CUESTIONARIO: Preparaciones Microbiológicas

Preparaciones

1. ¿Qué aplicación tienen las preparaciones en fresco?

Se utilizan para observar microorganismos vivos. Por ejemplo, para la búsqueda
de Trichomonas vaginalis en secreciones vaginales.

2. ¿Qué grupos microbianos se observan con las preparaciones en fresco?

Se logran observar todos aquellos microorganismos que estén vivos.

3. ¿Qué es un frotis y para que se sirve?

Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o
cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen
agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida.
La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y
adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles
agrupaciones de células que pudiera haber.

4. ¿Cuál es el objeto de dejar secar al aire la muestra?

Obtener una desecación rápida.

5. ¿Para que se fija una muestra?

Se fija el frotis por calor o por agentes químicos. Con las siguientes finalidades:
- Se evita la deformación de las células con el colorante.
- Para posicionar las estructuras internas y externas de la célula.
- Además se mata al microorganismo.
- Protege la subestructura fina y la morfología de los microorganismos delicados de mayor
tamaño.

6. Describe los métodos que se emplean para fijar una muestra.

 Métodos físicos: Los principales agentes físicos utilizados para fijar material
biológico son el calor y la congelación: El calor es el más sim- ple de los métodos;
produce coagulación de las proteínas y licuefacción de los lípidos. Es utilizado en
microbiología pues se conservan muy bien las bacterias.

 Métodos químicos: La mayor parte de los fijadores químicos son líquidos que
afectan física (endurecimiento y contracción de la muestra) y químicamente un
tejido, su rango de penetración es muy importante pues es el que determina el
tiempo y tamaño máximo de la muestra.
 Tinciones

1. ¿Por qué es necesario teñir a los microorganismos o bien el fondo de la

preparación?
La tinción bacteriana tiene dos propósitos fundamentales:
a) Identificar la bacteria (Gram positiva o Gran negativa).
b) Con base en la identificación, indicar el tratamiento correcto (los antibióticos no
funcionan por igual para bacterias Gram positivas que Gram negativas).
Además, tincionar las bacterias es importante para poder verlas en el microscopio,
dependiendo el tipo de bacterias se tinciona de cierta manera siguiendo un protocolo.

2. ¿Qué es un colorante? ¿Cómo está constituido? ¿Qué factores intervienen para

que los colorantes se combinen con los componentes celulares?

Un colorante se define como una sustancia capaz de dar color a células, tejidos, fibras,
etcétera. el colorante está constituido de un componente cromóforo y un auxócromo. El
cromóforo es todo grupo aislado, covalente e insaturado, que tiene una absorción
característica en la región ultra- violeta o visible; dicho de otra forma, es la capacidad que
tiene la molécula para que sus electrones absor- ban energía o luz visible, se exciten y
emitan diversos colores de acuerdo con la longitud de emitida como resultado del cambio
en el nivel energético.

Muchos colorantes utilizados con frecuencia son moléculas cargadas positivamente

(cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados
negativamente, tales como los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos. Ejemplos de
colorantes catiónicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros
colorantes son moléculas cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los
constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas proteínas. Esos
colorantes incluyen la eosina, la fucsina ácida y el rojo Congo.

3. ¿Qué es y cuáles son las principales características de un colorante vital?

Son aquellos que ejercen su acción en las partes vivas de las células sin
alterar su metabolismo, y poniendo de relieve sus estructuras. Estos
colorantes varían en su composición y consisten en mezclas de reactivos que incluyen el
colorante, ácidos, aldehídos, alcoholes y agua.

4. ¿Cuál es el objetivo de utilizar colorantes vitales?

Observar movilidad, así como algunos de sus organelos o inclusiones teñidas, sin daño
aparente.
 5. ¿Para qué se emplean los mordentes? Describe algunos ejemplos.
Los mordentes intensifican la tinción porque aumentan la afinidad de la célula por el
colorante. Ejemplo: el yodo en la tinción de Gram intensifica el color cristal violeta de la
pared de la célula bacteriana.

6. ¿Qué es una tinción? ¿Cuántos tipos existen?

La tinción es un proceso por el cual las moléculas de un colorante se absorben a una
superficie. Existen 3 tipos: tinción simple, diferencial y selectiva.

