Fundación Universidad de América

Extracción de esencias y separación de pigmentos naturales

(Clorofila, xantofilas y carotenos)
Dayana Cuta1*, Carolina Banquez2, Andres Diaz3.

Universidad de América.

Resumen
Se extrajeron esencias de origen vegetal, por los métodos para extracción de tipo soxhlet y desti-
lación por arrastre de vapor (extracción continua) con disolventes orgánicos, donde se identifica-
ron características organolépticas de las mismas tales como el olor y color.
Tras la obtención de las esencias, se procedió a realizar los protocolos 1 (acetona) y 2 (etanol)
para la extracción de pigmentos con solventes, para cuantificar por cromatografía los porcentajes
de clorofila y carotenoides encontrados en la muestra vegetal. Finalmente, se calcula la concen-
tración de clorofila en las muestras, que fueron resultado de los protocolos ya establecidos utili-
zando métodos espectrofotométricos.

Palabras claves: Esencias, cromatografía, soxhlet, arrastre de vapor, pigmentos.

Abstract
Essences extracted from plants, by soxhlet and steam distillation methods (continuous extraction)
with organic solvents, where the same organoleptic characteristics such as odor and color were
identified.
After obtaining essences, we proceeded to perform Protocols 1 (acetone) and 2 (ethanol) pigment
extraction with solvents, chromatography to quantify the percentages chlorophyll and carotenoids
found in plant sample. Finally, the chlorophyll concentration in the samples was calculated proto-
cols established using spectrophotometric methods.

Keywords: Essences, chromatography, soxhlet, steam stripping, pigments.

