCUSIÓN
5.9 CONCLUSIONES
5.10 REFERENCIAS
52
PRÁCTICA No. 6.
QUÍMICA SANGUÍNEA II
René Damián S.
53
b) bilirrubinas directa, indirecta y total son pruebas que valoran la biotransformación y
excreción hepática, conjuntamente indican el origen de la ictericia.
6.2 OBJETIVOS
- El alumno conocerá el fundamento y la técnica de las determinaciones, a través de
la realización de las mismas, para que obtenga resultados confiables.
- El alumno conocerá la importancia clínica de las determinaciones y con base a sus
resultados valore el estado clínico del paciente.
6.3 MATERIALES
6.3.1 Muestra biológica
Suero obtenido en tubo de tapón rojo o dorado
54
6.3.4 Reactivos
Kit para determinación de Alcohol para las torundas
- proteínas totales Agua destilada
- albúmina Hipoclorito de sodio
- colesterol
- triglicéridos
- lípidos totales
- bilirrubinas
6.4 MÉTODOS
NOTA: Para conocer el procedimiento para todas las técnicas utilizadas en esta
práctica es necesario consultar el manual de uso (inserto) de los reactivos
disponibles en el laboratorio.
6.4.1 Proteínas totales: método del Biuret
Fundamento
Medio alcalino
Proteínas + Cu2+ Complejo azul violeta (λ = 560 nm)
Significado clínico. El valor de referencia es 6,1 – 7,9 g/dl. La hiperproteinemia
puede presentarse durante la deshidratación o diarrea grave. La hipoproteinemia se
observa en inanición o mala absorción (desnutrición), hepatopatías, síndrome
nefrótico, hemorragias.
55
POD
H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol quinonimina roja (λ = 505 nm) + 2H2O
CEH: Colesterol éster hidrolasa; COx: Colesterol oxidasa; POD: Peroxidasa
Significado clínico. El valor de referencia es 60 – 200 mg/dl. La determinación de
colesterol en forma aislada tiene utilidad diagnóstica limitada. La hipercolesterolemia
se ha relacionado con la formación de placas ateroscleróticas, con pacientes
hipertensos y obesos, en los cuales se incrementa el riesgo de enfermedad cardiaca
coronaria. La hipocolesterolemia puede relacionarse con alteraciones en la síntesis de
hormonas esteroideas.
56
Significado clínico. Los valores de referencia son:
Bilirrubina directa hasta 0,2 mg/dl, Bilirrubina indirecta hasta 0,8 mg/dl, Bilirrubina total
hasta 1,0 mg/dl. La determinación de bilirrubinas apoya a la evaluación y clasificación
de la ictericia (hiperbilirrubinemia):
Ictericia Defecto fisiológico Ejemplos de etiología
Prehepática Producción excesiva de bilirrubina Ictericia hemolítica
no conjugada
Hepática no Transporte defectuoso de la bilirrubina Síndrome de Gilbert
conjugada Deficiencia de la glururoniltransferasa Síndrome de Crigler-Najjar
57
6.6 DIAGRAMA DE FLUJO
58
6.7 RESULTADOS
6.7.1 Cálculos
59
6.8 DISCUSIÓN
6.9 CONCLUSIONES
60
PRACTICA No. 7
URIANÁLISIS
Leticia Arellano M.
61
- ¿Qué significa: anuria, poliuria, oliguria, hematuria y cetonuria?
7.2. OBJETIVO
El alumno interpretará los resultados emitidos de un urianálisis, relacionando la
importancia de la adecuada recolección de la muestra de orina, el conocimiento del
fundamento de las determinaciones realizadas y la identificación al microscopio de las
estructuras presentes en la orina centrifugada, a fin de descartar alguna enfermedad.
7.3 MATERIALES
7.3.1 Muestra biológica
50 mL de orina recién emitida
7.3.4 Reactivos
Tira reactiva para análisis de orina.
7.4 METODOS
- Homogenizar y permitir que la muestra de orina a este a temperatura ambiente
antes de realizar el estudio.
- Rotular dos tubos 13x100 mm (tubo 1 y tubo 2). Trasvasar aproximadamente 6 mL
de orina a cada tubo.
62
La orina es muy pálida o incolora entre otras cosas debido a un elevado consumo de
líquidos o a estados patológicos como la diabetes mellitus.
La causa más común del color rojo de la orina es la presencia de eritrocitos
(hematuria), aunque también puede deberse a la presencia de hemoglobina libre o
mioglobina.
