Universidad Politécnica del Estado de Morelos

Ingeniería en Biotecnología
Biología Celular y Molecular Examen departamental Agosto/2018

Nombres: Almazán Orlova Luba Tzitlali, Hernández Gil Karla Andrea.

Lea cuidadosamente cada una de las preguntas y responda utilizando lenguaje técnico. Al menos 4
referencias bibliográficas de libro y/o artículos.

1. Las mutaciones condicionales letales han demostrado ser indispensables en análisis

genéticos y bioquímicos de procesos complejos tal como la replicación del DNA. Las
mutantes sensibles a la temperatura, la cual es una forma de una mutación condicional
letal, permite el crecimiento de la mutante a una temperatura ( por ejemplo 30ºC) pero
no a una temperaturas más elevada ( por ejemplo 42ºC).
Durante muchos años se han aislado un gran numero de mutantes en la replicación
sensibles a la temperatura en E. coli. Estas bacterias mutantes presentan defectos en la
replicación a 42ºC pero no a 30ºC. Si la temperatura del medio cambia de 30 a 42ºC, esas
mutantes detienen la síntesis de DNA. Las mutantes de parada rápida detienen
inmediatamente la síntesis de DNA, mientras las mutantes de parada lenta detienen la
síntesis de DNA después de varios minutos. 10 Puntos
a) Prediga cual de las siguientes proteínas, en una mutante sensible a la temperatura,
mostraría un fenotipo de parada rápida o de parada lenta. En cada caso explica y justifica
tu predicción de la función.
i. DNA topoisomerasa I
ii. SSBP
iii. DNA helicasa
iv. DNA primasa
v. DNA ligasa

Las proteínas que están involucradas en el movimiento de la horquilla de la replicación mostraran

un fenotipo de parada rápida, esto debido a que la horquilla de replicación no podrá avanzar si
las proteínas mencionadas no cumplen su función. En el caso de las proteínas mutantes: DNA
topoisomerasa l, será incapaz de aliviar la tensión de las cadenas de DNA antes del inicio de la
replicación; Las SSB no podrán estabilizar el DNA en la bifurcación; La DNA helicasa no abrirá las
cadenas de DNA. La DNA primasa mostrará un fenotipo de parada rápida, pero esto solo afectaría
en la síntesis de la cadena rezagada.
Las proteínas que no están involucradas en el movimiento de la horquilla de replicación
mostrarán un fenotipo de parada lenta ya que las moléculas de DNA que habían pasado la etapa
de iniciación antes de que la temperatura aumentara continuarían replicando el cromosoma
hasta que se requiera de una etapa de iniciación en el ciclo siguiente. Por lo tanto una DNA ligasa
sensible a la temperatura mostraría un fenotipo de parada lenta, ya que el progreso de la
horquilla de replicación no se detendría.
 2. En la figura 1, puedes observar la proteína activadora CAP y el represor Lac en las 4
combinaciones posibles de sitios de unión en el promotor del operón Lac. Cada
combinación de las proteínas regulatorias corresponde a una mezcla particular de glucosa
y lactosa. Para cada una de las 4 combinaciones, señala en el extremo izquierdo de la
figura cual es el azúcar que esta presente y, en el extremo derecho, si el operón estaría
encendido o apagado. 10 Puntos

+ + APAGADO

+ _ APAGADO

_ _
APAGADO

_ + APAGADO (falta la ARN polimerasa)

Figura 1. Disposición de los sitios de unión y las cuatro posibles combinaciones de genes proteínas
reguladoras en el promotor del Operón Lac

NOTA: En el último caso, el operón cumple con todas las condiciones para estar encendido,
debido a que hay ausencia de glucosa disponibilidad de lactosa y el represor lac no se encuentra
unido al operador por la unión de la alolactosa. CAP está activa por lo que lo único que faltante
es la ARN polimerasa para que haya una fuerte transcripción.

3. Durante tu estancia II generas una fusión entre el operón Trp, que codifica las enzimas
necesarias para la biosíntesis de triptófano, y el operón Lac, que codifica las enzimas
necesarias para el metabolismo de lactosa (Figura 2). ¿Bajo que condiciones (A-F) se
expresará la enzima beta galactosidasa en la cepa que porta la fusión del operón Trp-Lac?
Explica detalladamente que sucede en cada una de las condiciones se exprese o no la
enzima justifica tu respuesta. 18 Puntos
A. En ausencia de lactosa y glucosa
B. En presencia de lactosa y glucosa
C. En ausencia de lactosa y presencia de glucosa
D. En presencia de lactosa y ausencia de glucosa
E. En ausencia de triptófano
F. En presencia de triptófano
Figura 2. Operón Trp y Lac normal y fusionados

En el operón fusionado los genes del operón Lac han estado bajo el control de la región
reguladora del operón Trp. Por lo tanto, la expresión del producto del gen LacZ la β-galactosidasa
estará regulada por el represor de triptófano. Debido a que el represor de triptófano requiere
triptófano para unirse a la región reguladora y apagar el operón, la expresión de β-galactosidasa
ocurrirá solo cuando el triptófano esté ausente del medio: condición E.

Debido a que la región reguladora del operón triptófano controla la expresión del producto de
LacZ, cuando esté presente el triptófano: condición F el operón no se transcribirá, ya que el
regulador reconoce el triptófano del medio y considera un gasto innecesario de energía crear
más. Por lo que el operón permanece apagado.

Para las condiciones A, B, C, el operón permanece inactivo debido a que las condiciones descritas
inhiben la síntesis de β-galactosidasa, debido a la regulación por el represor Lac. En la condición
D, el operon está encendido, debido a que la presencia de lactosa funciona como un inductor en
ausencia de glucosa, por lo que el gen se transcribirá.

Bibliografía.

 Alberts,B. et al, Biología Molecular de la Célula, Ediciones Omega, 4ta Edición, España,
2004, pp.238-255,398-400.
 Lodish,H. et al, Biología Celular y Molecular, Editorial Medica Panamericana, 5ta Edición,
Argentina, 2009, pp. 115-117.
 Chaudhuri,K. Recombinant DNA Technology, The Energy and Resources
Institute,India,2013, pp. 93-94.
 Howe, C. Gene Cloning and Manipulation, Cambridge University Press, 2da Edición, 2007,
pp.169.
 Neubauer,P. et al, Introduction of the tac-promoter by lactose under fermentation
conditions, Acta Biotechnol, 11(1):23-29; http://doi.org/10.1002/abio.3701110107
 Herman, A. et al, The tac promoter: A functional hybrid derived from the trp and lac
promoters, PNAS January 1, 1983, 80 (1) 21-25; http://doi.org/10.1073/pnas.80.1.21