Preparación de solución DNS.

Para la preparación del reactivo se pesaron por separado: 5 g de ácido 3,5- dinitrosalicílico, que se
disolvieron en 150 ml de agua destilada a 45°C (solución A); separadamente se pesaron 150 g de
tartrato de sodio-potasio que se disolvieron en 100 ml de solución de NaOH 2N (recién preparada)
calentada a 40°C (solución B). Se mezclaron ambas soluciones y se llevó a volumen de 500 ml.

Desarrollo de la reacción del DNS En tubos de cristal de 10 ml se adicionan 0.5 ml de muestra y 0.5
ml del reactivo de DNS. Los tubos se colocan en baño de agua a 100 ºC por 5 min. Se enfrían hasta
temperatura ambiente y se le añade 5 ml de agua destilada. Se agita y se realiza la lectura a 540 nm
en espectrofotómetro.

http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1851-30182015000200005

Cuantificación de azúcares reductores Según el método Miller [16], los azúcares reductores pueden
reducir al ácido 3,5-dinitrosalicílico (DNS) bajo determinadas condiciones. Cuando el ácido 3,5-
dinitrosalicílico es reducido en presencia de calor, por los azúcares reductores que entran en
contacto con él, se desarrolla un cambio de color parecido al café (con variaciones de amarillo hasta
café). El cambio de coloración puede entonces determinarse por lecturas de densidad óptica, leídas
por espectrofotometría a una determinada longitud de onda. La concentración de los azúcares
reductores totales liberados en la muestra se determina haciendo una interpolación en la curva
patrón del azúcar utilizado, graficando la absorbancia en función de la concentración. Para la
aplicación del método DNS de Miller se necesita preparar el reactivo DNS, disolviendo 0,8 g de NaOH
en agua destilada, luego se adicionan 15 g de tartrato de sodio-potasio tetra hidratado y 0,5 g de
DNS (ácido 3,5-dinitrosalisílico). Esta mezcla se afora a 50 mL con agua destilada y se almacena en
un frasco ámbar a 4°C. La concentración de azúcares reductores se determina utilizando una curva
de calibración absorbancia en función de concentración. Para obtener esta curva se prepararon
soluciones de 200-1000 mg/L, utilizando glucosa como estándar. A estas soluciones se les aplicó el
método DNS y se leyó la absorbancia de cada una de ellas en un espectrofotómetro (Genesys 10vis)
a una longitud de onda 540 nm. Una vez construida la curva patrón se aplicó el método DNS a cada
una de las muestras, para lo cual se mezclaron 0,5 mL de cada una con 0,5 mL del reactivo DNS, se
colocaron a ebullición por 5 min en baño de maría e inmediatamente se detuvo la reacción con baño
de agua y hielo. Se reconstruyeron las muestras con 5 mL de agua destilada, se agitaron, se dejaron
en reposo por 15 min, y se determinó su absorbancia a 540 nm. El mismo tratamiento se realizó
para el blanco con agua destilada. Leyendo la absorbancia de cada una de las muestras en la curva
patrón se determinó la concentración de azúcares reductores

http://www.redalyc.org/pdf/904/90424216002.pdf

El reactivo consiste en una disolución formada por los siguientes compuestos: ácido dinitrosalicílico
(ácido 2-hidroxi-3,5-dinitrobenzóico), que actúa como oxidante; Sal de Rochelle (tartrato sódico-
potásico), que impide la disolución de oxígeno en el reactivo y hidróxido sódico, que aporta el medio
requerido para que se produzca la reacción redox. De esta forma, el ácido 2-hidroxi-3,5-
dinitrobenzóico se reduce, en presencia del grupo reductor de la glucosa, formando el ácido 3-
amino-5-nitrosalicílico, mientras que el grupo aldehído reductor se oxida, para formar un grupo
carboxílico. En este método analítico el DNS está en exceso frente a los grupos reductores y en todas
las muestras se adiciona la misma cantidad, de tal forma que mayores concentraciones de azúcares
reductores provocan una mayor coloración de la muestra. Estas diferencias de coloración pueden
determinarse por espectrofotometría visible, a la longitud de onda de máxima absorbancia de 540
nm.

Preparación del reactivo: ácido dinitrosalicílico (DNS) al 1%:

Se disuelven en un vaso de precipitado, con ayuda de un agitador magnético, 20,0 g de ácido 2-

hidroxi-3,5-dinitrobenzóico en 800 mL de agua desionizada. Posteriormente, se adicionan
gradualmente 300 mL de una disolución de NaOH, preparada previamente (32,0 g/ 300 mL de agua
desionizada). Se calienta la disolución obtenida, en un baño de agua termostatizado a 50 ºC, hasta
que la solución se aclare. Se añaden gradualmente 600 g de Sal de Rochelle (tartrato sódico-
potásico). La disolución se enfría hasta la temperatura ambiente y se diluye con agua desionizada
hasta 2 litros. La disolución se deja en reposo durante la noche, filtrando la solución a través de un
crisol de placa porosa.

https://upcommons.upc.edu/bitstream/handle/2117/93739/09CAPITULO4.pdf

Nos referimos exactamente al método del ácido 3,5-dinitrosalicílico (DNS), el cual se basa en la
reducción del DNS (de color amarillo) por la glucosa u otro azúcar reductor al ácido 3-amino-5-
nitrosalicílico (de color rojo ladrillo) (Chaplin, 1986), cuya presencia puede detectarse por lectura de
la Absorbancia en la zona de 540 nm.

https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/31%20INVERTASA%20ENSAYO.pdf

https://pubs.acs.org/doi/10.1021/ac60147a030