1. Introducción La cromatografía es una técnica utilizada para analizar

e identificar los pigmentos naturales presentes en una
En lo últimos años el estudio de los aceites esenciales muestra problemas. Con la realización de esta técnica
ha llamado la atención de la ciencia, convirtiéndose en se obtienen resultados cromatógrafos y espectrofoto-
un área de investigación y desarrollo, por su gran aco- métricos donde se calculan porcentajes (clorofila a y b,
gida en la industria farmacéutica, cosmética y de ali- carotenoides) y concentraciones respectivamente, pre-
mentos, entre otras. La extracción de las diferentes sentes en una muestra problema.
esencias y pigmentos de tipo vegetal se pueden reali-
zar empleando técnicas y protocolos de extracción. 2. Marco teórico
Los aceites esenciales por ser volátiles y encontrarse
distribuidos en los frutos y plantas, pueden ser retira- ESENCIAS:
dos utilizando destilación con arrastre de vapor de Son compuestos químicos intensamente aromáticos,
agua donde se utiliza principalmente para extraer no grasos (por lo que no se enrancian), volátiles
esencias de limón y naranja que se aprovechan para por naturaleza (se evaporan rápidamente), livianos
la fabricación de bebidas refrescantes, o con equipo de (densidades de 0.9-0.8), insolubles en agua, leve-
tipo soxhlet. Los pigmentos de materiales verdes se mente solubles en vinagre, y solubles en disolventes
extraen utilizando los protocolos 1 donde se utiliza la orgánicos como alcohol, benceno, cloroformo, éter,
acetona y el 2 con el etanol, donde los dos son disol- hexano, grasas, ceras, aceites vegetales, resinas. Son
ventes orgánicos y que son útiles para separar pigmen- sustancias oleosas, odoríferas y de origen vegetal.
tos naturales (clorofilas, xantofilas y carotenos).
EXTRACCIÓN:
1. Estudiante 4to semestre de Ing. Química 2015(yo_liseth@hotmail.com)
2. Estudiante 4to semestre de Ing. Química 2015(carolab-1997@hotmail.com)
3. Estudiante 4to semestre de Ing. Química 2015(anderson19951@hotmail.es)
Fundación Universidad de América
Constituye una de las técnicas de separación de com-
puestos más utilizada en el laboratorio químico. El prin-
cipal objetivo de la extracción es separar selectiva-
mente el producto de una reacción, o bien eliminar las
impurezas que lo acompañan en la mezcla de reac-
ción, gracias a sus diferencias de solubilidad en el di-
solvente de extracción elegido.
Extracción discontinua: Se la llama también “extrac-
ción líquido-líquido”, en este caso el procedimiento
consiste en la transferencia de una sustancia de una
fase a otra y se desarrolla entre dos líquidos inmisci-
bles, esto quiere decir que son incapaces de ser mez-
clados sin la división de fases. Las dos fases líquidas
de la extracción son la acuosa y orgánica. (Equipo tipo
soxhlet o destilación por arrastre de vapor)
Extracción continua: Conocida también como “extrac-
ción sólido-líquido”, en este tipo se dividen uno o más
componentes de una mezcla sólida a través de un di-
solvente líquido. Se desarrolla en dos etapas distintas.
Se lleva a cabo un contacto del disolvente con el sólido
que permite la mezcla del soluto o componente soluble
al disolvente. Esto se realiza a una temperatura am-
biente o cálida pero en este caso para impedir la pér-
dida del disolvente se efectúa una ebullición a reflujo.
(Agitando el disolvente en el embudo de decantación)
CLOROPLASTOS:
Los cloroplastos fueron identificados como los orgánu-
los encargados de la fotosíntesis, en ellos se trans-
forma la energía lumínica en energía química, que
puede ser aprovechada por los vegetales.
Clorofilas: Las Clorofilas son compuestos del tipo tetra-
pirrol, al mismo grupo pertenecen las ficocianinas y las
ficoeritrinas (pigmentos accesorios en algas azules y
rojas). Constan de cuatro anillos de pirrol unidos por
medio de puentes de metilo (--CH=) lo que constituye
una porfirina.
- La clorofila b se diferencia de la clorofila a sola-
mente por estar sustituido el grupo metilo (--CH3) del
carbono 3 en el segundo anillo pirrólico, por un grupo
aldehido (--CHO). Esta diferencia es suficiente para
causar un cambio notable en la coloración como tam-
bién en el espectro de absorción de esta molécula. La
clorofila a es verde azulada, la clorofila b es de color
verde amarillento.
2
Fuente: http://www.scielo.br/img/revis-
tas/cr/v35n3/a43fig01.jpg
CAROTENOIDES:
Los carotenoides o tetraterpenoides son una clase de
pigmentos terpenoides con 40 átomos de carbono de-
rivados biosintéticamente a partir de dos unidades de
geranil-geranilpirofosfato, en su mayoría son solubles
en solventes apolares y de coloraciones que oscilan
entre el amarillo (por ejemplo el ß-caroteno) y el rojo
(por ejemplo el licopeno). L. Se clasifican en dos gru-
pos: carotenos y xantofilas. Los carotenos solo contie-
nen carbono e hidrógeno, mientras que las xantofilas
contienen además oxígeno.
CROMATOGRAFÍA:
La cromatografía es un método físico de separación en
el que los componentes que se han de separar se dis-
tribuyen entre dos fases, una de las cuales está en re-
poso (fase estacionaria, F.E.) mientras que la otra
(fase móvil, F.M.) se mueve en una dirección definida.
-De acuerdo con el estado físico la cromatografía se
clasifica:
Cromatografía de gases: Con fase móvil gaseosa.
 Cromatografía gas-líquido
 Cromatografía gas-sólido
Cromatografía líquida: Con fase móvil líquida.
 Cromatografía líquido-líquido
 Cromatografía líquido-sólido
-Dependiendo de la naturaleza de la fase estática y de
la fase móvil se pueden distinguir distintos tipos de cro-
matografía
a) Cromatografía sólido-líquido. La fase estática o es-
tacionaria es un sólido y la móvil un líquido.
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b) Cromatografía líquido-líquido. La fase estática o Equipos

estacionaria es un líquido anclado a un soporte sólido.
- Centrífuga
c) Cromatografía líquido-gas. La fase estática o es- - Espectrofotómetro
tacionaria es un líquido no volátil impregnado en un só- - Equipo soxhlet
lido y la fase móvil es un gas. - Cámara de cromatografía