La orina de color castaño a negro puede deberse a la excreción de ácido
homogenístico, característico de la alcaptonuria.
Los pacientes que tienen ictericia obstructiva excretan pigmentos biliares como la
bilirrubina, y la orina es de color castaño-amarillento a verde-amarillento.
En cuanto a la turbidez de la orina, puede ser debida a la presencia de cristales,
leucocitos, células epiteliales, bacterias, moco o grasa.
Procedimiento
- Se puede emplear cualquiera de los dos tubos. Observar el aspecto (presencia o
no de turbidez) y color de la orina. Anotar resultados.
63
- Gravedad específica. Se basa en el cambio de pKa de algunos polielectrólitos, con
lo que se mide la concentración iónica de la orina, lo cual esta relacionado con el
peso específico.
- Bilirrubina. Se basa en la reacción de acoplamiento de la bilirrubina con una sal de
diazonio.
- Urobilinógeno. Se basa en la reacción que se lleva a cabo entre el urobilinógeno y
el dimetilaminibenzaldehido, generando un complejo color amarillo castaño.
- Leucocitos. La prueba detecta la presencia estearasa leucocitria, esta enzima
hidroliza el éster del ácido indoxilocarbónico que a su vez, reacciona con el
indicador bromosulfoftaleína produciendo un color morado.
Significado Clínico
- pH. El pH de la orina es ligeramente ácido alrededor de 6. No existiendo un
intervalo normal, ya que puede cambiar de ácida a básica, por factores tales como
la dieta.
- Glucosa. La presencia de cantidades significativas de glucosa en la orina se llama
glucosuria. La principal causa de glucosuria es un elevado nivel de glucosa en
sangre, ya que por lo general la glucosa aparece en la orina cuando el nivel de
glucosa en sangre supera los 160-180 mg/dL, cifra que se conoce como el umbral
renal de la glucosa.
- Proteínas. En condiciones normales existe una mínima cantidad de proteínas de
bajo peso molecular en la orina (< 20 mg/dL). La presencia de una concentración
elevada de proteínas en la orina puede constituir un índice de enfermedad renal.
- Sangre oculta. Se denomina así porque es sangre que no se aprecia a simple vista
(microhematuria) y el color de la muestra no resulta afectado. Puede presentarse
hematuria en enfermedades renales o lesiones del tractor urinario inferior.
- Cetona. Los cuerpos cetónicos se forman durante el catabolismo de los ácidos
grasos. Cuando la capacidad de los tejidos para utilizar los cuerpos cetónicos es
superada, el exceso se excreta en la orina. Lo anterior sucede en casos de ingesta
baja de hidratos de carbono, enfermedades como la diabetes mellitus y en la
eclampsia entre otros.
- Nitritos. La determinación de nitritos por tira reactiva es un método rápido e
indirecto para el diagnóstico de bacteriuria e identifica la presencia de bacterias
que reducen el nitrato de la orina a nitrito (Ej. E. coli, Citrobacter, Klebsiella).
- Gravedad específica. Constituye un índice del material disuelto en la orina. El
intervalo normal varía de 1.003 – 1.035. Algunas de las causas que producen
64
aumento del peso específico son las siguientes: deshidratación, proteinuria,
glucosuria y eclampsia.
- Bilirrubina. Normalmente en la orina no existen cantidades detectables de
bilirrubina. La presencia de bilirrubina en orina se debe a la presencia de ictericia
por aumento de bilirrubina conjugada.
- Urobilinógeno. A diferencia de la bilirrubina, existen una pequeña cantidad de
urobilinógeno en la orina (1 unidad Erlich / 100 mL de orina) y su elevación puede
indicar daño hepático.
- Leucocitos. En condiciones normales los leucocitos no son detectables por tira
reactiva. La tira reactiva dará positiva, solo si existe una cantidad abundante de
leucocitos, lo cual se puede deber a la presencia de procesos infecciosos o
inflamatorios del tracto urinario.
Procedimiento
- Emplear el tubo No. 1 y una tira reactiva para urianalisis.
- Sumergir la parte reactiva de la tira en el tubo y retirar inmediatamente, teniendo
cuidado de retirar el exceso de orina sobre papel absorbente.
- Leer los resultados para cada parámetro en el tiempo indicado en la etiqueta del
frasco y comparando los resultados con la escala de colores indicada en la
etiqueta. El tiempo de lectura no debe exceder de dos minutos.
- Debido a que se trata de una determinación semicuantitativa, los resultados se
reportan como negativo (-) o positivo (+) y en caso de ser positivo puede
reportarse con +, ++, +++ o ++++, en función de la intensidad del color generado.