7. Describe las diferencias entre una tinción positiva y una negativa

Las células Gram positivas permanecen tenidas, pero las negativas pierden el colorante.
Se tiñe con safranina (contraste). El color violeta de las Gram positivas se vuelve más
oscuro y las Gram negativas se tiñen de rosa.

8. ¿Qué información de un microorganismo nos proporciona una tinción simple?

La tinción simple se utiliza para destacar el microorganismo completo para que se vean
las formas y lasestructuras celulares básicas.

Tinciones simples

1. ¿En qué consiste una tinción simple?

En las tinciones simples se usa un único colorante, que siempre es de tipo básico. Se
utilizan solamente para incrementar el contraste; todas las células absorberán el colorante
y quedarán teñidas del mismo color. Por tanto, la tinción simple mejora la observación de
la célula completa. Se fija el espécimen, se añade el colorante y se deja el tiempo
adecuado para que se absorba, se retira el exceso de colorante y la preparación ya está
lista para ser observada. Si se utiliza un mordiente, hay que añadirlo justo antes del
colorante.

2. ¿Qué información proporcionan

- Una preparación en fresco con tinción simple?
- Una preparación fija con tinción simple?

Tinciones selectivas

1. ¿Qué es una tinción selectiva?

Las tinciones específicas incrementan el contraste en las células microbianas y revelan
estructuras particulares, entre las que se incluyen las en dos poras, los flagelos y las
cápsulas.

2. ¿Qué función tiene la endospora microbiana?

 3. ¿cuál es la composición de la endospora?
4. ¿Por qué es necesario calentar la tinción de espora?
5. Haz un diagrama de flujo de la tinción de endospora indicando qué sucede en cada
paso
6. Menciona tres géneros de bacterias que producen endospora y su importancia
(clínica, industrial, en alimentos o ecológica).
7. ¿Qué función tiene la cápsula?
8. De acuerdo con la composición de la cápsula indica por qué esta preparación no
se fija
9. Haz un diagrama de flujo de la tinción de cápsula e indica lo que sucede en cada
paso.
10. Menciona tres géneros de bacterias que produzcan cápsula y su importancia.

Tinciones diferenciales

1. ¿Qué es una tinción diferencial?

Las tinciones diferenciales se utilizan para distinguir entre tipos de
microorganismos. La técnica de tinción diferencial consta de dos etapas:
una tinción primaria (siguiendo el mismo método que en una tinción simple)
seguida de una tinción de contraste. En la tinción de contraste se utiliza otro
colorante que tiñe (y por tanto, revela) las células no teñidas por el primer
colorante. Estas tinciones son muy utilizadas en microbiología.

2. Indica las diferencias que existen entre una tinción simple y una diferencial.
3. Químicamente ¿cómo está formada la pared celular bacteriana?
4. ¿Qué función tiene esta estructura bacteriana?

TINCIÓN DE GRAM

a. ¿Cuáles son las principales diferencias entre la pared celular de las

bacterias grampositivas y gramnegativas?
b. De acuerdo con la información anterior, hacer un esquema de las diferencias
que existen entre la pared celular de las bacterias gramnegativas y
grampositivas.
c. ¿Qué función tiene cada uno de los reactivos empleados en la tinción de
Gram? ¿Cuáles son los colorantes utilizados y cuál es el mordente?
d. De acuerdo con la información anterior explica: a) ¿porqué unas bacterias
retienen el primer colorante y otras lo pierden, tomando el color del colorante
secundario?
e. Explica el fundamento de la tinción de Gram y su importancia en la
microbiología

TINCIÓN DE ZIEHL NEELSEN O DE ÁCIDO ALCOHOL RESISTENCIA

a. En la tinción de Ziehl Neelsen ¿qué función tienen: la anilina, el fenol y el
calentamiento?
b. Hacer un esquema de la pared celular de las bacterias ácido resistentes
c. ¿Cuáles son los reactivos empleados en esta tinción y qué función tienen?
d. ¿De qué color se observan las bacterias ácido alcohol resistentes y porqué?
e. Menciona dos ejemplos de bacterias acidorresistentes.
f. Explica el fundamento de la tinción de ácido resistencia y su importancia en
la microbiología