d) Cromatografía sólido-gas. La fase estacionaria es Reactivos

un sólido y la móvil un gas.
- Alcohol etílico del 96% p
-De acuerdo con el método de separación. Según el - Etanol al 80%
tipo de interacción que se establece entre los compo- - Agua destilada
nentes de la mezcla y la fase móvil y estacionaria po- - Pétalos de rosas, limones, naranjas, flores frutos u
demos distinguir entre: hojas, espinacas o hierbas. El estudiante debe traer-
las.
a) Cromatografía de adsorción. La fase estacionaria - Acetona al 80%
es un sólido polar capaz de adsorber a los componen- - Éter de petróleo
tes de la mezcla mediante interacciones de tipo polar.
4. Procedimientos
b) Cromatografía de partición. La separación se basa
en las diferencias de solubilidad de los componentes
de la mezcla en las fases estacionaria y móvil, que son
ambas líquidas.

c) Cromatografía de intercambio iónico. La fase es-

tacionaria es un sólido que lleva anclados grupos fun-
cionales ionizables cuya carga se puede intercambiar
por aquellos iones presentes en la fase móvil.

3. Metodología

Materiales

-2 Erlenmeyer de 250 mL
-1 Condensador
- 1 Balón de fondo plano esmerilado de 250 mL
- 1 Soxhlet
- 1 Aro
- 3 Nueces
- 2 Pinzas para balón
- 1 Mortero y mazo
- 2 Mallas de asbesto
- 1 Te en vidrio
- 2 Mangueras
- Papel de filtro
- Papel para cromatografía
- Mortero
- Tubo de centrífuga plástico

3
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2
Fundación Universidad de América

3.5
%Clorofila tipo B =( )*100 = 64.8%
5.4

5. Análisis y Cálculos. 5.2

5.1 Distinga en su muestra ¿A qué pigmento corres-
ponde cada mancha?
- Las manchas observadas en la placa de cromatogra-
fía son de color verde oliva (claro) , verde oscuro, ama-
rillo (claro) y rojo (claro) que corresponden a clorofilas
tipo b , clorofilas tipo a , Xantófilas y Carotenos respec-
tivamente.
5.2 Calcular la movilidad relativa de los distintos pig-
mentos RF
𝑅𝑠
%PIGMENTOS=( )*100
𝑅𝑓
Rf: altura máxima alcanzada por el solvente – línea de
referencia
Rs: altura de la línea de referencia a la mancha
%Caroteno =( )*100 = 96.2%
5.4
4.9
%Xantófilas =( )*100 = 90.7%
5.4
5.3 ¿Qué factores pueden afectar al coeficiente de
particion?
- El coeficiente de partición (Rf) se puede ver afectado
por la pureza (concentracion) del solvente orgánico en
la cámara cromatografía, puesto que esto afecta en el
arrastre de los pigmentos.
Por otro lado, dependiendo de la concentración de pig-
mentos que posea la hoja la altura de las manchas se
verán afectadas, debido a que al poseer una alta con-
centración la mancha tiende a ascender.
5.4 Calcular los µg de clorofila que hay por gramo
de hoja, extraida con cada uno de los protocolos.

ETANOL
ACETONA ppm clorofila = (absorbancia)*13,14
2.8 ppm clorofila = (1.975)*13,14 = 25,96ppm
%Clorofila tipo B =( )*100 = 51.85%
5.4