- Anotar resultados.
Nota: Las tira reactiva debe mantenerse en el envase original con el desecante y
extraerla hasta el momento de emplearla cuidando de no tocar las bandas reactivas
con los dedos y tapar el frasco inmediatamente después de extraer la tira.
Significado Clínico
En condiciones normales la orina es transparente prácticamente no contiene partículas
en suspensión. Sin embargo en algunos casos patológicos y no patológicos, se
65
pueden encontrar estructuras tan diversas como células, cilindros, cristales y cuerpos
extraños generados por algún medicamento.
Células.
Eritrocitos: Se pueden encontrar de 2-3 por campo y en gran número indican sangrado
de vías urinarias.
Leucocitos. Es normal encontrar de 1-2 por campo, pero se incrementan en casos
como infección o inflamación de vías urinarias.
Células Epiteliales. Provienen de las vías urinarias y pueden ser:
- Células epiteliales pavimentosas, son células grandes de núcleo pequeño y
provienen de vías urinarias bajas o epitelio vaginal.
- Células epiteliales piriformes, más pequeñas que las pavimentosos, con un
apéndice en forma de cola y provienen de vías urinarias altas.
Cilindros.
Los cilindros son precipitados de proteína que pueden o no agrupar células o algún
otro material y se forman en los túbulos contorneados, razón por la que adquieren su
nombre y forma. En función de la composición del cilindro, se pueden encontrar
cilindros hialinos, cilindros eritrocitarios, cilindros leucocitarios, cilindros granulosos,
cilindros de células epiteliales y cilindros cilindros grasos.
Cristales.
Por lo general no se encuentran cristales en la orina recién emitid, pero aparecen
dejándola reposar un tiempo. La presencia de abundantes cristales en la orina resulta
importante en el caso de sospecha de cálculos renales o trastornos s. Entre los
cristales más importantes se encuentran los de tirosina, leucina o sulfamida. Como la
formación de cristales depende del pH de la orina, en general se clasifican como:
cristales de orina ácida y cristales de orina básica.
Cristales de orina ácida:
Cristales de ácido úrico. Se presentan en casos como la gota, enfermedades febriles o
nefritis.
Cristales de oxalato de calcio. Pueden aparecer después de la ingesta de alimentos
ricos en oxalatos y en diabetes mellitus o en alguna enfermedad renal crónica.
Cristales de uratos de sodio. Carecen de significado clínico.
Cristales de cistina. Aparece en pacientes que presentan cistinuria sistémica.
Cristales de orina alcalina:
66
Cristales de fosfato triple. Se llegan a encontrar en orinas normales, pero también
pueden aparecer en algunos procesos patológicos como cistitis crónica o cálculos
renales.
Cristales de fosfato amorfo. Carecen de significado clónico.
Cristales de fosfato de calcio. Pueden estar presentes en caso de cálculos renales.
Procedimiento
- Tapar el tubo No. 2 con papel parafilm y centrifugar a 2500 rpm durante 5
minutos.
- Después de centrifugar, decantar el sobrenadante, dejando aproximadamente
0.5 mL del mismo para resuspender el sedimento.
- Con ayuda de una pipeta Pasteur colocar una gota de sedimento resuspendido
y cubrirla con un cubreobjetos.
- Enfocar en el microscopio primero con el objetivo de 4x y después con el de
10x (seco débil) para enfocar la imagen.
- Cambar al objetivo de 40x y revisar 15 campos.
- Reportar tipo y número de estructuras encontradas por campo. En el caso de
que las estructuras sean muy abundantes. Se reportará escasos, moderados o
abundantes.
- Anotar resultados.
Nota: Traer para el día se la práctica un atlas de sedimento urinario o laminillas de
color para ayudar a identificar las estructuras encontradas.
67
7.6 DIAGRAMA DE FLUJO
68
7.7 RESULTADOS
Datos del Paciente
Nombre______________________________________Edad______ Sexo____
Análisis Físico
Determinación Resultado Valor de Referencia Observaciones
Color
Aspecto
Análisis Químico
Determinación Resultado Valor de Referencia Observaciones
Glucosa
Proteínas
Sangre
Cetona
Bilirrubina
Gravedad
específica
pH
Urobilinógeno
Nitrito
Leucocitos
Análisis de sedimento
Resultado Valor de Referencia Observaciones
Eritrocitos
Leucocitos
Otras estructuras
69
7.8 DISCUSIÓN
7.9 CONCLUSIONES
70
REFERENCIAS
71