3.4 0.02596g de clorofila  0.55g de hojas

%Clorofila tipo A =( )*100 = 62.96% Xg de clorofila  1g de hojas
5.4
X=0.0472g clorofila/ g hoja
5.1
%Caroteno =( )*100 = 94.44%
5.4 ACETONA
4.2
ppm total de clorofila = (20.2*A645 ) + (8.02*A663 )
%Xantófilas =( )*100 = 77.77% ppm=(20.2*1.992)+(8.02*1.976) = 56.07ppm
5.4
ppm acetona=ppm total – ppm etanol
ETANOL ppm acetona = 56.07 – 25.96 = 30.11ppm
3.1
%Clorofila tipo A =( )*100 = 57.4%
5.4 0.03011g de clorofila  0.55g de hojas
Xg de clorofila  1g de hojas
X=0.0547g clorofila/ g hoja
3
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5.5 Comparar los resultados obtenidos entre sí y con
el resto de los grupos ¿Qué protocolo es el más ade-
cuado para el tipo de material vegetal empleado? Ra-
zonar la respuesta
Al comparar las concentraciones de clorofila obteni-
dos, se logra deducir que utilizar el protocolo 1 (ace-
tona) es más conveniente al obtener una mayor con-
centración que al utilizar el protocolo 2 (etanol), puesto
que se obtiene una mejor extracción de pigmentos.
5.6 Calcular la concentración de clorofila (a) en el ex-
tracto inicial de la hoja de espinaca por formula de Mar-
ker. ¿Cuántos mg de clorofila a se han extraído de la
hoja de espinaca?
ppm= 1.976*13.14
clorofila a ppm= 25.96
clorofila total [ppm] = (20.2*1.992)+(8.02*1.976)
clorofila total [ppm] = 56.07
5.7 ¿Se han extraido todos los pigmentos?
En esta práctica, utilizando acetona y etanol no se ex-
trajeron en su totalidad los pigmentos fotosintéticos de-
bido a que no son procedimientos muy eficaces, de-
pendiento el método usado cambiara la concentración
de los pigmentos.
5.8 ¿Qué es 13.14 en la fórmula de Marker?
El número 13.14 que aparece en la ecuación de Marker
para la determinación de concentración de clorofila
(ppm=A(a 665 nm) * 13.14) no es más que una relación
(razón) que existe entre la concentración y la absor-
bancia (depende del coeficiente de absortividad mo-
lar), es decir que por cada 13.14 ppm la muestra tendrá
una absorbancia equivalente a 1.
5.9 ¿Interfieren el resto de pigmentos en la determina-
ción de clorofila a?
6. Conclusiones
1. Se comprendió la importancia de los diferentes
métodos de extracción de esencias utilizados a ni-
vel de laboratorio e industrial.
2
2. Se identificaron los compuestos orgánicos presen-
tes en las esencias extraídas.
3. Se clasificó, identificó y relación los diferentes ti-
pos de esencias que se pueden encontrar en el
reino vegetal.
4. Se extrajeron y separaron los diferentes tipos de
pigmentos de cloroplastos por cromatografía de
papel en función de su polaridad relativa.
5. Se extrajeron los pigmentos de cloroplastos de
una material vegetal y se determinó la cantidad de
clorofila contenida en el mismo.
7. Cuestionario
1. ¿Qué normatividad existe en el país para las
esencias?
- En Colombia no hay una farmacopea nacional,
por lo tanto se recurre a las siguiente farmaco-
peas oficialmente aceptadas en el país, como
consta en el Parágrafo Primero del Artículo 22
del decreto 677 de 1995: “United State Phar-
macopeia (USP), a la Brittish Pharmacopeia
(Inglaterra), al Codex Francés, a la Farmaco-
pea Alemana (DAB), a la Europea e internacio-
nal (OMS) o a la que en su momento rija para
la Unión Europea. En todos los casos se apli-
carán las técnicas establecidas en la edición
vigente de la farmacopea respectiva”.
- DECRETO NÚMERO 677 DE 1995 (abril 26)
Por el cual se reglamenta parcialmente el Ré-
gimen de Registros y Licencias, el Control de
Calidad, así como el Régimen de Vigilancia
Sanitaria de Medicamentos, Cosméticos, Pre-
paraciones Farmacéuticas a base de Recur-
sos Naturales, Productos de Aseo, Higiene y
Limpieza y otros productos de uso doméstico
y se dictan otras disposiciones sobre la mate-
ria.
- En el caso de los alimentos se usan los Códi-
gos Alimenticios siendo el más universal el Co-
dex Alimentarius, que es una publicación de la
FAO y la OMS y el Food Chemical Codex de
los EEUU.
- El CAS NUMBER es una guía internacional
que describe los ingredientes estudiados y
aprobados para uso cosmético.
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- Normas internacional ISO 855:2003.
2. Componentes químicos que proporciona el
olor de la esencia, fórmulas estructurales
3. Elaborar un paralelo entre esencia natural y
sintética
Esencia Natural Esencia sintética
-Se obtiene de plantas - Son mezclas de diver-
o animales por proce- sos productos obteni-
dimientos artesanales dos por procesosquimi-
cos.
-Son llamados aceites
esenciales -Sonmaseconomicos-
que las esencias natu-
-Tieneaparenciaacei- rales.
tosa concentrado
- Se utilizan en laprepa-
-volatilespor natura- racionde sustancias
leza, livianos, insolu- aromatizantes y sabori-
bles en agua zantes.
- Solo se obtiene de -Se sintetiza a partir de
las plantas herbaceas, una sustanciaprimaria
arbustos y arboles como alcohol o ácidoor-
ganico.
4. Investigar en que consiste la extracción de
esencias por disolución de aceites fijos
Los aceites son solubles en grasas y alcoholes de alto
porcentaje. Sobre una capa de vidrio se coloca una fina
película de grasa y sobre ella los pétalos de flores ex-
tendidas. La esencia es absorbida por la grasa, hasta
saturación de la grasa. Posteriormente con alcohol etí-
lico, se extrae el aceite esencial.
5. Explique en que consiste la extracción por fluidos
supercríticos y de ejemplos industriales de compues-
tos que se puedan extraer por esta técnica.
Los fluidos súper ricos presentan ventajas en los pro-
cesos de extracción, ya que al comportarse como un
líquido facilita la disolución de los solutos, a la vez
que, su comportamiento como gas permite una fácil
separación de la matriz. Esto conlleva un proceso de
extracción más rápido, eficiente y selectivo que en el
caso de la extracción líquido-líquido. Además, se pue-
den usar "disolventes verdes" como el CO2 evitando
3
el uso de los habituales disolventes clorados de las
extracciones líquido-líquido.
Al tratarse los alimentos de mezclas altamente
complejas lo más habitual es que los extractos
también lo sean por lo cual es muy habitual hablar
de fraccionamiento de extractos. El fracciona-
miento en condiciones supercríticas consiste en
una caída en cascada de la densidad con la consi-
guiente precipitación en cascada de los compues-
tos extraídos en los separadores donde se produce
esta disminución de densidad.
6. Explique en que consiste el proceso de enflorado.
El enflorado es un proceso utilizado para captar las
fragancias de las plantas utilizando grasas inodoras,
y sólidas a temperatura ambiente. El proceso puede
ser enflorado en frío en caliente.
ENFLORADO EN FRIO: En el enflorado en frío, se
utiliza una placa de vidrio, que se unta con una capa
de grasa animal, sobre la grasa, se colocan las mate-
rias vegetales, como flores o pétalos o flores. Al paso
de 1 a 3 días, la grasa se habrá impregnado con su
aroma. El proceso se repite sustituyendo los vegeta-
les utilizados por otros más frescos, y así hasta llegar
al punto deseado de saturación de fragancia en la
grasa llamada “Pomada enflorada”. También puede
continuarse el proceso limpiando o empapando la
grasa con alcohol etílico con el fin de extraer de la
grasa las moléculas de fragancia y transferirlas al al-
cohol. Luego se deja evaporar el alcohol. Los restos
de grasa todavía con restos de aromas, pueden utili-
zarse para la fabricación de jabones aromáticos.
ENFLORADO EN CALIENTE
En el enflorado en caliente, las grasas sólidas se ca-
lientan mientras las materias vegetales se agitan re-
solviéndolas con la grasa impregnándola con su
aroma. Al igual que en el enflorado en frio se sustitu-
yen los vegetales utilizados por otros más fres-
cos, hasta conseguir la “Pomada enflorada”. Tam-
bién puede continuarse el proceso limpiando o em-
papando la grasa con alcohol etílico con el fin de ex-
traer de la grasa las moléculas de fragancia y trans-
ferirlas al alcohol.
8. Referencias
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Fundación Universidad de América
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